基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的sers基底制備方法
【專利摘要】一種基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，通過(guò)滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)將小段引物延伸后，核殼納米金結(jié)構(gòu)組裝的互補(bǔ)單鏈與其相互雜交，彎曲易折的長(zhǎng)單鏈變成伸展雙鏈的過(guò)程中核殼納米金等距離地嵌入到雙鏈中，利用滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)的序列延伸實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大、核殼納米結(jié)構(gòu)自身以及通過(guò)DNA雜交實(shí)現(xiàn)距離控制所得的納米金結(jié)構(gòu)之間的拉曼信號(hào)疊加，實(shí)現(xiàn)信號(hào)高效相對(duì)均一的SERS基底制備，從而可應(yīng)用于生物分子的高效靈敏檢測(cè)、生物傳感器領(lǐng)域。該技術(shù)的序列延伸實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大、實(shí)現(xiàn)距離控制所得的納米金結(jié)構(gòu)之間的拉曼信號(hào)疊加，實(shí)現(xiàn)信號(hào)高效相對(duì)均一的SERS基底制備。
【專利說(shuō)明】基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于DNA納米技術(shù)及納米材料的功能化及應(yīng)用領(lǐng)域，涉及一種基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)及核殼納米金結(jié)構(gòu)的高效SERS基底的制備方法，可應(yīng)用于生物分子檢測(cè)、生物傳感器等領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]表面增強(qiáng)拉曼散射(SurfaceEnhanced Raman scattering, SERS)是指位于粗糖金屬表面的小分子本身的拉曼信號(hào)得到增強(qiáng)的現(xiàn)象。這種現(xiàn)象已在表面科學(xué)、分析科學(xué)和生物科學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，為深入表征各種表面(界面)的結(jié)構(gòu)和過(guò)程提供分子水平上的信息，如鑒別分子或離子在表面的鍵合、構(gòu)型和取向以及材料的表面結(jié)構(gòu)。關(guān)于SERS的增強(qiáng)機(jī)制，雖然到目前仍存在爭(zhēng)議，但較為認(rèn)可的是電磁場(chǎng)增強(qiáng)機(jī)理，而該機(jī)理中涉及到的“熱點(diǎn)”(hot spot)—般是指在一些納米粒子組成的聚集體中，相鄰的納米粒子之間的空隙之處的區(qū)域。此區(qū)域的SERS效應(yīng)最強(qiáng)。如何能構(gòu)建高效均一含有更多的“熱點(diǎn)”的SERS基底，已成為SERS研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。
[0003]現(xiàn)在的研究中，構(gòu)建高效均一基底的常見(jiàn)方法有如下幾種:
a:金屬電極活性基底，這是目前使用較為廣泛的一種基底。通過(guò)電極表面進(jìn)行適當(dāng)?shù)拇植诨幚?，可以產(chǎn)生粗糙度基本處于宏觀粗糙度與亞微觀粗糙度范圍內(nèi)。這種方式的缺點(diǎn)是多數(shù)金屬經(jīng)過(guò)處理后，表面粗糙尺度變化范圍較大，造成基底上個(gè)點(diǎn)表面增強(qiáng)效應(yīng)變化很大，這種結(jié)構(gòu)上的不均一性直接影響了吸附分子的SERS光譜的穩(wěn)定性及數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性。
[0004]b:化學(xué)刻蝕和化學(xué)沉積的活性基底，是通過(guò)強(qiáng)腐蝕性物質(zhì)把金屬表面的原子通過(guò)化學(xué)反應(yīng)溶解掉來(lái)達(dá)到表面粗糙化的目的。這種方式的缺點(diǎn)是反應(yīng)條件較難控制、沉積的時(shí)間、反應(yīng)的溫度、試劑的濃度等都對(duì)基底的粗糙度有影響。
[0005]另外還有平板印刷技術(shù)、自助裝技術(shù)、有序組裝技術(shù)等來(lái)制備活性基底，但都存在各自的缺點(diǎn)從而限制了 SERS技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)及核殼納米金結(jié)構(gòu)的高效SERS基底的制備方法。
[0007]—種基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，通過(guò)滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)將小段引物延伸后，核殼納米金結(jié)構(gòu)組裝的互補(bǔ)單鏈與其相互雜交，彎曲易折的長(zhǎng)單鏈變成伸展雙鏈的過(guò)程中核殼納米金等距離地嵌入到雙鏈中，通過(guò)納米金結(jié)構(gòu)自身以及相互之間的拉曼信號(hào)，實(shí)現(xiàn)高效SERS基底的制備，從而可應(yīng)用于生物分子的高效靈敏檢測(cè)、生物傳感器領(lǐng)域；
