一種檢測(cè)赭曲霉毒素a的磁性免疫層析試劑盒及制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種檢測(cè)赭曲霉毒素A的磁性免疫層析試劑盒，包括至少一個(gè)試紙條和一個(gè)超順磁性復(fù)合粒子標(biāo)記赭曲霉毒素A抗體溶液；所述試紙條由反應(yīng)墊、樣品墊1、樣品墊2、吸水墊依次相互交錯(cuò)粘在底板上并覆蓋透明塑料膜組裝而成；其中反應(yīng)墊上預(yù)包被有赭曲霉毒素A蛋白偶聯(lián)物的檢測(cè)線和預(yù)包被了可與赭曲霉毒素A抗體結(jié)合的抗抗體的質(zhì)控線；所述超順磁性復(fù)合粒子標(biāo)記赭曲霉毒素A抗體為赭曲霉毒素A抗體和超順磁性復(fù)合粒子以肽鍵共價(jià)結(jié)合形成的聚合體。本發(fā)明還涉及本發(fā)明試劑盒的制備方法及其用于檢測(cè)食品及飼料中赭曲霉毒素A的用途。本發(fā)明以磁性顆粒為標(biāo)記物引入免疫層析技術(shù)中，檢測(cè)快速、操作簡(jiǎn)便、線性范圍廣、靈敏度高。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種檢測(cè)赭曲霉毒素A的磁性免疫層析試劑盒及制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品及飼料檢測(cè)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及一種檢測(cè)赭曲霉毒素A 的磁性免疫層析試劑盒、其制備方法以及該試劑盒用于檢測(cè)赭曲霉毒素A的用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 赭曲霉毒素（Ochratoxin)是曲霉屬和青霉屬的某些菌種產(chǎn)生的一組結(jié)構(gòu)類(lèi)似的 次生代謝產(chǎn)物，包括赭曲霉毒素A(OchratoxinA，0TA)、赭曲霉毒素B(OchratoxinB，0TB)、 赭曲霉毒素C(OchratoxinC，OTC)、赭曲霉毒素D(OchratoxinD，OTD)、0TA的甲酯以及0TB 的甲醋和乙醋等化合物。其中以〇TA的毒性最強(qiáng)，WHO規(guī)定人的每天最大攝入量為16ng 〇TA/kg體重。0TA易蓄積于組織中，主要為腎臟和肝臟，屬烈性腎臟毒和肝臟毒。實(shí)驗(yàn)表明 動(dòng)物攝入被這種毒素污染的飼料后，就會(huì)發(fā)生急性或慢性中毒癥，此外，0TA還具有致癌、致 畸和致突變性。
[0003] 目前0TA的檢測(cè)方法主要為薄層層析法（TLC)、高效液相色譜法（HPLC)和酶聯(lián)免 疫吸附法（Enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)和膠體金免疫層析法。TLC法是 0TA早期研宄中最常見(jiàn)的檢測(cè)方法，因其操作簡(jiǎn)便曾被廣泛應(yīng)用。但這種方法較費(fèi)時(shí)（48h 左右），靈敏度和特異性較差，在0TA的提取過(guò)程中所需的有機(jī)溶劑品種多且量大。HPLC法 具有更高的靈敏度，可以精確地對(duì)樣品中的0TA進(jìn)行定性和定量分析，但此法不適合于大 批量樣品的檢測(cè)。ELISA法由于其靈敏、可定量、操作簡(jiǎn)便、無(wú)需貴重儀器設(shè)備，且對(duì)樣品純 度要求不高，特別適用于大批量樣品的檢測(cè)，但由于需要多種儀器設(shè)備，不適合于現(xiàn)場(chǎng)快速 抽檢。
