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一種檢測腸道屏障功能的試劑盒的制作方法與工藝

文檔序號:12544209閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:
1.一種檢測腸道屏障功能的試劑盒,其特征在于,其包括:1)反應(yīng)裝置所述反應(yīng)裝置包括血漿分離器和反應(yīng)基板,所述反應(yīng)基板包含空白對照孔、二胺氧化酶反應(yīng)孔、D-乳酸反應(yīng)孔和細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)孔;2)一種或多種顯色液;3)一種或多種稀釋液;所述的血漿分離器每個(gè)孔內(nèi)設(shè)有血漿分離膜;所述的空白對照孔內(nèi)放有空白墊;其中,所述的二胺氧化酶反應(yīng)孔從孔底部起依次放有第一底物墊和顯色墊:所述第一底物墊由第一底物溶液滴加在載體上制備而成;所述的第一底物溶液以600-800mmol/LpH6.5-7.0的磷酸鈉和磷酸鉀緩沖液為溶劑,包括0.0001-0.01g/mL的第一底物、10-10000U/mL的過氧化物酶、0.005%-50%的D-海藻糖和0.005%-50%的吐溫20,所述第一底物為二胺氧化酶底物;所述顯色墊由第一顯色液滴加在載體上制備而成;所述第一顯色液以水為溶劑,包括1-5mg/mL的第一顯色劑和10-20g/LD-海藻糖;所述第一顯色劑為TOOS、DA-67和AmplifluRed;其中,所述的D-乳酸反應(yīng)孔從孔底部起依次放有酶墊和顯色劑墊:所述酶墊由酶液滴加在載體上制備而成;所述的酶液以水為溶劑,包括10-1000U/mL的D-乳酸脫氫酶,200-300mmol/LpH8.0-9.0的Tris-HCl或PIPES緩沖液,0.005%-50%的牛血清白蛋白和肌醇;所述顯色劑墊由第二顯色液滴加在載體上制備而成;所述的第二顯色液以水為溶劑,包括:0.01-10mmol/L的NAD;0.01-100mmol/L的黃遞酶或者N-甲基吩嗪硫酸鹽;0.1-100mg/mL的第二顯色劑,所述第二顯色劑為NBT或MTT;0.005%-50%的牛血清白蛋白和肌醇;其中,所述細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)孔放有第二底物墊。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述試劑盒,其特征在于,所述稀釋液以水為溶劑,包括0.00001-10mg/mL的第一激活劑和pH6.0-9.0、0.01-100mmol/L緩沖液,所述第一激活劑為乙二胺四乙酸二鈉、K+、Zn2+、Mn2+、Mg2+、Li+、Na+、Co2+、TritonX-100、吐溫20或吐溫80中的一種或多種。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述試劑盒,其中,所述第一激活劑為Mn2+。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述試劑盒,所述第二底物墊由第二底物溶液滴加在載體上制備而成;所述的第二底物溶液以水為溶劑,包括0.02-20mg/mL的第二底物、0.01-10mol/LpH6.0-9.0的緩沖液、0.1-10%的第二激活劑和0.005%-50%的穩(wěn)定劑,所述第二底物為甘氨酰-L-脯氨酸-4-甲氧基-β-萘胺、精氨酰-精氨酸-4-甲氧基-β-萘胺、甘氨酰-精氨酸-4-甲氧基-β-萘胺、精氨酰-精氨酸-β-萘胺、甘氨酰-L-脯氨酸-β-萘胺、亮氨酰-甘氨酸-4-甲氧基-β-萘胺中的一種或多種,所述第二激活劑為K+、Zn2+、Mn2+、Mg2+、Li+、Na+、Co2+、TritonX-100、吐溫20或吐溫80中的一種或多種。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒,其中,所述第二底物為精氨酰-精氨酸-4-甲氧基-β-萘胺。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒,其中,所述第二激活劑為TritonX-100。7.根據(jù)權(quán)利要求1-3、5-6任一項(xiàng)所述試劑盒,其特征在于,所述顯色墊、顯色劑墊、酶墊、第一底物墊和第二底物墊的載體均為濾紙、玻璃纖維或者層析紙。8.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒,其特征在于,所述顯色墊、顯色劑墊、酶墊、第一底物墊和第二底物墊的載體均為濾紙、玻璃纖維或者層析紙。
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