妊娠期糖尿病的母體生物標志物的制作方法
【專利摘要】本文的實施方案涉及用于胎兒/母體健康的篩查工具的領(lǐng)域，并且，更具體地，涉及妊娠期糖尿病的生物標志物。在多個實施方案中，所述方法可提供用于妊娠期糖尿病的無創(chuàng)和微創(chuàng)篩查工具，其包括檢測相對于參照樣品，測試樣品的蛋白質(zhì)組圖譜的改變。在具體的實施方案中，所述方法可包括確定來自所述受試者的測試樣本的蛋白質(zhì)組圖譜是否包括至少一種妊娠期糖尿病特有的表達特征，其中所述蛋白質(zhì)組圖譜包含糖基化的纖連蛋白和糖基化的PSG的表達信息，例如纖連蛋白-SNA或纖連蛋白抗體復(fù)合物以及PSG-AAL或PSG抗體復(fù)合物的水平的信息。在一些實施方案中，所述蛋白質(zhì)組圖譜還可包含脂連蛋白、性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)的表達信息、人絨毛膜促性腺激素(hCG)與胎盤催乳素的比例、或其組合。
【專利說明】妊娠期糖尿病的母體生物標志物
[0001] 相關(guān)申請的交叉引用
[0002] 本申請要求于2012年4月13日提交的，題為"妊娠期糖尿病的母體生物標志物" 的美國臨時申請No. 61/623, 690的優(yōu)先權(quán)，所述申請的整個公開內(nèi)容以引用的形式全文納 入本文。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003] 本文的實施方案涉及用于胎兒/母體健康的篩查工具的領(lǐng)域，并且，更具體地，涉 及妊娠期糖尿病的生物標志物。

【背景技術(shù)】
[0004] 在美國和全球，在過去的20年內(nèi)，肥胖癥和糖尿病的比率已迅速增長。伴隨著肥 胖癥和2型糖尿病的總體上升，妊娠期糖尿?。℅DM)的發(fā)病率也在不斷增加。預(yù)期采用基 于最近的商血糖癥和不良妊娠結(jié)局（HAPO)研究的新的診斷標準能夠?qū)DM的患病率提商 到約所有孕婦的18%。根據(jù)這樣的事實--即可單獨使用生活方式療法來管理80-90%的 患有GDM的婦女，GDM的普遍篩查逐漸被認為是合理的。
[0005] GDM是妊娠的嚴重并發(fā)癥，其可增加多種母嬰疾病（包括巨大兒、肩難產(chǎn)或產(chǎn)傷、 早產(chǎn)、先兆子癇）的風險。除了與妊娠和分娩有關(guān)的并發(fā)癥的風險增加以外，還有與GDM相 關(guān)的嚴重產(chǎn)后并發(fā)癥。例如，發(fā)現(xiàn)5-10%的患有GDM的婦女在懷孕后立即患上糖尿病，并且 已經(jīng)患有GDM的婦女在接下來的10-20年內(nèi)發(fā)展成糖尿病的可能性高10倍?；加蠫DM的 母親的孩子在以后的生活中發(fā)展成2型糖尿病風險高8倍。因此，無論是短期和長期，未經(jīng) 治療的GDM都會增加總的糖尿病人群。
[0006] 普遍或甚至廣泛的GDM篩查受到以下事實的阻礙，即所述糖尿病和糖尿病前期的 標準評估（例如空腹胰島素/葡萄糖和HbAlc)并不被推薦用于篩查GDM。相反，所推薦的 參數(shù)是口服葡萄糖耐量試驗（OGTT)，所述試驗成本昂貴且具有侵入性，需要醫(yī)院就診和多 次抽血。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0007] 通過以下的詳細描述并結(jié)合附圖將很容易理解實施方案。附圖中的實施方案僅作 示例而非限制性說明。