[0004] 磁性免疫層析技術(shù)（MagneticImmunoChromatographicTest，MICT)是近年來(lái)出 現(xiàn)的一種定量檢測(cè)技術(shù)，它以超順磁微粒代替膠體金標(biāo)記物來(lái)進(jìn)行免疫層析，通過(guò)檢測(cè)結(jié) 合在超順磁微粒上的目標(biāo)物來(lái)提供對(duì)生物樣品的定量檢測(cè)數(shù)據(jù)。該技術(shù)與傳統(tǒng)技術(shù)相比具 有以下優(yōu)勢(shì)：靈敏度較目測(cè)法高10-1000倍；測(cè)量結(jié)果可在至少4個(gè)數(shù)量級(jí)的范圍內(nèi)呈線 性；檢測(cè)儀器體積小，尺寸僅書(shū)本大?。粯?biāo)記物磁微粒由聚合物包被，不隨時(shí)間而衰變，分 析結(jié)果可存檔并重新檢測(cè)。該技術(shù)彌補(bǔ)了傳統(tǒng)免疫層析技術(shù)靈敏度低，只定性不能定量的 缺點(diǎn)，代表了當(dāng)前食品檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展方向。
[0005] 本發(fā)明目的是將磁性免疫層析技術(shù)應(yīng)用在0TA分析中，簡(jiǎn)化操作步驟，縮短檢測(cè) 時(shí)間，提高檢測(cè)靈敏度。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的之一是提供一種檢測(cè)0TA的磁性免疫層析試劑盒。所述試劑盒包括 至少一個(gè)本發(fā)明的試紙條和一種超順磁性復(fù)合粒子標(biāo)記0TA抗體溶液。
[0007] 所述試紙條由反應(yīng)墊、樣品墊1、樣品墊2、吸水墊依次相互交錯(cuò)地，例如相互交錯(cuò) 2mm，粘在底板上并在上層覆蓋透明塑料膜組裝而成，所述樣品墊1與樣品墊2連接，反應(yīng)墊 一端連接樣品墊2,另一端與吸水墊相連。所述硝酸纖維素膜預(yù)包被有相互分離的檢測(cè)線 和質(zhì)控線，所述檢測(cè)線含有OTA抗原，所述質(zhì)控線含有能與所述OTA抗體特異性結(jié)合的抗抗 體。
[0008] 所述反應(yīng)墊為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜的長(zhǎng)度可以為25mm-35mm，例如為 35mm〇
[0009] 所述OTA抗體為OTA多克隆抗體或OTA單克隆抗體，優(yōu)選為OTA單克隆抗體。
[0010] 所述0TA抗原為0TA半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物，所述0TA半抗原為0TA，所述 載體蛋白為牛血清白蛋白（BSA)或人血清蛋白或鑰孔血藍(lán)蛋白（KLH)或卵清蛋白，優(yōu)選為 BSA〇
[0011] 所述〇TA抗體特異性結(jié)合的抗抗體為羊抗鼠IgG抗體或兔抗鼠IgG抗體，優(yōu)選為 羊抗鼠IgG抗體。
[0012] 所述樣品墊1為纖維素膜或玻璃纖維膜或玻璃纖維與纖維素的混合膜。
[0013] 所述樣品墊2為經(jīng)樣品墊處理液預(yù)處理的纖維素膜或玻璃纖維膜或玻璃纖維 與纖維素的混合膜。所述樣品墊處理溶液例如為含有0.5% -2%BSA，1 % -5%蔗糖， 0? 5% -3% 曲拉通X-100 的 0? 01MPBS，pH7. 0-7. 6。
[0014] 所述吸水墊為纖維素膜。
[0015] 所述超順磁性復(fù)合粒子標(biāo)記0TA抗體溶液為0TA抗體與超順磁性復(fù)合粒子以肽 鍵共價(jià)結(jié)合形成的聚合體溶解在保存液中形成的溶液。所述保存液例如為1%BSA，0. 5% Tween-20, 5%蔗糖的pH8. 5的硼酸緩沖液。
[0016] 所述超順磁性復(fù)合粒子為Fe304納米粒子，粒徑為50-300nm，優(yōu)選為100-200nm。 所述超順磁性復(fù)合粒子表面帶有易于與OTA抗體偶聯(lián)的基團(tuán)，這些基團(tuán)可以是羧基、氨基 等基團(tuán)，優(yōu)選的基團(tuán)是羧基基團(tuán)。
[0017] 本發(fā)明還涉及用于制備本發(fā)明的檢測(cè)0TA的磁性免疫層析試劑盒的制備方法，包 括以下步驟：
[0018] I.超順磁性復(fù)合粒子標(biāo)記0TA抗體的制備：
[0019] (1)將超順磁性復(fù)合粒子、1-乙基_(3_二甲基氨基丙基）碳二亞胺（EDC)、N_羥 基丁二酰亞胺（NHS)和濃度例如為0.lM、pH= 4. 7的2-(N-嗎啡啉）乙磺酸（MES)緩沖液 混勻，EDC與NHS的摩爾比為1 : 2,在37°C下反應(yīng)大約30min，得到活化的磁性粒子；
