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用于初次慢性腎臟疾病的發(fā)展的預(yù)后生物標(biāo)志物的制作方法

文檔序號(hào):6244266閱讀:154來源:國知局
用于初次慢性腎臟疾病的發(fā)展的預(yù)后生物標(biāo)志物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于初次慢性腎臟疾病的發(fā)展的預(yù)后生物標(biāo)志物。本發(fā)明的主題是用于預(yù)測(cè)初次慢性腎臟疾病(CKD)的發(fā)展或用于監(jiān)測(cè)慢性腎臟疾病療法的測(cè)定方法和體外方法,所述方法包含測(cè)定ANP和/或ADM或其前體或其片段的水平。
【專利說明】用于初次慢性腎臟疾病的發(fā)展的預(yù)后生物標(biāo)志物
[0001] 本申請(qǐng)為國際申請(qǐng)日2009年10月22日、國際申請(qǐng)?zhí)朠CT/EP2009/007739于2011 年4月22日進(jìn)入中國國家階段、申請(qǐng)?zhí)?00980142234. 7、發(fā)明名稱"用于初次慢性腎臟疾 病的發(fā)展的預(yù)后生物標(biāo)志物"的分案申請(qǐng)。 發(fā)明領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明為預(yù)后生物標(biāo)志物領(lǐng)域,并涉及為慢性腎臟疾病患者預(yù)測(cè)后果。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] 慢性腎臟疾?。–KD)是重要的健康問題,具有不斷增加的發(fā)病率和流行率,花費(fèi) 高昂并且后果不良。引入腎臟疾病后果等級(jí)主動(dòng)性(Kidney Disease Outcome Quality Initiative) (K/DOQI)分類并使用估算的腎小球?yàn)V過率(eGFR)評(píng)估腎功能,已鑒定到大 量患有以前未診斷的CKD的患者(國家腎臟基金會(huì)(National Kidney Foundation), Am J Kidney Dis 2002 ;39(2Suppl I) :S1_266;疾病控制和預(yù)防中心(Centers for Disease Control and Prevention) (CDC),Morb Mortal Wkly Rep 2OO7;56:16I-I65)。然而,僅有 少部分CKD患者最終發(fā)展到末期腎病(ESRD) (Clase等,BMJ 2004 ;329:912-915)。鑒定具 有CKD發(fā)展的最高風(fēng)險(xiǎn)的患者,仍然是一個(gè)挑戰(zhàn)。由于許多實(shí)驗(yàn)室采納了 K/D0QI的推薦方 案并日常報(bào)告GFR估算值,在未診斷CKD的篩查中獲得了顯著成功。但是,對(duì)于進(jìn)一步風(fēng)險(xiǎn) 分層并鑒定其他風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)因子以對(duì)患有CKD、最可能發(fā)展到ESRD的患者進(jìn)行定向干預(yù),存 在著緊迫需求。
[0005] 氨基端proBNP (NT-proBNP),一種用于心血管疾病的公認(rèn)預(yù)后標(biāo)志物,已顯示 在患有初次CKD的非糖尿病患者中預(yù)測(cè)腎臟疾病進(jìn)展(Spanaus等,Clin Chem 2007; 53:1264-1272)。
[0006] A-型利尿鈉肽(ANP)和腎上腺髓質(zhì)素(ADM)是強(qiáng)有力的降血壓劑、利尿劑和利尿 鈉肽,其參與維持心血管和腎臟體內(nèi)平衡(Vesely等,Cardiovasc Res 2001 ;51:647-658 ; Bunton等,Pharmacol Ther 2004;103:179-201)。已報(bào)道在患有心血管疾病的患者和患有 腎臟疾病的患者中,ANP和ADM的血漿濃度增加(Lerman等,Lancet 1993 ;341:1105-1109 ; Jougasaki 等,Circulation 1995 ;92:286-289 ;Winters 等,Biochem Biophys Res Commun 1988 ;150:231-236;Ishimitsu 等,J Clin Invest 1994;94:2158-2161)。然而,ANP和 ADM 還從未被當(dāng)做標(biāo)志物來預(yù)測(cè)腎臟疾病的發(fā)展。
[0007] 腎上腺髓質(zhì)素(ADM)這種肽,作為一種從人類嗜鉻細(xì)胞瘤分離的包含52個(gè)氨基 酸的新的降血壓肽,在 1993 年首次被描述(Kitamura 等,(1993),13;[0(3116111.13;[(^115^.1^8. Commun. 192:553-560)。同年,包含185個(gè)氨基酸的前體肽的編碼cDNA和該前體肽的完整氨 基酸序列也被描述(Kitamura 等,(1993) ,Biochem. Biophys. Res. Commun. 194:720-725)。 在N端特別包含有21個(gè)氨基酸的信號(hào)序列的前體肽,被稱為"前腎上腺髓質(zhì)素原"。
[0008] ADM肽包含pre-pro-ADM的95到146位氨基酸,其由pre-pro-ADM通過蛋白水解切 割而形成。在pre-pro-ADM的切割中形成的某些肽片段已進(jìn)行詳細(xì)的性質(zhì)研究,特別是生 理活性肽腎上腺髓質(zhì)素(ADM)和"PAMP",后者是包含在pre-pro-ADM中緊隨信號(hào)肽的21個(gè) 氨基酸之后的20個(gè)氨基酸(22-41位)的肽。另一個(gè)未知功能并具有高的離體穩(wěn)定性的片 段是中段腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM) (Struck 等,(2004),P印tides 25 (8) : 1369-72),對(duì) 其已開發(fā)出一種可靠的定量方法(Morgenthaler 等(2005),Clin. Chem. 51 (10) : 1823-9)。
[0009] 1993年ADM的發(fā)現(xiàn)和定性引發(fā)了大量研究活動(dòng)和無數(shù)出版物,它們的結(jié)果最近已 被總結(jié)在各種綜述文章中,在本說明書的情況下,具體來說參考在"Peptides"雜志的ADM ??≒印 tides 22(2001))中的文章,特別是(Takahashi (2001),P印 tides 22, 1691 和 Eto (2001),Peptides22, 1693-1711)。該主題進(jìn)一步綜述在 Hinson 等的文章中(Hinson 等,(2000) ,Endocr. Rev. 21 (2) ,138-167)。ADM可以被當(dāng)作多功能調(diào)控肽。它以帶有 C端甘氨酸的無活性形式釋放到循環(huán)中(Kitamura等,(1998),Biochem. Biophys. Res. Commun. 244(2),551-555)。
[0010] ADM是有效的血管舒張劑。降血壓效應(yīng)已與ADM的C端部分中的肽區(qū)段具體相 關(guān)聯(lián)。另一方面,ADM的N端肽序列表現(xiàn)出升血壓效應(yīng)(Kitamura等,(2001),Peptides 22, 1713-1718)。
[0011] 心房利尿鈉肽(ANP,也稱為心房利尿鈉因子(ANF))是一種包含28個(gè)氨基酸殘基 的肽類激素(SEQ ID NOAhANP基因包含3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子,并編碼153個(gè)氨基酸的 pre-pr〇ANP(SEQ ID N0:6)。在切開N端信號(hào)肽(25個(gè)氨基酸)和兩個(gè)C端氨基酸(127/128) 后,釋放出proANP。ANP包含來自前體激素原proANP的C端的99-126位氨基酸殘基(SEQ ID NO: 7)。該激素原被切割成28個(gè)氨基酸的ANP成熟肽,也稱為ANP (1-28)或a -ANP,以 及氨基端片段 ANP(l-98) (NT-proANP,SEQ ID N0:9)。因此,NT-proANP 和 ANP 以等摩爾量 產(chǎn)生。98個(gè)氨基酸的NT-proANP可以進(jìn)行進(jìn)一步蛋白水解加工。中段proANP (MR-proANP) 被定義為proANP或其包含proANP的至少53-90位氨基酸殘基的任何片段。proANP的53 至90位氨基酸顯示在SEQ ID NO: 10中(圖10)。MR-proANP的測(cè)量已被用于急性代謝失 調(diào)心力衰竭的鑒別診斷中(Gegenhuber等,Clin Chem 2〇〇6;52:827_31)。
[0012] 關(guān)于ANP及其前體和片段,幾份出版物涉及在患有晚期腎臟疾病的患者中測(cè)量 這些被分析物,特別是在血液透析之前和之后。在這些出版物中,分析了測(cè)量到的被分析 物水平與其他參數(shù)的相關(guān)性,所述其他參數(shù)在獲得用于測(cè)量的樣品的同時(shí)從患者獲得。 還沒有出版物跟蹤了疾病隨時(shí)間的發(fā)展,因此不能并且也沒有研究在給定時(shí)間點(diǎn)測(cè)量到 的被分析物水平是否與疾病嚴(yán)重性的增加相關(guān),即被分析物水平是否適合用于疾病發(fā)展 的預(yù)測(cè)。N印hron. 1991 ;58(1) : 17-22,"血液透析后血漿中免疫反應(yīng)性的心房利尿鈉因 子激素原的N端、C端和4000道爾頓中段的變化"(Change in plasma immunoreactive N-terminus, C-terminus, and 4, 000-dalton midportion of atrial natriuretic factor prohormone with hemodialysis), Winters CJ, Vesely DL〇 Regul Pept Suppl. 1985 ; 4:110-2,"長(zhǎng)期血液透析患者中心房利尿鈉多肽的血楽濃度"(PIasma concentrat ion of atrial natriuretic polypeptide in chronic hemodialysis patients), Yamamoto Y, Higa T, Kitamura K, Tanaka K, Kangawa K, Matsuo H〇


