專利名稱：可樂定免疫層析快速檢測(cè)試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)試紙條，尤其涉及一種可樂定免疫層析快速檢測(cè)試紙條，應(yīng)用免疫學(xué)原理，通過膠體金的免疫反應(yīng)再借助免疫層析技術(shù)達(dá)到檢測(cè)可樂定目的，應(yīng)用于快速檢測(cè)豬尿、飼料和豬肉及制品中的可樂定。
背景技術(shù)：
可樂定在臨床上主要用于治療中、重度高血壓，患有青光眼的高血壓；也用于偏頭痛、嚴(yán)重痛經(jīng)；絕經(jīng)潮熱和青光眼?？蓸范ㄊ悄I上腺素能α 2受體激動(dòng)劑，是一種藥效較強(qiáng)的老降壓藥，但毒副作用較大，現(xiàn)在臨床較少使用?？蓸范ǔ擞米髋R床要用之外，還可以提高動(dòng)物生長(zhǎng)和改善胴體品質(zhì)?？蓸范榭诜┬?，具有使用方便、價(jià)格低廉，豬吃了含有可樂定的飼料后可以增加體重，增加瘦肉率和減少肥肉率，但不影響骨骼和性成熟等。含有可樂定的豬肉經(jīng)過食物鏈傳遞到人體，累積一定量，就可導(dǎo)致休克，心率緩慢，造成呼吸循環(huán)衰竭死亡。2009年我國(guó)北京發(fā)生了一起嚴(yán)重的群體性可樂定中毒事件。檢測(cè)飼料、豬尿和豬肉中殘留的可樂定的常用方法是液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。該方法靈敏度較高，但由于其儀器昂貴，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，操作程序較繁瑣，因此適用性不強(qiáng)。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題是提供一種可樂定免疫層析快速檢測(cè)試紙條，用來檢測(cè)飼料、豬尿和豬肉中可樂定的殘留情況，敏感度高、特異性強(qiáng)，且不需要專業(yè)設(shè)備，操作簡(jiǎn)單快速，10分鐘可完成檢測(cè)，適合基層養(yǎng)殖和生產(chǎn)加工現(xiàn)場(chǎng)的普及使用，該試紙條具有操作簡(jiǎn)便、測(cè)試快捷、判斷結(jié)果直觀、價(jià)格低廉、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。為解決上述技術(shù)問題，本實(shí)用新型提供一種可樂定免疫層析快速檢測(cè)試紙條，所述試紙條包括樣品墊、含有抗可樂定單克隆抗體蛋白印跡的金標(biāo)記物釋放墊、層析膜、吸水紙、PVC粘板；在PVC粘板的起始端至末端依次疊合有樣品墊,金標(biāo)記物釋放墊，層析膜以及吸水紙；層析膜上設(shè)檢測(cè)線和質(zhì)控線；所述樣品墊和吸水紙上均設(shè)有塑料薄膜標(biāo)簽。進(jìn)一步地，所述層析膜粘貼在PVC粘板中間。進(jìn)一步地，所述樣品墊上粘貼印制MAX標(biāo)簽的塑料薄膜保護(hù)標(biāo)簽；所述吸水紙上粘貼印制產(chǎn)品名稱標(biāo)簽的塑料薄膜標(biāo)簽。進(jìn)一步地，所述樣品墊疊加于金標(biāo)記物釋放墊之上，疊加寬度為1mm。進(jìn)一步地，所述層析膜上檢測(cè)線位置為可樂定偶聯(lián)蛋白抗原的印記，質(zhì)控線位置為羊抗兔IgG抗體蛋白印記。進(jìn)一步地，在層析膜的起始端疊加金標(biāo)記物釋放墊，在層析膜的末端疊加吸水紙。 本實(shí)用新型是通過以下技術(shù)方案和工作原理實(shí)現(xiàn)的?？箍蓸范贵w標(biāo)記在膠體金指示劑顆粒上，標(biāo)記物附著在玻璃纖維上；將可樂定偶聯(lián)蛋白抗原印制并固定層析膜的檢測(cè)線(T)位置上，層析膜粘貼在PVC粘板上，層析膜始端依次粘貼金標(biāo)記物釋放墊以進(jìn)行金標(biāo)抗體的釋放，在粘貼樣品墊以處理樣品，層析膜末端粘貼吸水紙助層析完成。樣品墊和吸水紙上分別粘貼塑料薄膜以保護(hù)和鑒別。檢測(cè)時(shí)，由于被測(cè)樣本中可樂定和復(fù)溶的金標(biāo)記抗體發(fā)生了免疫反應(yīng)，此時(shí)混合液層析到檢測(cè)線位置上時(shí)印制抗原無法競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到金標(biāo)記抗體，檢測(cè)線上沒有出現(xiàn)反應(yīng)線，即陽性，相反如被測(cè)樣本沒有可樂定，則金標(biāo)記的抗體層析到檢測(cè)區(qū)時(shí)和印制在膜上的偶聯(lián)抗原反應(yīng)結(jié)合形成紫紅線反應(yīng)線，即陰性。