一種蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒及其檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒及其檢測方法，其中，該檢測試劑盒包括：凝集素、封閉液、生物素標(biāo)記的抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈親和素、3',3',5',5'-四甲基聯(lián)苯胺底物顯色液、終止液以及清洗緩沖液；檢測方法包括如下步驟：基于凝集素與寡糖鏈的特異性識別，將凝集素固定于聚苯乙烯固相載體上用于識別并結(jié)合樣本中的糖蛋白，再通過蛋白質(zhì)與其抗體的特異性結(jié)合，識別出所需檢測的糖蛋白，并實現(xiàn)對該糖蛋白的半定量分析。本發(fā)明不僅可以實現(xiàn)單一蛋白質(zhì)糖基化亞型的半定量檢測，同時操作簡便，成本較低。
【專利說明】一種蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒及其檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)及其翻譯后修飾檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒及其檢測方法。

【背景技術(shù)】
[0002]糖基化(Glycosylat1n)是最普遍的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一，約一半以上的哺乳動物蛋白質(zhì)都發(fā)生了糖基化。通過影響蛋白質(zhì)的溶解度、折疊、定位以及構(gòu)象的維持，它可以調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的功能和降解，從而介導(dǎo)分子與分子之間、分子與細(xì)胞之間、細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用。近年來，蛋白質(zhì)糖基化在腫瘤方面的研宄日益興起。大量研宄表明，蛋白質(zhì)糖基化在腫瘤細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化、迀移、侵襲的過程中會發(fā)生改變并有相應(yīng)的功能性作用。在臨床診斷領(lǐng)域，蛋白質(zhì)糖基化亞型是一種重要的惡性腫瘤標(biāo)志物。在多種腫瘤，如肺癌、乳腺癌、肝癌、直腸癌、胰腺癌、胃癌等，的腫瘤組織或患者血清中，一些糖蛋白糖基化亞型被發(fā)現(xiàn)與正?；蛄夹詫φ战M之間存在顯著性差異。因此，建立高靈敏度、選擇性強、操作簡便的蛋白質(zhì)糖基化檢測方法，對于癌癥的早期診斷及治療具有十分重要的意義。
[0003]目前，對于蛋白質(zhì)的糖基化檢測主要是通過凝集素(Lectin)與糖鏈的特異性結(jié)合。簡強等建立的凝集素芯片技術(shù)通過將多種特異性識別不同糖鏈結(jié)構(gòu)的凝集素固定在環(huán)氧化片基上，再與待測樣本反應(yīng)，實現(xiàn)了對糖蛋白快速、高通量的分析。Jung-Hyun Rho等利用高效液相色譜技術(shù)(High performance liquid chromatography，HPLC)與串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(MS/MS)聯(lián)用，可實現(xiàn)糖肽的分離和鑒定。此外，凝集素印跡、凝集素組織化學(xué)等方法也可用于組織或體液樣本中蛋白質(zhì)糖鏈的檢測。但這些方法操作復(fù)雜，反應(yīng)步驟多，耗時長，需要配備價格昂貴的實驗設(shè)備；此外，這些技術(shù)均不能實現(xiàn)生物樣本中特定蛋白質(zhì)的某種糖基化修飾亞型的檢測，不適用于臨床腫瘤標(biāo)志物的實時、快速檢測。對于已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的一些可用作腫瘤診斷標(biāo)志物的蛋白質(zhì)糖基化亞型，如巖藻糖基化的甲胎蛋白等，開發(fā)適用于臨床的實時、快捷、較高靈敏度的檢測方法是非常有必要的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是為了解決生物樣品中蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測問題，提供了一種蛋白質(zhì)糖基化亞型檢測的試劑盒及其檢測方法，其不僅可以實現(xiàn)單一蛋白質(zhì)糖基化亞型的半定量檢測，同時操作簡便，成本較低。
