發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于調(diào)節(jié)有效(active)和參考檢測(cè)表面之間的主體信號(hào)失配的方法。更具體地說，本發(fā)明涉及用于建立溶劑校正曲線以及使用所述曲線從分析物的傳感圖獲得校正的傳感圖或校正的報(bào)告點(diǎn)的方法。本發(fā)明還涉及用于執(zhí)行所述方法的步驟的分析系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)程序產(chǎn)品。發(fā)明背景能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)分子相互作用的分析傳感器系統(tǒng)(即，無(wú)標(biāo)簽系統(tǒng))正受到越來越多的關(guān)注。這些系統(tǒng)經(jīng)?；诠鈱W(xué)生物傳感器，且通常被稱作相互作用分析傳感器或生物特異性相互作用分析傳感器。代表性生物傳感器系統(tǒng)是由gehealthcarelifesciences銷售的biacore?儀器，其使用表面等離子體共振(surfaceplasmonresonance，spr)來檢測(cè)樣品中的分子與固定在傳感表面上的分子結(jié)構(gòu)之間的相互作用。使用biacore?系統(tǒng)，有可能在不使用標(biāo)記的情況下實(shí)時(shí)確定樣品中的具體分子的存在和濃度以及附加的相互作用參數(shù)，例如分子相互作用的締合速率常數(shù)和解離速率常數(shù)。該裝置和理論背景在文獻(xiàn)(參見例如，jonsson，u.等人，biotechniques11：620-627(1991))中充分描述。通常，該技術(shù)涉及將配體固定到傳感器芯片(流動(dòng)池)的特殊光學(xué)傳感器表面，使傳感器芯片與含有感興趣的分析物的樣品流接觸，和隨后測(cè)量由配體和分析物之間的結(jié)合引起的傳感器芯片的表面光學(xué)特性中的變化。有關(guān)spr的更多細(xì)節(jié)，還參考美國(guó)專利no.5,313,264、美國(guó)專利no.5,573,956和美國(guó)專利no.5,641,640。當(dāng)用弱疏水的分析物分子運(yùn)行測(cè)定時(shí)，可能需要在流動(dòng)緩沖液和樣品中包含有機(jī)溶劑。對(duì)于較小的有機(jī)分子分析物(80-1000da)，通常使用有機(jī)溶劑例如2-5%二甲基亞砜(dmso)。許多這些應(yīng)用取決于有效表面和參考表面之間的基準(zhǔn)減法(referencesubtraction)，以便獲得足夠的數(shù)據(jù)品質(zhì)。然而，取決于固定在有效表面上的配體的量，主體信號(hào)(來自流動(dòng)緩沖液和樣品中的折射率的差異)不能被基準(zhǔn)減法完全猝滅。這被添加到來自分析物結(jié)合的響應(yīng)中，并且由于失配也隨著移液誤差而變化，其可以從顯著的正值跨到負(fù)值。取決于報(bào)告點(diǎn)讀數(shù)，這可能對(duì)測(cè)定中的數(shù)據(jù)品質(zhì)而言是重要的。然而，這可以通過測(cè)量在參考物中參考誤差與主體響應(yīng)的函數(shù)且隨后通過該函數(shù)調(diào)節(jié)每個(gè)樣品來校正，即溶劑校正。當(dāng)進(jìn)行溶劑校正時(shí)，用戶必須制備具有代表性主體響應(yīng)的許多溶液(根據(jù)biacore推薦的程序，8種)。為了建立校正曲線，將這些溶液注射到每一對(duì)參考-有效檢測(cè)表面上。由于程序在整個(gè)運(yùn)行中重復(fù)至少一次，并且由于不存在多次使用相同位置的方式，板占用率和用戶工作量是顯著的。需要使溶劑校正過程簡(jiǎn)單和自動(dòng)化。