酶聯(lián)免疫斑點計生四項聯(lián)合試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實用新型涉及一種酶聯(lián)免疫斑點計生四項聯(lián)合試劑盒，設有載體板、巨細胞病毒、弓形蟲、風疹病毒、單純皰疹病毒抗體或抗原檢測線或點、對照線或點和硝酸纖維素膜等；硝酸纖維素膜粘貼在載體板的表面，巨細胞病毒、弓形蟲、風疹病毒、單純皰疹病毒抗體或抗原檢測點、對照點自上而下依次設在硝酸纖維素膜上；在巨細胞病毒、弓形蟲、風疹病毒、單純皰疹病毒抗體或抗原檢測點處分別包被對應的抗原或抗體；在對照線或點處包被巨細胞病毒、弓形蟲、風疹病毒、單純皰疹病毒抗原或含巨細胞病毒、弓形蟲、風疹病毒、單純皰疹病毒抗體的病人陽性血清。本實用新型一次性快速檢測計生四項、操作簡單，成本低、設計新穎，易于觀察并做出診斷。
【專利說明】酶聯(lián)免疫斑點計生四項聯(lián)合試劑盒
【技術領域】:
[0001]本實用新型涉及一種酶聯(lián)免疫斑點技術一次性檢測計生四種病毒(種)的試劑盒，屬于醫(yī)療診斷計生四項聯(lián)合試劑盒檢測【技術領域】。
【背景技術】:
[0002]四項計生檢測是針對育齡婦女在懷孕早期開展的旨在預防新生兒出生缺陷的一項重要的檢測措施，它對于提高出生人口素質(zhì)，減少新生兒出生風險具有重要的意義，已被醫(yī)療機構和孕產(chǎn)婦廣泛接受和應用。四項計生檢測包括風疹病毒，巨細胞病毒、弓形體和單純皰疹病毒。通過四項計生檢測可檢測出孕婦和胎兒是否存在感染的情況，并有針對性地治療或終止妊娠。
[0003]目前應用免疫斑點法來檢測診斷這四項疾病時，每項疾病的檢測單獨操作完成，各種試劑均為分散放置，沒有特制的斑點反應板，所以檢測過程復雜、時間長、攜帶及操作不方便。如:化學反應法及Elisa法均一次一種地操作及分別使用各自的試劑盒。
【發(fā)明內(nèi)容】
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[0004]本實用新型的目的在于克服現(xiàn)有技術的缺點，把計生四項即四種不同的病種放到一個反應板上，一次性操作即可得出四種疾病的診斷結(jié)果，減少了頻繁的操作程序，節(jié)約人力、物力、節(jié)省時間，易于觀察并做出診斷。
[0005]為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本實用新型設有載體板、巨細胞病毒(CMV)抗體(抗原)檢測線(點)、弓形蟲(TO)抗體(抗原)檢測線(點)、風疹病毒(RV)抗體(抗原)檢測線(點)、單純皰疹病毒(HSV-1)抗體(抗原)檢測線(點)、對照線(點)、硝酸纖維素膜(NC膜)、溫育槽；硝酸纖維素膜粘貼在載體板的表面，巨細胞病毒抗體(抗原)檢測線(點)、弓形蟲抗體(抗原)檢測線(點)、風疹病毒抗體(抗原)檢測線(點)、單純皰疹病毒抗體(抗原)檢測線(點)、對照線(點)自上而下依次設在硝酸纖維素膜上，并在各檢測線(點)和對照線(點)四周制有溫育槽；在巨細胞病毒抗體(抗原)檢測線(點)、弓形蟲抗體(抗原)檢測線(點)、風疹病毒抗體(抗原)檢測線(點)、單純皰疹病毒抗體(抗原)檢測線(點)處分別包被對應的抗原(抗體);在對照線或?qū)φ拯c處自左至右分別包被巨細胞病毒抗原、弓形蟲抗原、風疹病毒抗原、單純皰疹病毒抗原或分別包被含巨細胞病毒抗體、弓形蟲抗體、風疹病毒抗體、單純皰疹病毒抗體的病人陽性血清。
