一種慢性腎病診斷試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種慢性腎病診斷試劑盒，包括FGF23單抗隆抗體、生物素標(biāo)記試劑Sulfo-NHS-LC-Biontin、pH 7.0 0.1M的PBS緩沖溶液、casein鹽溶液、鏈霉素親和素和底物TMB，F(xiàn)GF23抗體與生物素標(biāo)記試劑Sulfo-NHS-LC-Biontin標(biāo)記條件為重量比為1:5～1:12，鏈霉素親和素的稀釋倍數(shù)是1:3000。本發(fā)明試劑盒FGF23的最低檢測(cè)限值為10pg/ml，比常規(guī)單抗提高了10倍的靈敏度，對(duì)于慢性腎病的早期診斷具有重要意義。
【專利說明】-種慢性腎病診斷試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于疾病檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體設(shè)及一種慢性腎病診斷試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23(FGF23)是FGFs超家族中的一員，它通過抑制磯的重 吸收及增加磯的外分泌，在慢性腎病病人早期磯穩(wěn)態(tài)的維持中發(fā)揮重要作用（J Am Soc N巧虹ol. 2007:18:1637-1647)?！睹绹?guó)腎臟雜志》及《新英格蘭》相繼報(bào)道，慢性腎病病人 FGF23濃度升高先于磯代謝異常；FGF23表達(dá)水平與慢性腎病的惡化及晚期透析治療病人 的死亡率成獨(dú)立相關(guān)。因此，F(xiàn)GF23成為了腎功能早期診斷的重要標(biāo)志物。由于目前臨床 使用的生物標(biāo)物-肌氨酸酢存在著準(zhǔn)確性低、特異性不高的缺陷，而且一旦查出肌氨酸酢 水平超標(biāo)，多數(shù)病程已經(jīng)達(dá)到中晚期。因此，開發(fā)新的慢性腎病診斷試劑一FGF23單克隆抗 體試劑盒具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明目的在于提供一種慢性腎病診斷試劑盒，為慢性腎病早期診斷提供一種簡(jiǎn) 便易行的方法，為慢性腎病的檢測(cè)和治療提供了新方法與途徑。
[0004] 本發(fā)明具體通過W下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0005] 一種慢性腎病診斷試劑盒，包括FGF23單抗隆抗體、生物素標(biāo)記試劑 Sul化-NHS-LC-Biontin、緩沖溶液、casein鹽溶液、鏈霉素親和素和底物TMB。
[0006] 本發(fā)明試劑盒使用抑7.00. 1M PBS作為包被緩沖溶液，檢測(cè)樣品的包被體積為 lOOy 1，包被濃度為2yg/ml。
[0007] 本發(fā)明試劑盒FGF23抗體與生物素標(biāo)記試劑Sulfo-NHS-LC-Bio ntin標(biāo)記條件為 重量比為1:5?1:12,混合后的濃度為2 y g/ml。
[000引本發(fā)明試劑盒所述的casein鹽溶液為FGF23、檢測(cè)抗體和鏈霉素親和素的稀釋 液，鏈霉素親和素的稀釋倍數(shù)是1:3000。
[0009] 本發(fā)明試劑盒所述的鏈霉素親和素與底物的作用時(shí)間為10分鐘。
[0010] 本發(fā)明試劑盒FGF23的最低檢測(cè)限值為lOpg/ml，檢測(cè)線性范圍是2400pg/ml? lOpg/mlo
[0011] 本發(fā)明的有益效果為為慢性腎病的早期檢測(cè)提供了一種體外檢測(cè)試劑盒，該試劑 盒對(duì)FGF23臨床檢測(cè)的靈敏度達(dá)到lOpg/ml，比常規(guī)單抗提高了 10倍的靈敏度，對(duì)于慢性腎 病的早期診斷具有重要意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0012] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例吸光度值與樣品濃度間的線性關(guān)系。

【具體實(shí)施方式】
[0013] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，W下所述，僅是對(duì)本發(fā)明的較佳實(shí)施 例而已，并非對(duì)本發(fā)明做其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示 的技術(shù)內(nèi)容加W變更為同等變化的等效實(shí)施例。凡是未脫離本發(fā)明方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明 的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)W上實(shí)施例所做的任何簡(jiǎn)單修改或等同變化，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0014] 實(shí)施例1FGF23檢測(cè)試劑盒的制備
[001引利用FGF23-FC抗原免疫小鼠，獲得雜交瘤細(xì)胞陽性FGF23抗體克隆，針對(duì)其中的 1276株克隆進(jìn)行了篩選，檢測(cè)了他們對(duì)FGF23蛋白的結(jié)合特異性，篩選得到編號(hào)278、6B12 和6化的=種抗體。
[0016] 利用前期篩選的S株FGF23單克隆抗體278,她12和6化進(jìn)行FGF23 ELISA檢測(cè) 試劑盒檢測(cè)條件的優(yōu)化。
[0017] l)2mg/ml她12和細(xì)1各lOOy 1按1:20、1:10、1:5室溫進(jìn)行30分鐘生物 素化反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束用等體積1 % BSA結(jié)束反應(yīng)。用包被抗體278,進(jìn)行包被，3ng/ ml FGF23 =倍梯度稀釋，生物素化抗體進(jìn)行檢測(cè)，考察生物素化效率，生物素試劑選擇 畑S-PEG4-Biontin(Lot#ND 172078)，具體情況見表 1 ;
[001引表1生物素標(biāo)記比率優(yōu)化
[0019]

【權(quán)利要求】
1. 一種慢性腎病診斷試劑盒，其特征在于：FGF23單抗隆抗體、生物素標(biāo)記試劑 Sulfo-NHS-LC-Biontin、緩沖溶液、casein鹽溶液、鏈霉素親和素和底物TMB。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的診斷試劑盒，其特征在于：所述的緩沖溶液為pH 7. 0、0. 1M 的 PBS。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的診斷試劑盒，其特征在于：所述的F GF23單抗隆抗體與生 物素標(biāo)記試劑Sulfo-NHS-LC-Biontin標(biāo)記條件為重量比為1:5?1:12,混合后的濃度為 2 y g/ml〇
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的診斷試劑盒，其特征在于：所述的鏈霉素親和素的稀釋倍數(shù) 為1:3000,所使用的稀釋液為casein鹽溶液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的診斷試劑盒，其特征在于：所述的鏈霉素親和素與底物的作 用時(shí)間為10分鐘。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的診斷試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒最低檢測(cè)限值為 10pg/ml，檢測(cè)線性范圍是 2400pg/ml ?10pg/ml。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK104502596SQ201410811167
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年12月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月23日
【發(fā)明者】李校堃, 梁廣, 王曉杰, 李世軍 申請(qǐng)人:溫州醫(yī)科大學(xué)