應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的定量檢測方法及試劑盒和外部設(shè)備的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的檢測方法及試劑盒和外部設(shè)備，它是使用外部設(shè)備和試劑盒對待測樣本的反應(yīng)量和反應(yīng)時間進行精確控制，從而實現(xiàn)逆向免疫層析反應(yīng)；該劑盒內(nèi)設(shè)有層析膜，層析膜中部載有對照區(qū)域和檢測區(qū)域；當外部設(shè)備檢測到樣本層析到達指定位置，樣本層析完成，自動控制外部設(shè)備將洗液和顯色液或發(fā)光液先后注入試劑盒，外部設(shè)備控制吸液泵作用于試劑盒，使注入的液體進行逆向?qū)游?，并先后與對照區(qū)域和檢測區(qū)域內(nèi)的物質(zhì)進行反應(yīng)，并最后產(chǎn)生顏色變化或產(chǎn)生可見光，最后外部設(shè)備通過識別對照區(qū)域和檢測區(qū)域的光信號，并將對照區(qū)域和檢測區(qū)域的光信號以及內(nèi)置的標準曲線進行對比后即可得出定量檢測結(jié)果。
【專利說明】應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的定量檢測方法及試劑盒和外部設(shè)備
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的定量檢測方法及試劑盒和外部設(shè)備，特別是一種應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的定量檢測方法及試劑盒和外部設(shè)備及其所用的試劑盒和外部設(shè)備。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，對于生物樣本的檢測方法很多，其中IDEXX公司使用了一種特制的試劑盒，它將洗液和顯色液存儲于試劑盒中，洗液和顯色液的上方設(shè)置層析膜。它的具體工作原理(以牛奶檢測為例)是:在將牛奶樣本放入試劑管中加熱5分鐘(45°C)后，滴入試劑盒中，層析膜利用毛細現(xiàn)象將牛奶樣本層析移動至層析膜上的檢測點和對照點，使牛奶樣本與檢測點和對照點內(nèi)的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，然后觀察牛奶樣本層析到一定位置(檢測窗處)后，將試劑盒的一側(cè)按下，由于試劑盒的這一側(cè)上設(shè)有兩根分別連接洗液池與層析膜及顯色液池與層析膜的毛細管，所以試劑盒一側(cè)按下后，毛細管刺穿密封的洗液池和顯色液池，并將洗液和顯色液吸至層析膜處，然后進行層析移動至檢測點和對照點，對檢測點和對照點進行洗脫和顯色，最后觀察檢測點和對照點的顏色即可得出檢測結(jié)果。其試劑盒的結(jié)構(gòu)如圖1所示。
[0003]但是這中試劑盒由于存儲了洗液和顯色液，且內(nèi)部結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，因此體積較為龐大，攜帶不便。另外，由于一般洗液和顯色液需要保持較低的溫度，試劑盒在長途運輸過程中始終需要冷藏保存，其運輸成本較高。而且，由于每個試劑盒內(nèi)的洗液和顯色液的需要實現(xiàn)封裝在試劑盒內(nèi)，其用量必須統(tǒng)一才可便于大規(guī)模生產(chǎn)，為了使其能適應(yīng)絕大多數(shù)樣本的檢測，洗液和顯色液的封裝量一般需大于實際使用量，所以會造成很大的浪費。另外，由于該方案基本都是利用層析膜自身的毛細作用使液體進行流通，所以試劑盒對層析膜的要求較高，需要其內(nèi)部具有足夠多的毛細管，且保存中需避免受潮。因此IDEXX公司所用的層析膜一般也是特制的，其生產(chǎn)成本及保存成本較高。更值得一提的是，該方案只能定性檢測樣本，不能輸出定量結(jié)果，所以只能判定陰性陽性，不能輸出確定的濃度值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于，提供一種應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的定量檢測方法及試劑盒和外部設(shè)備。