試樣的分析方法、其中使用的溶液以及試樣分析用盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種能夠提高分析精度的使用毛細(xì)管電泳的試樣的分析方法、其中使用的溶液以及試樣分析用盒。在一種方式中涉及試樣分析方法，包括通過(guò)毛細(xì)管電泳進(jìn)行試樣中的分析對(duì)象物質(zhì)的分離和／或檢測(cè)，在pH緩沖物質(zhì)和非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)的存在下進(jìn)行分析對(duì)象物質(zhì)的分離和／或檢測(cè)。另外，在另一種方式中涉及毛細(xì)管電泳用溶液，含有pH緩沖物質(zhì)、非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)和水。
【專利說(shuō)明】試樣的分析方法、其中使用的溶液以及試樣分析用盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種試樣的分析方法、毛細(xì)管電泳用溶液及試樣分析用盒(kit)。
【背景技術(shù)】
[0002]作為利用了毛細(xì)管電泳法的血中蛋白質(zhì)的分析方法，W02010-010859公開(kāi)了通過(guò)毛細(xì)管電泳法分析血紅蛋白的方法。W02010-010859公開(kāi)了含有富馬酸、硫氰酸鈉、精氨酸和硫酸軟骨素C的pH4.8的電泳液。另外，該文獻(xiàn)還公開(kāi)了血中蛋白質(zhì)的分析時(shí)間在35秒以下。
[0003]JP2009-109230A公開(kāi)了通過(guò)毛細(xì)管電泳法測(cè)定穩(wěn)定型HbAlc的方法。作為電泳緩沖液，JP2009-109230A公開(kāi)了含有亞硝酸鈉和表面活性劑的檸檬酸緩沖液(pH6.0)或含有亞硝酸鉀和硫酸葡聚糖的蘋果酸緩沖液(PH5.2)。
[0004]JP2006-145537A公開(kāi)了通過(guò)使用含有脂肪族二胺或脂肪族多胺等的流動(dòng)抑制劑的兩性離子緩沖液的毛細(xì)管電泳法分析血紅蛋白的方法。作為分析緩沖溶液，JP2006-145537A公開(kāi)了三(羥甲基)甲基甘氨酸/ 1，4-二氨基丁烷緩沖液(ρΗ9.37)、三(羥甲基)甲基甘氨酸/ 1，5_ 二氨基戊烷緩沖液(ρΗ9.37)、三(羥甲基)甲基甘氨酸/ 二乙烯三胺緩沖液(ΡΗ9.40)、三(羥甲基)甲基甘氨酸/ Ν，Ν，Ν’，Ν’_四甲基-1，4-丁二烯胺緩沖液(ρΗ9.19)。
[0005]JP09(1997)-510792A中作為適合糖化血紅蛋白的毛管電泳檢測(cè)的緩沖液，公開(kāi)了含有水、糖絡(luò)合化合物(硼酸、硼砂等)、為了使緩沖液為PH9?12的充分的堿化合物、以及pKa是9?12的兩性離子化合物的緩沖液。
[0006]W02008-136321公開(kāi)了通過(guò)毛細(xì)管電泳法進(jìn)行的血紅蛋白的分析方法。W02008-136321中作為毛細(xì)管中所含的緩沖液，公開(kāi)了將非離子性表面活性劑(十二烷基麥芽糖苷等)添加到含有富馬酸、精氨酸和硫酸軟骨素C的緩沖液(pH4.8)中的緩沖液。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]使用毛細(xì)管電泳法的試樣的分析方法有需要的試樣少和裝置能夠小型化等優(yōu)點(diǎn)。另一方面，從用于臨床檢查的觀點(diǎn)看，更期待著提高精度和縮短分析時(shí)間。
[0008]可是，當(dāng)要謀求縮短分析時(shí)間時(shí)，會(huì)引起電流值的增加和/或發(fā)熱，有血紅蛋白熱變性、峰寬度增大、高鐵血紅蛋白發(fā)生、毛細(xì)管內(nèi)中的氣泡發(fā)生等的可能，存在分析精度不足的問(wèn)題。例如，在W02010-010859中血紅蛋白的熱變性成為問(wèn)題，在JP2009-109230A中由亞硝酸鹽的添加引起電流值的增加導(dǎo)致的發(fā)熱量的增加成為問(wèn)題，任一個(gè)都難以提高分析精度。另外，在JP2006-145537A和JP09 (1997)-510792A中存在測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)(例如，10分鐘以上)、實(shí)質(zhì)上不能適用于希望在短時(shí)間內(nèi)處理多個(gè)試樣的臨床檢查的問(wèn)題。而且，在W02008-136321的方法中有由于表面活性劑的作用從而血紅蛋白變性、峰寬度增大、高鐵血紅蛋白發(fā)生等的可能，存在分析精度不足的問(wèn)題。
