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用于分析血液樣品中的葡萄糖?6?磷酸脫氫酶活性的方法和組合物與流程

文檔序號:11934821閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于檢測葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)活性的方法,所述方法包括:

a.獲得未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品;和

b.檢測存在于所述未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品中的G6PD活性,其中所述檢測G6PD活性包括對所述未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品進(jìn)行落射熒光檢測。

2.權(quán)利要求1的方法,其中所述檢測G6PD活性包括測量對應(yīng)于所述未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品中NADP+至NADPH的酶促轉(zhuǎn)化的信號。

3.權(quán)利要求1至2中任一項(xiàng)的方法,還包括測量NADPH熒光。

4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的方法,其中所述測量NADPH熒光是通過在被紫外光激發(fā)時(shí)測量NADPH發(fā)射,通過分光光度法進(jìn)行的。

5.權(quán)利要求3至4中任一項(xiàng)的方法,其中所述NADPH熒光在290-400nm之間的一個(gè)或多個(gè)波長處被激發(fā)。

6.權(quán)利要求3至5中任一項(xiàng)的方法,其中所述NADPH熒光在310-380nm之間的一個(gè)或多個(gè)波長處被激發(fā)。

7.權(quán)利要求3至6中任一項(xiàng)的方法,其中所述NADPH熒光在330-370nm之間的一個(gè)或多個(gè)波長處被激發(fā)。

8.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的方法,其中所述檢測G6PD活性通過衰減全反射(ATR)方法進(jìn)行。

9.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的方法,其中所述檢測G6PD活性包括測量對應(yīng)于所述未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品中葡萄糖-6-磷酸(G6P)至6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯的轉(zhuǎn)化的信號。

10.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的方法,其中所述檢測未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品中的G6PD活性作為用于檢測所述血液樣品中的血液傳染性微生物的診斷方法的一部分或與其結(jié)合進(jìn)行。

11.權(quán)利要求10方法,其中在未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品的相同等分試樣上進(jìn)行所述G6PD活性的檢測和血液傳染性微生物的檢測。

12.權(quán)利要求10至11中任一項(xiàng)的方法,其中所述血液傳染性微生物選自細(xì)菌、原生動(dòng)物、霉菌、酵母、絲狀微真菌和病毒。

13.權(quán)利要求10至12中任一項(xiàng)的方法,其中所述血液傳染性微生物是瘧疾的致病微生物。

14.權(quán)利要求10至13中任一項(xiàng)的方法,其中所述瘧疾的致病微生物是屬于選自瘧原蟲屬、Polychromophilus、Rayella和蜥細(xì)胞蟲屬的原生動(dòng)物屬的微生物。

15.權(quán)利要求14方法,其中所述瘧疾的致病微生物是屬于選自以下的亞屬的瘧原蟲微生物:Asiamoeba,Bennettinia,Carinamoeba,Giovannolaia,血變形蟲目,Huffia,Lacertamoeba,萊佛蘭原蟲,Novyella,Paraplasmodium,瘧原蟲屬,Sauramoeba,和Vinckeia。

16.權(quán)利要求15的方法,其中所述瘧原蟲微生物選自惡性瘧原蟲,諾氏瘧原蟲,三日瘧原蟲,卵形瘧原蟲和間日瘧原蟲。

17.權(quán)利要求10至16中任一項(xiàng)的方法,其中所述未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品中血液傳染性微生物的所述檢測包括測定特異于所述血液傳染性微生物的至少一種生物標(biāo)志物的水平或存在。

18.權(quán)利要求17方法,其中所述至少一種生物標(biāo)志物是特異于所述血液傳染性微生物的抗原,其選自醛縮酶(pFBPA)、富含組氨酸的蛋白2(HRP-2)、次黃嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(pHPRT)、乳酸脫氫酶(pLDH)和磷酸甘油酸酯變位酶(pPGM)。