它可以解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的試劑盒無法輸出定量結(jié)果、攜帶不方便、運輸成本和保存成本高、及洗液和顯色液浪費等問題。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案:應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的定量檢測方法，其特點是:使用外部設(shè)備和試劑盒對待測樣本的反應(yīng)量和反應(yīng)時間進行精確控制，從而實現(xiàn)逆向免疫層析反應(yīng)；該劑盒內(nèi)設(shè)有層析膜，層析膜中部載有對照區(qū)域和檢測區(qū)域；當外部設(shè)備檢測到樣本層析到達指定位置，樣本層析完成，自動控制外部設(shè)備將洗液和顯色液或發(fā)光液先后注入試劑盒，外部設(shè)備控制吸液泵作用于試劑盒，使注入的液體進行逆向?qū)游觯⑾群笈c對照區(qū)域和檢測區(qū)域內(nèi)的物質(zhì)進行反應(yīng)(免疫反應(yīng)和/或化學反應(yīng))，并最后產(chǎn)生顏色變化或產(chǎn)生可見光，最后外部設(shè)備通過識別對照區(qū)域和檢測區(qū)域的光信號，并將對照區(qū)域和檢測區(qū)域的光信號以及內(nèi)置的標準曲線進行對比后即可得出定量的檢測結(jié)果。
[0006]內(nèi)置的標準曲線是預(yù)先存儲在外部設(shè)備中的，它是一條信號光強弱與樣本中待測物質(zhì)濃度的對應(yīng)曲線(可以根據(jù)多次實驗總結(jié)擬合而成)。因此在測得光信號強度后即可對應(yīng)得到濃度信息。
[0007]上述的應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的定量檢測方法中，樣本檢測的具體步驟包括:
[0008]①在試劑盒的其中一側(cè)的加樣孔中進行定量加樣，樣本在層析膜的毛細作用下層析移動至對照區(qū)域和檢測區(qū)域，并與對照區(qū)域和檢測區(qū)域內(nèi)的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)；
[0009]②當外部設(shè)備檢測到待測樣本層析到指點位置，外部設(shè)備又在試劑盒的另一側(cè)的注液孔中先注入洗液，并在加樣孔上使用吸液泵進行抽吸，使洗液反向?qū)游鲆苿又良訕涌祝?br> [0010]③然后在注液孔中加顯色液或發(fā)光液，同時吸液泵繼續(xù)工作，使顯色液或發(fā)光液和洗液進行同向?qū)游?，接著對照區(qū)域和檢測區(qū)域上發(fā)生顯色反應(yīng)；
[0011]④最后外部設(shè)備對檢測區(qū)域和對照區(qū)域的光信號(包括顏色信號)進行自動識別，最終外部設(shè)備對信號的強弱以及內(nèi)置的標準曲線進行比對分析后，得出定量的檢測結(jié)果，并將檢測結(jié)果顯示給使用者。
[0012]前述的應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的定量檢測方法中，所述檢測區(qū)域和對照區(qū)域為載有反應(yīng)物(乳膠/磁珠/抗體)的點或線。
[0013]用于前述方法的試劑盒，其特點是:包括條形的層析膜，層析膜外包覆有盒體，盒體的中部設(shè)有檢測窗，檢測窗所在位置的層析膜上設(shè)有對照區(qū)域和檢測區(qū)域；所述檢測窗兩側(cè)的盒體上分別開設(shè)有用于添加樣本的加樣孔和用于添加洗液和顯色液或發(fā)光液的注液孔，注液孔還用于檢測樣本的層析位置；所述對照區(qū)域和檢測區(qū)域內(nèi)分別載有與樣本反應(yīng)的反應(yīng)物。
[0014]用于前述方法的外部設(shè)備，其特點是:至少包括一個地板部件，地板部件上設(shè)有支架部件，支架部件下方設(shè)有用于容納試劑盒且可滑動進出外部設(shè)備的板卡托板，支架部件上固定有吸液部件和加液部件；支架部件還固定有條形碼檢測部件、圖像檢測部件；還包括顯示部件以及控制各部件的控制主板。