【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明涉及用于預(yù)測(cè)初次慢性腎臟疾?。–KD)的發(fā)展或用于監(jiān)測(cè)慢性腎臟疾病 療法的方法,所述方法包含下列步驟:
[0014] (a)提供來自患有初次慢性腎臟疾病的患者的樣品,
[0015] (b)測(cè)定ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平,
[0016] (c)將ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與初次慢性腎 臟疾病的發(fā)展的預(yù)測(cè)相關(guān)聯(lián)。
[0017] 附圖描述
[0018] 圖1 :腎上腺髓質(zhì)素(ADM)前體肽(pre-pro-ADM)的氨基酸序列。1-21位氨基酸 形成信號(hào)肽。22-41位氨基酸形成pro-ADM N-端20肽(proADM N20)。45-92位氨基酸形 成MR-proADM肽。成熟ADM包含95-146位氨基酸。148-185位氨基酸形成proADM C-端片 段。
[0019] 圖2 :腎上腺髓質(zhì)素原肽(proADM)的氨基酸序列。
[0020] 圖3 :腎上腺髓質(zhì)素原N-端20肽(proADM N20 ;PAMP)的氨基酸序列。PAMP肽可 以具有酰胺化的C-端。
[0021] 圖4 :MR腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM)的氨基酸序列。
[0022] 圖5 :成熟腎上腺髓質(zhì)素肽(ADM)的氨基酸序列。ADM肽可以具有酰胺化的C-端 和/或可以被糖基化。
[0023] 圖6 :心房利尿鈉肽(ANP)前體(pre-pro-ANP)的氨基酸序列。1-25位氨基酸形 成信號(hào)肽。
[0024] 圖7 :proANP的氨基酸序列。
[0025] 圖8 :成熟ANP的氨基酸序列。
[0026] 圖9 :NT_proANP的氨基酸序列。
[0027] 圖10 :proANP的53-90位氨基酸的氨基酸序列。
[0028] 圖11 :KapIan_Meier作圖,顯示了患有CKD并根據(jù)基線時(shí)MR-proANP的中位數(shù) (106pmol/L)分層到兩個(gè)組中的患者的腎病發(fā)展。
[0029] 圖12 :KapIan_Meier作圖,顯示了患有CKD并根據(jù)基線時(shí)MR-proADM的中位數(shù) (0. 75nmol/L)分層到兩個(gè)組中的患者的腎病發(fā)展。
[0030] 圖13 :使用MR-proADM的最適截止值的Kaplan Meier曲線:靈敏度=0? 766,特異 性=0? 809,對(duì)數(shù)排序:p =〈0? 001。
[0031] 圖14 :使用MR-proANP的最適截止值的Kaplan Meier曲線:靈敏度(0? 891),特異 性=0? 582,對(duì)數(shù)排序:p =〈0? 001。

【具體實(shí)施方式】
[0032] 在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,本發(fā)明涉及用于預(yù)測(cè)初次慢性腎臟疾?。–KD)的發(fā)展的 方法,所述方法包含下列步驟:
[0033] (a)提供來自患有初次慢性腎臟疾病的患者的樣品,
[0034] (b)測(cè)定ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平,
[0035] (c)將ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與初次慢性腎 臟疾病的發(fā)展的預(yù)測(cè)相關(guān)聯(lián)。
[0036] 在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,本發(fā)明涉及用于監(jiān)測(cè)慢性腎臟疾病療法的方法,所述 方法包含下列步驟:
[0037] (a)提供來自患有初次慢性腎臟疾病的患者的樣品,
[0038] (b)測(cè)定ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平,
[0039] (c)將ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與初次慢性腎 臟疾病的發(fā)展的預(yù)測(cè)相關(guān)聯(lián)。
[0040] 最優(yōu)選實(shí)施方案是如上所述用于預(yù)測(cè)初次腎臟疾病的發(fā)展的方法。這是最有價(jià)值 的實(shí)施方案。這種用于預(yù)測(cè)的方法可以隨著本文后面概述的所有具體實(shí)施方案而變。方法 允許將患有進(jìn)行性慢性腎臟疾病的患者與患有非進(jìn)行性慢性腎臟疾病的患者區(qū)分開。本文 中的進(jìn)行性CKD是指發(fā)展和可能發(fā)展到血清肌酸酐加倍和末期腎?。‥SRD)的CKD。因此, 在方法的優(yōu)選實(shí)施方案中,患者被分類成發(fā)展者或非發(fā)展者。因此,發(fā)展者是其CKD最終將 發(fā)展成末期腎?。‥SRD)的患者。在一個(gè)實(shí)施方案中,這意味著發(fā)展者被定義為發(fā)展到血漿 肌酸酐加倍而優(yōu)選不達(dá)到ESRD的終點(diǎn)的患者。ESRD是非補(bǔ)償性腎病。這意味著腎損傷不 再可逆轉(zhuǎn),并且需要透析或移植。
[0041] 這意味著用于預(yù)測(cè)初次CKD的發(fā)展和/或用于監(jiān)測(cè)慢性腎臟疾病的方法的優(yōu)選患 者亞組只包含不處于ESRD的患者。
[0042] 在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中,發(fā)展者被定義為發(fā)展到需要更換腎臟的終點(diǎn)ESRD 的患者。因此,發(fā)展被定義為疾病從輕度至中度腎臟疾病朝向上面提到的終點(diǎn)之一的過程, 所述終點(diǎn)是血漿肌酸酐加倍而優(yōu)選不達(dá)到ESRD或達(dá)到需要更換腎臟的ESRD。本發(fā)明的方 法特別適用于具有輕度至中度腎臟疾病的患者。具有輕度至中度腎臟疾病的患者被定義為 在被分析物測(cè)量之前具有至少3個(gè)月的穩(wěn)定腎功能的患者。在優(yōu)選實(shí)施方案中,具有輕度 至中度腎臟疾病的患者不需要血液透析。
[0043] 在優(yōu)選實(shí)施方案中,本發(fā)明的方法用于預(yù)測(cè)慢性腎臟疾病的發(fā)展或監(jiān)測(cè)慢性腎臟 疾病,但是不預(yù)測(cè)死亡風(fēng)險(xiǎn)。因此,根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案,死亡不是被用作將患者分 類成發(fā)展者或非發(fā)展者的終點(diǎn)。然而,對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員來說,顯然發(fā)展者與非發(fā) 展者相比具有增加的死亡風(fēng)險(xiǎn)。
[0044] 在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,本發(fā)明涉及用于為患有輕度至中度腎臟疾病的患者預(yù)測(cè) 初次慢性腎臟疾?。–KD)的發(fā)展或監(jiān)測(cè)慢性腎臟疾病療法的方法,所述方法包含下列步 驟:
[0045] (a)提供來自患有初次慢性腎臟疾病、具有輕度至中度腎臟疾病的患者的樣品,
[0046] (b)測(cè)定ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平,
[0047] (c)將ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與初次慢性腎 臟疾病的發(fā)展的預(yù)測(cè)相關(guān)聯(lián)。
[0048] 在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,本發(fā)明涉及用于為患有輕度至中度腎臟疾病的患者預(yù)測(cè) 初次慢性腎臟疾?。–KD)的發(fā)展或監(jiān)測(cè)慢性腎臟疾病療法的方法,所述方法包含下列步 驟:
[0049] (a)提供來自患有初次慢性腎臟疾病、具有輕度至中度腎臟疾病的患者的樣品,
[0050] (b)測(cè)定ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平,
[0051] (c)將ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與初次慢性腎 臟疾病的發(fā)展的預(yù)測(cè)相關(guān)聯(lián),不將死亡的預(yù)測(cè)考慮在內(nèi)。
[0052] 這意味著初次慢性腎臟疾病的進(jìn)展,其中進(jìn)展意味著腎功能惡化。腎功能惡化的 度量是基線血清肌酸酐的增加、即至少倍增,和/或需要換腎療法的ESRD。
[0053] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,測(cè)定ANP或其片段或其前體或所述前體的片段 的水平,并將其用作單一標(biāo)志物。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,測(cè)定ADM或其片段或 其前體或所述前體的片段的水平,并將其用作單一標(biāo)志物。
[0054] 優(yōu)選情況下,ANP或其片段或其前體或所述前體的片段選自NT-proANP、 MR-proANP和成熟ANP或其片段。片段可以具有優(yōu)選至少12個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度。
[0055] 優(yōu)選情況下,ADM或其片段或其前體或所述前體的片段選自成熟ADM、MR-proADM、 PAMP和CT-proADM或其片段。片段可以具有優(yōu)選至少12個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度。