[0020] (2)將步驟⑴得到的活化的磁性粒子、0TA抗體和濃度為50mMpH= 8. 5的硼酸 緩沖液混勻，37°C反應(yīng)3. 5h，得到偶聯(lián)后磁性粒子反應(yīng)液；（3)向步驟（2)中的反應(yīng)液加入 含有BSA的例如50mMpH= 8. 5的硼酸緩沖液，使BSA終濃度為5%，在37°C下反應(yīng)30min， 得到含有封閉后磁性粒子的反應(yīng)液；再將封閉后的磁性粒子進(jìn)行洗滌、保存，得到超順磁性 復(fù)合粒子標(biāo)記0TA抗體；所述洗滌液為50mMpH= 8. 5的硼酸緩沖液，所述保存液為1 % 85八，0.5%1'冊(cè)611-20,5%蔗糖的口118.5的硼酸緩沖液；
[0021]II.反應(yīng)墊的處理：用例如含有1% -2%BSA的0.01MPBS、pH7. 0-7. 6的包被緩 沖液將0TA抗原及抗抗體分別稀釋至例如0.l-2mg/mL的濃度，并通過(guò)定量噴液裝置例如以 0. 8-1. 5yL/cm的量分別將二者噴到硝酸纖維素膜上，分別形成檢測(cè)線和質(zhì)控線，0TA抗原 與抗抗體的間隔（即檢測(cè)線和質(zhì)控線之間的間隔）在0.5-lcm之間，噴完后晾干，放入干燥 器中備用；
[0022] III.樣品墊2的處理：將樣品墊放入樣品墊處理溶液中浸泡例如大約0. 5-2小時(shí) 后取出，在大約25°C-35°C烘干大約6-12小時(shí)；
[0023] 其中所述樣品墊處理溶液例如為含有大約0.5% -2 %BSA，1 % -5 %蔗糖， 0? 5% -3% 曲拉通X-100 的 0? 01MPBS，pH7. 0-7. 6。
[0024] IV.試紙條的組裝：將反應(yīng)墊、樣品墊、吸水墊依次相互交錯(cuò)例如2mm粘在含有不 干膠的底板上并在上層覆蓋透明塑料膜，得到試紙板，并切割成寬度為例如3-5mm的試紙 條。
[0025] 本發(fā)明進(jìn)一步涉及根據(jù)本發(fā)明磁性免疫層析試劑盒用于檢測(cè)OTA的用途，所述試 劑盒可以用于檢測(cè)食品及飼料中的OTA。
[0026] 在實(shí)際應(yīng)用中，將本發(fā)明試劑盒中偶聯(lián)有OTA抗體的磁顆粒與樣品液混合，施加 于試紙條上，按免疫層析原理對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)合讀磁儀進(jìn)行檢測(cè)，即可完成快速定量檢 測(cè)，操作簡(jiǎn)單，方便實(shí)用。
[0027] 本發(fā)明的試劑盒是利用競(jìng)爭(zhēng)法原理定量檢測(cè)樣品中的OTA，當(dāng)待測(cè)樣品中含有 OTA時(shí)，樣品中的OTA競(jìng)爭(zhēng)地與免疫磁微粒上的OTA抗體結(jié)合，從而抑制免疫磁微粒上的 OTA抗體與檢測(cè)線上的OTA抗原結(jié)合，因此結(jié)合在檢測(cè)線上的免疫磁微粒較少；當(dāng)待測(cè)樣 品中不含有OTA時(shí)，隨著層析作用的進(jìn)行，免疫磁微粒移動(dòng)到檢測(cè)線位置，免疫磁微粒上的 OTA抗體與檢測(cè)線上的OTA抗原相結(jié)合并聚集于此；無(wú)論樣品中是否含有OTA，未結(jié)合在檢 測(cè)線上的免疫磁微粒隨著層析作用最終前行到質(zhì)控線上，抗抗體與磁微粒上的OTA抗體結(jié) 合并聚集。整個(gè)反應(yīng)在30分鐘內(nèi)進(jìn)行完全，一般在反應(yīng)20分鐘后即可讀磁儀進(jìn)行檢測(cè)，檢 測(cè)線與質(zhì)控線都會(huì)產(chǎn)生磁性響應(yīng)，計(jì)算檢測(cè)線與質(zhì)控線的比值，根據(jù)預(yù)設(shè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)樣 品進(jìn)行定量。