[0008] 圖1示出了對照和GDM母體血清樣本的二維差異膠內(nèi)凝膠電泳（2D-DIGE)分析， 其中多個實施方案中，取決于過低或過高豐度的程度，豐度不同的蛋白質(zhì)（箭頭）呈現(xiàn)為綠 色或紅色斑點。
[0009] 圖2示出了依據(jù)多個實施方案的接收者操作特征（ROC)曲線，所述曲線證明了纖 連蛋白和妊娠特異性糖蛋白（PSG)糖基化區(qū)分來自具有和不具有妊娠期糖尿病的孕婦的 樣本的能力。
[0010]圖3示出了依據(jù)多個實施方案的ROC曲線，所述ROC曲線證明了作為單獨分析物 以及作為多分析物模型的每一種蛋白質(zhì)和蛋白糖基化模式的分類性能。
[0011] 圖4示出了依據(jù)多個實施方案在35例非糖尿病對照中的整個孕期間對纖連蛋 白-SNA的連續(xù)測量，其中，直線代表所述GDM研究小組的第25和第75百分位數(shù)。
[0012] 圖5是依據(jù)多個實施方案的接收者操作特征（ROC)曲線，所述曲線說明了孕期前 3個月纖連蛋白-SNA預(yù)測后續(xù)產(chǎn)生妊娠期糖尿病的能力。
[0013] 圖6是依據(jù)多個實施方案的接收者操作特征（ROC)曲線，所述曲線說明了纖連蛋 白和PSG糖基化區(qū)分在妊娠的中間3個月和后3個月內(nèi)的非糖尿病患者和妊娠期糖尿病患 者的能力。
[0014] 圖7是依據(jù)多個實施方案的接收者操作特征（ROC)曲線，所述曲線說明了作為單 獨分析物以及作為多分析物模型的每一種蛋白質(zhì)和蛋白糖基化模式的分類性能。
[0015] 圖8A和8B示出了依據(jù)本文公開的多個實施方案可使用的側(cè)流免疫測定（圖8A) 以及側(cè)流檢測裝置（圖8B)的實例的示意圖。
[0016] 圖9是示出了依據(jù)多個實施方案，將纖連蛋白ELISA結(jié)果和FNLFIA測試結(jié)果進行 比較的曲線圖。

【具體實施方式】
[0017] 在以下的詳細說明中，參考了構(gòu)成本說明書的一部分的附圖，并且在所述附圖中 通過舉例說明的方式示出了可實施的實施方案。應(yīng)理解，可使用其他實施方案并且可進行 結(jié)構(gòu)上或符合常理的改變，而不偏離本發(fā)明范圍。因此，以下的詳細說明不應(yīng)以限制性含義 來理解，并且實施方案的范圍由所附權(quán)利要求及其等價物來限定。
[0018] 各種操作可以以依次的多個獨立操作進行描述，這種方式可以有助于理解實施方 案；但是，描述的順序不應(yīng)被解釋為意味著這些操作的順序是確定的。
[0019] 本說明書可使用基于視角的描述，例如上/下、后/前以及頂部/底部。這些描述 僅為便于討論，并不意欲限制所公開的實施方案的應(yīng)用范圍。
[0020] 可使用術(shù)語"偶聯(lián)"和"連接"以及它們的派生詞。應(yīng)理解，這些術(shù)語不意味著是 彼此的同義詞。而是，在具體的實施方案中，"連接"可用于指示兩個或多個元件彼此直接物 理接觸或電接觸。"偶聯(lián)"可意指兩個或多個元件直接物理或電接觸。但是，"偶聯(lián)"還可意 指兩個或多個元件彼此不直接接觸，但仍然彼此協(xié)作或相互作用。
[0021] 出于描述的目的，以"A/B"或"A和/或B"形式表示的短語意指（A)、（B)或（A和 B)。出于描述的目的，以"A、B和C中的至少一個"形式表示的短語意指（A)、（B)、（C)、（A 和B)、（A和C)、（B和C)或（A、B和C)。出于描述的目的，以"㈧B"形式表示的短語意指 (B)或（AB)，即，A是可選元件。