19.權(quán)利要求18的方法,其中所述至少一種生物標(biāo)志物是對特異于乳酸脫氫酶(pLDH)的抗原。

20.權(quán)利要求10至19中任一項(xiàng)的方法,其中所述血液傳染性微生物的檢測通過免疫測定進(jìn)行。

21.權(quán)利要求10至權(quán)利要求20中任一項(xiàng)的方法,所述血液傳染性微生物的檢測通過夾心免疫測定進(jìn)行。

22.權(quán)利要求20至21中任一項(xiàng)的方法,其中所述用于檢測血液傳染性微生物的免疫測定是基于微粒的SERS納米標(biāo)簽免疫測定。

23.權(quán)利要求22方法,其中所述用于檢測血液傳染性微生物的基于微粒的SERS納米標(biāo)簽免疫測定是均相免疫測定。

24.權(quán)利要求20至21的方法,其中所述用于檢測血液傳染性微生物的免疫測定是酶聯(lián)免疫吸附測定。

25.權(quán)利要求10至24中任一項(xiàng)的方法,其中所述G6PD活性的檢測和血液傳染性微生物的檢測在單一反應(yīng)混合物上同時(shí)進(jìn)行。

26.權(quán)利要求10至24中任一項(xiàng)的方法,其中所述G6PD活性的檢測和血液傳染性微生物的檢測在單一反應(yīng)混合物上順序進(jìn)行。

27.權(quán)利要求10至24中任一項(xiàng)的方法,其中在進(jìn)行所述G6PD活性檢測和血液傳染性微生物檢測之前,將所述未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品分成樣品等分試樣。

28.權(quán)利要求27的方法,其中所述G6PD活性的檢測和血液傳染性微生物的檢測在空間上分離的樣品等分試樣中進(jìn)行。

29.一種用于檢測未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)活性的量的試劑盒,所述試劑盒包含:

a.葡萄糖-6-磷酸(G6P)或適用于在未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品中使用的G6P替代物;和

b.煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)或適用于在未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品中使用的NADP+替代物。

30.權(quán)利要求29試劑盒,還包括用于制備促進(jìn)NADP+、G6P和G6PD酶在未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品中的反應(yīng)的反應(yīng)混合物的說明書。

31.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)試劑盒,還包含用于檢測血液傳染性微生物的免疫測定試劑。

32.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法或試劑盒,其中所述未稀釋或最低限度稀釋的血液樣品來自受試者。

33.權(quán)利要求32的方法或試劑盒,其中所述受試者患有或疑似患有疾病。

34.權(quán)利要求33的方法或試劑盒,其中所述受試者患有或疑似患有發(fā)熱性疾病。

35.權(quán)利要求33的方法或試劑盒,其中所述疾病由血液傳染性微生物引起。

36.權(quán)利要求35的方法或試劑盒,其中所述疾病是瘧疾。

37.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法或試劑盒,其中在經(jīng)受分析的所述血液樣品中,最終反應(yīng)混合物中全血或血液成分的濃度大于0.1%。

38.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法或試劑盒,其中在經(jīng)受分析的所述血液樣品中,最終反應(yīng)混合物中全血或血液成分的濃度大于1%。

39.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法或試劑盒,其中在經(jīng)受分析的所述血液樣品中,最終反應(yīng)混合物中全血或血液成分的濃度大于25%,30%,40%,50%60%,68%,70%,80%或90%。

40.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法或試劑盒,其中在經(jīng)受分析的所述血液樣品中,最終反應(yīng)混合物中全血或血液成分的濃度為0.1%至95%,1%至95%,1%至68%,25%至99%,25%至95%,25%至70%,40%至80%,40%至68%,50%至95%,50%至68%,60%至95%,60%至80%,68%至95%或68%至90%。

41.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法或試劑盒,其中在經(jīng)受分析的所述血液樣品中,最終混合物中的全血或血液成分的濃度是未稀釋的。

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