[0028] 本發(fā)明以磁性顆粒為標(biāo)記物引入免疫層析技術(shù)中，較以光學(xué)檢測(cè)原理為基礎(chǔ)的免 疫層析技術(shù)具有更高的檢測(cè)靈敏度。因?yàn)楣鈱W(xué)原理測(cè)定易受雜質(zhì)干擾，且只能檢測(cè)表面 10%的信號(hào)標(biāo)記物，而90%的信號(hào)標(biāo)記物無(wú)法測(cè)定，而磁性測(cè)定具有穿透性，可測(cè)定100% 的信號(hào)標(biāo)記物，抗干擾能力強(qiáng)。
[0029] 在本發(fā)明中，若無(wú)特別說(shuō)明，所用的百分比含量為質(zhì)量百分比。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0030] 圖1所示為本發(fā)明所述檢測(cè)OTA的磁性免疫層析試劑盒中的試紙條。
[0031] 圖2所示為OTA標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0032] 附圖標(biāo)記說(shuō)明：
[0033] 1-樣品墊1 ;2_樣品墊2 ;3_反應(yīng)墊；4-吸水墊；5-檢測(cè)線；6-質(zhì)控線。

【具體實(shí)施方式】
[0034] 為了更好的理解本發(fā)明，下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明， 但是本發(fā)明保護(hù)的范圍不限制于實(shí)施例所表示的范圍。本發(fā)明實(shí)施例中使用的試劑均可市 場(chǎng)購(gòu)得。
[0035] 實(shí)施例1:制備本發(fā)明的試劑盒
[0036] I、試紙條的制備：
[0037] (1)反應(yīng)墊的處理：用包被緩沖液（含2%BSA的0? 01MPBS溶液，pH為7. 2,過(guò) 0? 22ym濾膜）將OTA-BSA(美國(guó)Sigma-Aldrich公司，產(chǎn)品號(hào)03007)稀釋為lmg/mL，羊抗 鼠IgG抗體（上海杰一生物技術(shù)有限公司，產(chǎn)品號(hào)JY-QT03)稀釋為lmg/mL，使用Biodot公 司XYZ3060噴膜機(jī)的Biojet噴頭以1yL/cm的量將二者以0. 8cm的間隔噴涂于硝酸纖維 素膜上，37 °C晾干后，加入干燥劑封存?zhèn)溆谩?br> [0038] (2)樣品墊2的處理：樣品墊處理液為含有3%酪蛋白和0. 1%Tween-20的0. 01M pH7. 2的PBS緩沖液。將lcm寬的樣品墊放入適量樣品墊處理液中浸泡1小時(shí)后取出，30°C 烘干8小時(shí)備用。
[0039] (3)磁免疫層析試紙條的組裝與切割
[0040] 試紙板的組裝：將35mm寬的反應(yīng)墊，25mm寬的吸水墊，10mm寬的樣品墊粘貼在透 明塑料底板上，上層蓋上透明塑料膜，組成試紙板。
[0041] 試紙條的裁切：使用上海金標(biāo)生物科技有限公司ZQ2000切條機(jī)將上述試紙板切 成5mm寬的試紙條。
[0042] 將切割好的5mm寬的試紙條放入塑料底卡的卡槽內(nèi)，蓋上上蓋，利用壓卡機(jī)（美國(guó) QuantumDesign公司，產(chǎn)品號(hào)4094-497-01)將上下兩片塑料卡壓緊，確保整個(gè)試紙條處于 繃緊狀態(tài)。加入干燥劑室溫下封存?zhèn)溆谩?br> [0043] II、超順磁性復(fù)合粒子標(biāo)記0TA抗體溶液的制備：
[0044] 將3mg粒徑為200nm的超順磁性復(fù)合粒子（美國(guó)Quantum Design公司，產(chǎn)品號(hào)100001)、0. 96mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺（EDC，美國(guó)Thermo公司，產(chǎn)品號(hào) 22980)、1. 15mg N-羥基丁二酰亞胺（NHS，美國(guó)Thermo公司，產(chǎn)品號(hào)24500)和lmL濃度為 0? 1M pH = 4. 7的2-(N-嗎啡啉）乙磺酸（MES，美國(guó)Sigma-Aldrich公司，產(chǎn)品號(hào)M3671) 緩沖液（稱(chēng)取1.〇66g MES，0? 45gNaCl溶于50mL純水，調(diào)pH至4. 7)混勻，37°C反應(yīng)30min， 得到活化后磁性粒子；