[0015]前述的外部設(shè)備中，還包括IC卡讀寫部件、加熱部件和熒光掃描檢測部件。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過一個外部設(shè)備和一個更為簡易的試劑盒配合使用以實現(xiàn)檢測目的。通過對注液孔的監(jiān)測，通過外部設(shè)備可以自動分析出樣本層析的位置和時間，自動控制加洗液和顯色液的時機，在檢測區(qū)域反應(yīng)結(jié)束時加入洗液，終止反應(yīng)。與現(xiàn)有技術(shù)項相比，由于機器自動控制，防止過度反應(yīng)產(chǎn)生的報廢，提高了試劑檢測的精密度，防止人工操作引起的不必要誤差。相對于現(xiàn)有技術(shù)，顯色液和洗液的添加及保藏的工作移交至外部設(shè)備。所以本發(fā)明的試劑盒可以做得很薄，體積很小，便于攜帶，且沒有了洗液和顯色液的保存條件束縛，運輸、保存成本也降低了很多。另外，由于外部設(shè)備可以保存大量的顯色液和洗液，其添加量也可以由外部設(shè)備精確控制，且一臺外部設(shè)備可以重復(fù)對不同的試劑盒進行作用，與現(xiàn)有技術(shù)相比，可節(jié)省大量的洗液和顯色液。而且本發(fā)明還在外部設(shè)備中設(shè)置了吸液部件，在檢測的多個步驟中使用吸液部件作用于層析膜，使液體被動地進行層析，因而降低了對層析膜(相當于現(xiàn)有技術(shù)中的層析膜)本身性能的要求，同時增強了洗滌能力，降低非特異性反應(yīng)。本發(fā)明在進行樣本檢測時，只需試劑盒插入外部設(shè)備，再將待測樣本加入外部設(shè)備，其它步驟均可以由外部設(shè)備進行自動控制，最終可在外部設(shè)備的顯示系統(tǒng)上直觀地得到定量的檢測結(jié)果，避免了人的主觀判斷所產(chǎn)生的誤差。
[0017]圖1是現(xiàn)有試劑盒的結(jié)構(gòu)圖；
[0018]圖2是本發(fā)明試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0019]圖3是本發(fā)明外部設(shè)備的結(jié)構(gòu)框圖；
[0020]圖4是圖3的側(cè)視圖。
[0021]附圖中的標記為:1-加樣孔，2-檢測窗，3-層析膜，4-注液孔，5-盒體，6_對照區(qū)域，7-檢測區(qū)域，11-地板部件，12-支架部件，13-吸液部件，14-加液部件，15-圖像檢測部件，16-板卡托板，17-1C卡讀寫部件，18-熒光掃描檢測部件，110-顯示部件，111-加熱部件，112-控制主板。
[0022]下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但并不作為對本發(fā)明限制的依據(jù)。
[0023]實施例。應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的檢測方法:使用外部設(shè)備和試劑盒對待測樣本的反應(yīng)量和反應(yīng)時間進行精確控制，從而實現(xiàn)逆向免疫層析反應(yīng)；該劑盒內(nèi)設(shè)有層析膜，層析膜中部載有對照區(qū)域和檢測區(qū)域；當外部設(shè)備檢測到樣本層析到達指定位置，樣本層析完成，自動控制外部設(shè)備將洗液和顯色液或發(fā)光液先后注入試劑盒，外部設(shè)備控制吸液泵作用于試劑盒，使注入的液體進行逆向?qū)游?，并先后與對照區(qū)域和檢測區(qū)域內(nèi)的物質(zhì)進行反應(yīng)(免疫反應(yīng)和/或化學反應(yīng))，并最后產(chǎn)生顏色變化或產(chǎn)生可見光，最后外部設(shè)備通過識別對照區(qū)域和檢測區(qū)域的光信號，對比信號的強弱以及內(nèi)置的標準曲線后即可得出定量檢測結(jié)果。
[0024]樣本檢測的具體步驟包括:
[0025]①在試劑盒的其中一側(cè)的加樣孔中進行定量加樣，樣本在層析膜的毛細作用下層析移動至對照區(qū)域和檢測區(qū)域，并與對照區(qū)域和檢測區(qū)域內(nèi)的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)；
[0026]②當外部設(shè)備檢測到待測樣本層析到指點位置，外部設(shè)備又在試劑盒的另一側(cè)的注液孔中先注入洗液，并在加樣孔上使用吸液泵進行抽吸，使洗液反向?qū)游鲆苿又良訕涌祝?br> [0027]③然后在注液孔中加顯色液或發(fā)光液，同時吸液泵繼續(xù)工作，使顯色液或發(fā)光液和洗液進行同向?qū)游觯又鴮φ諈^(qū)域和檢測區(qū)域上發(fā)生顯色反應(yīng)；
