鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的合成方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于納米技術(shù)與檢測領(lǐng)域，具體涉及一種鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯的合成方法與應(yīng)用。該材料以石墨烯為基底，具有大比表面積；具有超順磁性，利于后續(xù)分離分析；同時(shí)將鈦、錫兩種金屬進(jìn)行摻雜形成雙金屬氧化物，摻雜比例為1：1，使得對磷酸化肽段具有優(yōu)異的富集效果。同時(shí)該合成方法簡單、成本低，具有巨大的推廣應(yīng)用潛力。
【專利說明】鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的合成方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于納米材料與檢測領(lǐng)域，具體涉及一種用于選擇性富集磷酸化肽段的鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的合成方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來，蛋白質(zhì)組學(xué)已成為發(fā)展最快的生物研究領(lǐng)域之一，成為生命科學(xué)研究不可或缺的一部分。在眾多的翻譯后修飾中，蛋白質(zhì)磷酸化及糖基化在體內(nèi)分布最廣、影響最多，與生命活動(dòng)最為密切相關(guān)。蛋白質(zhì)磷酸化調(diào)節(jié)著生物體內(nèi)許多重要的生理活動(dòng)和細(xì)胞活動(dòng)如信號傳遞、細(xì)胞分裂、增殖、分化以及新陳代謝。生物質(zhì)譜技術(shù)作為后基因組學(xué)研究的核心技術(shù)之一，已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用于蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究，然而對于紛繁復(fù)雜的生物體系而言，以質(zhì)譜為主要研究手段的蛋白質(zhì)磷酸化研究，仍然面臨著諸多問題，如:修飾肽段化學(xué)計(jì)量水平低、存在強(qiáng)的背景干擾，同時(shí)質(zhì)譜檢測前樣本處理過程復(fù)雜且損失嚴(yán)重。因此特異的富集技術(shù)與快速靈敏的檢測手段成為蛋白質(zhì)磷酸化的關(guān)鍵。
[0003]二氧化鈦和二氧化錫都是磷酸化肽段富集的金屬氧化物親和探針，但將鈦-錫摻雜形成的鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物具有飛躍的富集效果。磁性四氧化三鐵微球有著成熟簡便的合成工藝，成本低廉，具有良好的磁性。在外加磁場的作用下可以簡便的將材料與溶液體系分離，大大簡化了由于離心等其他分離手段帶來的實(shí)驗(yàn)操作步驟。石墨烯具有大的比表面積，與四氧化三鐵結(jié)合可形成優(yōu)良的載體。
[0004]因此，可以提出一種用于選擇性富集磷酸化肽段的鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾修飾的磁性石墨烯材料的合成及其應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明目的在于提供一種鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾修飾的磁性石墨烯材料的合成方法及其應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明提出的一種鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的合成方法，具體步驟如下:
[0007](I)將石墨烯溶解于濃硫酸中，攪拌6-12個(gè)小時(shí)，其中，石墨烯與濃硫酸的比例為0.40-0.50g:50_100mL ；
[0008](2)將步驟(I)所得的產(chǎn)物進(jìn)行離心，用去離子水清洗直至清洗液呈中性；
[0009](3)將步驟(2)所得的產(chǎn)物在50°C條件下干燥，得到酸化石墨烯；