所述的滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)為單引物的滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)以及多引物的超分支滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)。
[0008]所述的小段引物為長(zhǎng)度在10_40bp的一段無(wú)標(biāo)記人工合成單鏈DNA。
[0009]所述的核殼納米金結(jié)構(gòu)為尺寸介于30_50nm的納米金核殼結(jié)構(gòu)，核殼中間存在l_3nm縫隙，且縫隙里吸附有拉曼小分子，如DTNB (5D0,全稱是5，5’-dith1bis (2-nitrobenzoic acid),中文名:5, 5’-二硫雙(2-硝基苯甲酸))，Cy3(cyanine-3), Cy5 (cyanine-5)，F(xiàn)ITC (fluorescein isoth1cyannate)，批P定。
[0010]所述的互補(bǔ)單鏈為序列上與擴(kuò)增所用的環(huán)模板相同或部分相同的一段經(jīng)過(guò)巰基或生物素標(biāo)記的一段DNA序列。
[0011]所述的彎曲易折的長(zhǎng)單鏈為滾環(huán)擴(kuò)增后所得的數(shù)量可達(dá)幾十kbp，長(zhǎng)度可達(dá)數(shù)微米的單鏈DNA。
[0012]所述的伸展雙鏈為擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)單鏈與互補(bǔ)鏈雜交后，單鏈本身的二級(jí)結(jié)構(gòu)等打開(kāi)，形成的均一雙鏈或是間斷性均一雙鏈。
[0013]所述的等距離地嵌入到雙鏈為納米金通過(guò)組裝巰基的互補(bǔ)鏈或組裝有親和素的納米金與生物素標(biāo)記的互補(bǔ)鏈連接，實(shí)現(xiàn)嵌入。
[0014]所述的納米金結(jié)構(gòu)自身以及相互之間的拉曼信號(hào)為核殼納米金自身拉曼信號(hào)以及核殼結(jié)構(gòu)之間形成的拉曼信號(hào)的疊加。
[0015]利用滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)的序列延伸實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大、核殼納米結(jié)構(gòu)自身以及通過(guò)DNA雜交實(shí)現(xiàn)距離控制所得的納米金結(jié)構(gòu)之間的拉曼信號(hào)疊加，實(shí)現(xiàn)信號(hào)高效相對(duì)均一的SERS基底制備。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]附圖1為經(jīng)過(guò)滾環(huán)擴(kuò)增之后，得到長(zhǎng)單鏈DNA與互補(bǔ)序列充分雜交后所得的雙鏈結(jié)構(gòu)的AFM成像，圖中雙鏈結(jié)構(gòu)較為均一，伸展性良好。圖片掃描尺寸為10 μ m。

【具體實(shí)施方式】
[0017]實(shí)施例1:
5 μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ M待測(cè)核酸序列加入到0.5mL離心管中。C混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(10000rpm/min, 5min),收集底部溶液，為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0018]8μ L milliQ 加入以下溶液:環(huán)狀 DNA模板(6μ L)，dNTPs (2 μ L, 10 mM), RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0019]3μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L )預(yù)成環(huán) DNA (100 μ Μ, 3 μ L), ΤΑΕ 緩沖液(125mM Mg2+，2yL)總體積為20yL混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C (每20s降低0.2°C)，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。雜交溶液2 ix L加入18 μ L milliQ 7欠，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mill1-Q滴流沖洗，原子力顯微鏡Tapping-mode 成像。
[0020]實(shí)施例2:
5μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ Μ待測(cè)核酸序列加入到0.5mL離心管中混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(lOOOOrpm/min, 5min),收集底部溶液,為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0021]8μ L milliQ加入以下溶液:環(huán)狀DNA模板(6μ L)，b1-dNTPs (2 μ L, 1 mM),RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0022]3μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L )預(yù)成環(huán) DNA (100 μ Μ, 3 μ L), ΤΑΕ 緩沖液(125mM Mg2+，2yL)總體積為20yL混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C (每20s降低0.2°C )，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。
[0023]2uL lOmM avidin加入上述雜交產(chǎn)物中，室溫下反應(yīng)連接lh。后取此溶液2 μ L加入18 μ L mi 11 iQ水，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mi 11 i_Q滴流沖洗，原子力顯微鏡Tapping-mode成像。
[0024]實(shí)施例3:
5μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ Μ待測(cè)核酸序列加入到0.5mL離心管中混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(10000rpm/min, 5min),收集底部溶液,為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0025]8yL milliQ 加入以下溶液:環(huán)狀 DNA 模板(6yL)，dNTPs (2 μ L, 1 mM), RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0026]3 μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L ), b1-預(yù)成環(huán) DNA (100 μ M, 3 μ L),ΤΑΕ緩沖液(125mM Mg2+，2 μ L)總體積為20 μ L混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C(每20s降低0.2°C )，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。
[0027]2uL 10mM avidin加入上述雜交產(chǎn)物中，室溫下反應(yīng)連接lh。后取此溶液2 μ L加入18 μ L mi 11 iQ水，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mi 11 i_Q滴流沖洗，原子力顯微鏡Tapping-mode成像。
[0028]實(shí)施例4:
5μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ Μ待測(cè)核酸序列加入到0.5mL離心管中混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(10000rpm/min, 5min),收集底部溶液,為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0029]8yL milliQ 加入以下溶液:環(huán)狀 DNA 模板(6yL)，dNTPs (2 μ L, 1 mM), RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0030]3 μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L ), b1-預(yù)成環(huán) DNA (100 μ M, 3 μ L),ΤΑΕ緩沖液(125mM Mg2+，2 μ L)總體積為20 μ L混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C(每20s降低0.2°C )，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。
[0031]lmL 5nm金溶液中，加入20yL lmg/mL streptavidin,充分混勻后，室溫下吸附連接lh，加入200yL BSA (10%)溶液，封閉30min后，超濾管過(guò)濾，回收100 μ LAu-streptavidin 產(chǎn)物。
[0032]10 μ L Au-streptavidin加入上述雜交產(chǎn)物中，室溫下反應(yīng)連接lh。后取此溶液2uL加入18 μ L milliQ水，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mill1-Q滴流沖洗,原子力顯微鏡Tapping-mode成像。
[0033]實(shí)施例5
5μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ Μ待測(cè)核酸序列加入到0.5mL離心管中混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(10000rpm/min, 5min),收集底部溶液,為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0034]8yL milliQ 加入以下溶液:環(huán)狀 DNA 模板(6yL)，dNTPs (2 μ L, 1 mM), RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0035]3 μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L ), b1-預(yù)成環(huán) DNA (100 μ M, 3 μ L),ΤΑΕ緩沖液(125mM Mg2+，2 μ L)總體積為20 μ L混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C(每20s降低0.2°C )，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。
[0036]lmL 5nm金溶液中，加入20yL lmg/mL streptavidin,充分混勻后，室溫下吸附連接lh，加入200yL BSA (10%)溶液，封閉30min后，超濾管過(guò)濾，回收100 μ LAu-streptavidin 產(chǎn)物。
[0037]10 μ L Au-streptavidin加入上述雜交產(chǎn)物中，室溫下反應(yīng)連接lh。后取此溶液2uL加入18 μ L milliQ水，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mill1-Q滴流沖洗,原子力顯微鏡Tapping-mode成像。
[0038]實(shí)施例6:
5μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ Μ待測(cè)核酸序列加入到0.5mL離心管中混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(10000rpm/min, 5min),收集底部溶液,為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0039]8yL milliQ 加入以下溶液:環(huán)狀 DNA 模板(6yL)，dNTPs (2 μ L, 1 mM), RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0040]3 μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L ), b1-預(yù)成環(huán) DNA (100 μ M, 3 μ L),ΤΑΕ緩沖液(125mM Mg2+，2 μ L)總體積為20 μ L混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C(每20s降低0.2°C )，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。
[0041]lmL 15nm金溶液中，加入20yL lmg/mL streptavidin,充分混勻后，室溫下吸附連接 lh，加入 200yL BSA (10%)溶液，封閉 30min后，離心洗滌 3 次(12500rpm/min, 20min)回收 100 μ L Au-streptavidin 產(chǎn)物。
[0042]10 μ L Au-streptavidin加入上述雜交產(chǎn)物中，室溫下反應(yīng)連接lh。后取此溶液2uL加入18 μ L milliQ水，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mill1-Q滴流沖洗,原子力顯微鏡Tapping-mode成像。
[0043]實(shí)施例7: 5μ L 100 μ Μ預(yù)成環(huán)DNA與10 μ L 100 μ M待測(cè)核酸序列加入到0.5mL離心管中混合均勻，90°C下lmin，當(dāng)管中溶液自然冷卻到室溫時(shí)，加入3μ LT4連接酶及2 μ LT4連接酶緩沖液，25°C環(huán)境下連接16小時(shí)以上，結(jié)束后，65°C條件下酶變性lOmin，酶作用完全后，用30KD的超濾管超濾(10000rpm/min, 5min),收集底部溶液,為環(huán)狀DNA模板溶液。
[0044]8yL milliQ 加入以下溶液:環(huán)狀 DNA 模板(6yL)，dNTPs (2 μ L, 1 mM), RCAbuffer (2 μ L, 10 X), phi29 polymerase (2 μ L, 10 U/μ L),混合溶液終體積為 20 μ L。然后30°C水浴中擴(kuò)增30 min。90°C條件下酶變性lOmin，4°C環(huán)境下保存待用。
[0045]3 μ L 上述擴(kuò)增產(chǎn)物，milliQ water (12 μ L ), b1-預(yù)成環(huán) DNA (100 μ M, 3 μ L),ΤΑΕ緩沖液(125mM Mg2+，2 μ L)總體積為20 μ L混合均勻后，95°C (5min)，37°C降至4°C(每20s降低0.2°C )，時(shí)間約為1.5h進(jìn)行DNA雜交反應(yīng)。