[0028]④最后外部設(shè)備對檢測區(qū)域和對照區(qū)域的光信號(包括顏色信號)進行自動識別，最終外部設(shè)備對信號的強弱以及內(nèi)置的標準曲線進行比對分析后，并將檢測結(jié)果顯示給使用者。
[0029]所述檢測區(qū)域和對照區(qū)域為載有反應(yīng)物(乳膠/磁珠/抗體)的點或線。
[0030]用于前述方法的試劑盒，如圖2所示:包括條形的層析膜3，層析膜3外包覆有盒體5，盒體5的中部設(shè)有檢測窗2，檢測窗2所在位置的層析膜3上設(shè)有對照區(qū)域6和檢測區(qū)域7 ;所述檢測窗2兩側(cè)的盒體5上分別開設(shè)有用于添加樣本的加樣孔I和用于添加洗液和顯色液或發(fā)光液的注液孔4，注液孔4還用于檢測樣本的層析位置；所述對照區(qū)域6和檢測區(qū)域7內(nèi)分別載有與樣本反應(yīng)的反應(yīng)物。
[0031]用于前述方法的外部設(shè)備，如圖3和圖4所示:至少包括一個地板部件11，地板部件11上設(shè)有支架部件12，支架部件12下方設(shè)有用于容納試劑盒且可滑動進出外部設(shè)備的板卡托板16，支架部件12上固定有吸液部件13和加液部件14 ;支架部件12還固定有條形碼檢測部件19、圖像檢測部件15 ;還包括顯示部件110以及控制各部件的控制主板112。還包括IC卡讀寫部件17、加熱部件111和熒光掃描檢測部件18。各部件的在外部設(shè)備的位置關(guān)系無特別要求，只需能實現(xiàn)下述工作原理即可任意布置。
[0032]外部設(shè)備的工作原理如下，以牛奶樣本為例，將牛奶樣品加入樣品管，輕微搖勻，再將樣品管放入外部設(shè)備的加熱部件111，加熱5min ;將樣品管從加熱部件111取出，將牛奶倒入試劑盒的加樣孔1，樣本開始層析移動，同時將試劑盒放入板卡托板16，板卡托板16進入外部設(shè)備，條形碼檢測部件19檢測試劑盒上的條形碼，然后圖像檢測部件15自動檢測注液孔，檢測樣品是否到達注液孔；當檢測到樣本到達注液孔，吸液部件13移動到加樣孔，并開始吸液，同時加液部件14開始工作，加入洗液；洗液層析完成后，吸液部件繼續(xù)工作，加入顯色液并開始層析。顯色液層析完成后，試劑盒移動到檢測位，由圖像檢測部件15開始檢測(加發(fā)光液時，可使用熒光掃描檢測部件18進行檢測)，通過控制主板112配合軟件分析給出檢測結(jié)果，并將結(jié)果顯示在顯示部件110上。
[0033]現(xiàn)以牛奶樣本檢測為例，其具體檢測原理如下。
[0034]1、說明。
[0035]I)反應(yīng)管中包含PBP-HRP (青霉素結(jié)合蛋白-辣根過氧化物酶連接蛋白，簡稱PBP-HRP)和R-ant1-M IgG-HRP (兔抗鼠免疫球蛋白-辣根過氧化物酶連接蛋白，簡稱RAM-HRP )凍干粉末；
[0036]2)檢測點:通過固相包被技術(shù)將氨芐青霉素小分子(Amp)固定到微納米乳膠顆粒(簡稱:Latex)上簡稱Latex-Amp,取一定濃度的包被乳膠點樣到層析膜上。
[0037]3)對照點包括2個方案。
[0038]方案A:通過固相包被技術(shù)將小鼠IgG(免疫球蛋白)固定到微納米乳膠顆粒上(簡寫:Latex-M IgG)，取一定濃度的包被乳膠點樣到層析膜上。此時，包含在反應(yīng)管中的對照抗體為兔抗小鼠IgG的辣根過氧化物酶結(jié)合物(簡寫R-ant1-M IgG-HRP)。
[0039]方案B:通過固相包被技術(shù)將小鼠抗PBP蛋白抗體固定到微納米乳膠顆粒上(簡寫:Latex-Anti PBP)，去一定濃度的包被乳膠點樣到層析膜上。此時，包含在反應(yīng)管中的無對照抗體，僅有PBP-HRP。
[0040]2、反應(yīng)過程
[0041]I)取400ul待測牛奶樣本，加入到反應(yīng)管中，混勻，加入到外部設(shè)備的樣本添加口，45 °C 加熱 5min。
[0042]其中存在的反應(yīng):
[0043]a)陰性牛奶:復(fù)融的PBP-HRP和牛奶中的任何成分不反應(yīng)，仍以游離PBP-HRP蛋
白存在于牛奶中。
[0044]b)陽性牛奶:部分復(fù)融的PBP-HRP和牛奶中的抗生素反應(yīng)(以青霉素G(Penicillin G)為例)，形成Penicillin G-PBP-HRP復(fù)合物，存在于牛奶中，部分PBP-HRP仍以游離的方式存在，如果待測牛奶的中含Penicillin G濃度高，則游離PBP-HRP濃度低。
[0045]c)方案 A 中，R-ant1-M IgG-HRP 不參與反應(yīng)。