[0010](4)將步驟(3)所得的產(chǎn)物，加入至乙二醇中，步驟(3)所得產(chǎn)物與乙二醇比例為0.30-0.40g:40_50mL ；
[0011](5)在攪拌情況下，將FeCl3.6H20、檸檬酸三鈉、醋酸鈉和聚乙二醇加入至步驟
(4)所得產(chǎn)物中，其中FeCl3.6H20、檸檬酸三鈉、醋酸鈉和聚乙二醇的比例為0.18-0.20mg:
0.15-0.20g:2.5-2.6g:1.8-2.0g ；[0012](6)將步驟(5)所得產(chǎn)物加入高壓反應(yīng)釜，在200°C條件下反應(yīng)9.5-10.5小時(shí)；
[0013](7)將步驟(6)中高壓反應(yīng)釜冷卻至室溫，利用磁性分離技術(shù)分離和洗滌所得產(chǎn)物，得到磁性石墨烯；
[0014](8)將步驟(7)所得產(chǎn)物修飾上鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾，即得
所需產(chǎn)品。
[0015]本發(fā)明中，步驟(8)中鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球的合成步驟具體如下:
[0016](8.1)將鈦酸丁酯、SnCl4AH2O分散至乙醇中，超聲0.5-1小時(shí)，得到均相溶液，其中鈦酸丁酯、SnCl4.5H20 與乙醇的配比為 0.5-lmL:0.3-0.6g:50-100mL ；
[0017](8.2)將磁性石墨烯分散至步驟(8.1)所得溶液中，超聲0.5-1.0小時(shí)，兩者的比例為 0.015-0.03g:50-100mL ；
[0018](8.3)將50mL水和IOmL乙醇混合，攪拌均勻；
[0019](8.4)將步驟(8.3)所得的溶液在機(jī)械攪拌條件下，于0.5小時(shí)內(nèi)逐滴加入至步驟
(2)所得溶液中；
[0020](8.5)將步驟(8.4)所得的溶液于室溫下繼續(xù)攪拌8小時(shí)，使反應(yīng)充分進(jìn)行；
[0021](8.6)利用磁鐵對步驟(8.5)所得的產(chǎn)物進(jìn)行收集，用乙醇和水反復(fù)清洗3次以除去產(chǎn)物表面的雜質(zhì)；
[0022](8.7)將步驟(8.6)所得的產(chǎn)物在50°C條件下干燥；
[0023](8.8)將步驟(8.7)所得產(chǎn)物于400°C條件下煅燒2小時(shí)，即得所需材料。
[0024]本發(fā)明中，將得到的鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料作為磷酸化肽段富集的應(yīng)用，具體為:將肽段與鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料充分混合，分散均勻，在37°C _38°C下振蕩酶解25-30分鐘，利用磁鐵將鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料與溶液分離，洗滌材料3次后，再進(jìn)行洗脫，得到純化的磷酸化肽段。
[0025]將原本得不到磷酸化肽段信號的蛋白酶解液，利用該種材料進(jìn)行富集后質(zhì)譜檢測，可以得到條數(shù)眾多、信噪比高的磷酸化肽段信號，此項(xiàng)富集已實(shí)踐于酪蛋白酶解液、酪蛋白與牛血清白蛋白混合溶液酶解液與小鼠鼠腦酶解液等多項(xiàng)試驗(yàn)中獲得成功。
[0026]本發(fā)明的有益效果在于:磁性四氧化三鐵微球的引入可以簡便的將材料與溶液體系分離，大大簡化了實(shí)驗(yàn)操作。將鈦-錫雙金屬在原子水平雜化，使得其對磷酸化肽段的富集效果大大超出了簡單的鈦、錫氧化物小球的加和，顯示出了對于磷酸化肽段的高效的特異性和選擇性富集。其合成方法簡單、成本低，富集效果優(yōu)異，可以為磷酸化組學(xué)的研究提供一種新型、快捷的研究手段。
[0027]【專利附圖】

【附圖說明】
[0028]圖1為鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯掃描電子顯微鏡圖；