[0006]本實用新型的制備方法如下:
[0007]1、抗巨細胞病毒抗體、抗弓形蟲抗體、抗風疹病毒抗體、抗單純皰疹病毒抗體或巨細胞病毒抗體(抗原)、弓形蟲抗體(抗原)、風疹病毒抗體(抗原)、單純皰疹病毒抗體(抗原)市售購買；
[0008]2、標準陽性血清的獲得:
[0009]收集風疹病毒、巨細胞病毒、弓形體和單純皰疹病毒病人的陽性血清，得到陽性參照血清，定為標準陽性血清，_30°C凍存；[0010]陽性病人的血清必須經(jīng)過Elisa實驗，結(jié)果為陽性(顯色明顯，陽性OD值/陰性OD值≤2.1);經(jīng)過熒光免疫實驗(IFA)，結(jié)果為陽性結(jié)果。
[0011]3、硝酸纖維素膜的點樣:巨細胞病毒抗體(抗原)檢測線(點)、弓形蟲抗體(抗原)檢測線(點)、風疹病毒抗體(抗原)檢測線(點)、單純皰疹病毒抗體(抗原)檢測線(點)和對照線(點)自上而下依次設在硝酸纖維素膜上，并在各檢測線(點)和對照線(點)四周制有溫育槽；在硝酸纖維素膜的各病毒(種)檢測線(點)上分別包被巨細胞病毒抗原(抗體)、弓形蟲抗原(抗體)、風疹病毒抗原(抗體)、單純皰疹病毒抗原(抗體)；在各對照線(點)上自左至右分別包被巨細胞病毒抗原、弓形蟲抗原、風疹病毒抗原、單純皰疹病毒抗原或自左至右分別包被含巨細胞病毒抗體、弓形蟲抗體、風疹病毒抗體、單純皰疹病毒抗體的病人陽性血清；晾干;
[0012]4、抗巨細胞病毒抗體、抗弓形蟲抗體、抗風疹病毒抗體、抗單純皰疹病毒抗體或巨細胞病毒抗體、弓形蟲抗體、風疹病毒抗體、單純皰疹病毒抗體的堿性磷酸酶標記或辣根過氧化物酶標記；
[0013]5、制備免疫斑點試劑盒
[0014]用切條機將載體板切成條狀，將硝酸纖維素膜粘貼在載體板表面；和用酶標記的抗巨細胞病毒抗體、抗弓形蟲抗體、抗風疹病毒抗體、抗單純皰疹病毒抗體或巨細胞病毒抗體、弓形蟲抗體、風疹病毒抗體、單純皰疹病毒抗體及堿性磷酸酶底物或辣根過氧化物酶底物四甲基聯(lián)苯胺TMB共同組成計生四項免疫斑點試劑盒；所述堿性磷酸酶底物是硝基藍四唑和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽BCIP比例為1:49的混合物。
[0015]本實用新型一次性快速檢測計生四項、操作簡單，成本低、設計新穎，易被使用者喜愛，更便于普及使用。
【專利附圖】
【附圖說明】:
[0016]1、圖1為點狀酶聯(lián)免疫斑點計生四項聯(lián)合試劑盒結(jié)構示意圖；
[0017]2、圖2為線狀酶聯(lián)免疫斑點計生四項聯(lián)合試劑盒結(jié)構示意圖。
【具體實施方式】:
[0018]下面通過附圖和具體實施例對本實用新型做進一步闡述。
[0019]實施例1、