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于建立溶劑校正曲線以及使用所述曲線從分析物的傳感圖獲得校正傳感圖或校正報(bào)告點(diǎn)的方法。在一方面，它提供了用于建立溶劑校正曲線的方法，其包括：a.提供包含高濃度的有機(jī)溶劑的第一溶液和包含低濃度的相同有機(jī)溶劑的第二溶液；b.在集成微流體盒(ifc)的流動(dòng)通道中以預(yù)定比例在線混合所述兩種溶液，所述流動(dòng)通道包含具有未固定有配體或類似物的光學(xué)傳感器表面的流動(dòng)池；c.從步驟(b)的光學(xué)傳感器表面獲得所述混合溶液的傳感圖，所述傳感圖包含所述傳感圖的穩(wěn)定部分處的報(bào)告點(diǎn)；d.在集成微流體盒(ifc)的另一個(gè)流動(dòng)通道中以如步驟(b)中的相同預(yù)定比例在線混合所述兩種溶液，所述流動(dòng)通道包含具有固定有配體或類似物的光學(xué)傳感器表面的流動(dòng)池；e.從步驟(d)的光學(xué)傳感器表面獲得所述混合溶液的傳感圖，所述傳感圖包含所述傳感圖的穩(wěn)定部分處的報(bào)告點(diǎn)；f.以所述兩種溶液的不同預(yù)定比例重復(fù)步驟(b)和(c)各n次；和g.使用所述報(bào)告點(diǎn)建立溶劑校正曲線；其中n為至少3。在另一方面，它提供了用于獲得分析物的校正響應(yīng)的方法，其包括：a.在包括含有用于分析物的固定配偶體(partners)的光學(xué)傳感器表面的流動(dòng)池中生成具有分析物的溶液的傳感圖；b.在具有不含有用于分析物的固定配偶體的光學(xué)傳感器表面的相同或另一個(gè)流動(dòng)池中生成溶液的傳感圖；c.通過以下方式獲得校正的響應(yīng)，首先對(duì)于各個(gè)信號(hào)，從(a)的信號(hào)中減去(b)的信號(hào)以生成修改的傳感圖，隨后根據(jù)通過本發(fā)明的某些實(shí)施方案獲得的校正曲線調(diào)節(jié)所述修改的傳感圖的信號(hào)或來自所述傳感圖的報(bào)告點(diǎn)。在再一方面，它提供了一種用于在微通道中混合兩種液體的方法，其包括：a.提供包含特定組合物的第一液體和包含另一種組合物的第二液體；b.在微通道中以預(yù)定比例在線混合兩種液體；其中，混合所述兩種液體包括各自以單獨(dú)的預(yù)設(shè)流動(dòng)速率注射所述兩種液體，使組合液體行進(jìn)通過所述微通道，并使所述流動(dòng)反向，使得所述組合液體第二次通過所述微通道。在另一方面，本發(fā)明提供了用于研究分子相互作用的分析系統(tǒng)，其包括計(jì)算機(jī)處理裝置，所述計(jì)算機(jī)處理裝置包括用于執(zhí)行所述方法的步驟的程序代碼裝置。在又一方面，本發(fā)明提供了用于執(zhí)行所述方法的步驟的包含存儲(chǔ)在計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)上或承載在電信號(hào)或光信號(hào)上的程序代碼裝置的計(jì)算機(jī)程序產(chǎn)品。本發(fā)明的其它細(xì)節(jié)和優(yōu)點(diǎn)將從下面的描述和權(quán)利要求而顯而易見。附圖簡(jiǎn)述圖1a和b說明當(dāng)兩種溶液混合三次時(shí)，ifc的一部分的細(xì)節(jié)，示出流動(dòng)通道中的方向(箭頭)和混合模式。圖2示出與用手動(dòng)混合方法論(預(yù)混合)產(chǎn)生的曲線相比，用本發(fā)明(返回的)產(chǎn)生的溶劑校正點(diǎn)。圖3示出使用本發(fā)明的實(shí)施方案收集的數(shù)據(jù)的傳感圖。發(fā)明詳述小分子應(yīng)用越來越多地使用無(wú)標(biāo)簽系統(tǒng)進(jìn)行。如上所述，這些應(yīng)用通常取決于溶劑校正，其需要大量的動(dòng)手時(shí)間，容易出錯(cuò)并且在儀器中占據(jù)大量的試劑/樣品位置。