一種化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明主要涉及化妝品中四環(huán)素類抗生素的檢測方法，所述的檢測方法包括以下步驟：（1）樣品萃?。簻?zhǔn)確取樣，加入離心管中，加入提取液，渦旋混勻并超聲提取，得樣品待測液；（2）標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：稱取四環(huán)素類標(biāo)準(zhǔn)品，加入去離子水配制標(biāo)準(zhǔn)品待測液；（3）UPLC:將步驟（1）中與步驟（2）中制得的樣品待測液及標(biāo)準(zhǔn)品待測液進(jìn)行UPLC：A為甲酸、甲醇及水的混合液，B為甲醇、乙腈與水的混合液，流動(dòng)相A:B為（25：75，V/V）。該檢測方法分離度高，檢測結(jié)果準(zhǔn)確，檢測時(shí)間短，可滿足化妝品監(jiān)管部門對市場所售化妝品的隨機(jī)大樣本監(jiān)測。
【專利說明】—種化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及化妝品安全檢測領(lǐng)域，具體涉及化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法

【背景技術(shù)】
[0002]化妝品中添加抗生素及甲硝唑等，可一定程度度抑制微生素的生長，因此，近年來，許多不法廠家將這類物質(zhì)添加于化妝品中，目前，這種非法添加抗菌類藥物的現(xiàn)象比較普遍，這些抗生素類的非法添加無疑給人們化妝品的使用帶來較大的安全隱患。而祛痘或抑制粉刺類化妝品抗生素類添加最多，在我國監(jiān)管難度較大。
[0003]祛痘或抑制粉刺類化妝品主要添加的一種抗生為四環(huán)素類，非法添加四環(huán)素類，可取得短暫性的祛痘效果，但可引起菌群失調(diào)，易導(dǎo)致皮炎等皮膚問題，嚴(yán)重者可損傷各臟器。四環(huán)素類主要包括美滿霉素、土霉素、金霉素，多西環(huán)素等，目前我國和歐美發(fā)達(dá)國家均將抗菌類藥物列入化妝品禁用物質(zhì)。目前，常采用液相色譜質(zhì)譜法、HPLC等方法來對化妝品中四環(huán)素類作定性或定量檢測，但這些方法靈敏度相對較低。本發(fā)明在傳統(tǒng)地HPLC基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，采用超高液相色譜(UPLC)法進(jìn)行測定，分離度及靈敏度均較高，且明顯縮短檢測時(shí)間。四環(huán)素為一類兩性抗生素，在堿性溶液中易破壞，中性條件下，可螯合多種金屬離子形成不溶性物質(zhì)，本發(fā)明據(jù)此提供一種化妝品中四環(huán)素新的檢測方法，該檢測方法檢測迅速，檢測結(jié)果準(zhǔn)確。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種可對化妝品中四環(huán)素類抗生素進(jìn)行迅速檢測、且檢測結(jié)果準(zhǔn)確的方法。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0006]一種化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法，包括以下步驟:
[0007](I)樣品萃取:準(zhǔn)確稱取固體樣品l_5g或準(zhǔn)確量取5-10ml液體樣品，加入1ml離心管中，加入提取液，渦旋混l_3min，超聲提取3-6min，冷凍離心5_10min，離心速度為8000轉(zhuǎn)/min，加入提取液定容至刻度，棄上清，得樣品待測液；
[0008](2)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備:稱取l_3g四環(huán)素類標(biāo)準(zhǔn)品，加入去離子水配制成原液
0.5-1.0g/L，得標(biāo)準(zhǔn)品待測液，于_20°C冰箱內(nèi)保存；
[0009](3)UPLC:將步驟(I)中與步驟(2)中制得的樣品待測液及標(biāo)準(zhǔn)品待測液進(jìn)行UPLC:A為甲酸、甲醇及水的混合液，B為甲醇、乙腈與水的混合液，流動(dòng)相A: B為(25: 75，V/V);色譜柱:Ultimate XB C18 柱；柱溫 25_28°C ;流速 0.5-0.8ml/min ;進(jìn)樣量Iul0
[0010]所述的四環(huán)素類藥物為四環(huán)素、土霉素、金霉素、米諾環(huán)素或多西環(huán)素。
[0011]優(yōu)選的，步驟(I)中所述的提取液為甲醇溶液，所述的甲醇溶液濃度為40-45%。
[0012]步驟(3)中UPLC檢測時(shí)采用正離子掃描模式。
[0013]步驟(3)中UPLC同時(shí)檢測多種抗生素時(shí)，采用梯度洗脫程序，梯度洗脫程序的時(shí)間及流動(dòng)相B的體積比如下:
[0014]
0-12s流動(dòng)相B體積比為10-30
12-24s流動(dòng)相B體積比為30-50
25-30s流動(dòng)相B體積比為60-80
30-35S流動(dòng)相B體積比為10-10
[0015]優(yōu)選的，梯度洗脫時(shí)采用的洗脫液為甲醇與乙酸銨的混合液，所述的甲醇與乙酸銨的體積比為(70-80): (20-30)，所述的甲醇濃度為為0.05-0.lmol/L,所述的乙酸銨濃度為 0.02-0.0SmmoI /I,η
[0016]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，有益效果體現(xiàn)在:
[0017](I)四環(huán)素類在乙醇及丙酮中不溶，本發(fā)明中采用甲醇溶液提取，提高了四環(huán)素類抗生素的溶解度，實(shí)驗(yàn)顯示，30^^50%的甲醇溶液對樣品進(jìn)行提取時(shí)，回收率較低，而40% -45%的甲醇溶液提取時(shí)，四環(huán)素類抗生素回收率均較高。
[0018](2)本發(fā)明中，UPLC采用甲酸、甲醇、水的混合液與甲醇、乙腈、水的混合液作為流動(dòng)相，且兩者的體積比為(25: 75);可同時(shí)對四環(huán)素類多種抗生素進(jìn)行檢測，且分離效果好，檢測時(shí)間短。
[0019](3)梯度洗脫時(shí)采用的洗脫液為甲醇與乙酸銨的混合液，甲醇與乙酸銨的體積比為60: 40時(shí)，30min后組分尚未完全流出，而將甲醇與乙酸銨的體積比限定為(70-80): (20-30)，可使分離效果明顯提高，提高檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。

