一種雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)裝置及方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)裝置及方法，棉線兩端固定黏附在貼于塑料卡片上的兩塊雙面膠上，棉線檢測(cè)區(qū)域通過(guò)滴加方式固定單克隆抗體，棉線一端固定了兩個(gè)納米金結(jié)合墊；第一結(jié)合墊(1)固定了修飾了另一種單克隆抗體和一端帶有巰基一端帶有生物素基團(tuán)DNA的納米金粒子，第二結(jié)合墊(2)則固定了修飾有鏈酶親合素的納米金粒子；棉線另一端則貼有吸水濾紙。本發(fā)明采用兩種納米金粒子為標(biāo)記物，實(shí)現(xiàn)了信號(hào)放大的目的。另外采用棉線為檢測(cè)載體，大大簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)納米金層析試紙條裝置，同時(shí)不需要點(diǎn)噴設(shè)備，制備簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉，一次性使用，干試劑化，檢測(cè)靈敏，快速，使用完處理方便，適于現(xiàn)場(chǎng)診斷。
【專利說(shuō)明】一種雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)裝置及方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)裝置及方法，具體地說(shuō)，涉及一種基于棉線為載體的雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)裝置及方法。

【背景技術(shù)】
[0002]20世紀(jì)90年代Beggs等人首次開(kāi)發(fā)了膠體金層析試紙條技術(shù)，用于蛋白質(zhì)檢測(cè)。傳統(tǒng)的納米金層析試紙條技術(shù)構(gòu)造較為復(fù)雜，制備需要昂貴的點(diǎn)噴設(shè)備。本發(fā)明的目的在于克服上述技術(shù)存在的缺陷，提供一種雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)裝置及方法，該方法采用商品化的棉線為載體，檢測(cè)區(qū)域的抗體采用滴加方式固定，使得整個(gè)檢測(cè)裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單化，制備方便，價(jià)格便宜，使用方便，檢測(cè)時(shí)間短。另外，我們?cè)趥鹘y(tǒng)的夾心免疫反應(yīng)基礎(chǔ)上采用了兩種納米金標(biāo)記物，大大提高了檢測(cè)靈敏度。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]其具體技術(shù)方案為:
[0004]一種雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)裝置，棉線兩端固定黏附在貼于塑料卡片上的兩塊雙面膠上，棉線檢測(cè)區(qū)域通過(guò)滴加方式固定單克隆抗體，棉線一端固定了兩個(gè)納米金結(jié)合墊；第一結(jié)合墊I固定了修飾了另一種單克隆抗體和一端帶有巰基一端帶有生物素基團(tuán)DNA的納米金粒子，第二結(jié)合墊2則固定了修飾有鏈酶親合素的納米金粒子；棉線另一端則貼有吸水濾紙。
[0005]優(yōu)選地，所述雙面膠規(guī)格為:2.2cmX 1.0cm，兩塊雙面膠之間的距離為2.3cm。
[0006]優(yōu)選地，所述檢測(cè)區(qū)距離上面的雙面膠下邊緣0.6cm。
[0007]優(yōu)選地,所述結(jié)合墊尺寸:寬3mm,長(zhǎng)9mm,兩塊結(jié)合墊緊密相連。
[0008]一種雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)方法，包括以下步驟:檢測(cè)時(shí)在第一結(jié)合墊I上滴加帶有待測(cè)抗原的樣品溶液，第二結(jié)合墊2則滴加緩沖溶液，等待十五分鐘，棉線檢測(cè)區(qū)域出現(xiàn)紅色條帶，顯示兩種納米金標(biāo)記物被捕獲于檢測(cè)區(qū)域；檢測(cè)時(shí)采用商用掃描儀掃描檢測(cè)區(qū)域，用ImageJ軟件分析顏色強(qiáng)度，即可得到定量分析信息。
[0009]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明采用兩種納米金粒子為標(biāo)記物，實(shí)現(xiàn)了信號(hào)放大的目的。另外采用棉線為檢測(cè)載體，大大簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)納米金層析試紙條裝置，同時(shí)不需要點(diǎn)噴設(shè)備，制備簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉，一次性使用，干試劑化，檢測(cè)靈敏，快速，使用完處理方便，適于現(xiàn)場(chǎng)診斷。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010]圖1為雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)裝置的結(jié)構(gòu)圖；
[0011]圖2為雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)方法的示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0012]下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明。
