1.一種DNA熒光分析方法,其特征在于,包括如下步驟:
步驟一、將鏈霉親和素磁珠懸浮在PBS緩沖液中,加入3’端修飾生物素的嗎啉寡核苷酸探針,反應(yīng)結(jié)束后進行磁分離,并用PBS緩沖液清洗多次;
步驟二、加入待測DNA片段溶液,雜交反應(yīng)結(jié)束后進行磁分離,并用Tris-HCl緩沖液清洗多次;
步驟三、加入ZrOCl2溶液,配位反應(yīng)結(jié)束后進行磁分離,并用60wt%乙醇清洗多次;
步驟四、加入1-芘丁酸溶液,反應(yīng)結(jié)束后進行磁分離,并用N,N-二甲基甲酰胺清洗多次;
步驟五、再加入金絲桃素溶液,反應(yīng)結(jié)束后進行磁分離,并用二甲基亞砜清洗多次,最后復(fù)懸在DMSO中測紫外和熒光光譜。
2.如權(quán)利要求1所述的DNA熒光分析方法,其特征在于,步驟一中,鏈霉親和素磁珠的濃度為0.1~1.0mg/mL,嗎啉寡核苷酸探針的濃度為0.5~1.5μM,嗎啉寡核苷酸探針的序列為5’-AAC CAT ACA ACC TAC TAC CTC A-Biotin-3’,反應(yīng)時間為40~80min。
3.如權(quán)利要求1所述的DNA熒光分析方法,其特征在于,步驟二中,所述的待測DNA片段溶液的溶劑為TE緩沖液,DNA濃度為1nM~100nM,DNA片段選用序列為5’-TGA GGT AGT AGG TTG TAT GGT T-3’的完全互補的DNA片段,序列為5’-TGA GGT AGT AGG TTG TGT GGT T-3’的單堿基錯配的DNA片段,序列為5’-TGA GGT ATT AGA TTG TGT GGT T-3’的三堿基錯配的DNA片段或序列為5’-ACT TAC CTT TGC TCA TTG ACG A-3’的對照DNA片段,反應(yīng)時間為40~80min。
4.如權(quán)利要求1所述的DNA熒光分析方法,其特征在于,步驟三中,所述的ZrOCl2溶液的溶劑為60wt%乙醇,Zr4+的濃度為4mM,反應(yīng)時間為20~40min。
5.如權(quán)利要求1所述的DNA熒光分析方法,其特征在于,步驟四中,所述的1-芘丁酸溶液的溶劑為N,N-二甲基甲酰胺,1-芘丁酸濃度為2mM,反應(yīng)時間為20~40min。
6.如權(quán)利要求1所述的DNA熒光分析方法,其特征在于,步驟五中,所述的金 絲桃素溶液的溶劑為二甲基亞砜,金絲桃素濃度為0.1~0.3mM,反應(yīng)時間為10~80min。