[0005]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):
[0006]一種蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒，包括:
[0007]凝集素:固定在聚苯乙烯固相載體上后，利用其糖識別域特異性識別并結(jié)合糖蛋白上的寡糖鏈，凝集素包被濃度為3?30 μ g/mL ；
[0008]封閉液:含0.025 ?0.05g/mL 牛血清白蛋白(Bovine serum albumin，BSA)的磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffered Saline,PBS,pH = 6?8)，用于封閉未與凝集素結(jié)合的固相載體位點，降低背景值；
[0009]生物素標(biāo)記的抗體:用于特異性結(jié)合凝集素捕獲的糖蛋白中的目標(biāo)蛋白，且生物素-親和素系統(tǒng)有級聯(lián)放大作用，使用時用含體積分?jǐn)?shù)為0.02?0.1% Tween-20的PBST (pH = 6 ?8)稀釋至 100 ?2000 倍；
[0010]辣根過氧化物酶(Horseradish peroxidase，HRP)標(biāo)記的鏈親和素:結(jié)合了酶的親和素分子與結(jié)合有特異性抗體的生物素分子發(fā)生反應(yīng)，起到了級聯(lián)放大作用，且辣根過氧化物酶在遇到催化底物后顯色，達(dá)到檢測目標(biāo)糖蛋白糖基化亞型的目的，使用時用含體積分?jǐn)?shù)為 0.02 ?0.1 % Tween-20 的 PBST (pH = 6 ?8)稀釋至 2000 ?10000 倍；
[0011]3，，3，，5，，5，-四甲基聯(lián)苯胺(3，，3’，5’，5’ -Tetramethylbenzidine, TMB)底物顯色液:在辣根過氧化物酶催化下可形成可溶性藍(lán)色產(chǎn)物，用于半定量檢測目標(biāo)糖蛋白；
[0012]終止液?2mol/L硫酸，用于終止上訴催化反應(yīng)；
[0013]清洗緩沖液:含體積分?jǐn)?shù)為0.1 %?0.2% Tween-20的PBST，pH = 6?8。
[0014]一種蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測方法，包括以下步驟:
[0015]I)將凝集素用pH = 9?9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋至3?30 μ g/mL后，包被于96孔板的每個聚苯乙烯反應(yīng)孔內(nèi)，每孔中加入凝集素50?200 μ L，2?6°C靜置12?18h ；
[0016]2)將封閉液加入反應(yīng)孔內(nèi)，每孔加200?300 μ L，封閉未與凝集素結(jié)合的部位，室溫孵育I?3h ;
[0017]3)用清洗緩沖液清洗96孔板4次；
[0018]4)將生物樣品(組織裂解液、細(xì)胞裂解液或血清等)用含0.005?0.015g/mLBSA的PBS (pH = 6?8)稀釋后加入96孔板，加50?200 μ L于上述已包被的各反應(yīng)孔中，室溫孵育I?3h ;待反應(yīng)結(jié)束后，用清洗緩沖液清洗96孔板4次；
[0019]5)用含體積分?jǐn)?shù)為0.02?0.1 % Tween-20的PBST稀釋生物素標(biāo)記的特異性抗體100?2000倍，加50?200 yL至各反應(yīng)孔內(nèi)，室溫孵育I?3h ;反應(yīng)結(jié)束后，用清洗緩沖液洗板子4次；其中，含Tween-20的PBST的pH = 6?8 ;