[0009]因此，本發(fā)明在一個(gè)方式中提供一種能夠提高分析精度的使用毛細(xì)管電泳的試樣的分析方法、毛細(xì)管電泳用溶液、以及試樣分析用盒。
[0010]本發(fā)明在一個(gè)方式中涉及試樣分析方法，包括通過(guò)毛細(xì)管電泳進(jìn)行試樣中的分析對(duì)象物質(zhì)的分離和/或檢測(cè)，在pH緩沖物質(zhì)和非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)的存在下進(jìn)行分析對(duì)象物質(zhì)的分離和/或檢測(cè)。
[0011]本發(fā)明在其它方式中涉及毛細(xì)管電泳用溶液，該毛細(xì)管電泳用溶液含有pH緩沖物質(zhì)、非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)和水。
[0012]本發(fā)明在其它方式中涉及試樣分析用盒，該試樣分析用盒包括本發(fā)明的毛細(xì)管電泳用溶液和毛細(xì)管電泳芯片，所述毛細(xì)管電泳芯片是包括試樣保持槽、電泳緩沖液保持槽和毛細(xì)管流路，所述試樣保持槽和所述電泳緩沖液保持槽通過(guò)所述毛細(xì)管流路連通的電泳
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[0013]根據(jù)本發(fā)明，在一種方式中，可以提供一種能夠提高分析精度的使用了毛細(xì)管電泳的試樣的分析方法、毛細(xì)管電泳用溶液、或試樣分析用盒。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1 (A)是示出毛細(xì)管電泳芯片的一種實(shí)施方式的平面圖，圖1 (B)是從1-1方向觀察圖1(A)所示的電泳芯片的截面圖；
[0015]圖2的(A)示出通過(guò)使用實(shí)施例1的毛細(xì)管電泳用溶液的毛細(xì)管電泳法得到的電泳圖譜的一例，圖2的(B)示出通過(guò)使用實(shí)施例2的毛細(xì)管電泳用溶液的毛細(xì)管電泳法得到的電泳圖譜的一例，圖2的(C)示出通過(guò)使用比較例I的毛細(xì)管電泳用溶液的毛細(xì)管電泳法的電泳圖譜的一例；
[0016]圖3的(A)示出通過(guò)使用實(shí)施例3的毛細(xì)管電泳用溶液的毛細(xì)管電泳法得到的電泳圖譜的一例，圖3的(B)示出通過(guò)使用實(shí)施例4的毛細(xì)管電泳用溶液的毛細(xì)管電泳法得到的電泳圖譜的一例，圖3的(C)示出通過(guò)使用比較例2的毛細(xì)管電泳用溶液的毛細(xì)管電泳法得到的電泳圖譜的一例；
[0017]圖4的(A)示出通過(guò)使用實(shí)施例5的毛細(xì)管電泳用溶液的毛細(xì)管電泳法得到的電泳圖譜的一例，圖4的(B)示出通過(guò)使用比較例3的毛細(xì)管電泳用溶液的毛細(xì)管電泳法得到的電泳圖譜的一例，圖4的(C)示出通過(guò)使用比較例4的毛細(xì)管電泳用溶液的毛細(xì)管電泳法得到的電泳圖譜的一例；
[0018]圖5示出通過(guò)使用實(shí)施例3的毛細(xì)管電泳用溶液的毛細(xì)管電泳法得到的電泳圖譜的一例。
【具體實(shí)施方式】
[0019]本發(fā)明在一種方式中，基于以下見(jiàn)解:在毛細(xì)管電泳法的泳動(dòng)中當(dāng)使分離對(duì)象的物質(zhì)組和非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)存在時(shí)，可以通過(guò)使電泳中的電流值降低來(lái)防止發(fā)熱，由此可以提高分析精度。即，本發(fā)明在一種方式中涉及試樣分析方法，包括通過(guò)毛細(xì)管電泳進(jìn)行試樣中的分析對(duì)象物質(zhì)的分離和/或檢測(cè)，在pH緩沖物質(zhì)和非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)的存在下進(jìn)行分析對(duì)象物質(zhì)的分離和/或檢測(cè)。另外，本發(fā)明在其它方式中涉及試樣分析方法，包括將試樣導(dǎo)入填充有電泳緩沖液的毛細(xì)管流路，以及對(duì)所述流路的全部或一部分施加電壓來(lái)進(jìn)行毛細(xì)管電泳，進(jìn)行所述試樣中的分析對(duì)象物質(zhì)的分離和/或檢測(cè)，在pH緩沖物質(zhì)和非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)的存在下進(jìn)行分析對(duì)象物質(zhì)的分離和/或檢測(cè)。[非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)]