[0029]圖2為(a)石墨烯上的磁球、(b)石墨烯上的鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球與磁球?qū)Ρ扰c(C)石墨烯上的鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球的透射電子顯微鏡照片，(d)為鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球高分辨率透射電子顯微鏡，比例尺分別為 200nm、0.2 μ m、IOOnm 和 5nm ；[0030]圖3為鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的元素分析譜圖；
[0031]圖4為實(shí)施例2中IOng/ μ L的磷酸化肽段(a)富集前和(b)利用鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料富集后質(zhì)譜圖；
[0032]圖5為實(shí)施例3中1.0pg/ μ L的磷酸化肽段(a)富集前和(b)利用鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料富集后質(zhì)譜圖；
[0033]圖6為實(shí)施例4中質(zhì)量比1:10的酪蛋白與牛血清白蛋白混合蛋白酶解液(a)富集前和(b)利用鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料富集后質(zhì)譜圖；
[0034]圖7為實(shí)施例4中質(zhì)量比1:1000的酪蛋白與牛血清白蛋白混合蛋白酶解液(a)富集前和(b)利用鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料富集后質(zhì)譜圖；
[0035]其中，*為磷酸化肽段峰，O為脫磷酸肽段碎片峰。
【具體實(shí)施方式】
[0036]下面的實(shí)施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而不是限制本發(fā)明的范圍。
[0037]實(shí)施例1
[0038]磁性石墨烯材料的合成步驟如下:
[0039](I)將0.40g石墨烯溶解于50mL濃硫酸中，攪拌6個(gè)小時(shí)；
[0040](2)將步驟(I)所得的產(chǎn)物進(jìn)行離心，用去離子水清洗直至清洗液呈中性；
[0041](3)將步驟(2)所得的產(chǎn)物在50°C條件下干燥，得到酸化石墨烯；
[0042](4)將0.30g步驟(3)所得的產(chǎn)物，加入至40mL乙二醇中；
[0043](5)在攪拌情況下，將0.18g FeCl3.6Η20、0.15g檸檬酸三鈉、2.5g醋酸鈉和1.8g聚乙二醇加入至步驟(4)所得產(chǎn)物中；
[0044](6)將步驟(5)所得產(chǎn)物加入高壓反應(yīng)釜，在200°C條件下反應(yīng)10小時(shí)；
[0045](7)將步驟(6)中高壓反應(yīng)釜冷卻至室溫，利用磁性分離技術(shù)分離和洗滌所得產(chǎn)物，得到磁性石墨烯；
[0046](8)將0.5mL鈦酸丁酯以及0.3g SnCl4.5Η20分散至50mL乙醇中，超聲0.5小時(shí)，得到均相溶液；
[0047](9)將0.015g步驟(7)所得產(chǎn)物磁性石墨烯分散至步驟(8)所得溶液中，超聲0.5小時(shí)；
[0048](10)將50mL水和IOmL乙醇混合，攪拌均勻；
[0049](11)將步驟(9)所得的溶液在機(jī)械攪拌條件下，于0.5小時(shí)內(nèi)逐滴加入至步驟(10)所得溶液中；
[0050](12)將步驟(11)所得的溶液于室溫下繼續(xù)攪拌8小時(shí)，使反應(yīng)充分進(jìn)行；
[0051](13)利用磁鐵對步驟(12)所得的產(chǎn)物進(jìn)行收集，用乙醇和水反復(fù)清洗3次以除去產(chǎn)物表面的雜質(zhì)；
[0052](14)將步驟(13)所得的產(chǎn)物在50°C條件下干燥；
[0053](15)將步驟(14)所得產(chǎn)物于400°C條件下煅燒2小時(shí)，即得所需材料。[0054]如圖1-3，所得的鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的掃描電子顯微鏡照片(20KV，飛利浦XL30電子顯微鏡，荷蘭)如圖1所示，透射電子顯微鏡照片(200KV，日本株式會社2011顯微鏡，日本)如圖2所示，元素分析譜圖(20KV，飛利浦XL30電子顯微鏡，荷蘭)如圖3所示。
[0055]實(shí)施例2:
[0056]鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的用于酪蛋白酶解液中磷酸化肽段的富集，具體步驟如下:
[0057](I)將2mg鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料分散于lmL50%乙腈溶液中，超聲至分散均勻；
[0058](2)取200 μ L步驟(I)所得溶液，用含0.1%TFA的50%乙腈溶液對材料進(jìn)行清洗，最后分散至200 μ L該溶液中；
[0059](3)加入酪蛋白酶解液(肽段溶液)，使得肽段濃度達(dá)到目標(biāo)濃度；
[0060](4)在37 °C條件下富集30分鐘；
[0061 ] (5)用含0.1%TFA的50%乙腈溶液對材料進(jìn)行清洗，再加入5 μ L0.4Μ的氨水溶液；
[0062](6)在37 °C條件下洗脫15分鐘；
[0063](7)用磁鐵分離材料，得到洗脫液；
[0064](8)將洗脫液點(diǎn)在質(zhì)譜靶板上，送入質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。
[0065]如圖4可以看出:從圖4a與圖4b的對比中可以看出，在富集前，酪蛋白酶解液中難以鑒定到磷酸化肽段，經(jīng)過鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料富集之后，酪蛋白酶解磷酸化肽段峰信號得到了顯著增強(qiáng)。
[0066]實(shí)施例3:
[0067]鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的用于混合肽段中磷酸化肽段的富集，具體步驟如下:
[0068](I)將2mg鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料分散于lmL50%乙腈溶液中，超聲至分散均勻；
[0069](2)取200 μ L步驟(I)所得溶液，用含0.1%TFA的50%乙腈溶液對材料進(jìn)行清洗，最后分散至200 μ L該溶液中；
[0070](3)加入酪蛋白與牛血清白蛋白混合酶解液(肽段溶液)，使得肽段濃度達(dá)到目標(biāo)濃度；
[0071](4)在37°C條件下富集30分鐘；
[0072](5)用含0.1%TFA的50%乙腈溶液對材料進(jìn)行清洗，再加入5 μ L0.4Μ的氨水溶液；
[0073](6)在37 °C條件下洗脫15分鐘；
[0074](7)用磁鐵分離材料，得到洗脫液；
[0075](8)將洗脫液點(diǎn)在質(zhì)譜靶板上，送入質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。
[0076]如圖5可以看出:從圖5a與圖5b的對比中可以看出，在富集前，酪蛋白與牛血清白蛋白混合酶解液中難以鑒定到磷酸化肽段，經(jīng)過鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料富集之后，酪蛋白酶解磷酸化肽段峰信號得到了顯著增強(qiáng)。
[0077]實(shí)施例4:
[0078]鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的用于混合肽段中磷酸化肽段的富集，具體步驟如下:
[0079](I)將2mg鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料分散于lmL50%乙腈溶液中，超聲至分散均勻；
[0080](2)取200 μ L步驟(I)所得溶液，用含0.1%TFA的50%乙腈溶液對材料進(jìn)行清洗，最后分散至200 μ L該溶液中；
[0081 ] (3)加入酪蛋白與牛血清白蛋白混合酶解液(肽段溶液)，使得肽段濃度達(dá)到目標(biāo)濃度；
[0082](4)在37 °C條件下富集30分鐘；
[0083](5)用含0.1%TFA的50%乙腈溶液對材料進(jìn)行清洗，再加入5 μ L0.4Μ的氨水溶液；
[0084](6)在37 °C條件下洗脫15分鐘；
[0085](7)用磁鐵分離材料，得到洗脫液；
[0086](8)將洗脫液點(diǎn)在質(zhì)譜靶板上，送入質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。