[0013]我們首次利用棉線和納米金標(biāo)記物實(shí)現(xiàn)了對(duì)肺癌標(biāo)志物(鱗狀癌胚抗原)的低成本、高靈敏、快速檢測(cè)。其中作為分析物的鱗狀癌胚抗原和一對(duì)單克隆抗體組成了干試劑棉線即時(shí)診斷設(shè)備模型。而且，我們利用兩種納米金標(biāo)記物實(shí)現(xiàn)了信號(hào)放大過(guò)程。與簡(jiǎn)單的基于棉線設(shè)備的夾心免疫反應(yīng)相比，采用兩種納米金標(biāo)記物明顯提高了檢測(cè)靈敏度。與傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)檢測(cè)方法相比，我們?cè)O(shè)計(jì)的方法避免了多次反應(yīng)和多步洗滌。通過(guò)觀察檢測(cè)區(qū)顏色變化進(jìn)行定性檢測(cè)，定量檢測(cè)數(shù)據(jù)通過(guò)掃面儀和相應(yīng)的軟件分析而得到。在最佳條件下，該方法檢測(cè)鱗狀癌胚抗原，檢測(cè)限可達(dá)Ing/mL，滿足臨床診斷的要求。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程在室溫下進(jìn)行，這大大簡(jiǎn)化了檢測(cè)程序。與傳統(tǒng)的試紙條生物傳感器相比，我們只需要8微升的試樣。同時(shí)，我們還用同樣的方法成功實(shí)現(xiàn)了另外一種肺癌標(biāo)志物(鐵蛋白)的快速檢測(cè)。
[0014]具體構(gòu)成:棉線兩端固定黏附在貼于塑料卡片上的兩塊雙面膠上，棉線檢測(cè)區(qū)域通過(guò)滴加方式固定鱗狀癌胚抗原單克隆抗體，棉線一端固定了兩個(gè)納米金結(jié)合墊。結(jié)合墊I固定了修飾了另一種單克隆抗體和一端帶有巰基一端帶有生物素基團(tuán)DNA的納米金粒子，結(jié)合墊2則固定了修飾有鏈酶親合素的納米金粒子。棉線另一端則貼有吸水濾紙。檢測(cè)時(shí)在結(jié)合墊I上滴加帶有待測(cè)抗原的樣品溶液，結(jié)合墊2則滴加緩沖溶液，等待十五分鐘，棉線檢測(cè)區(qū)域出現(xiàn)紅色條帶，顯示兩種納米金標(biāo)記物被捕獲于檢測(cè)區(qū)域。檢測(cè)時(shí)采用商用掃描儀掃描檢測(cè)區(qū)域，用ImageJ軟件分析顏色強(qiáng)度，即可得到定量分析信息。血清樣品檢測(cè)時(shí)，用緩沖溶液1:1稀釋樣品，然后按照上述方法進(jìn)行檢測(cè)。
[0015]同時(shí)，該裝置已經(jīng)成功實(shí)現(xiàn)了另外一種肺癌標(biāo)志物(鐵蛋白)的檢測(cè)和一種疾病相關(guān)DNA序列的檢測(cè)。
[0016]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】，本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，可顯而易見(jiàn)地得到的技術(shù)方案的簡(jiǎn)單變化或等效替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)裝置，其特征在于，棉線兩端固定黏附在貼于塑料卡片上的兩塊雙面膠上，棉線檢測(cè)區(qū)域通過(guò)滴加方式固定單克隆抗體，棉線一端固定了兩個(gè)納米金結(jié)合墊；第一結(jié)合墊(I)固定了修飾了另一種單克隆抗體和一端帶有巰基一端帶有生物素基團(tuán)DNA的納米金粒子，第二結(jié)合墊(2)則固定了修飾有鏈酶親合素的納米金粒子；棉線另一端則貼有吸水濾紙。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)裝置，其特征在于，所述雙面膠規(guī)格為:2.2cmXl.0cm，兩塊雙面膠之間的距離為2.3cm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)裝置，其特征在于，所述檢測(cè)區(qū)距離上面的雙面膠下邊緣0.6cm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)裝置，其特征在于，所述結(jié)合墊尺寸:寬3mm，長(zhǎng)9mm，兩塊結(jié)合墊緊密相連。
5.一種雙納米金標(biāo)記物信號(hào)放大蛋白質(zhì)標(biāo)志物快速檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟:檢測(cè)時(shí)在第一結(jié)合墊(I)上滴加帶有待測(cè)抗原的樣品溶液，第二結(jié)合墊(2)則滴加緩沖溶液，等待十五分鐘，棉線檢測(cè)區(qū)域出現(xiàn)紅色條帶，顯示兩種納米金標(biāo)記物被捕獲于檢測(cè)區(qū)域；檢測(cè)時(shí)采用商用掃描儀掃描檢測(cè)區(qū)域，用ImageJ軟件分析顏色強(qiáng)度，即可得到定量分析信息。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104280554SQ201410561795
【公開(kāi)日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年10月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月12日
【發(fā)明者】毛勛, 毛敏 申請(qǐng)人:西北大學(xué)