[0056] 在本發(fā)明的特別優(yōu)選實(shí)施方案中,初次慢性腎臟疾病的發(fā)展的預(yù)測(cè),可以通過附 加地測(cè)定并使用至少一種其他實(shí)驗(yàn)室參數(shù)或其他標(biāo)志物的水平來改進(jìn),所述其他實(shí)驗(yàn)室參 數(shù)或其他標(biāo)志物選自:肌酸酐、GFR( "腎小球?yàn)V過率";GFR可以通過例如測(cè)量碘海醇清除率 來測(cè)定(Bostom 等,J Am Soc N印hrol 2002 ;13:2140-2144))、蛋白尿、白蛋白、CRP、半胱 氨酸蛋白酶抑制劑C、GDF15、ST2、NGAL、降鈣素原及其片段、BNP或其片段或其前體或所述 前體的片段特別是ProBNP或NT-proBNP、血管加壓素原及其包括和肽素、血管加壓素和后 葉激素運(yùn)載蛋白II的片段、內(nèi)皮素原-1及其包括CT-pr 〇ET-l、NT-pr〇ET-l、大內(nèi)皮素-1和 內(nèi)皮素_1的片段。
[0057] 此外,優(yōu)選情況下,附加地測(cè)定選自下列的至少一個(gè)臨床參數(shù):年齡、性別、收縮 壓、舒張壓、體重指數(shù)、當(dāng)前吸煙嗜好、抗高血壓治療。
[0058] 本發(fā)明還涉及用于預(yù)測(cè)初次慢性腎臟疾病的發(fā)展或用于監(jiān)測(cè)慢性腎臟疾病療法 的方法,其中ANP和/或ADM或其前體或片段的水平單獨(dú)地或與其他預(yù)后有用的實(shí)驗(yàn)室或 臨床參數(shù)聯(lián)合,通過可以選自下列可選方案的方法用于預(yù)測(cè)初次慢性腎臟疾病的發(fā)展:
[0059] -與初次慢性腎臟疾病患者群體中全部預(yù)定樣品中的ANP和/或ADM或其前體或 其片段的水平的中位數(shù)進(jìn)行比較,
[0060] -與初次慢性腎臟疾病患者群體中全部預(yù)定樣品中的ANP和/或ADM或其前體或 其片段的水平的分位數(shù)進(jìn)行比較,
[0061] -根據(jù)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析或使用風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)計(jì)算例如NRJ(凈重新分類指數(shù))或 IDI (綜合鑒別指數(shù))進(jìn)行計(jì)算。
[0062] 在具體實(shí)施方案中,使用診斷測(cè)定方法測(cè)量MR-proADM的水平,所述測(cè)定方法包 含一個(gè)或多個(gè)針對(duì)位于Pre-proADM的第45-92位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)表位的捕獲探針。
[0063] 另一方面,本發(fā)明還涉及使用ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片 段,用于在患有初次慢性腎臟疾病的患者中預(yù)測(cè)腎臟終點(diǎn)(renal endpoints)。
[0064] 此外,本發(fā)明涉及使用ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片段,用于 預(yù)測(cè)初次慢性腎臟疾病的發(fā)展。
[0065] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,患有初次慢性腎臟疾病的患者未患糖尿病。因此,在 本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中,慢性腎臟疾病是非糖尿病性慢性腎臟疾病。
[0066] 在本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括使用ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片 段,用于將患有初次慢性腎臟疾病的患者分類成發(fā)展者或非發(fā)展者。
[0067] 具體來說,ANP和/或ADM或其片段或其前體或所述前體的片段被用作不依賴于 GFR的預(yù)測(cè)物和分類標(biāo)志物。
[0068] 本發(fā)明還涉及使用本發(fā)明的任一種方法,用于在患有初次慢性腎臟疾病的患者中 監(jiān)測(cè)慢性腎臟疾病療法的成功。在這種情形中,本發(fā)明的方法可以在療法開始后實(shí)施一次 或多次,并且結(jié)果可以互相或與療法開始前的結(jié)果進(jìn)行比較,以便評(píng)估療法的成功。
[0069] 本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括使用本發(fā)明的任一種方法,用于監(jiān)測(cè)腎功能。
[0070] 在一個(gè)實(shí)施方案中,使用具有低于0. 3nmol/L和/或低于初次慢性腎臟疾病患者 群體的中位數(shù)的檢測(cè)極限,以及在正常范圍內(nèi)〈30% CV的測(cè)定間精確度的MR-proADM測(cè)定 方法,用于預(yù)測(cè)初次慢性腎臟疾病的發(fā)展。
[0071] 在另一個(gè)實(shí)施方案中,使用具有低于20pmoI/L和/或低于初次慢性腎臟疾病患者 群體的中位數(shù)的檢測(cè)極限,以及在正常范圍內(nèi)〈30% CV的測(cè)定間精確度的MR-proADM測(cè)定 方法,用于預(yù)測(cè)初次慢性腎臟疾病的發(fā)展。
[0072] 本發(fā)明還涉及使用針對(duì)ANP或其片段或其前體或所述前體的片段和/或ADM或其 片段或其前體或所述前體的片段的捕獲探針,用于預(yù)測(cè)初次慢性腎臟疾病的發(fā)展。在ADM 的情形中,優(yōu)選情況下,所述捕獲探針針對(duì)位于pre-proADM的第45-92位氨基酸中的一個(gè) 或多個(gè)表位。在ANP的情形中,優(yōu)選情況下,所述捕獲探針針對(duì)位于proANP的第53-90位 氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)表位。
[0073] -般來說,本文中所定義的肽和前體肽的片段,涉及其長(zhǎng)度為至少12個(gè)氨基酸的 片段。片段優(yōu)選為肽的可免疫檢測(cè)的片段。
[0074] 在本發(fā)明的上下文中,術(shù)語"腎上腺髓質(zhì)素原"(proADM)和術(shù)語"腎上腺髓質(zhì)素原 或其片段"是指ProADM的完整分子或其包括但不限于ADM、PAMP和MR-proADM的至少12個(gè) 氨基酸的片段。在優(yōu)選實(shí)施方案中,ProADM是指proADM的完整分子或其除了成熟ADM之 外的至少12個(gè)氨基酸的片段。在其他優(yōu)選實(shí)施方案中,proADM是指proADM的完整分子或 其除了成熟ADM或成熟ADM的片段之外的至少12個(gè)氨基酸的片段。因此,在本發(fā)明的一個(gè) 具體實(shí)施方案中,"測(cè)定proADM或其片段的水平"是指測(cè)定proADM或其片段的水平,其中成 熟ADM和/或成熟ADM的片段的水平不測(cè)定。
[0075] 腎上腺髓質(zhì)素的前體肽(前腎上腺髓質(zhì)素原)的氨基酸序列在圖1中給出(SEQ ID NO: 1)。腎上腺髓質(zhì)素原是指前腎上腺髓質(zhì)素原序列的22到185位氨基酸殘基。腎上 腺髓質(zhì)素原(pro-ADM)的氨基酸序列在圖2中給出(SEQ ID N0:2)。pro-ADM的N端20肽 (PAMP)是指pre-proADM的第22-41位氨基酸殘基。PAMP的氨基酸序列在圖3中給出(SEQ ID NO. 3)。MR-腎上腺髓質(zhì)素原(MR-pro-ADM)涉及pre-pro-ADM的第45-92位氨基酸殘 基。MR-pro-ADM的氨基酸序列提供在圖4中(SEQ ID N0:4)。成熟腎上腺髓質(zhì)素(ADM)的 氨基酸序列在圖5中給出(SEQ ID NO:5)。
[0076] ANP的氨基酸序列在圖8中給出(SEQ ID N0:8)。153個(gè)氨基酸的pre-proANP的 序列顯示在圖6中(SEQ ID NO:6)。在切開N-端信號(hào)肽(25個(gè)氨基酸)和兩個(gè)C-端氨基 酸(127/128)后,釋放出proANP(圖7, SEQ ID N0:7)。ANP包含來自前體激素原pro-ANP 的C-端的99-126位氨基酸殘基。該激素原被切割成28個(gè)氨基酸的ANP成熟肽,也稱為 八即(1-28)或〇-4即,以及氨基端片段4即(1-98)(階'11'(^即,圖9,5£0 10勵(lì):9)。中段 proANP (MR-proANP)被定義為NT-proANP或其包含proANP的至少第53_90位氛基酸殘基 (圖10中的SEQ ID NO: 10)的任何片段。
[0077] 在本文中,當(dāng)在蛋白或肽的上下文中提到時(shí),術(shù)語"片段"是指可以從較大蛋白或 肽得到的較小蛋白或肽,因此其包含較大蛋白或肽的部分序列。所述片段可以從較大蛋白 或肽通過其一個(gè)或多個(gè)肽鍵的皂化作用而產(chǎn)生。
[0078] 在本發(fā)明的文本中,在表述例如"蛋白酶水平"、"被分析物水平"和類似的表述中, 術(shù)語"水平"是指在相應(yīng)上下文中提到的分子實(shí)體的量,或在酶的情況下它也可以是指酶活 性。
[0079] 在本發(fā)明的方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,測(cè)定腎上腺髓質(zhì)素原或其片段和/或 proANP或其片段的所述水平,并將其用作單一標(biāo)志物。
[0080] 在本發(fā)明的特別優(yōu)選實(shí)施方案中,初次慢性腎臟疾病的發(fā)展的預(yù)測(cè),可以通過附 加地測(cè)定和使用至少一種其他實(shí)驗(yàn)室參數(shù)來改進(jìn),所述實(shí)驗(yàn)室參數(shù)選自:肌酸酐、GFR( "腎 小球?yàn)V過率";GFR可以通過例如測(cè)量碘海醇清除率來測(cè)定(Bostom等,J Am Soc Nephrol 2002 ;13:2140-2144))、蛋白尿、白蛋白、CRP、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C、⑶F15、ST2、NGAL、 降鈣素原及其片段、BNP或其片段或其前體或所述前體的片段特別是proBNP或NT-proBNP、 血管加壓素原及其包括和肽素、血管加壓素和后葉激素運(yùn)載蛋白II、內(nèi)皮素原-1及其片段 包括CT-pr 〇ET-l、NT-pr〇ET-l、大內(nèi)皮素-1和內(nèi)皮素-1的片段。