對(duì)于具有多通道構(gòu)造的系統(tǒng)，這些問題將惡化。與手動(dòng)操作相比，本發(fā)明的實(shí)施方案顯著地減少了用戶努力和位置占用的量。本發(fā)明的實(shí)施方案對(duì)于使用具有平行通道的集成微流體盒(ifc)(即所謂的多通道系統(tǒng))的測(cè)定特別有用。本發(fā)明涉及用于建立溶劑校正曲線以及獲得分析物的校正響應(yīng)的新方法。本發(fā)明還涉及用于執(zhí)行所述方法的步驟的分析系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)程序產(chǎn)品。因此，在一方面，本發(fā)明涉及用于建立溶劑校正曲線的方法，其包括：a.提供包含高濃度的有機(jī)溶劑的第一溶液和包含低濃度的相同有機(jī)溶劑的第二溶液；b.在集成微流體盒(ifc)的流動(dòng)通道中以預(yù)定比例在線混合所述兩種溶液，所述流動(dòng)通道包含具有未固定有配體或類似物的光學(xué)傳感器表面的流動(dòng)池；c.從步驟(b)的光學(xué)傳感器表面獲得所述混合溶液的傳感圖，所述傳感圖包含所述傳感圖的穩(wěn)定部分處的報(bào)告點(diǎn)；d.在集成微流體盒(ifc)的另一個(gè)流動(dòng)通道中以如步驟(b)中的相同預(yù)定比例在線混合所述兩種溶液，所述流動(dòng)通道包含具有固定有配體或類似物的光學(xué)傳感器表面的流動(dòng)池；e.從步驟(d)的光學(xué)傳感器表面獲得所述混合溶液的傳感圖，所述傳感圖包含所述傳感圖的穩(wěn)定部分處的報(bào)告點(diǎn)；f.以所述兩種溶液的不同預(yù)定比例重復(fù)步驟(b)和(c)各n次；和g.使用所述報(bào)告點(diǎn)建立溶劑校正曲線；其中n為至少3。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)n為3時(shí)，預(yù)定比例包括1:0(100%的第一溶液且不含第二溶液)；0:1(100%的第二溶液且不含第一溶液)；以及第一和第二溶液的混合，例如以0.5:0.5的比率混合。在某些實(shí)施方案中，預(yù)定比例間隔在1:0和0:1之間。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，預(yù)定比例均勻間隔在1:0和0:1之間。在某些實(shí)施方案中，在注射開始之后的規(guī)定時(shí)間置入報(bào)告點(diǎn)。優(yōu)選地，對(duì)于相同類型的所有注射，時(shí)間是相同的。此外，在注射或一系列注射之前的規(guī)定時(shí)間置入基準(zhǔn)報(bào)告點(diǎn)。這里使用的響應(yīng)是這兩者之間的差別；稱作相對(duì)響應(yīng)。對(duì)于校正曲線，來自固定的流動(dòng)池的傳感圖減去來自參考物(未固定的)的傳感圖，相對(duì)報(bào)告點(diǎn)響應(yīng)給出y軸值。來自參考傳感圖的相同的相對(duì)報(bào)告點(diǎn)值給出x軸值。當(dāng)繪制超過3個(gè)點(diǎn)時(shí)，可以通過例如將點(diǎn)擬合為二次多項(xiàng)式來生成溶劑校正曲線。當(dāng)樣品運(yùn)行時(shí)，使用參考響應(yīng)作為從y軸給出校正數(shù)的x值，將該值加到參考物的相對(duì)響應(yīng)減去樣品響應(yīng)，以給出校正的響應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，混合所述兩種溶液包括各自以單獨(dú)的預(yù)設(shè)流動(dòng)速率注射兩種溶液，使組合溶液行進(jìn)通過一個(gè)或多個(gè)流動(dòng)池，并使所述流動(dòng)反向，使得組合溶液第二次通過一個(gè)或多個(gè)流動(dòng)池。