[0020]如圖1所示，本實用新型設有載體板1、硝酸纖維素膜2粘貼在載體板I的表面，巨細胞病毒抗體(抗原)檢測點3、弓形蟲抗體(抗原)檢測點4、風疹病毒抗體(抗原)檢測點5、單純皰疹病毒抗體(抗原)檢測點6、對照點7自上而下依次設在硝酸纖維素膜2上，并在各檢測線點和對照點四周制有溫育槽8 ;在巨細胞病毒抗體(抗原)檢測點3、弓形蟲抗體(抗原)檢測點4、風疹病毒抗體(抗原)檢測點5、單純皰疹病毒抗體(抗原)檢測點6處分別包被對應的抗原(抗體);在對照點7處自左至右制有四個對照點9-12，分別包被巨細胞病毒抗原、弓形蟲抗原、風疹病毒抗原、單純皰疹病毒抗原或包被含巨細胞病毒抗體、弓形蟲抗體、風疹病毒抗體、單純皰疹病毒抗體的病人陽性血清。
[0021]如圖2所示，本實用新型設有載體板1、硝酸纖維素膜2粘貼在載體板I的表面，巨細胞病毒抗體(抗原)檢測線3、弓形蟲抗體(抗原)檢測線4、風疹病毒抗體(抗原)檢測線5、單純皰疹病毒抗體(抗原)檢測線6、對照線7自上而下依次設在硝酸纖維素膜2上，并在各檢測線和對照線四周制有溫育槽8 ;在巨細胞病毒抗體(抗原)檢測線3、弓形蟲抗體(抗原)檢測線4、風疹病毒抗體(抗原)檢測線5、單純皰疹病毒抗體(抗原)檢測線6處分別包被對應的抗原(抗體);在對照線7處自左至右制有四條對照線9-12，分別包被巨細胞病毒抗原、弓形蟲抗原、風疹病毒抗原、單純皰疹病毒抗原或包被含巨細胞病毒抗體、弓形蟲抗體、風疹病毒抗體、單純皰疹病毒抗體的病人陽性血清。
[0022]酶聯(lián)免疫斑點計生四項聯(lián)合試劑盒的制備:
[0023]1、抗巨細胞病毒抗體、抗弓形蟲抗體、抗風疹病毒抗體、抗單純皰疹病毒抗體或巨細胞病毒抗體(抗原)、弓形蟲抗體(抗原)、風疹病毒抗體(抗原)、單純皰疹病毒抗體(抗原)市售購買；
[0024]2、標準陽性血清的制備:
[0025]各收集50份風疹病毒、巨細胞病毒、弓形體和單純皰疹病毒陽性病人的血清，混合，得到陽性參照血清，定為標準陽性血清，_30°C凍存；
[0026]陽性病人的血清必須經(jīng)過Elisa實驗，結(jié)果為陽性(顯色明顯，陽性OD值/陰性OD值≤2.1);經(jīng)過熒光免疫實驗(IFA)，結(jié)果為陽性結(jié)果。
[0027]3、硝酸纖維素膜2的點樣:巨細胞病毒抗體(抗原)檢測線(點)3、弓形蟲抗體(抗原)檢測線(點)4、風疹病毒抗體(抗原)檢測線(點)5、單純皰疹病毒抗體(抗原)檢測線(點)6和對照線(點)7自上而下依次設在硝酸纖維素膜2上，并在各檢測線(點)和對照線(點)四周制有溫育槽；在硝酸纖維素膜2的各病毒(種)檢測線(點)上分別包被對應的抗原(抗體);在對照線(點)7處自左至右制有的四個對照線(點)9-12上分別包被巨細胞病毒抗原、弓形蟲抗原、風疹病毒抗原、單純皰疹病毒抗原或包被含巨細胞病毒抗體、弓形蟲抗體、風疹病毒抗體、單純皰疹病毒抗體的病人陽性血清，晾干；
[0028]4、抗巨細胞病毒抗體、抗弓形蟲抗體、抗風疹病毒抗體、抗單純皰疹病毒抗體或巨細胞病毒抗體、弓形蟲抗體、風疹病毒抗體、單純皰疹病毒抗體的堿性磷酸酶標記或辣根過氧化物酶標記；
[0029]5、制備免疫斑點試劑盒
[0030]用切條機將載體板切成條狀，將硝酸纖維素膜2粘貼在載體板I表面；和用酶標記的抗巨細胞病毒抗體、抗弓形蟲抗體、抗風疹病毒抗體、抗單純皰疹病毒抗體或巨細胞病毒抗體、弓形蟲抗體、風疹病毒抗體、單純皰疹病毒抗體及堿性磷酸酶底物(硝基藍四唑和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽比例為1:49的混合物)或辣根過氧化物酶底物(四甲基聯(lián)苯胺)共同組成計生四項免疫斑點試劑盒。