[0046]10(^1^，1011]\1粒徑為1511111的納米金中加入4 4 1^，10(^]\1 SH-polyA (15 個(gè) A 序列)DNA，室溫輕微振蕩過(guò)夜；后加入老化液0.1M PB (pH7.4)溶液10 μ L，室溫條件350rpm/min振蕩30min，后加入2M NaCl 20 μ L，分四次加入，間隔為30min，室溫下350rpm/min振蕩過(guò)夜；4°C，12000rpm/min，20min條件下進(jìn)行離心洗滌三次，洗滌液為lOmMPB，后lmL0.1M PBS重懸??；100 μ L 0.1Μ 5D0小分子溶液加入到500 μ L上述溶液中，室溫下350rpm/min振蕩，吸附 2-3 天。取 100 μ L 上述溶液然后加入 50 μ L1%PVP, 25 μ L lOmM NH20H *HC1,25 μ L5mM HAuC14，混勻振蕩lmin后20°C 4000rpm/min,每次6min離心洗漆三次，洗漆液為MilliQ水，后100μ LMilliQ水重懸?。辉摲绞街苽涞玫降牧皆?5nm左右，濃度為InM，具備高增強(qiáng)特征峰的一種核殼納米金結(jié)構(gòu)。
[0047]lmL核殼納米金結(jié)構(gòu)中，加入20 μ L lmg/mL streptavidin,充分混勻后，室溫下吸附連接lh，加入200 μ L BSA (10%)溶液，封閉30min后，離心洗滌3次(8000rpm/min，20min)回收 100 μ L 核殼 Au-streptavidin 產(chǎn)物。10 μ L 核殼 Au-streptavidin 加入上述雜交產(chǎn)物中，室溫下反應(yīng)連接lh。后取此溶液2 μ L加入18 μ L milliQ水，充分混勻后，取5 μ L滴到平整清潔云母表面，吸附3min后，Mill1-Q滴流沖洗，原子力顯微鏡Tapping-mode成像。取10 μ L滴到錫箔上，進(jìn)行ΤΕΜ成像。取10 μ L滴到硅片上，進(jìn)行SERS信號(hào)檢測(cè)。
【權(quán)利要求】
1.一種基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，通過(guò)滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)將小段引物延伸后，核殼納米金結(jié)構(gòu)組裝的互補(bǔ)單鏈與其相互雜交，彎曲易折的長(zhǎng)單鏈變成伸展雙鏈的過(guò)程中核殼納米金等距離地嵌入到雙鏈中，通過(guò)納米金結(jié)構(gòu)自身以及相互之間的拉曼信號(hào)，實(shí)現(xiàn)高效SERS基底的制備，從而可應(yīng)用于生物分子的高效靈敏檢測(cè)、生物傳感器領(lǐng)域。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)為單引物的滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)以及多引物的超分支滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的小段引物為長(zhǎng)度在10-40bp的一段無(wú)標(biāo)記人工合成單鏈DNA。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的核殼納米金結(jié)構(gòu)為尺寸介于30-50nm的納米金核殼結(jié)構(gòu)，核殼中間存在l_3nm縫隙，且縫隙里吸附有拉曼小分子，如DTNB (MO，全稱是5，5’-dith1bis (2-nitrobenzoic acid),中文名:5, 5’-二硫雙(2-硝基苯甲酸))，Cy3(cyanine-3), Cy5 (cyanine-5)，F(xiàn)ITC (fluorescein isoth1cyannate)，批P定。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的互補(bǔ)單鏈為序列上與擴(kuò)增所用的環(huán)模板相同或部分相同的一段經(jīng)過(guò)巰基或生物素標(biāo)記的一段DNA序列。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的彎曲易折的長(zhǎng)單鏈為滾環(huán)擴(kuò)增后所得的數(shù)量可達(dá)幾十kbp，長(zhǎng)度可達(dá)數(shù)微米的單鏈DNA。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述、基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的伸展雙鏈為擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)單鏈與互補(bǔ)鏈雜交后，單鏈本身的二級(jí)結(jié)構(gòu)等打開(kāi)，形成的均一雙鏈或是間斷性均一雙鏈。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的等距離地嵌入到雙鏈為納米金通過(guò)組裝巰基的互補(bǔ)鏈或組裝有親和素的納米金與生物素標(biāo)記的互補(bǔ)鏈連接，實(shí)現(xiàn)嵌入。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)和核殼納米金結(jié)構(gòu)的SERS基底制備方法，其特征在于，所述的納米金結(jié)構(gòu)自身以及相互之間的拉曼信號(hào)為核殼納米金自身拉曼信號(hào)以及核殼結(jié)構(gòu)之間形成的拉曼信號(hào)的疊加。
【文檔編號(hào)】G01N21/65GK104406952SQ201410661203
【公開(kāi)日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月19日
【發(fā)明者】何丹農(nóng), 顏娟, 胡沖婭 申請(qǐng)人:上海納米技術(shù)及應(yīng)用國(guó)家工程研究中心有限公司