任選地，流動(dòng)可以再一次反向，使得組合溶液第三次通過一個(gè)或多個(gè)流動(dòng)池。在某些實(shí)施方案中，混合所述兩種溶液包括各自以單獨(dú)的預(yù)設(shè)流動(dòng)速率注射兩種溶液，使組合溶液在進(jìn)入流動(dòng)池之前行進(jìn)通過一個(gè)或多個(gè)通道和/或閥。在某些實(shí)施方案中，通過控制各溶液的流動(dòng)速率實(shí)現(xiàn)混合兩種溶液。在某些實(shí)施方案中，溶液的流動(dòng)速率由一個(gè)或多個(gè)泵控制。在某些實(shí)施方案中，溶液之一可以由泵控制，而另一種溶液可以通過由針吸入引入。在一些實(shí)施方案中，第二個(gè)泵存在于流動(dòng)池的另一側(cè)，兩個(gè)泵共同作用以將溶液移動(dòng)跨過流動(dòng)池。在某些實(shí)施方案中，集成微流體盒包含多個(gè)平行通道。在某些實(shí)施方案中，有機(jī)溶劑是具有不同于緩沖液的主要組分(例如水)的折射率的溶劑。在某些實(shí)施方案中，有機(jī)溶劑是dmso或甘油。選擇第一溶液和第二溶液中的有機(jī)溶劑的濃度，使得其涵蓋對(duì)應(yīng)于樣品和流動(dòng)緩沖液之間的溶劑失配的范圍。在一些實(shí)施方案中，第一和第二溶液中的有機(jī)溶劑的濃度可以是該范圍的+/-50%、該范圍的+/-40%、該范圍的+/-30%或該范圍的+/-20%。例如，當(dāng)樣品和流動(dòng)緩沖液之間的潛在的溶劑失配為約2%時(shí)，第一溶液可具有3%的有機(jī)溶劑濃度，第二溶液可具有1%的有機(jī)溶劑濃度。在另一方面，本發(fā)明涉及用于獲得分析物的校正響應(yīng)的方法，其包括：a.在包括含有用于分析物的固定配偶體的光學(xué)傳感器表面的流動(dòng)池中生成具有分析物的溶液的傳感圖；b.在包括不含有用于分析物的固定配偶體的光學(xué)傳感器表面的相同或另一個(gè)流動(dòng)池中生成相同溶液的傳感圖；c.通過以下方式獲得校正的響應(yīng)，首先對(duì)于各個(gè)信號(hào)，從(a)的信號(hào)中減去(b)的信號(hào)以生成修改的傳感圖，隨后根據(jù)通過本發(fā)明的某些實(shí)施方案獲得的校正曲線調(diào)節(jié)所述修改的傳感圖的信號(hào)或來自所述傳感圖的報(bào)告點(diǎn)。在某些實(shí)施方案中，分析物可以是任何大分子顆粒，例如溶液中的化學(xué)化合物或生物分子。大分子顆?？梢允抢绲鞍踪|(zhì)、多糖、核酸分子。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，分析物是小分子。在某些實(shí)施方案中，分析物是具有在約80至約1000道爾頓之間的尺寸的小分子。在某些實(shí)施方案中，配體或其類似物在本文中以其對(duì)于包含能夠與分析物(目標(biāo)化合物)相互作用的官能團(tuán)的實(shí)體的常規(guī)含義使用。配體的基團(tuán)的實(shí)例是帶正電荷的基團(tuán)(陰離子交換配體)；帶負(fù)電荷的基團(tuán)(陽(yáng)離子交換配體)；疏水基團(tuán)；具有對(duì)特定目標(biāo)化合物的親和力的基團(tuán)，例如抗原對(duì)抗體的親和力(親和力配體)；等。因此，在ifc內(nèi)使用合并注射并通過使所述流動(dòng)反向(即，使樣品流回檢測(cè)點(diǎn)上)改進(jìn)樣品混合，用于建立溶劑校正曲線的改進(jìn)方法通過重復(fù)具有兩種極端溶液之間的改變混合比例的程序建立。為了生成準(zhǔn)確的溶劑校正曲線，需要至少4個(gè)來自不同濃度的有機(jī)溶劑溶液的報(bào)告點(diǎn)。優(yōu)選地，溶劑校正曲線包括八個(gè)或更多個(gè)報(bào)告點(diǎn)。溶劑校正曲線：spr信號(hào)反映傳感器表面的折射率(ri)中的變化。