[0081] 術(shù)語"附加地測(cè)定"不暗示、盡管也不排除這些測(cè)定在技術(shù)上組合。術(shù)語"附加地 使用"被定義為參數(shù)--它可以是實(shí)驗(yàn)室和/或臨床參數(shù)--的任何類型的數(shù)學(xué)組合,其 產(chǎn)生了初次慢性腎臟疾病的發(fā)展的預(yù)測(cè)。這種數(shù)學(xué)組合的一個(gè)實(shí)例是Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析, 從其可以推導(dǎo)出患有初級(jí)慢性腎臟疾病的對(duì)象的疾病發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn),但是也可以使用其他方 法。
[0082] 本發(fā)明還包括將個(gè)體的標(biāo)志物水平與預(yù)定值進(jìn)行比較。預(yù)定值可以采取各種形 式。它可以是單一截止值:這可以是例如參比群體的中位數(shù)或平均值或75th、90th、95 th* 99th百分位數(shù)。這也可以是例如"最適"截止值。給定標(biāo)志物的最適截止值是對(duì)于該標(biāo)志 物來說診斷靈敏度和特異性的積最大時(shí)的值。診斷靈敏度是患有疾病或發(fā)生疾病的風(fēng)險(xiǎn) (在任何具體情況下取決于所回答的診斷或預(yù)后問題)并且也被標(biāo)志物正確識(shí)別出的患者 ("真陽性")的相對(duì)分?jǐn)?shù),診斷特異性是不患有疾病或發(fā)生疾病的風(fēng)險(xiǎn)(在任何具體情況 下取決于所回答的診斷或預(yù)后問題)并且也被標(biāo)志物正確識(shí)別出的患者("真陰性")的相 對(duì)分?jǐn)?shù)。取決于臨床或經(jīng)濟(jì)學(xué)需要,這可以通過對(duì)截止值進(jìn)行優(yōu)化以獲得最大陰性預(yù)測(cè)值 或最大陽性預(yù)測(cè)值。
[0083] 因此,人們可以根據(jù)被認(rèn)為更加合適的是以也鑒定到"假陽性"為代價(jià)而鑒定大多 數(shù)有風(fēng)險(xiǎn)對(duì)象,還是以錯(cuò)過幾個(gè)具有中等風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象為代價(jià)而主要鑒定高風(fēng)險(xiǎn)對(duì)象,來挑 選截止值。
[0084] 預(yù)定值可以根據(jù)對(duì)比組來建立,例如一個(gè)規(guī)定組中的風(fēng)險(xiǎn)為另一個(gè)規(guī)定組中風(fēng)險(xiǎn) 的兩倍。它可以是范圍,例如將測(cè)試群體等量(或不等量)地分組,例如低風(fēng)險(xiǎn)組、中風(fēng)險(xiǎn) 組和高風(fēng)險(xiǎn)組,或分成四等分,最低的四分之一是具有最低風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體,最高的四分之一是 是具有最商風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體。
[0085] 在所選的特定參比群體中,預(yù)定值可以隨著他們的嗜好、種族、遺傳等而變化。因 此,所選的預(yù)定值可以考慮個(gè)體所屬類別。本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通專業(yè)人員可以使用不超出常 規(guī)的實(shí)驗(yàn)來選擇適合的范圍和類別。
[0086] 如上討論的各種閾值水平的有效性,可以通過例如Kaplan-Meier分析(圖11-14) 看出,其中描述了對(duì)于所調(diào)查患者群體的亞組來說事件、即在本發(fā)明的情況下是腎臟疾病 的發(fā)展、的發(fā)生。這里,對(duì)于四個(gè)Kaplan-Meier分析來說,所調(diào)查的患者群體各自被分成兩 個(gè)亞組。亞組定義如下:
[0087] a)所調(diào)查的患者群體被分成MR-proANP值高于中位數(shù)水平(106pmol/L)的一個(gè)組 和MR-proANP值低于中位數(shù)水平的另一個(gè)組(圖11),
[0088] b)所調(diào)查的患者群體被分成MR-proADM值高于中位數(shù)水平(0. 75nmol/L)的一個(gè) 組和MR-proADM值低于中位數(shù)水平的另一個(gè)組(圖12),
[0089] c)所調(diào)查的患者群體被分成MR-proADM值高于最適閾值水平(0. 865nmol/L(靈敏 度為0. 766,特異性為0. 809))的一個(gè)組和MR-proADM值低于最適閾值水平的另一個(gè)組(圖 13) ,
[0090] d)所調(diào)查的患者群體被分成MR-proANP值高于最適閾值水平(84. 15pmol/L(靈敏 度為0. 891,特異性為0. 582))的一個(gè)組和MR-proANP值低于最適閾值水平的另一個(gè)組(圖 14) 。
[0091] 在本發(fā)明中鑒定到的最適閾值水平是基于所調(diào)查的特定群體,并且由于上面描述 的原因,它們?cè)谄渌杀热后w中可能不同(+/-20% )。
[0092] 在本發(fā)明的文本中,術(shù)語"閾"、"閾值"、"截止"和"截止值"同義使用。
[0093] 這些結(jié)果得到Cox回歸分析(表4)的進(jìn)一步支持,所述Cox回歸分析證實(shí)了 MR-proANP和MR-proADM兩者對(duì)于預(yù)測(cè)初次慢性腎臟疾?。–KD)的發(fā)展的效用。
[0094] 通過使用個(gè)體的MR-proADM和/或MR-proANP值和其他預(yù)后性實(shí)驗(yàn)室和臨床參 數(shù)來計(jì)算個(gè)體風(fēng)險(xiǎn)的其他數(shù)學(xué)可能性是例如NRI (凈重新分類指數(shù))或IDI (綜合鑒別指 數(shù))。指數(shù)可以按照Pencina的文獻(xiàn)來計(jì)算(Pencina MJ等:"評(píng)估新標(biāo)志物的增加預(yù)測(cè)能 力:從 ROC 曲線下面積到重新分類等"(Evaluating the added predictive ability of a new marker:from area under the ROC curve to reclassification and beyond), Stat Med. 2008 ;27:157-172)。
[0095] 在某些實(shí)施方案中,不能依靠組中的一種或多種標(biāo)志物的具體閾值來確定從對(duì)象 獲得的標(biāo)志物水平的分布情況是否指示了特定的診斷/預(yù)后。相反,本發(fā)明可以利用標(biāo)志 物組"分布情況"作為不可分割的整體進(jìn)行評(píng)估。這種標(biāo)志物組中變化的特定"指紋"組合 形式能夠有效用作特定的診斷或預(yù)后指示物。正如在本文中討論的,變化的組合形式可以 從單一樣品或組的一個(gè)或多個(gè)成員的時(shí)間變化(或組的響應(yīng)值)獲得。這里的組是指一組 標(biāo)志物。
[0096] 組的響應(yīng)值可以通過各種方法產(chǎn)生。一個(gè)實(shí)例是Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析。另一個(gè)實(shí)例 是優(yōu)化ROC曲線:這可以通過對(duì)在各種截止值下特定組的靈敏度對(duì)組的1-(特異性)的ROC 曲線作圖來獲得。
[0097] 在這些方法中,來自對(duì)象的標(biāo)志物測(cè)量值的分布情況合在一起,被認(rèn)為提供了診 斷或預(yù)后的全局概率(表示成數(shù)字分值或風(fēng)險(xiǎn)百分率)。在這樣的實(shí)施方案中,標(biāo)志物的某 些子集的增加可能足以在一個(gè)患者中指示特定診斷/預(yù)后,而標(biāo)志物的不同子集的增加可 能足以在另一個(gè)患者中指示相同或不同的診斷/預(yù)后。也可以向組中的一個(gè)或多個(gè)標(biāo)志物 施加權(quán)重因數(shù),例如,當(dāng)標(biāo)志物在鑒定特定診斷/預(yù)后中效用特別高時(shí),可以將其權(quán)重成使 得在給定水平下,它單獨(dú)即足以傳遞陽性結(jié)果的信號(hào)。同樣,權(quán)重因數(shù)也可以提供成使得任 何特定標(biāo)志物的給定水平都不足以傳遞陽性結(jié)果的信號(hào),而只有當(dāng)另一個(gè)標(biāo)志物也有助于 分析時(shí)才傳遞結(jié)果的信號(hào)。
[0098] 在某些實(shí)施方案中,標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組被選擇成表現(xiàn)出至少約70 %的靈敏 度、更優(yōu)選至少約80%的靈敏度、更優(yōu)選至少約85%的靈敏度、更優(yōu)選至少約90%的靈敏 度以及最優(yōu)選至少約95 %的靈敏度,與至少約70 %的特異性、更優(yōu)選至少約80 %的特異 性、更優(yōu)選至少約85%的特異性、更優(yōu)選至少約90%的特異性以及最優(yōu)選至少約95%的特 異性的組合。在特別優(yōu)選實(shí)施方案中,靈敏度和特異性兩者均為至少約75%、更優(yōu)選至少 約80%、更優(yōu)選至少約85%、更優(yōu)選至少約90%以及最優(yōu)選至少約95%。在這種情況下, 術(shù)語"約"是指給定測(cè)量值的+/-5 %。
[0099] 在其他實(shí)施方案中,陽性似然比、陰性似然比、機(jī)會(huì)比或風(fēng)險(xiǎn)比被用作測(cè)試的預(yù)測(cè) 風(fēng)險(xiǎn)或診斷疾病的能力的度量。在陽性似然比的情況下,值為1表示在"患病"和"對(duì)照"組 二者的對(duì)象中陽性結(jié)果可能性相等;值大于1表示在患病組中陽性結(jié)果可能性更大;值小 于1表示在對(duì)照組中陽性結(jié)果可能性更大。在陰性似然比的情況下,值為1表示在"患病" 和"對(duì)照"組二者的對(duì)象中陰性結(jié)果可能性相等;值大于1表示在測(cè)試組中陰性結(jié)果可能性 更大;值小于1表示在對(duì)照組中陰性結(jié)果可能性更大。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中,標(biāo)志物和/ 或標(biāo)志物組優(yōu)選被選擇成表現(xiàn)出至少約1. 5或1. 5以上或約0. 67或0. 67以下、更優(yōu)選至 少約2或2以上或約0. 5或0. 5以下、更優(yōu)選至少約5或5以上或約0. 2或0. 2以下、更優(yōu) 選至少約1〇或1〇以上或約〇. 1或〇. 1以下,以及最優(yōu)選至少約20或20以上或約0. 05或 0.05以下的陽性或陰性似然比。在這種情況下,術(shù)語"約"是指給定測(cè)量值的+/-5%。