[0020]在本發(fā)明中“非表面活性劑型的”是指在一種或多種實(shí)施方式中，不形成膠團(tuán)。在本發(fā)明中“不形成膠團(tuán)”是指在一種或多種實(shí)施方式中，在水性介質(zhì)中不形成膠團(tuán)或者實(shí)質(zhì)上不形成膠團(tuán)。在本發(fā)明中，“不形成膠團(tuán)或者實(shí)質(zhì)上不形成膠團(tuán)”是指在一種或多種實(shí)施方式中，從提高分析精度的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選為臨界膠團(tuán)濃度(CMC)在200mmol / L以上，更優(yōu)選為在300mmol / L以上，進(jìn)一步優(yōu)選為兩性離子物質(zhì)不帶有臨界膠團(tuán)濃度。另外，非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)在一種或多種實(shí)施方式中，從提高分析精度的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選為不具有PH緩沖作用的物質(zhì)，更優(yōu)選為在泳動(dòng)條件的PH中不發(fā)揮或者實(shí)質(zhì)上不發(fā)揮pH緩沖作用的物質(zhì)。在不被限定的一種或多種實(shí)施方式中，當(dāng)作為后述的PH緩沖物質(zhì)在泳動(dòng)條件的pH附近具有pKa的物質(zhì)的濃度是40mmol / L時(shí)，即使添加IOOmmol / L非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)，也優(yōu)選為PH保持在0.2以下或0.1以下的變動(dòng)，更優(yōu)選為不使pH變動(dòng)或不使PH實(shí)質(zhì)上變動(dòng)。在本發(fā)明中“泳動(dòng)條件的pH”是指在一種或多種實(shí)施方式中，在泳動(dòng)前被填充在毛細(xì)管內(nèi)的電泳緩沖液(電泳緩沖液)的pH、或者試樣或用于調(diào)制試樣的試樣調(diào)制液的pH。
[0021]在本發(fā)明中，作為“兩性離子物質(zhì)”，在不被限定的一種或多種實(shí)施方式中，可以舉出兩性離子或甜菜堿。在本發(fā)明中，“兩性離子”也稱作分子內(nèi)鹽，在一種或多種實(shí)施方式中，是指在I分子內(nèi)帶有正電荷和負(fù)電荷兩者的分子。在本發(fā)明中，“甜菜堿”是指在同一分子內(nèi)的不相鄰隣位置帶有正電荷和負(fù)電荷，不在帶有正電荷的原子上結(jié)合可解離的氫原子，作為分子全部不帶有電荷的化合物。在本發(fā)明中，“甜菜堿”在一種或多種實(shí)施方式中包括:給出負(fù)電荷基團(tuán)是磺酸基(-SO3-)的磺酸甜菜堿、給出負(fù)電荷的基是羧基(-C00-)的羧基甜菜堿、給出負(fù)電荷的基是磷酸基(-PO4-)的磷酸甜菜堿。非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)在一種或多種實(shí)施方式中，從提高分析精度的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選為非表面活性劑型的甜菜堿，更優(yōu)選地，可舉出非表面活性劑型的磺酸甜菜堿和羥基甜菜堿，進(jìn)一步優(yōu)選為在同一分子內(nèi)的不相鄰位置具有季銨陽(yáng)離子和磺酸基(-SO3-)或羧基(-C00-)的非表面活性劑型的物質(zhì)，更進(jìn)一步優(yōu)選為非表面活性劑型磺酸甜菜堿(NDSB)。作為NDSB的不被限定的一種或多種實(shí)施方式，可以舉出
[0022]
【權(quán)利要求】