ri由于靠近傳感器表面的結(jié)合事件而變化，并且與表面上的質(zhì)量的增加有關(guān)。如果注射的樣品具有不同于流動(dòng)緩沖液的ri，則獲得額外的信號(hào)。該信號(hào)被稱作溶劑效應(yīng)。當(dāng)溶劑效應(yīng)小(大約100ru)時(shí)，通常可以通過從參考表面減去信號(hào)而從總信號(hào)中消除。然而，引入高ri溶劑如dmso可以在注射期間引起ri的大的偏移，并且僅從參考流動(dòng)池中減去數(shù)據(jù)不再足夠。為了校正這些效應(yīng)，采用溶劑校準(zhǔn)程序。具有不同濃度的溶劑的緩沖溶液可以按順序注射到參考和配體結(jié)合表面上。從參考表面獲得的校準(zhǔn)溶液的響應(yīng)涵蓋相對(duì)于基線的-800至+1200ru的典型范圍。通過繪制配體結(jié)合流動(dòng)池之間的響應(yīng)相對(duì)于無(wú)配體的流動(dòng)池中的響應(yīng)的差異產(chǎn)生溶劑校正曲線。該曲線用于校正在樣品注射期間獲得的響應(yīng)水平?，F(xiàn)在使用兩個(gè)各自在流動(dòng)池的任一側(cè)上的泵描述本發(fā)明的說明性實(shí)施方案。圖1a說明當(dāng)兩種溶液移動(dòng)通過流動(dòng)池三次時(shí)，ifc的一部分的細(xì)節(jié)，示出流動(dòng)通道中的方向(箭頭)和混合模式。與手動(dòng)過程相比，用戶只需在這里制備2種不同的溶液。在該圖中，當(dāng)兩種溶液通過流動(dòng)池(頂部通道)時(shí)，將兩種溶液(頂部通道中的暗和淺的陰影)混合，如通過中間陰影說明。溶液的運(yùn)動(dòng)由通道內(nèi)部的箭頭指示。在第一次通過之后，溶液不能足夠好地混合以獲得良好的溶劑校正曲線。因此，溶液的流動(dòng)在中間通道中反向，以進(jìn)一步混合溶液。因此，附圖的兩個(gè)上部分示出溶液兩次通過流動(dòng)池。第三部分示出任選的第三次通過。如果需要，可以重復(fù)第二次和第三次通過以甚至進(jìn)一步改進(jìn)混合。實(shí)際上，兩次通過為生成良好的溶劑校正曲線提供充分混合的溶液。在第一次通過期間，泵之一的較高流動(dòng)速率由較寬的箭頭指示。另一個(gè)泵的較低流動(dòng)速率和所得的差速流動(dòng)由較窄的箭頭指示。如果例如流動(dòng)池右邊的第二個(gè)泵的流動(dòng)速率為10μl/min而第一個(gè)泵的流動(dòng)速率(左邊，對(duì)于溶液1)為3μl/min，與溶液2的所得的差速流動(dòng)速率相差7μl/min。所得的混合比率將為30%的溶液1和70%的溶液2。然而，如傳感圖(圖3，合并部分)中觀察到的混合是不完全的。在注射結(jié)束后，可以停止第一個(gè)泵。通過反轉(zhuǎn)第二個(gè)泵，注射的溶液可以再次送回流動(dòng)池。溶液現(xiàn)在已有更多的時(shí)間通過擴(kuò)散混合。結(jié)果是溶液第二次通過流動(dòng)池(圖3返回部分)時(shí)得到更均勻的溶液。盡管圖中示出兩個(gè)流動(dòng)池，但僅僅是一個(gè)實(shí)施例。在某些實(shí)施方案中，單個(gè)流動(dòng)池可以存在于兩個(gè)泵之間。備選地，超過兩個(gè)流動(dòng)池可以存在于兩個(gè)泵之間。在備選的實(shí)施方案中，通過通道和閥泵送混合溶液也可以實(shí)現(xiàn)混合溶液的所需均勻性。圖1b示出其中兩個(gè)泵操作以將溶液在通道中混合的備選實(shí)施方案，并且僅將混合溶液引導(dǎo)到一個(gè)或多個(gè)流動(dòng)池中。圖1b說明當(dāng)兩種溶液移動(dòng)通過流動(dòng)池三次時(shí)，ifc的一部分的細(xì)節(jié)，示出流動(dòng)通道中的方向(箭頭)和混合模式。在該圖中，當(dāng)兩種溶液通過通道(頂部)時(shí)，將兩種溶液(頂部通道中的暗和淺的陰影)混合，如通過中間陰影說明。