[0022] 本說明書可使用術(shù)語"實施方案"、"多個實施方案"，這些術(shù)語可各自指代一個或 多個相同或不同的實施方案。另外，如實施方案所使用的術(shù)語"包含"、"包括"、"具有"等等 都是同義詞。
[0023] 本文在多個實施方案中公開了無創(chuàng)和微創(chuàng)方法，所述方法可用于妊娠期糖尿病的 廣泛篩查。在多個實施方案中，所述方法可包括通過以下方式來確定來自受試者的測試樣 本的蛋白質(zhì)組圖譜是否包括至少一種妊娠期糖尿病特有的表達特征：例如通過對糖基化 的纖連蛋白進行檢測和/或定量（如通過對纖連蛋白-黑接骨木凝集素（SNA)或纖連蛋 白-抗體復(fù)合物進行檢測/定量），和/或通過對糖基化的妊娠特異性糖蛋白（PSG)進行檢 測和/或定量（例如通過對妊娠特異性糖蛋白-橙黃網(wǎng)胞盤菌凝集素（PSG-AAL)或PSG-抗 體復(fù)合物進行檢測/定量），其中所述蛋白質(zhì)組圖譜包括糖基化的纖連蛋白的表達信息。在 一些實施方案中，所述蛋白質(zhì)組圖譜還可包括脂連蛋白、性激素結(jié)合球蛋白（SHBG)、C-反 應(yīng)蛋白（CRP)、人絨毛膜促性腺激素（hCG)與胎盤催乳素的比例、或者它們的組合（例如脂 連蛋白、SHBG、CRP、以及hCG和胎盤催乳素的比例中的兩個、三個或全部四個）的表達信息。
[0024] 本文使用的術(shù)語"蛋白質(zhì)組"是指在給定的時間內(nèi)生物樣本中的大部分蛋白質(zhì)。一 般而言，所述蛋白質(zhì)組與基因組是根本不同的，不同在于所述基因組幾乎是靜態(tài)的，而所述 蛋白質(zhì)組則不斷改變來響應(yīng)內(nèi)部和外部事件。因此，本文使用的術(shù)語"蛋白質(zhì)組圖譜"是指 在給定的時間內(nèi)生物樣本（例如全血、血漿、血清或唾液）中的多種蛋白質(zhì)的表達模式的表 示形式。在多個實施方案中，例如，蛋白質(zhì)組圖譜可以表示為質(zhì)譜，但是還包括其他基于蛋 白質(zhì)的任何物化或生化特性的表示形式。因此，蛋白質(zhì)組圖譜可例如基于如由二維聚丙烯 酰胺凝膠電泳（2D-PAGE)或二維差異膠內(nèi)凝膠電泳（2D-DIGE)確定的蛋白質(zhì)的電泳性質(zhì)的 差異，并且可表示為例如二維電泳凝膠中的多個斑點。在多個實施方案中，差異表達圖譜可 具有重要的診斷價值，并且可例如通過質(zhì)譜分析、免疫印跡、ELISA測定或蛋白質(zhì)微陣列來 對蛋白質(zhì)斑點進行檢測和/或量化。在多個實施方案中，可使用側(cè)流裝置（例如用于旁床 檢測，以及用于抽查比色測試）對蛋白質(zhì)進行檢測和/或定量。
[0025] 在多個實施方案中，依據(jù)本發(fā)明的蛋白質(zhì)組圖譜可代表或包含關(guān)于至少2、3、4、 5、6、7、8、9、10或甚至更多種蛋白質(zhì)的信息。本文使用的術(shù)語"表達特征"是指在生物樣本 (例如測試樣本）的蛋白質(zhì)組圖譜中獨特的蛋白表達特征或基序，所述蛋白質(zhì)組圖譜可能 在統(tǒng)計學上顯著不同于相應(yīng)的參照樣本（例如從相同類型的生物體液中獲得的）的蛋白質(zhì) 組圖譜。例如，在多個實施方案中，"妊娠期糖尿病特有的表達特征"可包括不同于正常參 照樣本的蛋白質(zhì)組圖譜的特征基序，或者其可與來自妊娠期糖尿病參照樣本的蛋白質(zhì)組圖 譜共有一個特征基序。