[0100] 在機(jī)會(huì)比的情況下,值為1表示在"患病"和"對(duì)照"組二者的對(duì)象中陽性結(jié)果可能 性相等;值大于1表示在患病組中陽性結(jié)果可能性更大。值小于1表示在對(duì)照組中陽性結(jié) 果可能性更大。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中,標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組優(yōu)選被選擇成表現(xiàn)出至少 約2或2以上或約0. 5或0. 5以下、更優(yōu)選至少約3或3以上或約0. 33或0. 33以下、更優(yōu) 選至少約4或4以上或約0. 25或0. 25以下、更優(yōu)選至少約5或5以上或約0. 2或0. 2以 下以及最優(yōu)選至少約10或約10以上或約〇. 1或約〇. 1以下的機(jī)會(huì)比。在這種情況下,術(shù) 語"約"是指給定測(cè)量值的+/-5 %。
[0101] 在風(fēng)險(xiǎn)比的情況下,值為1表示在"患病"和"對(duì)照"組二者中終點(diǎn)(例如死亡)的 相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)是相等;值大于1表示在患病組中風(fēng)險(xiǎn)更高;值小于1表示在對(duì)照組中風(fēng)險(xiǎn)更高。 在某些優(yōu)選實(shí)施方案中,標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組優(yōu)選被選擇成表現(xiàn)出至少約1.1或1.1以 上或約0. 91或0. 91以下、更優(yōu)選至少約1. 25或1. 25以上或約0. 8或0. 8以下、更優(yōu)選至 少約1. 5或1. 5以上或約0. 67或0. 67以下、更優(yōu)選至少約2或2以上或約0. 5或0. 5以 下以及最優(yōu)選至少約2. 5或2. 5以上或約0. 4或0. 4以下的風(fēng)險(xiǎn)比。在這種情況下,術(shù)語 "約"是指給定測(cè)量值的+/-5%。
[0102] 專業(yè)技術(shù)人員將會(huì)理解,將診斷或預(yù)后指示物與診斷或與將來臨床結(jié)果的預(yù)后風(fēng) 險(xiǎn)相關(guān)聯(lián),是一種統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。例如,標(biāo)志物水平大于X可以傳遞患者與水平低于或等于X 的患者相比更可能遭受不利后果的信號(hào),正如通過統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性水平所確定的。此外,標(biāo)志 物濃度從基線水平的改變可以反映患者的預(yù)后,并且標(biāo)志物水平變化的程度可能與不利事 件的嚴(yán)重性相關(guān)。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通常通過比較兩個(gè)或多個(gè)群體并確定置信區(qū)間和/或P值 來確定。參見例如Dowdy和Wearden,《用于研究的統(tǒng)計(jì)學(xué)》(Statistics for Research), John Wiley & Sons,New York,1983。本發(fā)明的優(yōu)選置信區(qū)間是 90%、95%、97.5%、98%、 99 %、99. 5 %、99. 9 %和 99. 99 %,而優(yōu)選的 p 值是 0? 1、0. 05、0. 025、0. 02、0. 01、0. 005、 0? 001 和 0? 0001。
[0103] 在其他實(shí)施方案中,可以進(jìn)行多次診斷或預(yù)后標(biāo)志物的測(cè)定,并使用標(biāo)志物的時(shí) 間變化確定診斷或預(yù)后。例如,可以在初始時(shí)間測(cè)定對(duì)象樣品中的標(biāo)志物濃度,并在第二個(gè) 時(shí)間從第二個(gè)對(duì)象樣品再次測(cè)定。在這樣的實(shí)施方案中,從初始時(shí)間到第二個(gè)時(shí)間標(biāo)志物 的增加可以指示特定的診斷或特定的預(yù)后。同樣地,從初始時(shí)間到第二個(gè)時(shí)間標(biāo)志物的減 少可以指示特定的診斷或特定的預(yù)后。
[0104] 當(dāng)在本文中使用時(shí),術(shù)語"樣品"是指出于對(duì)目標(biāo)對(duì)象例如患者進(jìn)行診斷、預(yù)后或 評(píng)估的目的而獲得的體液樣品。優(yōu)選的測(cè)試樣品包括血液、血清、血漿、腦脊液、尿液、唾液、 痰液和胸膜腔積液。此外,本【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到,某些測(cè)試樣品在分級(jí)或純化 步驟、例如將全血分離成血清或血漿組分后,可以更容易地分析。
[0105] 因此,在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中,所述樣品選自血液樣品、血清樣品、血漿樣品 和尿液樣品,或上面提到的任何樣品的提取物。
[0106] 當(dāng)在本文中使用時(shí),術(shù)語"患者"是指由于疾病而正接受醫(yī)學(xué)護(hù)理或?qū)⒔邮茚t(yī)學(xué)護(hù) 理的活的人類或非人類生物體。這包括疾病未確定、正在接受病理征兆調(diào)查的人。因此,本 文描述的方法和測(cè)定法可應(yīng)用于人類和獸醫(yī)疾病兩者。
[0107] 當(dāng)在本文中指稱診斷和預(yù)后標(biāo)記物的用途時(shí),術(shù)語"相關(guān)聯(lián)"是指將患者中標(biāo)記物 的存在或量,與其在已知患有給定病癥或已知具有給定病癥風(fēng)險(xiǎn)的人、或已知沒有給定病 癥的人中的存在或量進(jìn)行比較。正如上面討論的,可以將患者樣品中的標(biāo)志物水平與已知 與特定預(yù)后相關(guān)的水平進(jìn)行比較。樣品的標(biāo)志物水平被說成已經(jīng)與診斷相關(guān)聯(lián);也就是說, 專業(yè)技術(shù)人員可以使用標(biāo)志物水平確定患者是否進(jìn)行特定類型的診斷,并做出相應(yīng)應(yīng)答。 可替選地,樣品的標(biāo)志物水平可以與已知與良好結(jié)果(例如不存在疾病等)相關(guān)的標(biāo)志物 水平進(jìn)行比較。在優(yōu)選實(shí)施方案中,標(biāo)志物水平的分布情況與總體概率或特定結(jié)果相關(guān)聯(lián)。
[0108] "預(yù)后"是指指派給定過程或結(jié)果將會(huì)發(fā)生的概率。這通常通過檢查一種或多種 "預(yù)后指示物"來確定。它們是標(biāo)記物,其在患者(或從患者獲得的樣品)中的存在或量 傳遞了給定過程或結(jié)果將會(huì)發(fā)生的概率的信號(hào)。例如,當(dāng)在從這些患者獲得的樣品中一種 或多種預(yù)后指示物達(dá)到足夠高的水平時(shí),所述水平可以傳遞患者具有最終發(fā)展到末期腎病 (ESRD)的增加的概率,即患者具有成為"發(fā)展者"的增加的概率的信號(hào)。
[0109] 在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中,測(cè)量MR-proADM的水平。MR-proADM包含pre-proADM 的第45-92位氨基酸。
[0110] 在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,使用診斷測(cè)定法測(cè)量ProADM或其片段的水 平,所述診斷測(cè)定法使用了一種或多種針對(duì)位于pre-proADM的第45-92位氨基酸中的一個(gè) 或多個(gè)表位的捕獲探針。
[0111] 在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,測(cè)量MR-proANP水平。MR-proANP是指包含 proANP的第53-90位氨基酸的任何proANP片段。
[0112] 在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,使用診斷測(cè)定法測(cè)量proANP或其片段的水 平,所述診斷測(cè)定法使用了 一種或多種針對(duì)位于proANP的第53-90位氨基酸中的一個(gè)或多 個(gè)表位的捕獲探針。
[0113] 當(dāng)在本文中提到時(shí),"測(cè)定方法"或"診斷測(cè)定方法"可以是在診斷學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用的 任何類型的測(cè)定方法。這樣的測(cè)定方法可以基于待檢測(cè)被分析物與具有一定親和性的一種 或多種捕獲探針的結(jié)合。對(duì)于捕獲分子與目標(biāo)靶分子之間的相互作用來說,親和常數(shù)優(yōu)選 大于IO 8M'
[0114] 上面提到的標(biāo)志物的水平可以通過本【技術(shù)領(lǐng)域】任何公知的方法來獲得。典型情況 下,水平通過測(cè)量體液例如血液、淋巴、唾液、尿液等中的標(biāo)志物水平或活性來測(cè)定。水平可 以通過免疫測(cè)定法或用于測(cè)定標(biāo)志物水平的其他常規(guī)技術(shù)來測(cè)定。公認(rèn)的方法包括將患者 的體液樣品送往商業(yè)化實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行測(cè)量,但是也可以在護(hù)理現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行測(cè)量。