溶液的運(yùn)動(dòng)由通道內(nèi)部的箭頭指示。在第一次通過之后，溶液不能足夠好地混合以獲得良好的溶劑校正曲線。因此，溶液的流動(dòng)在中間通道中反向，以進(jìn)一步混合該溶液。底部示出第三次通過。在第一次通過期間，泵之一的較高流動(dòng)速率由較寬的箭頭指示。另一個(gè)泵的較低流動(dòng)速率和所得的差速流動(dòng)由較窄的箭頭指示。如果例如右邊的第二個(gè)泵的流動(dòng)速率為10μl/min而第一個(gè)泵(左邊，對(duì)于溶液1)的流動(dòng)速率為3μl/min，與溶液2的所得的差速流動(dòng)速率相差7μl/min。所得的混合比率將為30%的溶液1和70%的溶液2。在注射結(jié)束后，可以停止第一個(gè)泵。通過反轉(zhuǎn)第二個(gè)泵，注射的溶液可以再次送回。溶液現(xiàn)在已具有更多時(shí)間通過擴(kuò)散混合。結(jié)果是溶液第二次通過通道時(shí)得到更均勻的溶液，而當(dāng)溶液第三次通過通道時(shí)得到甚至更好的混合溶液。備選地，兩個(gè)泵都可以位于附圖左手側(cè)的通道處。執(zhí)行的實(shí)驗(yàn)示出以這種方式產(chǎn)生的溶劑校正曲線(例如，相對(duì)于參考響應(yīng)繪制并擬合為二次多項(xiàng)式的固定有配體的響應(yīng)-參考響應(yīng))給出與來自手動(dòng)混合溶液的溶劑校正曲線重疊的曲線(圖2)，因此手動(dòng)和自動(dòng)方法獲得相同的結(jié)果，即在兩種情況下校正是相同的。在圖2中，x軸和y軸兩者的單位均為ru。應(yīng)當(dāng)注意，本文所用的術(shù)語(yǔ)“光學(xué)傳感器表面”或“固體支撐物”應(yīng)被廣泛解釋，并且意在包含可在其上固定一種或多種結(jié)合劑和通過所選擇的具體檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)的與其進(jìn)行分子相互作用的任何固體(柔性或剛性)基材?；目梢允巧锏?、非生物的、有機(jī)的、無(wú)機(jī)的或它們的組合，并且可以是顆粒、股、沉淀物、凝膠、片、管、球體、容器、毛細(xì)管、墊、切片、膜、板、滑片等的形式，具有任何方便的形狀，包括盤、球體、圓等?；谋砻婵梢跃哂腥魏味S構(gòu)造，并且可以包括例如梯級(jí)、隆起、扭結(jié)、階面等，并且可以是與基材的其余部分不同的材料的層的表面。在某些實(shí)施方案中，光學(xué)傳感器表面是基于倏逝波傳感的檢測(cè)器的部分。優(yōu)選地，光學(xué)傳感器表面是基于表面等離子體共振的檢測(cè)器的部分。在流動(dòng)池(例如在上述biacore?儀器中使用的類型的流動(dòng)池)中執(zhí)行本發(fā)明的某些方法可能許多次是方便的?？梢栽诒景l(fā)明中使用的其它流動(dòng)池也是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的并且不需要在本文中描述。在另一方面，提供了一種用于在微通道中混合兩種液體的方法，其包括：b.提供包含特定組合物的第一液體和包含另一種組合物的第二液體；c.在微通道中以預(yù)定比例在線混合兩種液體；其中，混合所述兩種液體包括各自以單獨(dú)的預(yù)設(shè)流動(dòng)速率注射所述兩種液體，使組合液體行進(jìn)通過所述微通道，并使所述流動(dòng)反向，使得所述組合液體第二次通過所述微通道。在用于混合兩種液體的方法的某些實(shí)施方案中，流動(dòng)可以再一次反向，使得組合液體第三次通過微通道。在某些實(shí)施方案中，通過控制各液體的流動(dòng)速率來實(shí)現(xiàn)混合兩種液體。在某些實(shí)施方案中，液體的流動(dòng)速率由一個(gè)或多個(gè)泵控制。