一種離子穩(wěn)定劑和懸浮穩(wěn)定劑配合使用的檢測瘦素的膠乳增強免疫比濁試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及體外診斷試劑領(lǐng)域，特別是涉及一種離子穩(wěn)定劑和懸浮穩(wěn)定劑配合使用的檢測瘦素（Leptin）的膠乳增強免疫比濁試劑盒。本發(fā)明提供一種離子穩(wěn)定劑和懸浮穩(wěn)定劑配合使用的檢測瘦素（Leptin）的膠乳增強免疫比濁試劑盒，包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1由緩沖液1、穩(wěn)定劑1、防腐劑1、EDTA、增凝劑和保護劑1組成；所述試劑R2由交聯(lián)LP抗體的聚苯乙烯膠乳微球、緩沖液2、穩(wěn)定劑2、防腐劑2、保護劑2組成，其中聚苯乙烯膠乳微球與LP抗體之間以共價交聯(lián)方式連接，所述試劑R2中的穩(wěn)定劑2采用離子穩(wěn)定劑和懸浮穩(wěn)定劑配合使用。本發(fā)明采用膠乳增強免疫比濁法，當血液中的LP與LP抗體反應(yīng)時，帶動了聚苯乙烯膠乳聚集產(chǎn)生一定的濁度，檢測更為方便，容易在臨床中應(yīng)用。
【專利說明】一種離子穩(wěn)定劑和懸淳穩(wěn)定劑配合使用的檢測瘦素的膠乳 增強免疫比濁試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及體外診斷試劑領(lǐng)域，特別是涉及一種離子穩(wěn)定劑和懸浮穩(wěn)定劑配合使 用的檢測瘦素（Leptin)的膠乳增強免疫比濁試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 瘦素（L印tin)是一種分子量為16kDa，146個氨基酸組成的單鏈蛋白，它由肥胖基 因編碼、脂肪細胞合成分泌的蛋白質(zhì)類激素。人們普遍認為它進入血液循環(huán)后會參與糖、月旨 肪及能量代謝的調(diào)節(jié)，促使機體減少攝食，增加能量釋放，抑制脂肪細胞的合成，進而使體 重減輕。還與炎性反應(yīng)、神經(jīng)內(nèi)分泌、消化道腫瘤、婦產(chǎn)科疾病、肝臟疾病等有關(guān)，其代謝的 異常參與了相關(guān)疾病的發(fā)病過程。瘦素的主要功能是調(diào)節(jié)能量平衡，是維持正常體重的基 本激素，實驗證明肥胖者血清瘦素濃度均高于非肥胖者。在惡性腫瘤方面，瘦素及其受體的 表達與腫瘤，如乳腺癌、胃癌、肝癌等發(fā)生和預(yù)后密切相關(guān)。在慢性肝病中，瘦素水平與病情 程度顯著相關(guān)，不論肝功能異常程度如何，其血清瘦素水平均高于正常人。在正常妊娠中血 中瘦素水平隨妊娠進展逐漸增加，妊高癥時瘦素增加，故瘦素可作為一項臨床指標。研究表 明早產(chǎn)兒體重下降與血漿瘦素濃度下降之間存在顯著正相關(guān)。正常情況下胰島素刺激瘦素 分泌，與此同時瘦素通過與胰島細胞上的受體結(jié)合來抑制胰島素的分泌，提示瘦素與胰島 素及胰島素抵抗關(guān)系密切。研究還發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性高血壓患者血清瘦素和胰島素水平顯著升 高，相互間成正相關(guān)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：提供一種制備成 本低廉，穩(wěn)定性好，易于保存，數(shù)據(jù)重復(fù)性好，檢測靈敏度高，可廣泛應(yīng)用于臨床生化儀的 LP檢測試劑盒。
[0004] 為實現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明第一方面提供一種離子穩(wěn)定劑和懸浮穩(wěn) 定劑配合使用的檢測瘦素（Leptin)的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于，包括試劑Rl 和試劑R2,所述試劑Rl由緩沖液1、穩(wěn)定劑1、防腐劑1、EDTA、增凝劑和保護劑1組成；所述 試劑R2由交聯(lián)LP抗體的聚苯乙烯膠乳微球、緩沖液2、穩(wěn)定劑2、防腐劑2、保護劑2組成， 其中聚苯乙烯膠乳微球與LP抗體之間以共價交聯(lián)方式連接。
[0005] 本技術(shù)方案中的防腐劑1和2是指可以抑制試劑中細菌和微生物污染的一類試 齊U，對試劑具有防腐殺菌的作用。試劑R2中的保護劑一類能夠保護膠乳顆粒表面的抗體的 試齊U。穩(wěn)定劑1和2可以保持試劑內(nèi)的電荷平衡。本技術(shù)方案中的LP膠乳增強免疫比濁 試劑盒，將LP抗體交聯(lián)在聚苯乙烯膠乳微球表面，當血液中的LP與LP抗體反應(yīng)時，帶動聚 苯乙烯膠乳微球聚集產(chǎn)生一定濁度，而濁度與血液中的LP含量在一定范圍成正比，可以用 全自動生化儀在400-800nm波長下檢測血液中LP的含量。
[0006] 優(yōu)選的，所述試劑Rl中的緩沖液1選自Hepes緩沖液、Tris-HCl緩沖液、MOPS緩 沖液、PBS緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼砂緩沖液中的一種或多種的組合，其pH為7. O?9. 0， 濃度為25?500mmol/L ;所述試劑R2中的緩沖液2選自PBS緩沖液、硼砂緩沖液、甘氨酸 緩沖液、H印es緩沖液、GOODS緩沖液、MOPS緩沖液中的一種或幾種，其pH為7. 0?9. 0,濃 度為 25 ?500mmol/L。