[0115] 在本發(fā)明的文本中,"捕獲分子"是可用于結(jié)合來自樣品的目標(biāo)靶分子、即被分析 物的分子。因此,捕獲分子必須在空間上和表面特征例如表面電荷、疏水性、親水性、路易斯 供體和/或受體是否存在等方面適當(dāng)塑造,以特異性結(jié)合目標(biāo)靶分子。因此,結(jié)合可以由例 如捕獲分子與目標(biāo)靶分子之間的離子、范德華、n、S-JI、疏水或氫鍵相互作用或兩種 以上上面提到的相互作用的組合來介導(dǎo)。在本發(fā)明的情形中,捕獲分子可以例如選自核酸 分子、糖類分子、PNA分子、蛋白質(zhì)、抗體、肽或糖蛋白。優(yōu)選情況下,捕獲分子是抗體,包括 其與目標(biāo)靶或分子具有足夠親和性的片段,并包括重組抗體或重組抗體片段,以及所述抗 體或其源自于變體鏈的長(zhǎng)度為至少12個(gè)氨基酸的片段的化學(xué)和/或生物化學(xué)修飾的衍生 物。
[0116] 優(yōu)選的檢測(cè)方法包括各種格式的免疫測(cè)定法,例如放射免疫測(cè)定法、化學(xué)發(fā)光和 突光免疫測(cè)定法、酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA)、基于Luminex的珠子陣列、蛋白質(zhì)微陣列測(cè)定 法,以及快速檢測(cè)格式例如免疫層析條樣試驗(yàn)。
[0117] 測(cè)定法可以是均相或非均相測(cè)定法、競(jìng)爭(zhēng)和非競(jìng)爭(zhēng)性夾心測(cè)定法。在特別優(yōu)選的 實(shí)施方案中,測(cè)定法采用夾心測(cè)定法形式,其是非競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定法,其中待檢測(cè)和/或定 量分子與第一抗體并與第二抗體結(jié)合。第一抗體可以結(jié)合到固相例如珠子、孔或其他容器 的表面、芯片或條上,并且第二抗體是例如用染料、放射性同位素或反應(yīng)性或催化活性組成 部分標(biāo)記的抗體。然后通過適合的方法測(cè)量與被分析物結(jié)合的標(biāo)記抗體的量。"夾心測(cè)定 法"所涉及的通用組合物和步驟是已確立的,并為專業(yè)技術(shù)人員所公知。(《免疫測(cè)定手 冊(cè)》(The Immunoassay Handbook) ,David Wild 主編,Elsevier LTD, Oxford;第三版(2005 年 5 月),ISBN-13:978-0080445267 ;Hultschig C 等,Curr Opin Chem Biol.2006Feb ; 10(1) :4-10. PMID: 16376134),在此引為參考。
[0118] 在特別優(yōu)選實(shí)施方案中,測(cè)定方法包含兩種捕獲分子,優(yōu)選為都作為分散相存在 于液體反應(yīng)混合物中的抗體,其中第一種標(biāo)記組分附著在第一種捕獲分子上,其中所述第 一種標(biāo)記組分是基于熒光或化學(xué)發(fā)光淬滅或擴(kuò)增的標(biāo)記系統(tǒng)的一部分,并且所述標(biāo)記系統(tǒng) 的第二種標(biāo)記組分附著于第二種捕獲分子上,使得當(dāng)兩種捕獲分子與被分析物結(jié)合后產(chǎn)生 可測(cè)量信號(hào),允許檢測(cè)在包含樣品的溶液中形成的夾心復(fù)合物。
[0119] 在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中,測(cè)定法包含兩種捕獲分子,優(yōu)選為都作為分散體系存 在于液體反應(yīng)混合物中,其中第一標(biāo)記組分與第一捕獲分子結(jié)合,其中所述第一標(biāo)記組分 是基于熒光或化學(xué)發(fā)光-淬滅或擴(kuò)增的標(biāo)記系統(tǒng)的一部分,所述標(biāo)記系統(tǒng)的第二標(biāo)記組分 與第二捕獲分子結(jié)合,使得當(dāng)兩種捕獲分子與被分析物結(jié)合后產(chǎn)生可測(cè)量信號(hào),允許檢測(cè) 包含樣品的溶液中形成的夾心復(fù)合物。
[0120] 在更優(yōu)選情況下,所述標(biāo)記系統(tǒng)包含稀土穴狀化合物或稀土螯合物與熒光染料或 化學(xué)發(fā)光染料、特別是花青類型的染料的組合。
[0121] 在本發(fā)明的情形中,基于熒光的測(cè)定方法包含使用染料,所述染料可以例如選自 FAM(5-或6-羧基熒光素)、VIC、NED、熒光素、熒光素異硫氰酸酯(FITC)、IRD-700/800、花青 染料例如〇¥3、〇¥5、〇¥3.5、〇丫5.5、〇 77、占噸、6-羧基-2',4',7',4,7-六氯熒光素(冊(cè)父)、 TET、6-羧基-4',5-二氯-2',7'-二甲氧基熒光素(JOE)、N,N,N',N' -四甲基-6-羧基羅丹 明〇^11狀)、6-羧基1-羅丹明〇?(?)、5-羧基羅丹明-66〇?665)、6-羧基羅丹明-66〇?6)、 羅丹明、羅丹明綠、羅丹明紅、羅丹明110、BODIPY染料例如BODIPY TMR、俄勒岡綠、香豆素 類例如傘形酮、苯并亞胺類例如Hoechst 33258 ;菲陡類例如德克薩斯紅、雅吉瓦黃、Alexa Fluor、PET、溴化乙錠、吖啶類染料、咔唑染料、吩噁嗪染料、嚇啉染料、聚甲炔染料等。
[0122] 在本發(fā)明的情形中,基于化學(xué)發(fā)光的測(cè)定方法包含根據(jù)化學(xué)發(fā)光材料的物理原 理使用染料,所述原理描述在Kirk-Othmer的《化學(xué)技術(shù)百科全書》(Encyclopedia of chemical technology)第四版,J. I. Kroschwitz執(zhí)行主編,M. Howe-Grant編輯,John Wiley & Sons, 1993, vol. 15, p. 518-562中,在此引為參考,包括在551-562頁中的引用文獻(xiàn)。優(yōu)選 的化學(xué)發(fā)光染料是吖啶酯。
[0123] 在特別優(yōu)選實(shí)施方案中,使用具有低于0.3nmol/L的檢測(cè)極限以及在正常范圍內(nèi) 〈30% CV的測(cè)定間精確度的MR-proADM測(cè)定方法,在對(duì)象中預(yù)測(cè)初次不利事件或鑒定具有 發(fā)生初次不利事件的高風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象。
[0124] 本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是使用捕獲探針、例如針對(duì)proADM或其片段的抗體,在 對(duì)象中預(yù)測(cè)初次不利事件或鑒定具有發(fā)生初次不利事件的高風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象。
[0125] 在本發(fā)明的情形中,特別優(yōu)選的是使用針對(duì)包含在Pre-proADM的45-92氨基酸位 置中的表位和/或針對(duì)包含在proANP的53-90氨基酸位置中的表位的一種或多種抗體。
[0126] 實(shí)施例
[0127] 實(shí)施例1 :輕度至中度腎腫疾?。∕MKD)研究
[0128] 本研究的目的是在患有初次CKD的患者組群的前瞻性7年隨訪研究中,使用覆蓋 更穩(wěn)定的激素原片段(MR-proANP和MR-proADM)的中段表位的新的夾心免疫測(cè)定法,研究 ANP和ADM對(duì)腎臟疾病進(jìn)展的預(yù)測(cè)價(jià)值。
[0129] 結(jié)果
[0130] 表1顯示了按照K/D0QI的慢性腎臟疾病臨床實(shí)踐準(zhǔn)則使用基線GFR分層的等 級(jí)中 NT-proBNP、MR-proANP 和 MR-proADM 的血漿濃度??邕^ CKD 等級(jí),存在 NT-proBNP、 MR-proANP和MR-proADM血漿濃度中位數(shù)的連續(xù)增加。此外,非參數(shù)關(guān)聯(lián)性分析顯示出GFR 與所有三種參數(shù)之間的顯著關(guān)聯(lián)性(表2)。
[0131] 227位登記患者中的177位隨訪數(shù)據(jù)可用。在基線研究完成后隨訪持續(xù)時(shí)間的中 位數(shù)為53個(gè)月(范圍為3至84個(gè)月)。在隨訪期間,65位患者發(fā)展到終點(diǎn),所述終點(diǎn)在 36位患者中是血清肌酸酐加倍并且未達(dá)到ESRD,在29位患者中是需要換腎治療的ESRD。 表3報(bào)告了發(fā)展者和非發(fā)展者的基線CKD患者特征。達(dá)到發(fā)展終點(diǎn)的患者年齡較大、具有 較高的蛋白質(zhì)排泄率以及較低的GFR。此外,在發(fā)展者中與非發(fā)展者中相比,NT-proBNP、 MR-proANP 和 MR-proADM 的血漿濃度中位數(shù)較高(NT-proBNP,321 比 84ng/L ;MR-proANP, 164 比 74pmol/L ;以及 MR-proADM,I. 13 比 0? 55nmol/L)。
[0132] 圖11到12顯示了根據(jù)基線時(shí)MR-proANP和MR-proADM的中位數(shù)分層到兩個(gè)組 中的177位CKD患者的Kaplan-Meier曲線分析。GFR值低于中位數(shù)并且MR-proANP和 MR-proADM血漿濃度高于中位數(shù)的患者,與GFR值高于中位數(shù)并且MR-proANP和MR-proADM 血漿濃度低于中位數(shù)的患者相比,具有更糟的腎臟預(yù)后和明顯更短的發(fā)展時(shí)間[以月計(jì) 的發(fā)展平均時(shí)間,分別為對(duì)于MR-proANP來說51. 1(95% Cl 45. 2-57. 1)比71. 4(95% Cl 64. 7-78. I),p〈0. 001 ;對(duì)于 MRproADM 來說 51. 6 (95 % CI45. 6-57. 6)比 73. 6 (95 % Cl 68. 5-78. 6),p〈0. 001]。使用根據(jù)中位數(shù)值對(duì)預(yù)測(cè)變量進(jìn)行分層方法的單變量Cox比 例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析,顯示出對(duì)于高于中位數(shù)的GFR來說顯著降低的風(fēng)險(xiǎn)比(HR) (HR 0. 12 ; 95% CIO. 06-0. 24 ;p〈0. 001),以及對(duì)于基線時(shí)高于中位數(shù)的 NT-proBNP(HR3. 84 ;95% Cl 2. 14-6. 89 ;p〈0. 001)、MR-proANP (HR 4. 47 ;95 % CI2. 46-8. 12 ;p〈0. 001)和 MR-proADM (HR 5. 84 ;95% Cl 3. 04-11. 21 ;p〈0. 001)濃度來說顯著增加的 HR。