[0046]2)反應(yīng)結(jié)束后，將400ul牛奶加入到層析膜的加樣孔中，待測牛奶以層析的方式，在一定的時間內(nèi)快速流過檢測點和對照點的位置，并到達洗液孔的位置。
[0047]方案A中，其中檢測點和對照點存在的反應(yīng):
[0048]a)陰性牛奶:存在于生鮮牛乳中的游離PBP-HRP蛋白，和檢測點中Latex-Amp反應(yīng)，形成Latex-Amp-PBP-HRP復(fù)合物，固定于檢測點。
[0049]b)陽性牛奶:Penicillin G-PBP-HRP由于已經(jīng)反應(yīng),在流經(jīng)檢測點時,不發(fā)生反應(yīng)；而部分仍以游離的方式存在的PBP-HRP，則和Latex-Amp反應(yīng)，形成Latex-Amp-PBP-HRP復(fù)合物固定于檢測點。Latex-Amp-PBP-HRP復(fù)合物量的多少，取決于樣本中Penicillin G量的多少，樣本中Penicillin G量多，則Latex-Amp-PBP-HRP復(fù)合物量少，否則反之。
[0050]c)牛奶流經(jīng)對照點，R-ant1-M IgG-HRP 和 Latex-M IgG 反應(yīng)，形成 Latex-MI gG-R-ant 1-M I gG-HRP，固定于對照點。
[0051 ] 方案B中，檢測點和對照點的反應(yīng):
[0052]a)陰性牛奶:存在于生鮮牛乳中的游離PBP-HRP蛋白，分別與檢測點中Latex-Amp,對照點中的Latex-Anti PBP反應(yīng),形成Latex-Amp-PBP-HRP復(fù)合物，固定于檢測點；形成Latex-Anti PBP-PBP-HRP復(fù)合物固定于對照點。
[0053]b)陽性牛奶:Penicillin G-PBP-HRP由于已經(jīng)反應(yīng)，在流經(jīng)檢測點時，不與Iatex-Amp發(fā)生反應(yīng)；而部分仍以游離的方式存在的PBP-HRP,則和Latex-Amp反應(yīng),形成Latex-Amp-PBP-HRP復(fù)合物固定于檢測點。Latex-Amp-PBP-HRP復(fù)合物量的多少,取決于樣本中Penicillin G量的多少,樣本中Penicillin G量多，則Latex-Amp-PBP-HRP復(fù)合物量少，否則反之。當陽性牛奶流經(jīng)對照點，Latex-Anti PBP與Penicillin G-PBP-HRP以及游離的 PBP-HRP 反應(yīng),形成 Latex-Anti PBP-Penicillin G-PBP-HRP 復(fù)合物以及 Latex-AntiPBP-PBP-HRP復(fù)合物固定于對照點。樣品中Penicillin G濃度越高，形成PenicillinG-PBP-HRP復(fù)合物量越多，游離PBP-HRP量越少，則檢測點中Latex-Amp-PBP-HRP復(fù)合物量少，但對照點 Latex-Anti PBP-Penicillin G-PBP-HRP 越多。
[0054]3)洗滌:當反應(yīng)結(jié)束，吸液泵到達加樣孔，一定量洗液加入到洗液孔中，吸液泵工作，洗漆反應(yīng)膜
[0055]4)顯色:洗滌結(jié)束，在洗液孔中加入一定量顯色液，吸液泵工作，顯色3min
[0056]5)檢測判斷。圖像識別系統(tǒng)自動讀取檢測點和對照點灰度值，儀器內(nèi)部設(shè)置標準曲線，根據(jù)檢測點和對照點的灰度值，并參考內(nèi)置標準曲線，得出定量的濃度值。
[0057]除實施例1中的牛奶檢測外，本發(fā)明的方法和設(shè)備還適用于其它利用定向快速免疫層析檢測法進行檢測的樣本及檢測項目，而【背景技術(shù)】中IDEXX公司的試劑盒所能檢測的樣本和檢測項目均能使用本發(fā)明的方法和設(shè)備進行檢測。本發(fā)明可以檢測的樣本主要包括:血液、血清、血漿、尿液、胸腹水、腦積液、細胞培養(yǎng)上清、痰液、咽拭子洗脫液、生鮮牛乳、成品牛奶、乳粉、動植物組織勻漿液、動物血液、動物血清、動物尿液以及動物其他體液等。本發(fā)明可以用于檢測人及動物血液樣本、體液樣本，液態(tài)食品、動植物提取物中檢測病原體、蛋白、其他微小顆?；蚧瘜W分子等，檢測步驟與實施例1中的步驟基本相同，只需替換設(shè)備中檢測點、對照點中的物質(zhì)及相應(yīng)替換洗液和顯色液即可。
【權(quán)利要求】