[0007] 本發(fā)明試劑Rl中的緩沖液1可使用上述本領(lǐng)域各種常用的緩沖液，但為了使得試 劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發(fā)明中所述試劑Rl中緩沖液1優(yōu)選為包括下列組 分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉和甘氨酸的水溶液，且水蘇糖、明礬、果糖二磷 酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3. 5 - 7. 5g/L，緩沖液的pH值為7. 2 - 7. 6。
[0008] 優(yōu)選的，各組分在緩沖液1中的濃度為：
[0009]

【權(quán)利要求】
1. 一種離子穩(wěn)定劑和懸浮穩(wěn)定劑配合使用的檢測瘦素的膠乳增強免疫比濁試劑盒，包 括試劑R1和試劑R2,所述試劑R1由緩沖液1、穩(wěn)定劑1、防腐劑1、EDTA、增凝劑和保護劑 1組成；所述試劑R2由交聯(lián)LP抗體的聚苯乙烯膠乳微球、緩沖液2、穩(wěn)定劑2、防腐劑2、保 護劑2組成，其中聚苯乙烯膠乳微球與LP抗體之間以共價交聯(lián)方式連接，所述試劑R2中 的穩(wěn)定劑2采用離子穩(wěn)定劑和懸浮穩(wěn)定劑配合使用；其中離子穩(wěn)定劑為NaCl、KCl、Na2C03、 Na2S04或K2S04,懸浮穩(wěn)定劑為PEG8000、蔗糖、甘油或葡萄糖。
2. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的緩沖液1選自H印es 緩沖液、Tris-HCl緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼砂緩沖液中的一種或 多種的組合，其pH為7. 0?9. 0,濃度為25?500mmol/L ;所述試劑R2中的緩沖液2選自 PBS緩沖液、硼砂緩沖液、甘氨酸緩沖液、Hepes緩沖液、GOODS緩沖液、MOPS緩沖液中的一 種或幾種，其pH為7. 0?9. 0,濃度為25?500mmol/L。
3. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的穩(wěn)定劑1選自KC1、 NaCl、CaCl中的一種或多種的組合，其質(zhì)量濃度為0. 5%?10%。
4. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的防腐劑1為疊氮鈉、 硫柳汞或者ProClin300 ;所述試劑R2中的防腐劑2為疊氮鈉、硫柳汞或ProClin300。
5. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的增凝劑為PEG8000 或者葡聚糖。
6. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑R2中的聚苯乙烯乳膠微 球的表面官能團為氨基、羧基、酰肼、醛基或環(huán)氧基，聚苯乙烯乳膠微球的粒徑在100? 600nm，所述聚苯乙烯乳膠微球為表面官能團為羧基的聚苯乙烯膠乳微球。
7. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑R2中的LP抗體為鼠抗人 LP抗體、山羊抗人LP IgG抗體或兔抗人LP IgG抗體的一種或多種的組合。
8. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的保護劑1為牛血清 白蛋白；所述試劑R2中的保護劑2為牛血清白蛋白。
9. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述EDTA濃度為10?100mmol/L。
10. 如權(quán)利要求1-9任一權(quán)利要求所述的LP乳膠增強免疫比濁檢測試劑盒的制備方 法，包括如下步驟： (1) 試劑R1的制備： 在緩沖液1中加入穩(wěn)定劑1、增凝劑、防腐劑1、保護劑1和EDTA，攪拌混合均勻，即得試 劑R1 ; (2) 試劑R2的制備： 步驟一：將LP抗體進行4°C透析，再用緩沖液將LP抗體稀釋至2mg/ml，得到LP抗體稀 釋液；將聚苯乙烯膠乳微球用蒸餾水離心、洗滌3次； 步驟二：用緩沖液將經(jīng)過步驟一洗滌后的聚苯乙烯膠乳微球稀釋到質(zhì)量濃度為1%， 再加入質(zhì)量濃度為〇. 01 % _〇. 1 %的EDC，在室溫下攪拌反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后15000rpm 離心洗滌以除去未反應(yīng)的EDC，然后加入步驟一得到的LP抗體稀釋液，室溫下攪拌反應(yīng) 30min，再加入終止液終止反應(yīng)，將得到的反應(yīng)液15000rpm離心，用緩沖液2洗滌沉淀，重復(fù) 離心洗滌3次，最后加入緩沖液2、防腐劑、穩(wěn)定劑、保護劑攪拌混合均勻即得試劑R2。
【文檔編號】G01N33/68GK104407157SQ201410737777
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月5日
【發(fā)明者】王曉東 申請人:重慶中元生物技術(shù)有限公司