在多個實施方案中，所述表達特征可包括兩種或多種特定蛋白質(zhì)的 表達的增加或降低，所述特定蛋白質(zhì)是例如糖基化的纖連蛋白（例如，可將其作為纖連蛋 白-SNA或纖連蛋白-抗體復(fù)合物進行檢測）、糖基化的PSG(例如，可將其作為PSG-AAL或 PSG-抗體復(fù)合物進行檢測）、脂連蛋白、SHBG、和/或CRP，和/或所述表達特征可包括兩種 或多種特定蛋白質(zhì)的表達的比例（例如人絨毛膜促性腺激素（hCG)與胎盤催乳素的比例） 的增加或降低。對于這些蛋白質(zhì)中的每一種，列出了以下的示例性的GENBANK?登錄 號：人纖連蛋白，Genbank登錄號P02751 ;人妊娠特異性β-1-糖蛋白9,Genbank登錄號 gi: 6093845 ;人性激素結(jié)合球蛋白，Genbank登錄號gi: 134907 ;人脂連蛋白，Genbank登錄 號gi:167077467 ;人絨毛膜促性腺激素β亞基，Genbank登錄號gi:116184;人糖蛋白激素 α鏈，Genbank登錄號gi: 121312 ;人胎盤催乳素，Genbank登錄號gi: 190034 ;和人C-反應(yīng) 蛋白，Genbank登錄號gi: 30224。
[0026] 在一些實施方案中，所述方法包括檢測增加，例如相對于參照樣本的統(tǒng)計學顯著 增加，例如在糖基化的纖連蛋白（例如，可將其作為纖連蛋白-SNA或纖連蛋白-抗體復(fù)合 物進行檢測）和糖基化的PSG(例如，可將其作為PSG-AAL或PSG-抗體復(fù)合物進行檢測）的 表達上的至少10%、15%、25%、50%、75%、100%、150%、200%、250%或甚至更大的增加， 或者除了CRP和/或hCG和胎盤催乳素的比例以外，還在糖基化的纖連蛋白（例如，可將其 作為纖連蛋白-SNA或纖連蛋白-抗體復(fù)合物進行檢測）和糖基化的PSG(例如，可將其作為PSG-AAL或PSG-抗體復(fù)合物進行檢測）的表達上的統(tǒng)計學顯著增加。在一些實施方案中， 在糖基化的纖連蛋白和PSG(例如，纖連蛋白-SNA或纖連蛋白-抗體復(fù)合物和PSG-AAL或 PSG-抗體復(fù)合物）的表達上的統(tǒng)計學顯著增加還可伴隨著統(tǒng)計學顯著降低，例如，相對于 所述參照樣本，在脂連蛋白和/或SHBG的表達上至少10 %、15 %、25 %、50 %、75 %、100 %、 150%、200%、250%或甚至更大的降低。在具體的實施方案中，除了脂連蛋白和SHBG的表 達上的統(tǒng)計學顯著降低以外，妊娠期糖尿病特有的表達特征還可包括在糖基化的纖連蛋白 (例如，作為纖連蛋白-SNA或纖連蛋白-抗體復(fù)合物被檢測）、糖基化的PSG(例如，作為 PSG-AAL或PSG-抗體復(fù)合物被檢測）、CRP的表達上以及hCG和胎盤催乳素的比例的統(tǒng)計 學顯著增加。
[0027] 在多個實施方案中，如果所述參照樣本是正?；?qū)φ諈⒄諛颖荆ㄈ鐏碜圆痪哂腥?娠期糖尿病的受試者的樣本），并且所述測試樣本的蛋白質(zhì)組圖譜在至少一種妊娠期糖尿 病特有的表達特征上不同于所述參照樣本，則可確定所述受試者具有妊娠期糖尿病。相反， 如果所述測試樣本在至少一種妊娠期糖尿病特有的表達特征上與所述正常參照樣本沒有 不同，則可確定所述受試者不具有妊娠期糖尿病。在其他實施方案中，如果所述參照樣本是 妊娠期糖尿病參照樣本（如來自具有妊娠期糖尿病的受試者的樣本），并且所述測試樣本 的蛋白質(zhì)組圖譜在至少一種妊娠期糖尿病特有的表達特征上不同于所述參照樣本，則可確 定所述受試者不具有妊娠期糖尿病。相反，如果所述測試樣本在至少一種妊娠期糖尿病特 有的表達特征上與所述妊娠期糖尿病參照樣本沒有不同，則可確定所述受試者具有妊娠期 糖尿病。一些實施方案可使用一種以上的參照樣本，例如正常參照樣本和妊娠期糖尿病參 照樣本。因此，所述蛋白質(zhì)組圖譜提供了用于妊娠期糖尿病的診斷標準。用于確定相對于參 照樣本，目的蛋白的豐度是否增加或降低的統(tǒng)計學方法是本領(lǐng)域熟知的，并且如下文所述。