1.一種試樣的分析方法,包括: 通過(guò)毛細(xì)管電泳進(jìn)行試樣中的分析對(duì)象物質(zhì)的分離和/或檢測(cè)，其中， 在pH緩沖物質(zhì)和非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)的存在下進(jìn)行分析對(duì)象物質(zhì)的分離和/或檢測(cè)。
2.一種試樣的分析方法，包括: 將試樣導(dǎo)入填充有電泳緩沖液的毛細(xì)管流路，以及 對(duì)所述流路的全部或一部分施加電壓來(lái)進(jìn)行毛細(xì)管電泳，并進(jìn)行所述試樣中的分析對(duì)象物質(zhì)的分離和/或檢測(cè)，其特征在于， 在PH緩沖物質(zhì)和非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)的存在下進(jìn)行分析對(duì)象物質(zhì)的分離和/或檢測(cè)。
3.如權(quán)利要求1或2所述的試樣分析方法，其中，在離子性的準(zhǔn)固定相、pH緩沖物質(zhì)和非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)的存在下進(jìn)行分析對(duì)象物質(zhì)的分離和/或檢測(cè)。
4.如權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的試樣分析方法，其中，所述試樣含有pH緩沖物質(zhì)和非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)。
5.如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的試樣分析方法，其中，所述試樣含有離子性的準(zhǔn)固定相、PH緩沖物質(zhì)和非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)。
6.如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的試樣分析方法，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)是不形成膠團(tuán)的兩性離子物質(zhì)。
7.如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的試樣分析方法，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)是不具有PH緩沖作用的物質(zhì)。
8.如權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的試樣分析方法，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)是非表面活性劑型的甜菜堿。
9.如權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的試樣分析方法，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)是在同一分子內(nèi)的不相鄰位置具有季銨陽(yáng)離子以及磺酸基(-SO3-)或羧基(-C00-)的物質(zhì)。
10.如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的試樣分析方法，其中，pH緩沖物質(zhì)是其PKa或PKb的值被包含在泳動(dòng)條件的pH的±2.0的范圍內(nèi)的物質(zhì)。
11.如權(quán)利要求3至10中任一項(xiàng)所述的試樣分析方法，其中，離子性的準(zhǔn)固定相是陰離子性或陽(yáng)尚子性的聞分子。
12.如權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的試樣分析方法，其中，試樣是含有血紅蛋白的試樣。
13.如權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的試樣分析方法，其中，試樣作為分析對(duì)象物質(zhì)，含有被選自由穩(wěn)定型HbAlc(S-HbAlc)、血紅蛋白AO (HbAO)、血紅蛋白Ala(HbAla)、血紅蛋白Alb(HbAlb)、血紅蛋白Ald(HbAld)、血紅蛋白Ale(HbAle)、血紅蛋白A2 (HbA2)、血紅蛋白S(HbS、鐮狀紅細(xì)胞血紅蛋白)、血紅蛋白F(HbF、胎兒血紅蛋白)、血紅蛋白M(HbM)、血紅蛋白C(HbC)、血紅蛋白D(HbD)、血紅蛋白E(HbE)、高鐵血紅蛋白、氨甲?；t蛋白、乙?；t蛋白、醛化血紅蛋白和不穩(wěn)定型HbAlc(l — HbAlc)構(gòu)成的組中的物質(zhì)。