[0087]如圖6-7，可以看出:從圖6a與圖6b的對比，以及圖7a、7b的對比中可以看出，在富集前，酪蛋白與牛血清白蛋白混合酶解液中難以鑒定到磷酸化肽段，經(jīng)過鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料富集之后，酪蛋白酶解磷酸化肽段峰信號得到了顯著增強(qiáng)。
[0088]實(shí)施例5:
[0089]鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的用于小鼠大腦酶解液中磷酸化肽段的富集，具體步驟如下:
[0090](I)將2mg鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料分散于lmL50%乙腈溶液中，超聲至分散均勻；
[0091 ] (2)用含0.1%TFA的50%乙腈溶液對材料進(jìn)行清洗，最后分散至ImL該溶液中；
[0092](3)加入ImL小鼠鼠腦酶解液(肽段溶液)；
[0093](4)在37 °C條件下富集60分鐘；
[0094](5)用含0.1%TFA的50%乙腈溶液對材料進(jìn)行清洗，再加入40 μ L0.4Μ的氨水溶液；
[0095](6)在37 °C條件下洗脫30分鐘；
[0096](7)用磁鐵分離材料，得到洗脫液；
[0097](8)將材料固定酶酶解混合蛋白樣品的酶解液以及傳統(tǒng)溶液過夜酶解的酶解液進(jìn)行LC-MS/MS分析并搜庫比較。
[0098]LC-MS/MS分析步驟如下:
[0099](I)將酶解后的肽段完全凍干。干粉使用色譜流動(dòng)相A相溶解(0.5%乙酸水溶液)后，15000rpm轉(zhuǎn)速以上離心5分鐘，吸取上清；
[0100](2)取20 μ L進(jìn)樣，設(shè)置線性分離的色譜流動(dòng)相B (0.5%乙酸+80%乙腈水溶液)從5%到35%，再以75nl/min的流速，以90%的B相進(jìn)行洗脫。梯度的時(shí)長為140min ；
[0101](3) LC系統(tǒng)直接與LTQ線性離子阱質(zhì)譜相連，源工作電壓為2.1kV,離子傳輸管在200攝氏度下工作。質(zhì)譜設(shè)定為數(shù)據(jù)相關(guān)模式進(jìn)行分析。
[0102]由表I可以看出，通過利用鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料對小鼠鼠腦酶解液進(jìn)行富集，鑒別得到349個(gè)磷酸化位點(diǎn)，其中277個(gè)為絲氨酸(占79.37%)、60個(gè)為蘇氨酸(占17.19%)、12個(gè)為酪氨酸(占3.44%)，囊括了 170種不同的磷酸化肽段。
[0103]實(shí)施例6
[0104]磁性石墨烯材料的合成步驟如下:
[0105](I)將0.50g石墨烯溶解于IOOmL濃硫酸中，攪拌12個(gè)小時(shí)；
[0106](2)將步驟(1)所得的產(chǎn)物進(jìn)行離心，用去離子水清洗直至清洗液呈中性；
[0107](3)將步驟(2)所得的產(chǎn)物在50°C條件下干燥，得到酸化石墨烯；
[0108](4)將0.40g步驟(3)所得的產(chǎn)物，加入至40mL乙二醇中；
[0109](5)在攪拌情況下，將0.20g FeCl3.6Η20、0.20g檸檬酸三鈉、2.6g醋酸鈉和2.1g聚乙二醇加入至步驟(4)所得產(chǎn)物中；
[0110](6)將步驟(5)所得產(chǎn)物加入高壓反應(yīng)釜，在200°C條件下反應(yīng)10小時(shí)；
[0111](7)將步驟(6)中高壓反應(yīng)釜冷卻至室溫，利用磁性分離技術(shù)分離和洗滌所得產(chǎn)物，得到磁性石墨烯；
[0112](8)將0.5mL鈦酸丁酯以及0.3g SnCl4.5Η20分散至50mL乙醇中，超聲0.5小時(shí)，得到均相溶液；
[0113](9)將0.03g步驟(7)所得產(chǎn)物磁性石墨烯分散至步驟(8)所得溶液中，超聲I小時(shí)；
[0114](10)將50mL水和IOmL乙醇混合，攪拌均勻；
[0115](11)將步驟(9)所得的溶液在機(jī)械攪拌條件下，于0.5小時(shí)內(nèi)逐滴加入至步驟
(10)所得溶液中；
[0116](12)將步驟(11)所得的溶液于室溫下繼續(xù)攪拌8小時(shí)，使反應(yīng)充分進(jìn)行；