1.應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的定量檢測方法，其特征在于:使用外部設(shè)備和試劑盒對待測樣本的反應(yīng)量和反應(yīng)時間進行精確控制，從而實現(xiàn)逆向免疫層析反應(yīng)；該劑盒內(nèi)設(shè)有層析膜，層析膜中部載有對照區(qū)域和檢測區(qū)域；當外部設(shè)備檢測到樣本層析到達指定位置，樣本層析完成，自動控制外部設(shè)備將洗液和顯色液或發(fā)光液先后注入試劑盒，外部設(shè)備控制吸液泵作用于試劑盒，使注入的液體進行逆向?qū)游?，并先后與對照區(qū)域和檢測區(qū)域內(nèi)的物質(zhì)進行反應(yīng)，并最后產(chǎn)生顏色變化或產(chǎn)生可見光，最后外部設(shè)備通過識別對照區(qū)域和檢測區(qū)域的光信號，并將對照區(qū)域和檢測區(qū)域的光信號以及內(nèi)置的標準曲線進行對比后即可得出定量檢測結(jié)果。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的定量檢測方法，其特征在于，樣本檢測的具體步驟包括: ①在試劑盒的其中一側(cè)的加樣孔中進行定量加樣，樣本在層析膜的毛細作用下層析移動至對照區(qū)域和檢測區(qū)域，并與對照區(qū)域和檢測區(qū)域內(nèi)的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)； ②當外部設(shè)備檢測到待測樣本層析到指點位置，外部設(shè)備又在試劑盒的另一側(cè)的注液孔中先注入洗液，并在加樣孔上使用吸液泵進行抽吸，使洗液反向?qū)游鲆苿又良訕涌祝? ③然后在注液孔中加顯色液或發(fā)光液，同時吸液泵繼續(xù)工作，使顯色液或發(fā)光液和洗液進行同向?qū)游?，接著對照區(qū)域和檢測區(qū)域上發(fā)生顯色反應(yīng)； ④最后外部設(shè)備對檢測區(qū)域和對照區(qū)域的光信號進行自動識別，最終外部設(shè)備對信號的強弱以及內(nèi)置標準曲線進行比對分析后，將定量的檢測結(jié)果顯示給使用者。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用逆向免疫層析反應(yīng)的定量檢測方法，其特征在于:所述檢測區(qū)域和對照區(qū)域為載有反應(yīng)物的點或線。
4.用于權(quán)利要求1至3任一權(quán)利要求所述方法的試劑盒，其特征在于:包括條形的層析膜(3)，層析膜(3)外包覆有盒體(5)，盒體(5)的中部設(shè)有檢測窗(2)，檢測窗(2)所在位置的層析膜(3)上設(shè)有對照區(qū)域(6)和檢測區(qū)域(7);所述檢測窗(2)兩側(cè)的盒體(5)上分別開設(shè)有用于添加樣本的加樣孔(I)和用于添加洗液和顯色液或發(fā)光液的注液孔(4)，注液孔(4)還用于檢測樣本的層析位置；所述對照區(qū)域(6)和檢測區(qū)域(7)內(nèi)分別載有與樣本反應(yīng)的反應(yīng)物。
5.用于權(quán)利要求1至3任一權(quán)利要求所述方法的外部設(shè)備，其特征在于:至少包括一個地板部件(11)，地板部件(11)上設(shè)有支架部件(12 )，支架部件(12 )下方設(shè)有用于容納試劑盒且可滑動進出外部設(shè)備的板卡托板(16)，支架部件(12)上固定有吸液部件(13)和加液部件(14);支架部件(12)還固定有條形碼檢測部件(19)、圖像檢測部件(15);還包括顯示部件(110)以及控制各部件的控制主板(112)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的外部設(shè)備，其特征在于:還包括IC卡讀寫部件(17)、加熱部件(111)和熒光掃描檢測部件(18)。
【文檔編號】G01N33/558GK103760338SQ201410036880
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年1月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月26日
【發(fā)明者】陳功祥, 趙培潔, 厲永綱 申請人:杭州海士利生物科技有限公司, 杭州創(chuàng)新生物檢控技術(shù)有限公司