[0133] 使用預(yù)測(cè)變量的增量方法的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析的結(jié)果在表4中給出。在對(duì)年 齡和性別進(jìn)行調(diào)整的模型1中,GFR、蛋白尿、NT-proBNP、MR-proANP和MR-proADM對(duì)腎臟疾 病的發(fā)展顯示出明顯的HR。在對(duì)GRF和蛋白尿進(jìn)一步調(diào)整后,對(duì)于MR-proANP和MR-proADM 來說HR略微減弱,但是兩種變量仍保持與疾病發(fā)展的強(qiáng)烈關(guān)聯(lián),而對(duì)于NT-proBNP來說HR 不再顯著(模型2)。甚至在對(duì)NT-proBNP進(jìn)一步調(diào)整后,MR-proANP和MR-proADM仍各自 保留為腎臟疾病進(jìn)展的有力預(yù)測(cè)物(模型3)。因?yàn)閹讉€(gè)所調(diào)查的變量都是非正態(tài)分布的, 因此我們通過將對(duì)數(shù)變換的變量包含在模型中,進(jìn)行了靈敏度分析。這些分析顯示出非常 相似的結(jié)果(數(shù)據(jù)未顯示),例外的是NT-proBNP,其在對(duì)年齡、性別、GFR和蛋白尿進(jìn)行調(diào) 整后仍然顯著(HR 1. 59 ;95% CIL 15-2. 19 ;p = 0. 005)。然而,為了估算值的更好的可判 讀性,我們以原始的標(biāo)度呈現(xiàn)數(shù)據(jù)。
[0134] 我們還通過將MR-proANP和MR-proADM兩個(gè)變量包含在同樣的Cox回歸模型中并 對(duì)年齡、性別、DFR和蛋白尿進(jìn)行調(diào)整,研究了 MR-proANP和MR-proADM兩者是否獨(dú)立地增加 CKD發(fā)展的預(yù)測(cè)。兩個(gè)變量的風(fēng)險(xiǎn)比都降低(與表4的模型2中的估算相比),但是仍保持 顯著(對(duì)于 MR-proANP 來說 HR 1.60 ;95% Cl 1. 11-2.30, p = 0.011 ;對(duì)于 MR-proADM 來 說 HR 1. 96 ;95% Cl 1. 31-2. 94, p〈0. 001)。
[0135] 在二級(jí)分析中,我們只包含了根據(jù)K/D0QI的慢性腎臟疾病臨床實(shí)踐準(zhǔn)則處于3期 及以上的患者(GFR〈60ml/min/l. 73m2)。我們對(duì)于整個(gè)組來說觀察到與表4的模型2和3 所呈現(xiàn)的非常相似的估算值(數(shù)據(jù)未顯示)。
[0136] 討論
[0137] 本研究是調(diào)查MR-proANP和MR-proADM對(duì)患有初次CKD的白人患者的腎病發(fā)展的 預(yù)后價(jià)值的首個(gè)遠(yuǎn)景長(zhǎng)期觀察。我們的數(shù)據(jù)表明,基線時(shí)增加的MR-proANP和MR-proADM 血漿濃度是腎臟終點(diǎn)的強(qiáng)有力的預(yù)測(cè)物,即使在獨(dú)立于GFR的情況下。
[0138] 通過在許多實(shí)驗(yàn)室采納K/D0QI的推薦方案并日常報(bào)告GFR估算值,在未診斷CKD 的篩查中獲得了顯著成功(國家腎臟基金會(huì)(National Kidney Foundation) ,Am J Kidney Dis 2002 ;39(2Suppl I) :S1_266;疾病控制和預(yù)防中心(Centers for Disease Control and Prevention) (CDC),Morb Mortal Wkly Rep 2007 ;56:161-165)。但是,對(duì)于進(jìn)一步風(fēng) 險(xiǎn)分層并鑒定其他風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)因子以對(duì)患有CKD、最可能發(fā)展到ESRD的患者進(jìn)行定向干預(yù), 存在著緊迫需求。
[0139] 我們的研究的重要發(fā)現(xiàn)是下述事實(shí),S卩MR-proANP和MR-proADM與通過碘海醇測(cè) 量的GFR強(qiáng)烈相關(guān),碘海醇測(cè)量已被報(bào)道接近于測(cè)量腎功能的黃金標(biāo)準(zhǔn)(Bostom等,J Am Soc N印hrol 2002 ; 13:2140-2144)。我們發(fā)現(xiàn),在跨 GFR 等級(jí)間 MR-proANP 和 MR-proADM 的血漿濃度連續(xù)增加,表明了與疾病嚴(yán)重性的關(guān)聯(lián)。這種與GFR的強(qiáng)烈關(guān)聯(lián)性可能可歸 因于下述證據(jù),即ANP和ADM都在腎臟中產(chǎn)生(Vesely等,Am J Physiol Renal Physiol 2003 ;285:167-177),并且兩者在腎臟中都具有重要的生物學(xué)功能(Vesely等,Cardiovasc Res 2001;51:647-658 ;Nishikimi 等,Curr Med Chem 2007;14:1689-1699)。此外,已報(bào) 道兩種肽的腎臟保護(hù)性質(zhì),表明在CKD中ANP和ADM的濃度增加的代償性作用(Vesely 等,Cardiovasc Res 2001;51:647-658 ;Vesely 等,Am J Physiol Renal Physiol 2003 ; 285:167-177 ;Nishikimi 等,Curr Med Chem 2007 ;14:1689-1699)。
[0140] 在評(píng)估的背景下,MR-proANP和MR-proADM的預(yù)后價(jià)值,與腎臟疾病進(jìn)展的已確立 的預(yù)后性、但難以測(cè)定的標(biāo)志物GFR的價(jià)值相當(dāng)。在對(duì)年齡和性別進(jìn)行調(diào)整的Cox比例風(fēng)險(xiǎn) 回歸模型中,GFR、MR-proANP和MR-proADM的行為類似。但是,重要的是注意到除了 GFR之 夕卜,MR-proANP和MR-proADM兩者都顯著增加了疾病發(fā)展的預(yù)測(cè)。兩種參數(shù)中的每種增加一 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差,伴有疾病發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)增加兩倍以上,即使是在對(duì)基線GFR進(jìn)行調(diào)整之后。盡管 如此,我們向模型同時(shí)添加兩種參數(shù),獲得了兩種參數(shù)對(duì)風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的顯著并且獨(dú)立的貢獻(xiàn)。
[0141] NT-proBNP 的預(yù)后能力與 GFR、MR-proANP 或 MR-proADM 相比較低。
[0142] 重要的是注意到在我們的研究中,GFR不是通過公式計(jì)算,而是通過碘海醇清除率 來測(cè)量,其被認(rèn)為是測(cè)量腎臟功能的精確方法。但是,由于使用造影介質(zhì)并收集幾個(gè)血樣, 這種方法是繁瑣的,并且對(duì)于患者來說是一種負(fù)擔(dān)。測(cè)量MR-proANP或MR-proADM是替代 的簡(jiǎn)單方法,其提供了腎功能的良好近似,并為腎臟疾病的發(fā)展提供了性能良好的預(yù)測(cè)物, 其性能與GFR相等。
[0143] 總的來說,我們的工作證明了基線時(shí)MR-proANP和MR-proADM的增加的血漿濃度, 是腎臟疾病發(fā)展的強(qiáng)有力預(yù)測(cè)物。因此,兩種標(biāo)志物都可以在臨床上用作初次CKD患者中 的預(yù)測(cè)物。
[0144] 簡(jiǎn)要方法
[0145] 研究樣品:
[0146] 在基線時(shí),227位年齡在18至65歲之間、具有CKD和各種程度的腎損傷的白人患 者,在輕度至中度腎臟疾病(MMKD)研究中登記。這些患者從8個(gè)腎病科召集,如Kronenberg 等中所述(J Am Soc Nephrol2000;ll:105-115)。該研究得到學(xué)術(shù)論理委員會(huì)的批準(zhǔn),并且 所有對(duì)象提供了書面知情同意書。在進(jìn)入本研究之前,他們至少3個(gè)月具有穩(wěn)定的腎功能。 排除標(biāo)準(zhǔn)是用免疫抑制劑、魚油或紅細(xì)胞生成素治療、血清肌酸酐高于6mg/dL、任何類型的 糖尿病、惡性腫瘤、肝病、甲狀腺病或傳染病、腎病綜合征(定義為蛋白尿>3. 5g/l. 73m2/ 天)、器官移植、對(duì)離子造影介質(zhì)過敏和妊娠。為了避免觀察者之間的差異,所有患者由一位 醫(yī)生召集,他訪問了所有參加的中心?;€時(shí)的患者病史、包括吸煙嗜好和抗高血壓治療, 通過會(huì)談?dòng)涗洸⑼ㄟ^檢查患者的記錄來證實(shí)。此外補(bǔ)充了臨床檢查,包括體重指數(shù)和血壓 的評(píng)估。高血壓被定義為血壓高于140/90mm Hg和/或使用抗高血壓藥物。在研究登記的 當(dāng)天保持使用抗高血壓藥物,以便最小化對(duì)GFR測(cè)量的干擾。179位患者服用抗高血壓藥 物(79% ):利尿藥(n = 83 ;37% )、ACE抑制劑(n = 123 ;54% )、鈣通道阻斷劑(n = 78 ; 34% )、P -受體阻斷劑(n = 67 ;30% )以及a -1受體阻斷劑(n = 36 ;16% )。
[0147] 腎臟疾病的主要病因,在97位(在90位中活檢證實(shí))患者中是腎小球腎炎,在37 位患者中是成年人多囊腎病,在24位患者中是間質(zhì)性腎炎,在43位患者中是其他類型的腎 臟疾病,在26位患者中未知?;颊咴诟鶕?jù)K/D0QI的慢性腎臟疾病分類臨床實(shí)踐準(zhǔn)則 2的 CKD等級(jí)中的分布,提供在表1中。
[0148] 隨訪調(diào)查的終點(diǎn)被定義為基線血清肌酸酐加倍和/或需要換腎治療的ESRD。在 227位患者的最初組群中,177位患者(78% )被遠(yuǎn)景性隨訪了最高84個(gè)月的時(shí)間(Boes 等,J Am Soc N印hrol 2006;17:528-536)?;颊咴陂T診病房的正規(guī)控制下,并且向研究協(xié) 調(diào)中心報(bào)告終點(diǎn)。在隨訪過程中丟失的患者,已經(jīng)搬家或在基線調(diào)查后沒有訪問研究中心。 與參加隨附的患者相比,這些患者在基線時(shí)具有明顯更好的腎功能,但是在性別和年齡方 面沒有顯著差異。
