本發(fā)明涉及一種藏藥綠蘿花的HPLC特征圖譜及其構(gòu)建方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
藏藥滇結(jié)香(Edgeworthiagardneri)，為瑞香科(Thymelaeaceae)結(jié)香屬植物，花蕾、根河莖皮均可入藥，其花蕾稱為綠蘿花?，F(xiàn)代藥理研究表明，綠蘿花提取物有較強(qiáng)的α-葡萄糖苷酶抑制及抗氧化作用，對Ⅱ型糖尿病血糖及血脂有顯著的治療作用。綠蘿花成分復(fù)雜，基礎(chǔ)研究薄弱，目前僅知還原糖、黃酮類物質(zhì)是綠蘿花中的重要有效成分之一。李文茂等在《藏藥綠蘿花中總黃酮含量的提取工藝研究》(北方園藝2013年5期)采用乙醇回流提取法對綠蘿花中的總黃酮的提取條件進(jìn)行優(yōu)化研究，并采用分光光度法對綠蘿花中黃酮類物質(zhì)進(jìn)行測定。目前，對綠蘿花的質(zhì)量研究較少，甚至有文獻(xiàn)將其與觀賞植物綠蘿(天南星科)相混淆，部分藥商也將同科屬結(jié)香花(EdgeworthiachlysanthaLindl.)的花蕾替代綠蘿花，不僅大大制約了綠蘿花的開發(fā)應(yīng)用，且易引起安全問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種藏藥綠蘿花的HPLC特征圖譜，該圖譜包括以下10個特征峰，其中8號峰為槲皮素參照峰，其它9個特征峰的相對保留時間為：1號峰0.242、2號鋒0.306、3號峰0.392、4號峰0.492、5號峰0.906、6號峰0.925、7號峰0.967，9號峰1.03，10號峰1.167。本發(fā)明還提供了該圖譜的構(gòu)建方法，包括如下步驟：A、色譜條件：C18色譜柱，規(guī)格：250mm*4.6mm，以乙腈-含1％異丙醇和0.4％冰醋酸的混合液為流動相，采用梯度洗脫方式：0min→20min→40min→60min，流動相中乙腈體積濃度變化為18％→18％→40％→40％，檢測波長360nm，理論板數(shù)按槲皮素峰計算不低于2000；B、參照溶液的制備：取槲皮素對照品，加70％乙醇制成1ml含50ug的溶液；C、供試品的制備：取綠蘿花藥材粗粉，精密稱取0.2-5g，加50-80％乙醇50ml回流提取2小時，過濾，濾液蒸干，以50-80％乙醇溶解，定容至10ml量瓶中，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；D、特征圖譜構(gòu)建：分別精密吸取參照溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得綠蘿花HPLC特征圖譜。本發(fā)明優(yōu)選的，上述構(gòu)建方法中，步驟C、供試品的制備為：取綠蘿花藥材粗粉，精密稱取2g，加70％乙醇50ml回流提取2小時，過濾，濾液蒸干，以70％乙醇溶解，定容至10ml量瓶中，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；上述特征圖譜的構(gòu)建方法中，供試品的制備還可以直接使用綠蘿花提取物。本發(fā)明中流動相的濃度、乙醇濃度均為體積百分比。有益效果本發(fā)明所述的藏藥綠蘿花HPLC特征圖譜的構(gòu)建，以乙腈-1％異丙醇-0.4％冰醋酸為流動相，采用梯度洗脫方式建立綠蘿花HPLC特征圖譜，使用本發(fā)明的特征圖譜可有效檢測綠蘿花及其提取物，準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好。附圖說明圖1為槲皮素對照品色譜圖；圖2為綠蘿花(批號20141101)特征圖譜；圖3為綠蘿花提取物(批號：20141102)特征圖譜。圖4為綠蘿花提取物(批號：20141103)特征圖譜。其中，圖1、圖2、圖3、圖4的橫坐標(biāo)是時間，單位：分鐘(min)；縱坐標(biāo)是電壓，單位：毫伏特(Volts)。具體實施方式下述實驗例和實施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。實驗例1：藏藥綠蘿花及其提取物HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法和圖譜一、試驗儀器：高效液相色譜儀：日立L-2100泵L-2400紫外檢測器電子天平：島津AUW-220D型紫外分光光度計：島津UV-2450型對照品：槲皮素對照品(中國藥品生物制品檢定所)批號：100081-200907供試品：綠蘿花(金訶藏藥股份有限公司提供)，批號：20141101綠蘿花提取物(江西康恩泰中藥保健品有限公司，批號:20141102)二、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：C18色譜柱，規(guī)格：250mm*4.6mm，5um，以乙腈-含1％異丙醇和0.4％冰醋酸的混合液為流動相，采用梯度洗脫方式：0min→20min→40min→60min，乙腈18％→18％→40％→40％，檢測波長360nm，得到綠蘿花的特征圖譜，理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于2000。三、方法色譜條件選擇：綠蘿花現(xiàn)行報道主要成分為黃酮類，但現(xiàn)有文獻(xiàn)未見關(guān)于綠蘿花HPLC特征圖譜測定方法的報道。實驗表明：簡單的甲醇-水、乙腈-水等度體系無法完成測定，其他多種流動相如①甲醇-0.1％磷酸，②甲醇-四氫呋喃-0.1％磷酸，③甲醇-異丙醇-四氫呋喃-0.1％磷酸，④乙腈-0.5％異丙醇-0.5％檸檬酸等對于綠蘿花樣品的HPLC特征峰檢測結(jié)果也并不理想，部分特征峰分離度較差。通過大量實驗發(fā)現(xiàn)，使用0.4％冰醋酸及1％異丙醇調(diào)節(jié)峰形，能夠保證全部特征峰...