[0031]實施例2、本實用新型酶聯(lián)免疫斑點計生四項聯(lián)合試劑盒的使用方法
[0032]1、待測標本采用0.01mol/L PBS緩沖液進行1:50稀釋。
[0033]2、取出載體板，吸取待測標本0.2mL-0.3mL，加入到溫育槽內(nèi)，于室溫(18-25) V下溫育30min。
[0034]3、吸去溫育槽內(nèi)液體，用2mL0.01mol/L PBS緩沖液沖洗各溫育槽3次，每次5min。
[0035]4、加酶結(jié)合物:在溫育槽內(nèi)分別加入0.2mL-0.3mL酶結(jié)合物(采用堿性磷酸酶標記的二抗(相應的抗體)或辣根過氧化物酶標記的二抗(相應的抗體))，于18-25°C下溫育30mino[0036]5、吸取槽內(nèi)液體，用2mL0.01mol/L PBS緩沖液沖洗各溫育槽3次，每次5min。
[0037]6、底物溫育:在溫育槽內(nèi)分別加入0.2mL-0.3mL底物液:硝基藍四唑(NBT)和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽(BCIP)比例為1:49的混合物或四甲基聯(lián)苯胺，于室溫(18-25) °C下溫育 IOmin0
[0038]7、終止:吸取槽內(nèi)液體，用蒸餾水清洗各溫育槽3次，每次Imin。
[0039]結(jié)果判定:將各硝酸纖維素膜風干后判定結(jié)果，任一條檢測線出現(xiàn)黑色或藍色特異性條帶，就可判定為相應病毒的陽性。
【權利要求】
1.一種酶聯(lián)免疫斑點計生四項聯(lián)合試劑盒，其特征在于設有載體板、巨細胞病毒抗體或抗原檢測線或檢測點、弓形蟲抗體或抗原檢測線或檢測點、風疹病毒抗體或抗原檢測線或檢測點、單純皰疹病毒抗體或抗原檢測線或檢測點、對照線或?qū)φ拯c、硝酸纖維素膜、溫育槽；硝酸纖維膜粘貼在載體板的表面，巨細胞病毒抗體或抗原檢測線或檢測點、弓形蟲抗體或抗原檢測線或檢測點、風疹病毒抗體或抗原檢測線或檢測點、單純皰疹病毒抗體或抗原檢測線或檢測點、對照線或?qū)φ拯c自上而下依次設在硝酸纖維膜上，并在各檢測線或檢測點和對照線或?qū)φ拯c四周制有溫育槽；在巨細胞病毒抗體或抗原檢測線或檢測點、弓形蟲抗體或抗原檢測線或檢測點、風疹病毒抗體或抗原檢測線或檢測點、單純皰疹病毒抗體或抗原檢測線或檢測點處分別包被對應的抗原或抗體；在對照線或?qū)φ拯c處自左至右分別包被巨細胞病毒抗原、弓形蟲抗原、風疹病毒抗原、單純皰疹病毒抗原或分別包被含巨細胞病毒抗體、弓形蟲抗體、風疹病毒抗體、單純皰疹病毒抗體的病人陽性血清。
【文檔編號】G01N33/569GK203385727SQ201320512939
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2013年8月22日 優(yōu)先權日:2013年8月22日
【發(fā)明者】蘇冬梅, 張述智, 夏偉 申請人:青島中仁藥業(yè)有限公司