為了證明試劑有效性和易判讀，在質(zhì)控線(C)位置印制羊抗兔IgG，作為質(zhì)控反應(yīng)線，無論樣品中是否有可樂定，質(zhì)控線C始終出現(xiàn)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型的有益效果在于:本實(shí)用新型的可樂定免疫層析快速檢測(cè)試紙條與儀器檢測(cè)同樣具有高靈敏度和高特異性，但不需要專業(yè)設(shè)備，操作簡(jiǎn)單快捷，反應(yīng)結(jié)果直觀易于判斷，10分鐘可完成檢測(cè)，檢測(cè)成本低廉，適合飼料廠、生豬養(yǎng)殖、豬肉制品加工行業(yè)的普及使用。用免疫層析法生產(chǎn)可樂定快速檢測(cè)試紙條，用來檢測(cè)飼料、豬尿和豬肉中可樂定的殘留情況，是普通篩查的形勢(shì)要求的。本方法具有操作簡(jiǎn)便、測(cè)試快捷、反應(yīng)靈敏度高、價(jià)格低廉、特異性強(qiáng)、假陽性、假陰性率低的特點(diǎn)，無需特殊儀器及專業(yè)技術(shù)人員，檢測(cè)結(jié)果易于觀察，檢測(cè)費(fèi)用低廉，貯存和運(yùn)輸方便等優(yōu)點(diǎn)。十分適合各類檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)及生產(chǎn)企業(yè)在現(xiàn)場(chǎng)快速篩查可樂定的違法添加情況。

圖1A是本實(shí)用新型的實(shí)施例試紙條的側(cè)面結(jié)構(gòu)示意圖；圖1B是本實(shí)用新型的實(shí)施例試紙條的正面結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是本實(shí)用新型的實(shí)施例試紙條的檢測(cè)結(jié)果示意圖；其中，圖2A代表檢測(cè)結(jié)果為陰性的示意圖；圖2B代表檢測(cè)結(jié)果為陽性的示意圖；圖2C代表檢測(cè)結(jié)果為無效的示意圖。圖中附圖標(biāo)記說明如下:1.PVC粘板、2.層析膜、3.金標(biāo)記物釋放墊、4.檢測(cè)線、5.質(zhì)控線、6.樣品墊、7.吸
水紙、8.塑料薄膜標(biāo)簽、9.塑料薄膜保護(hù)標(biāo)簽。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)說明。實(shí)施例可樂定免疫層析快速檢測(cè)試紙條如圖1A和圖1B所示，將層析膜2粘貼在PVC粘板I中間，在層析膜2上印制檢測(cè)線4和質(zhì)控線5，層析膜2的起始端粘貼金標(biāo)記物釋放墊3 (金標(biāo)記物釋放墊3的一端與層析膜2的起始端粘貼，另一端與樣品墊6粘貼)，層析膜2的末端粘貼吸水紙7。即在PVC粘板I的起始端至末端依次疊合有樣品墊6，金標(biāo)記物釋放墊3，層析膜2以及吸水紙7 ;樣品墊6上粘貼印制MAX標(biāo)簽的塑料薄膜保護(hù)標(biāo)簽9以保護(hù)和加固試紙條。吸水紙7上粘貼印制產(chǎn)品名稱的塑料薄膜標(biāo)簽8以識(shí)別和加固試紙條。本實(shí)用新型可樂定免疫層析快速檢測(cè)試紙條的制備及檢測(cè)方法，包括如下步驟:1.將一定濃度的可樂定偶聯(lián)結(jié)合物(即可樂定蛋白偶聯(lián)抗原)和羊抗兔IgG分別印制于硝酸纖維素膜(即層析膜2)上的檢測(cè)線T (即檢測(cè)線4)和質(zhì)控線C (即質(zhì)控線5)的位置。具體為將可樂定單克隆抗體稀釋至濃度lmg/ml，將羊抗鼠IgG稀釋至濃度2mg/ml，將兩種溶液印制線于層 析膜上的檢測(cè)線和質(zhì)控線位置，形成檢測(cè)線T(即檢測(cè)線4和質(zhì)控線C (即質(zhì)控線5)。2.金標(biāo)記物釋放墊的制備用檸檬酸三鈉還原四氯化金(即氯金酸)制備粒徑40 60nm膠體金，調(diào)節(jié)pH后每毫升膠體金和12 μ g抗可樂定抗體混合進(jìn)行標(biāo)記并在220nm下測(cè)0D。將OD稀釋到3，鋪于玻璃纖維吸收烘干，玻璃纖維上即附著金標(biāo)記抗可樂定抗體顆粒。3.將包被完成的硝酸纖維素膜(層析膜2)、樣品墊6、金標(biāo)記物釋放墊3、吸水紙7一起依次粘貼在PVC粘板I上。