只要結(jié)合檢測(cè)點(diǎn)進(jìn)行混合，通過評(píng)估作為混合有效性的參數(shù)的平滑度(例如，在圖3中比較合并部分與返回部分)，可以容易地評(píng)估液體混合的有效性。以下一般原理適用于本發(fā)明的某些方面。可以使用許多不同的相互作用分析技術(shù)來表征表面結(jié)合相互作用和折射率的主體變化。市售可得的生物傳感器包括基于表面等離子體共振(spr)的上述biacore?系統(tǒng)儀器，并允許實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)表面相互作用。spr的現(xiàn)象是眾所周知的。當(dāng)光在某些條件下在不同折射率的兩種介質(zhì)之間的界面處反射，并且界面被金屬膜(通常為銀或金)涂覆時(shí)出現(xiàn)spr。在biacore?儀器中，介質(zhì)是樣品和通過微流體流動(dòng)系統(tǒng)與樣品接觸的傳感器芯片的玻璃。金屬膜是芯片表面上的薄金層。spr使反射光的強(qiáng)度在特定的反射角下降低。在biacore?系統(tǒng)的樣品側(cè)中，該最小反射光強(qiáng)度的角度隨著接近反射光相反側(cè)上的表面的折射率而變化。當(dāng)樣品中的分子與傳感器芯片表面上的捕獲分子結(jié)合時(shí)，表面的濃度且因此折射率改變并檢測(cè)spr響應(yīng)。在相互作用過程期間，針對(duì)時(shí)間繪制響應(yīng)將提供相互作用進(jìn)程的定量測(cè)量。這種圖通常被稱作傳感圖。在biacore?系統(tǒng)中，spr響應(yīng)值以共振單位(ru)表示。1ru表示在最小反射光強(qiáng)度的角度中0.00001°的變化，其對(duì)于大多數(shù)蛋白質(zhì)大致相當(dāng)于傳感器表面上約1pg/mm2的濃度變化。當(dāng)含有分析物的樣品接觸傳感器表面時(shí)，與傳感器表面結(jié)合的捕獲分子(配體)在被稱作“締合”的步驟中與分析物相互作用。當(dāng)使樣品最初與傳感器表面接觸時(shí)，該步驟通過ru增加在傳感圖上指示。相反，當(dāng)樣品流例如被緩沖液流替代時(shí)，通常會(huì)發(fā)生“解離”。當(dāng)分析物與表面結(jié)合的配體解離時(shí)，該步驟在傳感圖上通過ru隨時(shí)間的下降而指示。biacore?儀器的技術(shù)方面和spr的現(xiàn)象的詳細(xì)討論可以在美國(guó)專利no.5,313,264中發(fā)現(xiàn)。用于生物傳感器傳感表面的基質(zhì)涂層的更詳細(xì)信息在例如美國(guó)專利no.5,242,828和5,436,161中給出。此外，結(jié)合biacore?儀器使用的生物傳感器芯片的技術(shù)方面的詳細(xì)討論可在美國(guó)專利no.5,492,840中發(fā)現(xiàn)。上述美國(guó)專利的全部公開內(nèi)容通過引用并入本文中。盡管針對(duì)biacore?系統(tǒng)已經(jīng)進(jìn)行以上描述，但是應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明可以結(jié)合許多其它技術(shù)使用，所述技術(shù)用于基于折射率變化和其它物理現(xiàn)象(也需要在固體支撐表面的溶劑校正)檢測(cè)結(jié)合的相互作用。然而，實(shí)時(shí)檢測(cè)系統(tǒng)是優(yōu)選的，特別是基于化學(xué)傳感器或生物傳感器技術(shù)的系統(tǒng)。生物傳感器廣泛定義為使用用于分子識(shí)別的部件(例如具有固定的抗體的層)的設(shè)備，所述部件與固態(tài)物理化學(xué)換能器直接結(jié)合或與正與換能器結(jié)合的移動(dòng)載體珠/顆粒直接結(jié)合。雖然這種傳感器通?；跓o(wú)標(biāo)簽技術(shù)，檢測(cè)例如固定層的質(zhì)量、折射率或厚度的變化，還存在依賴一些種類的標(biāo)記的傳感器。