[0020]6)用含體積分?jǐn)?shù)為0.02?0.1 % Tween-20的PBST稀釋HRP標(biāo)記的鏈親和素2000?10000倍，加50?200 μ L至96孔板，室溫孵育0.5?1.5h，用清洗緩沖液洗板子4-5 次；
[0021]7)各反應(yīng)孔中加入50?200 μ LTMB底物顯色液，室溫孵育15?20min;
[0022]8)各孔中加入50?100 μ L終止液終止反應(yīng)；
[0023]9)待反應(yīng)完成后，利用酶標(biāo)儀檢測各反應(yīng)孔在波長為450nm處的吸光度值，對待測樣本中的目標(biāo)蛋白質(zhì)糖基化亞型進(jìn)行半定量檢測。
[0024]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果:
[0025]1、本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒及其檢測方法，是首個可以實現(xiàn)針對單一蛋白質(zhì)某一特定糖基化修飾亞型進(jìn)行檢測的方法，可以對樣本中目標(biāo)糖蛋白糖基化亞型的含量進(jìn)行半定量測定；對各種生物樣本中蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測具有廣泛適用性。
[0026]2、本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒及其檢測方法，是一種基于凝集素和抗體的酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒及其檢測方法。通過凝集素與寡糖鏈、抗原與抗體、生物素與鏈親和素等反應(yīng)級聯(lián)放大，然后將其轉(zhuǎn)化為方便檢測的信號，從而實現(xiàn)糖蛋白糖基化亞型的半定量檢測。
[0027]3、本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒及其檢測方法，利用凝集素和抗體分別識別糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)和蛋白質(zhì)抗原本身，在檢測前無需將目標(biāo)糖蛋白從生物樣本中提取純化，可以直接應(yīng)用收集的生物樣本進(jìn)行檢測。該方法不僅提高了檢測效率，同時不需要復(fù)雜的純化儀器設(shè)備；此外避免了蛋白質(zhì)純化過程對目標(biāo)糖蛋白活性、結(jié)構(gòu)等的不利影響。
[0028]4、本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒及其檢測方法，為了克服抗體本身攜帶的糖鏈對于目標(biāo)糖蛋白糖鏈檢測的干擾，采用凝集素包被聚丙乙烯孔，然后加入待測樣本，最后加入抗體的實驗方法，使得先加入反應(yīng)孔內(nèi)的待測樣本中過量的糖蛋白足以封閉所有的凝集素結(jié)合位點，并形成空間位阻效應(yīng)，從而達(dá)到避免抗體的糖鏈與凝集素相結(jié)合，降低背景值的目的。
[0029]5、本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒及其檢測方法，與以往蛋白質(zhì)糖基化檢測的方法操作相比，操作更加簡便，步驟少，且不需要昂貴的設(shè)備。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0030]圖1是實施例1中不同稀釋倍數(shù)血清樣品半乳糖基化α 1-抗胰蛋白酶亞型的吸光度檢測結(jié)果圖；
[0031]圖2是實施例2中不同稀釋倍數(shù)血清樣品巖藻糖基化α 1_抗胰蛋白酶亞型的吸光度檢測結(jié)果圖；
[0032]圖3是實施例3中不同稀釋度血清樣品聚乳糖胺基化α 1-抗胰蛋白酶亞型的吸光度檢測結(jié)果圖。

【具體實施方式】
[0033]下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0034]實施例1:
[0035]I)將西非單葉豆凝集素(Bandeiraea simplicifolia，BS-1)用 pH = 9.6 的碳酸鹽緩沖液溶解并稀釋至3 μ g/mL，加入96孔板的每個聚苯乙烯反應(yīng)孔內(nèi)，使其覆蓋整個孔底，每孔中加入該凝集素溶液100 yL，4°C過夜。
[0036]2)次日，棄去孔內(nèi)凝集素溶液，每孔加入200 μ L封閉液，封閉未與凝集素結(jié)合的部位，室溫孵育Ih。
[0037]3)用清洗緩沖液清洗96孔板4次，每次清洗時清洗緩沖液應(yīng)加滿整個反應(yīng)孔，輕柔搖動3min，棄去孔內(nèi)液體并在吸水紙上拍干。
[0038]4)將血清樣本用含 0.01g/mL BSA 的 PBS (pH = 7.4)按 1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1:1280、1:2560倍比稀釋后分別加入96孔板，每孔加100 μ L，室溫孵育Ih ；
待反應(yīng)結(jié)束后，用清洗緩沖液清洗96孔板4次。
[0039]5)用含體積分?jǐn)?shù)為0.05% Tween-20的PBST(pH = 7.4)將生物素標(biāo)記的α 1-抗胰蛋白酶抗體稀釋100倍，每孔加入100 μ L，室溫孵育Ih ;反應(yīng)結(jié)束后，用清洗緩沖液洗板子4次。
[0040]6)用含體積分?jǐn)?shù)為0.05 % Tween-20的PBST (pH = 7.4)將HRP標(biāo)記的鏈親和素稀釋2000倍，每孔加入100 μ L，室溫孵育30min。用清洗緩沖液洗板子5次。
[0041]7)于各反應(yīng)孔中加入100 μ LTMB底物顯色液，室溫孵育15?20min。
[0042]8)于各孔中加入50 μ L終止液終止反應(yīng)。
[0043]9)待反應(yīng)完成后，利用酶標(biāo)儀檢測各反應(yīng)孔在波長為450nm處的吸光度值，對不同稀釋倍數(shù)血清樣品中半乳糖基化α 1-抗胰蛋白酶亞型進(jìn)行半定量檢測。
[0044]具體檢測結(jié)果如圖1所示，橫坐標(biāo)為血清稀釋倍數(shù)，縱坐標(biāo)為吸光度。實施例1中凝集素BS-1特異性識別半乳糖和N-乙酰半乳糖，α 1-抗胰蛋白酶抗體可與α 1-抗胰蛋白酶特異性結(jié)合，聯(lián)合檢測半乳糖基化α 1-抗胰蛋白酶亞型的血清水平。
[0045]實施例2:
[0046]I)將橙黃網(wǎng)胞盤菌凝集素(Aleuria Aurantia Lectin，AAL)用pH = 9.6的碳酸鹽緩沖液溶解并稀釋至3 μ g/mL，加入96孔板的每個聚苯乙烯反應(yīng)孔內(nèi)，使其覆蓋整個孔底，每孔中加入該凝集素溶液100 yL，4°C過夜。
[0047]2)次日，棄去孔內(nèi)凝集素溶液，每孔加入200 μ L封閉液，封閉未與凝集素結(jié)合的部位，室溫孵育Ih。
[0048]3)用清洗緩沖液清洗96孔板4次，每次清洗時清洗緩沖液應(yīng)加滿整個反應(yīng)孔，輕柔搖動3min，棄去孔內(nèi)液體并在吸水紙上拍干。
[0049]4)將血清樣本用含 0.01g/mL BSA 的 PBS (pH = 7.4)按 1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1:1280、1:2560倍比稀釋后分別加入96孔板，每孔加100 μ L，室溫孵育Ih ；
待反應(yīng)結(jié)束后，用清洗緩沖液清洗96孔板4次。
[0050]5)用含體積分?jǐn)?shù)為0.05% Tween-20的PBST(pH = 7.4)將生物素標(biāo)記的α 1-抗胰蛋白酶抗體稀釋100倍，每孔加入100 μ L，室溫孵育Ih ;反應(yīng)結(jié)束后，用清洗緩沖液洗板子4次。
[0051]6)用含體積分?jǐn)?shù)為0.05% Tween-20的PBST (pH = 7.4)將HRP標(biāo)記的鏈親和素稀釋2000倍，每孔加入100 μ L，室溫孵育30min。用清洗緩沖液洗板子5次。
[0052]7)于各反應(yīng)孔中加入100 μ LTMB底物顯色液，室溫孵育15?20min。
[0053]8)于各孔中加入50 μ L終止液終止反應(yīng)。