[0149] 牛物化學(xué)分析
[0150] 在過夜禁食至少12小時(shí)后抽取血樣。將樣品立即在4°C下以I. 500g離心10分 鐘,并將上清液以等份試樣儲(chǔ)存在_8〇°C,直到進(jìn)一步使用?;颊咧械腉FR使用碘海醇清除 率技術(shù),按照Bostom等中的詳細(xì)描述進(jìn)行評(píng)估(J Am Soc N印hrol 2002 ; 13:2140-2144)。 常規(guī)的生物化學(xué)分析包括血清肌酸酐、蛋白尿、血清白蛋白和高靈敏性C-反應(yīng)蛋白,按照 Kronenberg 等中的描述進(jìn)行(J Am Soc Nephrol 2000;11:105-115)。血楽 NT-proBNP 在 Modular Analytics E170 系統(tǒng)(Roche Diagnostics, Mannheim, Germany)上測(cè)量(Spanaus 等,Clin Chem 2007 ;53:1264-1272) oMR-proANP和MR-proADM血漿濃度通過可商購的免疫 發(fā)光測(cè)定系統(tǒng)(B.R. A. H.M.S. AG, Hennigsdorf Germany)測(cè)量。這兩種方法的精確度已在 以前評(píng)估和描述(Morgenthaler 等,Clin Chem 2004 ;50:234-236 ;Morgenthaler 等,Clin Chem 2005 ;51:1823-1829)。
[0151] 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
[0152] 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用 SPSS 第 13. 0 版(SPSS Inc.,Chicago, Illinois, USA)和 MedCalc 9. 4. 2. 0軟件包(MedCalc Software, Mariakerke, Belgium)進(jìn)行。各個(gè)組之間連續(xù)變量的 單變量比較使用單向AN0VA、不成對(duì)t-檢驗(yàn)進(jìn)行,或在非正態(tài)分布變量的情況下使用非參 數(shù)性Kruskal-Wallis或Wilcoxon秩和檢驗(yàn)來進(jìn)行。二分化變量使用Pearson的X 2-檢 驗(yàn)進(jìn)行比較。數(shù)據(jù)被呈現(xiàn)為平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)以及對(duì)于偏斜變量來說在適當(dāng)時(shí)呈現(xiàn) 為中位數(shù)和25&和75&百分位數(shù)。秩相關(guān)(rs)的Spearman系數(shù)被用于評(píng)估四種主要研 究參數(shù)(即 GFR、NT-proBNP、MR-proANP 和 MR-proADM)之間的關(guān)系。對(duì)于 GFR、NT-proBNP、 MR-proANP和MR-proADM高于和低于整個(gè)研究群體的中位數(shù)值的患者來說,產(chǎn)生了從基線 到腎臟終點(diǎn)的時(shí)間分布的Kaplan-Meier估算值;計(jì)算了對(duì)數(shù)排序檢驗(yàn)以比較組之間的存 活曲線。使用按照整個(gè)組群的中位數(shù)濃度二分的所有四種參數(shù),進(jìn)行了單變量Cox比例風(fēng) 險(xiǎn)回歸分析。此外,使用每個(gè)增量為相應(yīng)數(shù)據(jù)的1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)的增量方法,計(jì)算了發(fā) 展終點(diǎn)的調(diào)整過的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估值。所有概率是雙尾的,并且P值〈0. 05被當(dāng)做是顯著的。
[0153] 表1 :根據(jù)腎小球?yàn)V過率(GFR)分層在國家腎臟基金會(huì)(National Kidney Foundation)等級(jí)中的227位患者的基線臨床和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)
[0154]

【權(quán)利要求】
1. 用于測(cè)定ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平的試劑在制備用于通過 如下包含下列步驟的方法預(yù)測(cè)初次慢性腎臟疾病的發(fā)展或用于監(jiān)測(cè)慢性腎臟疾病療法的 制劑中的應(yīng)用: (a) 提供來自患有初次慢性腎臟疾病的患者的樣品, (b) 測(cè)定ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平, (c) 將ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與初次慢性腎臟疾病的發(fā)展的 預(yù)測(cè)相關(guān)聯(lián), 其中所述制劑不預(yù)測(cè)死亡風(fēng)險(xiǎn)。
2. 權(quán)利要求1的應(yīng)用,其中所述患者被分類為發(fā)展者或非發(fā)展者。
3. 權(quán)利要求1或2的應(yīng)用,其中測(cè)定ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平 并將其用作單一標(biāo)記物。
4. 權(quán)利要求1到3任一項(xiàng)的應(yīng)用,其中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段選自 成熟 ADM、MR-proADM、PAMP 和 CT-proADM。
5. 權(quán)利要求1到4任一項(xiàng)的應(yīng)用,其中初次慢性腎臟疾病的發(fā)展的預(yù)測(cè),通過附加地測(cè) 定并使用至少一種實(shí)驗(yàn)室參數(shù)或其他標(biāo)志物的水平來改進(jìn),所述其他標(biāo)志物選自:肌酸酐、 GFR、蛋白尿、白蛋白、CRP、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C、⑶?15、512、如八1^、降鈣素原及其片段、 BNP或其片段或其前體或所述前體的片段、血管加壓素原及其包括和肽素、血管加壓素和后 葉激素運(yùn)載蛋白II的片段、內(nèi)皮素原-1及其包括CT-pr〇ET-l、NT-pr〇ET-l、大內(nèi)皮素-1和 內(nèi)皮素_1的片段。
6. 權(quán)利要求1到5任一項(xiàng)的應(yīng)用,其中附加地測(cè)定選自下列的至少一種臨床參數(shù):年 齡、性別、收縮壓、舒張壓、抗高血壓治療、體重指數(shù)、當(dāng)前吸煙嗜好。
7. 前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的應(yīng)用,其中ADM或其前體或片段的水平單獨(dú)地或與其他預(yù)后 有用的實(shí)驗(yàn)室或臨床參數(shù)聯(lián)合,通過可以選自下列可選方案的方法用于預(yù)測(cè)初次慢性腎臟 疾病的發(fā)展: -與初次慢性腎臟疾病患者群體中全部預(yù)定樣品中的ADM或其片段或其前體或所述前 體的片段的水平的中位數(shù)進(jìn)行比較, -與初次慢性腎臟疾病患者群體中全部預(yù)定樣品中的ADM或其片段或其前體或所述前 體的片段的水平的分位數(shù)進(jìn)行比較, -根據(jù)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析或使用風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)計(jì)算例如NRI (凈重新分類指數(shù))或IDI (綜 合鑒別指數(shù))進(jìn)行計(jì)算。
8. 前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的應(yīng)用,其中使用診斷測(cè)定方法測(cè)量MR-proADM的水平,所述 診斷測(cè)定方法包含一個(gè)或多個(gè)針對(duì)位于Pre-proADM的第45-92位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè) 表位的捕獲探針。
9. 用于測(cè)定ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平的試劑在制備用于在患 有初次慢性腎臟疾病的患者中預(yù)測(cè)腎臟終點(diǎn)的制劑中的應(yīng)用。
10. 用于測(cè)定ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平的試劑在制備用于預(yù)測(cè) 初次慢性腎臟疾病的發(fā)展的制劑中的應(yīng)用。
11. 用于測(cè)定ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平的試劑在制備將患有初 次慢性腎臟疾病的患者分類成發(fā)展者或非發(fā)展者的制劑中的應(yīng)用。
12. 權(quán)利要求1到9任一項(xiàng)的應(yīng)用,所述制劑用于監(jiān)測(cè)腎功能。
13. 針對(duì)ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的捕獲探針在制備用于預(yù)測(cè)初次慢 性腎臟疾病的發(fā)展的制劑中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104374920SQ201410548781
【公開日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2009年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2008年10月22日
【發(fā)明者】約阿希姆·斯特魯克, 本杰明·德普林格, 托馬斯·穆勒, 芭芭拉·科勒里茲, 弗洛里安·克羅嫩貝格 申請(qǐng)人:B.R.A.H.M.S有限公司
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