[0045] 用磁鐵吸附磁微粒，棄上層清液，并用上述MES緩沖液洗滌兩次；再加入0. 8mL的 pH8. 5、濃度為50mM的硼酸緩沖液和0. 3mg0TA單克隆抗體（北京市理化分析測(cè)試中心， 3A1)，37°C反應(yīng)4h ;
[0046] 向上述反應(yīng)液中加入含有BSA(美國(guó)Sigma-Aldrich公司，產(chǎn)品號(hào)A4612)的50mM pH= 8. 5的硼酸緩沖液，使BSA終濃度為5%，37°C反應(yīng)30min，得到含有封閉后的磁性粒子 的反應(yīng)液；用磁鐵吸附磁微粒，棄上層清液，并用0. 8mLpH8. 5的硼酸緩沖液洗滌兩次；最 后加入0.51^含有1%854,0.5%1'?的11-20,5%蔗糖的？118.5的硼酸緩沖液，得到超順磁性 復(fù)合粒子標(biāo)記0TA抗體溶液，于4°C下保存?zhèn)溆谩?br> [0047] 實(shí)施例2本發(fā)明試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線建立和回收率測(cè)定
[0048] 1?試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
[0049] 取適量0TA標(biāo)準(zhǔn)品（美國(guó)Sigma-Aldrich公司，產(chǎn)品號(hào)01877)用甲醇水溶液（甲 醇含量為16%)中，使終濃度為5.00,2.50，1.25和0.63叩/1^，取100 1^上述混合液與 2yL超順磁性復(fù)合粒子標(biāo)記0TA抗體溶液加入實(shí)施例1中的試紙條中，等待反應(yīng)20min后， 將試紙條插入讀磁儀（美國(guó)QuantumDesign公司，產(chǎn)品號(hào)8094-600-01)的插卡口中，采用 讀磁儀讀取檢測(cè)線與質(zhì)控線的MAR值，結(jié)果見(jiàn)表1。檢測(cè)結(jié)果通過(guò)線性回歸擬合，其標(biāo)準(zhǔn)曲 線如圖2所示，其中橫坐標(biāo)為0TA濃度的對(duì)數(shù)值，縱坐標(biāo)為檢測(cè)線MAR值與質(zhì)控線MAR值的 比值（即T/C)。由圖可以看出，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合良好，R2= 0. 992。
[0050] 表1讀磁儀測(cè)定MAR值
[0051]

【權(quán)利要求】
1. 一種檢測(cè)赭曲霉毒素 A的磁性免疫層析試劑盒，包括：至少一個(gè)試紙條和一種超順 磁性復(fù)合粒子標(biāo)記赭曲霉毒素 A抗體溶液。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性免疫層析試劑盒，其中所述超順磁性復(fù)合粒子標(biāo)記赭曲 霉毒素 A抗體溶液為赭曲霉毒素 A抗體與超順磁性復(fù)合粒子以肽鍵共價(jià)結(jié)合形成的聚合體 溶解在保存液中形成的溶液，所述超順磁性復(fù)合粒子為表面帶有易于與赭曲霉毒素 A抗體 偶聯(lián)的基團(tuán)的Fe304納米粒子。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性免疫層析試劑盒，其中所述試紙條由反應(yīng)墊、樣品墊1、 樣品墊2、吸水墊依次相互交錯(cuò)地粘在底板上并在上層覆蓋透明塑料膜組裝而成；所述反 應(yīng)墊一端連接樣品墊，另一端與吸水墊相連；所述反應(yīng)墊預(yù)包被有相互分離的檢測(cè)線和質(zhì) 控線，所述檢測(cè)線含有赭曲霉毒素 A抗原，所述質(zhì)控線含有能與所述赭曲霉毒素 A抗體特異 性結(jié)合的抗抗體。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的磁性免疫層析試劑盒，其中所述反應(yīng)墊為硝酸纖維素膜，所 述樣品墊1為纖維素膜或玻璃纖維膜或玻璃纖維與纖維素的混合膜，所述樣品墊2為經(jīng)樣 品墊處理液預(yù)處理的纖維素膜或玻璃纖維膜或玻璃纖維與纖維素的混合膜；所述吸水墊為 纖維素膜。