[0054]9)待反應(yīng)完成后，利用酶標(biāo)儀檢測各反應(yīng)孔在波長為450nm處的吸光度值，對不同稀釋倍數(shù)血清樣品中巖藻糖基化α 1-抗胰蛋白酶亞型進(jìn)行半定量檢測。
[0055]具體檢測結(jié)果如圖2所示，橫坐標(biāo)為血清稀釋倍數(shù)，縱坐標(biāo)為吸光度。實施例2中凝集素AAL特異性識別巖藻糖，α 1-抗胰蛋白酶抗體可與α 1-抗胰蛋白酶特異性結(jié)合，聯(lián)合檢測巖藻糖基化α 1-抗胰蛋白酶亞型的血清水平。
[0056]實施例3:
[0057]I)將美洲商路凝集素(Phytolacca americana，PWM)用pH = 9.6的碳酸鹽緩沖液溶解并稀釋至3 μ g/mL，加入96孔板的每個聚苯乙烯反應(yīng)孔內(nèi)，使其覆蓋整個孔底，每孔中加入該凝集素溶液100 μ L，4°C過夜。
[0058]2)次日，棄去孔內(nèi)凝集素溶液，每孔加入200 μ L封閉液，封閉未與凝集素結(jié)合的部位，室溫孵育Ih。
[0059]3)用清洗緩沖液清洗96孔板4次，每次清洗時清洗緩沖液應(yīng)加滿整個反應(yīng)孔，輕柔搖動3min，棄去孔內(nèi)液體并在吸水紙上拍干。
[0060]4)將血清樣本用含 0.01g/mL BSA 的 PBS (pH = 7.4)按 1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1:1280、1:2560倍比稀釋后分別加入96孔板，每孔加100 μ L，室溫孵育Ih ；
待反應(yīng)結(jié)束后，用清洗緩沖液清洗96孔板4次。
[0061]5)用含體積分?jǐn)?shù)為0.05% Tween-20的PBST(pH = 7.4)將生物素標(biāo)記的α 1-抗胰蛋白酶抗體稀釋100倍，每孔加入100 μ L，室溫孵育Ih ;反應(yīng)結(jié)束后，用清洗緩沖液洗板子4次。
[0062]6)用含體積分?jǐn)?shù)為0.05 % Tween-20的PBST (pH = 7.4)將HRP標(biāo)記的鏈親和素稀釋2000倍，每孔加入100 μ L，室溫孵育30min。用清洗緩沖液洗板子5次。
[0063]7)于各反應(yīng)孔中加入100 μ L TMB底物顯色液，室溫孵育15?20min。
[0064]8)于各孔中加入50 μ L終止液終止反應(yīng)。
[0065]9)待反應(yīng)完成后，利用酶標(biāo)儀檢測各反應(yīng)孔在波長為450nm處的吸光度值，對不同稀釋度血清樣品中聚乳糖胺基化α 1-抗胰蛋白酶亞型進(jìn)行半定量檢測。
[0066]具體檢測結(jié)果如圖3所示，橫坐標(biāo)為血清稀釋倍數(shù)，縱坐標(biāo)為吸光度。實施例3中凝集素PWM特異性識別聚乳糖胺，α 1-抗胰蛋白酶抗體可與α 1_抗胰蛋白酶特異性結(jié)合，聯(lián)合檢測聚乳糖胺基化α 1-抗胰蛋白酶亞型的血清水平。
[0067]上述實施例1、2、3中使用的生物素標(biāo)記的α 1-抗胰蛋白酶抗體購自Abcam公司，實施例1、2、3中使用的HRP標(biāo)記的鏈親和素、TMB底物顯色液均購自Sigma-Aldrich公司，實施例1、2中使用的凝集素BS-1、AAL購自Vector公司，實施例3中使用的凝集素PWM購自 Sigma-Aldrich 公司。
【權(quán)利要求】
1.一種蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒，其特征在于，包括: 凝集素:固定在聚苯乙烯固相載體上后，利用其糖識別域特異性識別并結(jié)合糖蛋白上的寡糖鏈，凝集素包被濃度為3?30 μ g/mL ； 封閉液:含0.025?0.05g/mL牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液，pH = 6?8，用于封閉未與凝集素結(jié)合的固相載體位點，降低背景值； 