[0117](13)利用磁鐵對步驟(12)所得的產(chǎn)物進(jìn)行收集，用乙醇和水反復(fù)清洗3次以除去產(chǎn)物表面的雜質(zhì)；
[0118](14)將步驟(13)所得的產(chǎn)物在50°C條件下干燥；
[0119](15)將步驟(14)所得產(chǎn)物于400°C條件下煅燒2小時(shí)，即得所需材料。
[0120]表1.利用鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的用于小鼠大腦酶解液中磷酸化肽段的富集結(jié)果
[0121]
【權(quán)利要求】
1.一種鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的合成方法，其特征在于具體步驟如下: (1)將石墨烯溶解于濃硫酸中，攪拌6-12個(gè)小時(shí)，其中，石墨烯與濃硫酸的比例為0.40-0.50g:50_100mL ； (2)將步驟(I)所得的產(chǎn)物進(jìn)行離心，用去離子水清洗直至清洗液呈中性； (3)將步驟(2)所得的產(chǎn)物在50°C條件下干燥，得到酸化石墨烯； (4)將步驟(3)所得的產(chǎn)物，加入至乙二醇中，步驟(3)所得產(chǎn)物與乙二醇比例為0.30-0.40g:40_50mL ； (5)在攪拌情況下，將FeCl3.6H20、檸檬酸三鈉、醋酸鈉和聚乙二醇加入至步驟(4)所得產(chǎn)物中，其中FeCl3.6H20、檸檬酸三鈉、醋酸鈉和聚乙二醇的比例為0.18-0.20mg:0.15-0.20g:2.5-2.6g: 1.8-2.0g ； (6)將步驟(5)所得產(chǎn)物加入高壓反應(yīng)釜，在200°C條件下反應(yīng)9.5-10.5小時(shí)； (7)將步驟(6)中高壓反應(yīng)釜冷卻至室溫，利用磁性分離技術(shù)分離和洗滌所得產(chǎn)物，得到磁性石墨烯； (8)將步驟(7)所得產(chǎn)物修飾上鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾，即得所需女口廣叩ο
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾的磁性石墨烯材料的合成方法，其特征在于步驟(8)中鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球的合成步驟具體如下: (8.1)將鈦酸丁酯、SnCl4.5Η20分散至乙醇中，超聲0.5-1小時(shí)，得到均相溶液，其中鈦酸丁酯、SnCl4.5Η20 與乙醇的配比為 0.5-lmL:0.3-0.6g:50-100mL ； (8.2)將磁性石墨烯分散至步驟(8.1)所得溶液中，超聲0.5-1.0小時(shí)，兩者的比例為0.015—0.03g:50-100 mL ； (8.3)將50mL水和IOmL乙醇混合，攪拌均勻； (8.4)將步驟(8.3)所得的溶液在機(jī)械攪拌條件下，于0.5小時(shí)內(nèi)逐滴加入至步驟(2)所得溶液中； (8.5)將步驟(8.4)所得的溶液于室溫下繼續(xù)攪拌8小時(shí)，使反應(yīng)充分進(jìn)行； (8.6)利用磁鐵對步驟(8.5)所得的產(chǎn)物進(jìn)行收集，用乙醇和水反復(fù)清洗3次以除去產(chǎn)物表面的雜質(zhì)； (8.7)將步驟(8.6)所得的產(chǎn)物在50°C條件下干燥； (8.8)將步驟(8.7)所得產(chǎn)物于400°C條件下煅燒2小時(shí)，即得所需材料。
3.—種如權(quán)利要求1所述合成方法得到的鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾材料作為磷酸化肽段富集的應(yīng)用，其特征在于將混合肽段與鈦-錫雙金屬原子水平雜化氧化物小球修飾修飾的磁性石墨烯材料充分混合，分散均勻，在37°C _38°C下振蕩酶解25-30分鐘，利用磁鐵將材料與溶液分離。
【文檔編號】G01N1/40GK103920476SQ201410097173
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年3月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月17日
【發(fā)明者】鄧春暉, 王夢依 申請人:復(fù)旦大學(xué)