并切成4mm的試紙條。4.將樣品端和吸水紙端分別用塑料薄膜粘貼以識(shí)別和加固試紙條。樣品墊6上粘貼印制MAX標(biāo)簽的塑料薄膜保護(hù)標(biāo)簽9以保護(hù)和加固試紙條。吸水紙7上粘貼印制產(chǎn)品名稱的塑料薄膜標(biāo)簽8以識(shí)別和加固試紙條。5.檢測(cè)步驟:a.固體樣本:稱取一定量的固體樣本，研碎，用稀釋液進(jìn)行溶解，離心取上清液，即得待檢樣品。豬尿樣本:直接取豬尿作為檢測(cè)樣本,若渾濁,則離心取上清液。b.取出試紙條，將試紙條插于待檢溶液中，溶液面不能超過MAX位置。c.5分鐘內(nèi)讀取結(jié)果。d.結(jié)果判定:圖2中，陽性結(jié)果為質(zhì)控線C位置出現(xiàn)紅色線條，而檢測(cè)線T位置不顯示紅色線條時(shí)，說明被檢樣品中有可樂定，判為陽性(見圖2B);陰性結(jié)果為質(zhì)控線C位置出現(xiàn)紅色線條，檢測(cè)線T位置 也出現(xiàn)紅色線條，說明被檢樣品中沒有可樂定存在，判為陰性(見圖2A);如果檢測(cè)線T位置和質(zhì)控線C位置均不顯示紅色線條，則判為檢測(cè)無效(見圖2C)。7.性能指標(biāo)靈敏度:應(yīng)用本實(shí)施例，可樂定濃度在0.lng/ml以上為陽性。使用目的:本品用于篩查可樂定在用于飼料、豬尿和豬肉的現(xiàn)場(chǎng)快速篩查，保障豬肉安全。
權(quán)利要求1.一種可樂定免疫層析快速檢測(cè)試紙條，其特征在于，所述試紙條包括樣品墊、含有抗可樂定單克隆抗體蛋白印跡的金標(biāo)記物釋放墊、吸水紙、層析膜、PVC粘板；在PVC粘板的起始端至末端依次疊合有樣品墊，金標(biāo)記物釋放墊，層析膜以及吸水紙；所述層析膜上設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線；所述樣品墊和吸水紙上均設(shè)有塑料薄膜標(biāo)簽。
2.如權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述層析膜粘貼在PVC粘板中間。
3.如權(quán)利要求2所述的試紙條，其特征在于，所述樣品墊上粘貼印制MAX標(biāo)簽的塑料薄膜保護(hù)標(biāo)簽；所述吸水紙上粘貼印制產(chǎn)品名稱標(biāo)簽的塑料薄膜標(biāo)簽。
4.如權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述樣品墊疊加于金標(biāo)記物釋放墊之上，疊加寬度為1mm。
5.如權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述層析膜上檢測(cè)線位置為可樂定偶聯(lián)蛋白抗原的印記，質(zhì)控線位置為羊抗兔IgG抗體蛋白印記。
6.如權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，在層析膜的起始端疊加金標(biāo)記物釋放墊，在層析膜的 末端疊加吸水紙。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種可樂定免疫層析快速檢測(cè)試紙條，所述試紙條包括樣品墊、含有抗可樂定單克隆抗體蛋白印跡的金標(biāo)記物釋放墊、層析膜、吸水紙、PVC粘板；在PVC粘板的起始端至末端依次疊合有樣品墊，金標(biāo)記物釋放墊，層析膜以及吸水紙；所述層析膜上設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線；所述樣品墊和吸水紙上均設(shè)有塑料薄膜標(biāo)簽。本實(shí)用新型不需要專門設(shè)備，操作簡(jiǎn)單快速，10分鐘可完成檢測(cè)，適合生豬養(yǎng)殖、飼料和豬肉及制品加工廠的普及使用，該試紙條具有操作簡(jiǎn)便、測(cè)試快速、反應(yīng)靈敏、價(jià)格低廉、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/74GK203148955SQ20132009084
公開日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2013年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月28日
發(fā)明者周中人, 史小月, 顧琳 申請(qǐng)人:上海快靈生物科技有限公司