[0028] 在多個實施方案中，可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種方法進行生物液體（例如 全血、唾液或血清）的蛋白質(zhì)組分析。在多個實施方案中，在直接的比較分析中，可以完全 相同的方式處理所述參照樣本和測試樣本，以正確反映蛋白質(zhì)的相對豐度并獲得精確的結(jié) 果。例如，如以上所論述的，在多個實施方案中，可根據(jù)存在于生物樣本中的蛋白質(zhì)的電荷 和分子量通過二維-凝膠電泳將它們分離。例如，首先可使用等電聚焦（一維凝膠電泳）， 例如，使用固定PH梯度（IPG)膠條（其是可商購的），通過蛋白質(zhì)的電荷將所述蛋白質(zhì)進 行分離。在多個實施方案中，所述第二維度可以是SDS-PAGE分析，其中可將所聚焦的IPG 膠條用作樣本。二維凝膠電泳分離后，然后可使用常規(guī)染料（例如考馬斯亮藍或銀染）使 蛋白質(zhì)顯影，并使用已知的技術(shù)和設(shè)備（諸如，例如Bi〇-RadGS800光密度計和TOQUESTtm軟 件）進行成像。
[0029] 在一些實施方案中，然后可將單個斑點從所述凝膠中切下、脫色、并進行胰蛋白酶 消化，從而使得所述肽混合物能夠通過質(zhì)譜（MS)進行分析?；蛘?，在一些實施方案中，可例 如通過毛細管高壓液相色譜（HPLC)分離所述肽，并可通過MS將它們單獨地或混合地進行 分析。如果需要的話，在一些實施方案中，可確定所述肽片段的以及它們從其中衍生的蛋白 質(zhì)的氨基酸序列。盡管有可能對存在于蛋白質(zhì)組圖譜中的所有或一些蛋白質(zhì)進行鑒定和測 序，但這對于所述蛋白質(zhì)組圖譜的診斷用途來說通常不是必需的。
[0030] 如以上所論述的，在多個實施方案中，可基于參照樣本和測試樣本之間的特征相 似性或差異（例如表達特征）對妊娠期糖尿病進行診斷。例如，在多個實施方案中，如果所 述蛋白質(zhì)組圖譜以質(zhì)譜的形式存在，則所述表達特征可以是性質(zhì)上或數(shù)量上不同于相應(yīng)正 常樣本的質(zhì)譜的峰或峰的組合。因此，質(zhì)譜中新峰的出現(xiàn)或新峰的組合的出現(xiàn)，或在現(xiàn)有峰 或現(xiàn)有峰的組合的振幅或形狀上的任何統(tǒng)計學上的顯著變化，或者質(zhì)譜中現(xiàn)有峰的消失都 可被認為是表達特征。
[0031] 用于比較蛋白質(zhì)組圖譜的統(tǒng)計學方法是本領(lǐng)域熟知的。例如，在使用質(zhì)譜的多個 實施方案中，可通過在沿著譜圖的水平軸的關(guān)鍵質(zhì)量/電荷（M/Z)的位置處的峰幅值定義 蛋白質(zhì)組圖譜。因此，在多個實施方案中，可例如通過由在給定的M/Z值處的光譜振幅的組 合形成的圖譜來表征特征性的蛋白質(zhì)組圖譜。在多個實施方案中，可通過使用合適的算法 將測試樣本的蛋白組圖譜與參照樣本的蛋白質(zhì)組圖譜進行匹配來確定是否存在特征性表 達特征或兩個圖譜的實質(zhì)同一性。