典型的傳感器檢測(cè)技術(shù)包括但不限于質(zhì)量檢測(cè)方法，例如光學(xué)、熱-光學(xué)和壓電或聲波(包括例如表面聲波(saw)和石英晶體微天平(qcm))方法以及電化學(xué)方法，例如電勢(shì)測(cè)定、電導(dǎo)測(cè)定、電流測(cè)定和電容/阻抗方法。關(guān)于光學(xué)檢測(cè)方法，代表性方法包括檢測(cè)質(zhì)量表面濃度的方法，例如反射-光學(xué)方法，包括外部和內(nèi)部反射方法兩者，其可以是角度、波長(zhǎng)、極化或相解析，例如倏逝波橢圓光度法和倏逝波光譜(ews，或內(nèi)部反射光譜)，這兩者都可包括經(jīng)由表面等離子體共振(spr)、布魯斯特角折射法、臨界角折射法、受抑全反射(ftr)、散射全內(nèi)反射(stir)的倏逝場(chǎng)增強(qiáng)，其可包括散射增強(qiáng)標(biāo)記、光學(xué)波導(dǎo)傳感器；外部反射成像、基于倏逝波成像例如臨界角解析成像、布魯斯特角解析成像、spr角解析成像等。此外，可提及光度測(cè)定和成像/顯微鏡方法“本身”或與反射方法組合的光度測(cè)定和成像/顯微鏡方法(基于例如表面增強(qiáng)拉曼光譜(sers)、表面增強(qiáng)共振拉曼光譜(serrs)、倏逝波熒光(tirf)和磷光)，以及波導(dǎo)干涉儀、波導(dǎo)泄漏模式光譜、反射干涉光譜(rifs)、透射干涉法、全息光譜和原子力顯微鏡(afr)。實(shí)施例表面制備：將傳感器芯片cm5對(duì)接(docked)，并通過使用來自gehealthcare的胺偶聯(lián)成套工具的胺偶聯(lián)來固定12000ru人血清白蛋白。注射10mm乙酸鹽ph5.0中的50μg/ml人血清白蛋白7分鐘。緩沖液和溶劑校正溶液如下所述制備：使用由gehealthcare提供的儲(chǔ)備溶液10xpbs-p+(具有0.5%p20)來制備流動(dòng)緩沖液。1.制備2升1.02xpbs-p+：用milli-q水將204ml10xpbs-p+儲(chǔ)備液稀釋至2000ml。該緩沖液用于制備流動(dòng)緩沖液和溶劑校正儲(chǔ)備溶液。2.溶劑校正儲(chǔ)備溶液和測(cè)定流動(dòng)緩沖液的制備：根據(jù)表1制備10ml具有1.5%和2.8%dmso的溶劑校正儲(chǔ)備溶液和1升具有2%dmso的測(cè)定流動(dòng)緩沖液。表1.用于溶劑校正的溶液和2%dmso流動(dòng)緩沖液。3.溶劑校正工作溶液的制備：使用1.5%和2.8%dmso儲(chǔ)備溶液，制備根據(jù)表2(體積以μl計(jì))的用于溶劑校正曲線的一系列等分物。表2.溶劑校正溶液的制備。體積以μl計(jì)。緩沖液/小瓶123456781.5%dmso02004006008001000120014002.8%dmso14001200100080060040020004.針對(duì)“預(yù)混合”數(shù)據(jù)，將這些溶液1-8一個(gè)接一個(gè)地注射通過兩個(gè)流動(dòng)池。5.在合并-返回實(shí)驗(yàn)中，僅使用溶液1和8，但以不同的流動(dòng)速率注射，并在如上所述的ifc中混合。使用手動(dòng)和合并-返回注射獲得的結(jié)果是比得上的，如圖2中所例示。雖然已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的具體實(shí)施方案，但是對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，在不偏離本發(fā)明的教導(dǎo)的情況下，可以進(jìn)行變化和修改。上述說明書和附圖中闡述的事項(xiàng)僅作為說明而不作為限制來提供。當(dāng)以他們基于現(xiàn)有技術(shù)的合適視角來看時(shí)，本發(fā)明的實(shí)際范圍旨在所附權(quán)利要求書中限定。當(dāng)前第1頁(yè)12