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的磁性免疫層析試劑盒，其中所述赭曲霉毒素 A抗體為赭曲霉 毒素 A單克隆抗體或赭曲霉毒素 A多克隆抗體，所述赭曲霉毒素 A抗原為赭曲霉毒素 A半 抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物；所述赭曲霉毒素 A抗體特異性結(jié)合的抗抗體為羊抗鼠 IgG抗體 或兔抗鼠 IgG抗體。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的磁性免疫層析試劑盒，其中所述赭曲霉毒素 A半抗原為赭曲 霉毒素 A，所述載體蛋白為牛血清白蛋白或人血清蛋白或鑰孔血藍(lán)蛋白或卵清蛋白。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性免疫層析試劑盒的制備方法，包括如下步驟： I. 超順磁性復(fù)合粒子標(biāo)記赭曲霉毒素 A抗體的制備： (1) 將超順磁性復(fù)合粒子、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺（EDC)、N-羥基丁 二酰亞胺（NHS)和2-(N-嗎啡啉）乙磺酸（MES)緩沖液混勻，反應(yīng)得到活化的磁性粒子； (2) 將步驟（1)得到的活化的磁性粒子、赭曲霉毒素 A抗體和硼酸緩沖液混勻，反應(yīng)得 到偶聯(lián)后磁性粒子反應(yīng)液； (3) 向步驟（2)中的反應(yīng)液加入含有牛血清白蛋白的硼酸緩沖液，反應(yīng)得到含有封閉 后磁性粒子的反應(yīng)液；再將封閉后的磁性粒子進(jìn)行洗滌、保存，最終得到超順磁性復(fù)合粒子 標(biāo)記赭曲霉毒素 A抗體； II. 反應(yīng)墊的處理：用包被緩沖液將赭曲霉毒素 A抗原及抗抗體分別稀釋至合適的濃 度，并通過(guò)定量噴液裝置以一定的間隔分別將二者噴到硝酸纖維素膜上，分別形成檢測(cè)線 和質(zhì)控線，噴完后晾干，放入干燥器中備用； III. 樣品墊2的處理：將樣品墊放入樣品墊處理溶液中浸泡后取出烘干； IV. 試紙條的組裝：將反應(yīng)墊、樣品墊1、樣品墊2、吸水墊依次相互交錯(cuò)粘在含有不干 膠的底板上并在上層覆蓋透明塑料膜，得到試紙板，并切割成試紙條。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中步驟I中所述用于洗滌的溶液為50mM的pH = 8. 5的硼酸緩沖液，所述用于保存的溶液為1%牛血清白蛋白、0. 5% Tween-20和5%蔗糖 的pH8. 5的硼酸緩沖液；步驟II中的所述包被緩沖液為含有1% -2% BSA的0. 01M PBS、 pH7. 0-7. 6的溶液；步驟III中所述樣品墊處理溶液為含有0. 5% -2%牛血清白蛋白、 1% -5%蔗糖和 0? 5% -3% 曲拉通 X-100 的 0? 01M PBS，pH7. 0-7. 6。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中在步驟I (1)中，在37°C下反應(yīng)30分鐘，在步驟 1(2)中，在37°C下反應(yīng)3. 5小時(shí)；在步驟1(3)中，在37°C下反應(yīng)30分鐘；在步驟II中，赭 曲霉毒素 A抗原與抗體的間隔為0. 5-lcm ;在步驟III中，樣品墊2在樣品墊處理液中浸泡 1小時(shí)。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的磁性免疫層析試劑盒用于檢測(cè)食品及飼料中赭曲 霉毒素 A的用途。
【文檔編號(hào)】G01N33/02GK104459062SQ201410737907
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月8日
【發(fā)明者】武會(huì)娟, 管笛, 亢子佳, 賈迪 申請(qǐng)人:北京市理化分析測(cè)試中心