生物素標(biāo)記的抗體:用于特異性結(jié)合凝集素捕獲的糖蛋白中的目標(biāo)蛋白，且生物素-親和素系統(tǒng)有級聯(lián)放大作用； 辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈親和素:結(jié)合了酶的親和素分子與結(jié)合有特異性抗體的生物素分子發(fā)生反應(yīng)，起到了級聯(lián)放大作用，且辣根過氧化物酶在遇到催化底物后顯色，達(dá)到檢測目標(biāo)糖蛋白糖基化亞型的目的； 3’，3’，5’，5’ -四甲基聯(lián)苯胺底物顯色液:在辣根過氧化物酶催化下能夠形成可溶性藍(lán)色產(chǎn)物，用于半定量檢測目標(biāo)糖蛋白； 終止液?2mol/L硫酸，用于終止上訴催化反應(yīng)； 清洗緩沖液:含體積分?jǐn)?shù)為0.1?0.2% Tween-20的PBST，pH = 6?8。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒，其特征在于，生物素標(biāo)記的抗體使用時用含體積分?jǐn)?shù)為0.02?0.1 % Tween-20的PBST稀釋至100?2000倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測試劑盒，其特征在于，使用時，辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈親和素用含體積分?jǐn)?shù)為0.02?0.1% Tween-20的PBST稀釋至2000 ?10000 倍。
4.一種蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)將凝集素用pH= 9?9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋至3?30 μ g/mL后，包被于孔板的每個聚苯乙烯反應(yīng)孔內(nèi)，每個孔中加入凝集素50?200 μ L，2?6°C靜置12?18h ； 2)將封閉液加入反應(yīng)孔內(nèi)，每孔加200?300μ L，封閉未與凝集素結(jié)合的部位，室溫孵育I?3h ; 3)用清洗緩沖液清洗孔板； 4)將生物樣品用含0.005?0.015g/mL BSA的PBS稀釋后加入孔板，加50?200 μ L于上述已包被的各反應(yīng)孔中，室溫孵育I?3h ;待反應(yīng)結(jié)束后，用清洗緩沖液清洗孔板；其中，含BSA的PBS的pH = 6?8 ; 5)用含體積分?jǐn)?shù)為0.02?0.1 % Tween-20的PBST稀釋生物素標(biāo)記的特異性抗體100?2000倍，加50?200 μ L至各反應(yīng)孔內(nèi)，室溫孵育I?3h ;反應(yīng)結(jié)束后，用清洗緩沖液洗板子4次；其中，含Tween-20的PBST的pH = 6?8 ; 6)用含體積分?jǐn)?shù)為0.02?0.1 % Tween-20的PBST稀釋HRP標(biāo)記的鏈親和素2000?10000倍，加50?200 μ L至孔板，室溫孵育0.5?1.5h，然后用清洗緩沖液洗孔板； 7)各反應(yīng)孔中加入50?200μ LTMB底物顯色液，室溫孵育15?20min ； 8)各孔中加入50?100μ L終止液終止反應(yīng)； 9)待反應(yīng)完成后，利用酶標(biāo)儀檢測各反應(yīng)孔在波長為450nm處的吸光度值，對待測樣本中的目標(biāo)蛋白質(zhì)糖基化亞型進(jìn)行半定量檢測。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測方法，其特征在于，孔板選用96孔板。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種蛋白質(zhì)糖基化亞型的檢測方法，其特征在于，生物樣品為組織裂解液、細(xì)胞裂解液或血清。
【文檔編號】G01N33/68GK104502611SQ201410826200
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月25日
【發(fā)明者】梁一倩, 陳明偉 申請人:西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院