[0032] 其他實施方案可使用蛋白質(zhì)陣列來檢測蛋白質(zhì)表達水平，能夠?qū)崿F(xiàn)高通量分析。 蛋白質(zhì)陣列是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并且通常通過使用任何本領(lǐng)域熟知的各種共價和非 共價的連接化學作用將蛋白質(zhì)（例如，特異性針對目的蛋白的抗體）固定在固體表面（例 如玻璃、硅膠、硝化纖維素、或PVDF)來形成?？墒褂脕碜詢煞N不同來源（例如，正常和測試 樣本）的熒光標記的蛋白質(zhì)來探測所述陣列，熒光強度可反映靶蛋白的表達水平。
[0033] 多個實施方案還可使用任意的用于蛋白表達水平定量的多種免疫測定形式。一般 而言，免疫測定可以是均相的或非均相的。例如，在多個實施方案中，可使用酶聯(lián)免疫吸附 測定（ELISA)來對蛋白質(zhì)表達進行定量。在一個實施例中，在"夾心"測定中，固體表面可 涂有固相抗體，并且可使所述測試樣品與所結(jié)合的抗體反應(yīng)。然后，可將任何未結(jié)合的抗原 (例如，目的蛋白）洗掉，隨后已知量的酶標記的抗體可進行反應(yīng)。然后可將所述標記物作 為對所述樣本中存在的目的蛋白含量的直接量度進行定量。
[0034] 在一些實施方案中，可將ELISA作為競爭性測定使用。例如，在競爭性測定中，可 將含所述目的蛋白的測試樣本與精確量的酶標記的目的蛋白混合，并且兩者可競爭結(jié)合連 接到固體表面上的抗體。在多個實施方案中，可在洗掉過量游離的酶標記的蛋白質(zhì)后加入 所述酶的底物，從酶-底物相互作用中產(chǎn)生的顏色強度可作為測試樣本中目的蛋白的量的 量度。
[0035] 多個其他實施方案可使用酶倍增免疫測定技術(shù)（EMIT)對目的蛋白進行定量，其 可包括測試樣本、酶標記的目的蛋白分子、特異性針對目的蛋白的抗體、和特異性酶顯色底 物。在多個實施方案中，可將過量的特異性抗體加入到所述測試樣本中，然后所述目的蛋白 可結(jié)合到所述抗體上。在多個實施方案中，然后可將一定量的相應(yīng)的酶標記的蛋白質(zhì)加入 到該混合物中，未被測試樣本中的目的蛋白占據(jù)的抗體結(jié)合位點會被所述酶標記的蛋白質(zhì) 分子占據(jù)。因此，在多個實施方案中，酶活性可能會降低，這是因為只有游離的酶標記的蛋 白能夠作用于底物，并且轉(zhuǎn)化的底物的量可反映混合物中剩下的游離酶的量。在多個實施 方案中，所述樣本中高濃度的目的蛋白可導致更高的吸光度讀數(shù)。
[0036] 多個其他實施方案包括用于對測試樣本中的目的蛋白進行定量的免疫測定試劑 盒。在多個實施方案中，這些試劑盒可包括：在單獨的容器中的對每一種目的蛋白具有結(jié)合 特異性的單克隆抗體，和，任選地，抗體免疫球蛋白，特別是經(jīng)標記的抗抗體免疫球蛋白。
[0037] 本文還公開了用于所述公開方法的捕獲裝置和樣品收集試劑盒。在一些實施方 案中，可使用樣品捕獲裝置一如可使得能夠?qū)煞N或多種目的蛋白進行定量的側(cè)流裝置 (例如，側(cè)流檢測帶）一進行所述公開方法?？色@得多種不同構(gòu)型的側(cè)流裝置，但是，在一 個實施例中，檢測帶可包括從上游的樣品應(yīng)用區(qū)到檢測位點的流動路徑，例如從樣本應(yīng)用 區(qū)通過移動區(qū)到捕獲區(qū)。在多個實施方案中，所述移動區(qū)可包含可與目的蛋白相互作用的 可移動的標志物，所述捕獲區(qū)可包含用于檢測和/或定量的結(jié)合目的蛋白的試劑。在其他 實施方案中，示例性的樣品收集試劑盒可包含吸收介質(zhì)如濾紙，所述吸收介質(zhì)可包含用于 將測試樣品放置在所述介質(zhì)上的標記。這類試劑盒還可包括用于從受試者中獲得血液樣本 的穿刺裝置，以及任選的，用于將所述測試樣品發(fā)送給醫(yī)師或?qū)嶒炇乙赃M行分析的郵件程 序。例如，可在標準產(chǎn)檢過程中（例如，在12周、16周、20周或24周就診時）使用這些樣 品收集試劑盒，和/或可在獲得用于其他標準產(chǎn)前測試的血液時進行樣品收集。