【具體實(shí)施方式】
[0020]實(shí)施例1
[0021]一種化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法，包括以下步驟:
[0022](I)樣品萃取:準(zhǔn)確稱取祛痘霜lg，加入1ml離心管中，加入40%的甲醇溶液，渦旋混勻lmin，超聲提取3min，冷凍離心5min，離心速度為8000轉(zhuǎn)/min，加入40%的甲醇溶液定容至刻度，棄上清，得樣品待測液；
[0023](2)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備:稱取Ig四環(huán)素類標(biāo)準(zhǔn)品，加入去離子水配制成原液0.5g/L，得標(biāo)準(zhǔn)品待測液，于-20°C冰箱內(nèi)保存；
[0024](3)UPLC:將步驟⑴中與步驟(2)中制得的樣品待測液及標(biāo)準(zhǔn)品待測液進(jìn)行UPLC:A為甲酸、甲醇及水的混合液，B為甲醇、乙腈與水的混合液，流動(dòng)相A: B為(25: 75，V/V);色譜柱=Ultimate XB C18 柱；柱溫 25°C ;流速 0.5ml/min ;進(jìn)樣量 Iul。
[0025]所述的四環(huán)素類藥物為四環(huán)素、土霉素、金霉素、米諾環(huán)素或多西環(huán)素。
[0026]步驟(3)中UPLC檢測時(shí)采用正離子掃描模式。
[0027]步驟(3)中UPLC同時(shí)檢測多種抗生素時(shí)，采用梯度洗脫程序，梯度洗脫程序的時(shí)間及流動(dòng)相B的體積比如下:
[0028]

【權(quán)利要求】
1.一種化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)樣品萃取:準(zhǔn)確稱取固體樣品l-5g或準(zhǔn)確量取5-10ml液體樣品，加入1ml離心管中，加入提取液，渦旋混勻l_3min，超聲提取3-6min，冷凍離心5_10min，離心速度為8000轉(zhuǎn)/min，加入提取液定容至刻度，棄上清，得樣品待測液； (2)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備:稱取l_3g四環(huán)素類標(biāo)準(zhǔn)品，加入去離子水配制成原液0.5-1.0g/L，得標(biāo)準(zhǔn)品待測液，于-20°C冰箱內(nèi)保存； (3)UPLC:將步驟(I)中與步驟(2)中制得的樣品待測液及標(biāo)準(zhǔn)品待測液進(jìn)行UPLC=A為甲酸、甲醇及水的混合液，B為甲醇、乙腈與水的混合液，流動(dòng)相A: B為(25: 75，V/V)；色譜柱 Ultimate XB C18 柱；柱溫 25-28°C ;流速 0.5-0.8ml/min ;進(jìn)樣量 Iul。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法，其特征在于，所述的四環(huán)素類藥物為四環(huán)素、土霉素、金霉素、米諾環(huán)素或多西環(huán)素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法，其特征在于，步驟(I)中所述的提取液為甲醇溶液，所述的甲醇溶液濃度為40-45%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法，其特征在于，步驟(3)中UPLC檢測時(shí)采用正離子掃描模式。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法，其特征在于，步驟(3)中UPLC同時(shí)檢測多種抗生素時(shí)，采用梯度洗脫程序，梯度洗脫程序的時(shí)間及流動(dòng)相B的體積比如下: 0-12s流動(dòng)相B體積比為10-30 12-24S流動(dòng)相B體積比為30-50 25-30s流動(dòng)相B體積比為60-80。 30-35S流動(dòng)相B體積比為10-10
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法，其特征在于，梯度洗脫時(shí)采用的洗脫液為甲醇與乙酸銨的混合液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法，其特征在于，所述的甲醇與乙酸銨的體積比為(70-80): (20-30)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化妝品中四環(huán)素類抗生素的快速檢測方法，其特征在于，所述的甲醇濃度為為0.05-0.lmol/L，所述的乙酸銨濃度為0.02-0.05mmol/L。
【文檔編號】G01N30/06GK104198625SQ201410404071
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月16日
【發(fā)明者】郭狄 申請人:中山鼎晟生物科技有限公司