14.如權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的試樣分析方法，其中，毛細(xì)管電泳的電泳緩沖液的pH是3.0~6.9。
15.如權(quán)利要求1至14中任一項(xiàng)所述的試樣分析方法，其中，離子性的準(zhǔn)固定相是具有陰離子性基的多糖類。
16.—種毛細(xì)管電泳用溶液，含有pH緩沖物質(zhì)、非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)和水。
17.如權(quán)利要求16所述的毛細(xì)管電泳用溶液，其中，還含有離子性的準(zhǔn)固定相。
18.如權(quán)利要求16或17所述的毛細(xì)管電泳用溶液，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)是不形成膠團(tuán)的兩性離子物質(zhì)。
19.如權(quán)利要求16至18中任一項(xiàng)所述的毛細(xì)管電泳用溶液，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)是不具有PH緩沖作用的物質(zhì)。
20.如權(quán)利要求16至19中任一項(xiàng)所述的毛細(xì)管電泳用溶液，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)是非表面活性劑型的甜菜堿。
21.如權(quán)利要求16至20中任一項(xiàng)所述的毛細(xì)管電泳用溶液，其中，非表面活性劑型的兩性離子物質(zhì)是在同一分子內(nèi)的不相鄰位置具有季銨陽(yáng)離子以及磺酸基(-SO3-)或羧基(-C0CT)的物質(zhì)。
22.如權(quán)利要求16至21中任一項(xiàng)所述的毛細(xì)管電泳用溶液，其中，pH緩沖物質(zhì)是其PKa或pKb的值被包含在泳動(dòng)條件的pH的±2.0的范圍內(nèi)的物質(zhì)。
23.如權(quán)利要求17至22中任一項(xiàng)所述的毛細(xì)管電泳用溶液，其中，離子性的準(zhǔn)固定相是陰離子性或陽(yáng)離子性的高分子。
24.如權(quán)利要求17至23中任一項(xiàng)所述的毛細(xì)管電泳用溶液，其中，離子性的準(zhǔn)固定相是具有陰離子性基的多糖類。
25.如權(quán)利要求16至24中任一項(xiàng)所述的毛細(xì)管電泳用溶液，其中，電泳緩沖液的pH是3.0 ~6.9 ο
26.—種試樣分析用盒,包括權(quán)利要求16至25中任一項(xiàng)所述的毛細(xì)管電泳用溶液和毛細(xì)管電泳芯片， 所述毛細(xì)管電泳芯片是包括試樣保持槽、電泳緩沖液保持槽和毛細(xì)管流路，所述試樣保持槽和所述電泳緩沖液保持槽通過(guò)所述毛細(xì)管流路連通的電泳芯片。
27.如權(quán)利要求26所述的試樣分析用盒，其中，還包含校正用物質(zhì)和/或精度對(duì)照用物質(zhì)。
28.—種試樣分析方法,包括: 將試樣導(dǎo)入填充有電泳緩沖液的毛細(xì)管流路，以及 對(duì)所述流路的全部或一部分施加電壓來(lái)進(jìn)行毛細(xì)管電泳，并進(jìn)行所述試樣中的分析對(duì)象物質(zhì)的分離和/或檢測(cè)，還包括: 使含有陰離子性的準(zhǔn)固定相以及具有2個(gè)以上酸性官能基的酸的液體，或者含有I個(gè)堿性官能基以及具有容易變成陰離子性的官能基的弱堿化合物的液體與以陽(yáng)離子性物質(zhì)覆蓋毛細(xì)管內(nèi)壁的毛細(xì)管接觸。
【文檔編號(hào)】G01N27/447GK103940887SQ201410030477
【公開(kāi)日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月22日
【發(fā)明者】大沼直嗣 申請(qǐng)人:愛(ài)科來(lái)株式會(huì)社