[0038] 提供如下的實施例僅為了說明目的，不應(yīng)被解釋為以任何方式的限制。
[0039] 實施例
[0040] 實施例1:受試者選擇
[0041] 連續(xù)共1463名處在妊娠中間3個月和最后3個月的婦女進行了 75克OGTT及隨 后2小時血漿葡萄糖測定。2小時血漿葡萄糖>7. 8mmol/L則診斷為GDM，這與WHO標準一 致。將所有剩下的婦女都歸類為非糖尿病患者。
[0042] 從所述人群中隨機選取14名非糖尿患者和15名GDM參與者。表1中描述了參與 者的臨床特征。
[0043] 表1.根據(jù)GDM狀態(tài)的參與者特征
[0044]

【權(quán)利要求】
1. 用于確定受試者是否患有妊娠期糖尿病的方法，所述方法 包括： 確定來自所述受試者的測試樣本的蛋白質(zhì)組圖譜是否包括至少一種妊娠期糖尿病特 有的表達特征，其中所述蛋白質(zhì)組圖譜包含糖基化的纖連蛋白和糖基化的PSG的表達信 肩、。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述糖基化的纖連蛋白和糖基化的PSG的表達信息包含纖 連蛋白-SNA或纖連蛋白-抗體復(fù)合物、和PSG-AAL或PSG-抗體復(fù)合物的水平的信息。
3. 權(quán)利要求2的方法，其中所述蛋白質(zhì)組圖譜還包括以下的表達信息： 脂連蛋白； 性激素結(jié)合球蛋白（SHBG); C-反應(yīng)蛋白（CRP); 人絨毛膜促性腺激素（hCG)與胎盤催乳素的比例；或者 其組合。
4. 權(quán)利要求2的方法，其中所述蛋白質(zhì)組圖譜還包含以下中的兩種或多種的表達信 息： 脂連蛋白； 性激素結(jié)合球蛋白（SHBG); C-反應(yīng)蛋白（CRP);和 人絨毛膜促性腺激素（hCG)與胎盤催乳素的比例。
5. 權(quán)利要求2的方法，其中所述蛋白質(zhì)組圖譜還包含以下中的三種或多種的表達信 息： 脂連蛋白； 性激素結(jié)合球蛋白（SHBG); C-反應(yīng)蛋白（CRP);和 人絨毛膜促性腺激素（hCG)與胎盤催乳素的比例。
6. 權(quán)利要求2的方法，其中所述蛋白質(zhì)組圖譜還包含以下的表達信息： 脂連蛋白； 性激素結(jié)合球蛋白（SHBG); C-反應(yīng)蛋白（CRP);和 人絨毛膜促性腺激素（hCG)與胎盤催乳素的比例。
7. 權(quán)利要求1的方法，其中確定所述測試樣本的蛋白質(zhì)組圖譜是否包括至少一種妊娠 期糖尿病特有的表達特征包括將所述測試樣本蛋白質(zhì)圖譜與參照蛋白質(zhì)圖譜進行比較。
8. 權(quán)利要求7的方法，其中所述參照樣本是非糖尿病對照參照樣本。
9. 權(quán)利要求8的方法，其中所述至少一種妊娠期糖尿病特有的表達特征包含相對于所 述參照樣本，纖連蛋白-SNA和PSG-AAL的水平的增加。
10. 權(quán)利要求9的方法，其中所述至少一種妊娠期糖尿病特有的表達特征還包含相對 于所述參照樣本，以下表達的增加： C-反應(yīng)蛋白（CRP);和 人絨毛膜促性腺激素（hCG)與胎盤催乳素的比例；或 其組合。
11. 權(quán)利要求9的方法，其中所述至少一種妊娠期糖尿病特有的表達特征還包含相對 于所述參照樣本，以下表達的增加： 脂連蛋白； 性激素結(jié)合球蛋白（SHBG);或 其組合。
12. 權(quán)利要求10的方法，其中所述至少一種妊娠期糖尿病特有的表達特征還包含相對 于所述參照樣本，C-反應(yīng)蛋白（CRP)和人絨毛膜促性腺激素（hCG)與胎盤催乳素的比例的 表達的增加，以及相對于所述參照樣本，脂連蛋白和性激素結(jié)合球蛋白（SHBG)的表達的降 低。
13. 權(quán)利要求12的方法，其中相對于所述參照樣本的所述增加或降低為至少10%。 14?權(quán)力要求1的方法，其中： 如果確定所述測試樣本的蛋白質(zhì)組圖譜包含至少一種妊娠期糖尿病特有的表達特征， 則確定所述受試者具有妊娠期糖尿?。缓? 如果確定所述測試樣本的蛋白質(zhì)組圖譜不包含至少一種妊娠期糖尿病特有的表達特 征，則確定所述受試者不具有妊娠期糖尿病。
15. 權(quán)利要求1的方法，其中所述參照樣本是妊娠期糖尿病參照樣本。
16. 權(quán)利要求5的方法，其中： 如果確定所述測試樣本的蛋白質(zhì)組圖譜與所述參照樣本共有至少一種妊娠期糖尿病 特有的表達特征，則確定所述受試者具有妊娠期糖尿??；和 如果確定所述測試樣本的蛋白質(zhì)組圖譜不與所述參照樣本共有至少一種妊娠期糖尿 病特有的表達特征，則確定所述受試者不具有妊娠期糖尿病。
17. 權(quán)利要求1的方法，其中所述測試樣本包含全血、血清或唾液。
18. 權(quán)利要求1的方法，其中使用ELISA測定確定所述蛋白質(zhì)圖譜。
19. 權(quán)利要求1的方法，其中使用側(cè)流裝置確定所述蛋白質(zhì)圖譜。
20. 用于在受試者中篩查妊娠期糖尿病的試劑盒，所述試劑盒包括抗纖連蛋白-SNA抗 體或抗纖連蛋白抗體，和抗PSG-AAL抗體或抗PSG抗體。
21. 權(quán)利要求20的試劑盒，所述試劑盒還包括： 抗脂連蛋白抗體； 抗性激素結(jié)合球蛋白（SHBG)抗體； 抗C-反應(yīng)蛋白（CRP)抗體； 抗人絨毛膜促性腺激素（hCG)抗體； 抗胎盤催乳素抗體；或 其組合。
22. 權(quán)利要求20的試劑盒，所述試劑盒還包括以下中的至少兩種： 抗脂連蛋白抗體； 抗性激素結(jié)合球蛋白（SHBG)抗體； 抗C-反應(yīng)蛋白（CRP)抗體； 抗人絨毛膜促性腺激素（hCG)抗體；和 抗胎盤催乳素抗體。
23. 權(quán)利要求20的試劑盒，所述試劑盒還包括以下中的至少三種： 脂連蛋白抗體； 抗性激素結(jié)合球蛋白（SHBG)抗體； 抗C-反應(yīng)蛋白（CRP)抗體； 抗人絨毛膜促性腺激素（hCG)抗體；和 抗胎盤催乳素抗體。
24. 權(quán)利要求20的試劑盒，所述試劑盒還包括： 抗脂連蛋白抗體； 抗性激素結(jié)合球蛋白（SHBG)抗體； 抗C-反應(yīng)蛋白（CRP)抗體； 抗人絨毛膜促性腺激素（hCG)抗體；和 抗胎盤催乳素抗體。
【文檔編號】G01N33/68GK104380112SQ201380031224
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2013年3月11日 優(yōu)先權(quán)日:2012年4月13日
【發(fā)明者】斯瑞尼瓦薩·R·納加拉 申請人:迪亞貝托米克斯有限公司