骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒及其用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，包括試劑R1、試劑R2、校準(zhǔn)品，試劑R1包括受體物質(zhì)，試劑R2包括底物，試劑R1內(nèi)還包括肝源性堿性磷酸酶復(fù)合免疫抑制劑。本發(fā)明在現(xiàn)有堿性磷酸酶檢測(cè)免疫抑制連續(xù)監(jiān)測(cè)法的基礎(chǔ)上，在底物試劑中加入肝源性堿性磷酸酶復(fù)合免疫抑制劑，與血清中肝源性的堿性磷酸酶特異性結(jié)合，從而抑制血清中肝源性堿性磷酸酶的活性，僅使骨源性的堿性磷酸酶催化底物反應(yīng)，從而測(cè)得血清中骨源性堿性磷酸酶的濃度。本發(fā)明不僅能定量檢測(cè)血清中堿性磷酸酶的含量，還可以利用現(xiàn)有的全自動(dòng)生化分析儀并且操作簡(jiǎn)單，檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確迅速，檢驗(yàn)成本低。
【專利說明】骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒及其用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)療檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]人血清中的堿性磷酸酶(ALP)主要有肝源性堿性磷酸酶和骨源性堿性磷酸酶組成，其他來源的堿性磷酸酶含量很低。因此，肝膽或骨骼疾病都會(huì)引起血清內(nèi)堿性磷酸酶升高。那么，在需要篩選或診斷骨骼疾病時(shí)，僅檢測(cè)血清堿性磷酸酶的含量沒有特異性，無法為疾病的診斷提供準(zhǔn)確的依據(jù)；故而需要僅檢測(cè)出血清中骨源性堿性磷酸酶的含量。目前市場(chǎng)上骨源性堿性磷酸酶測(cè)定試劑盒主要采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，只能定性或半定量測(cè)定人血清中的骨源性堿性磷酸酶的濃度，并且測(cè)定過程煩瑣，速度慢，人為因素影響大；目前國(guó)際上還有采用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定人血清中的骨源性堿性磷酸酶，但是它需要采用Beckman Coulter, Inc.公司的專用Access免疫測(cè)定系統(tǒng),價(jià)格昂貴,速度較慢。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是:定量檢測(cè)血清中堿性磷酸酶的含量，并且操作簡(jiǎn)單，檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確迅速，檢驗(yàn)成本低。為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明在現(xiàn)有堿性磷酸酶檢測(cè)免疫抑制連續(xù)監(jiān)測(cè)法的基礎(chǔ)上，在底物試劑中加入肝源性堿性磷酸酶復(fù)合免疫抑制劑，與血清中肝源性的堿性磷酸酶特異性結(jié)合，從而抑制血清中肝源性堿性磷酸酶的活性，僅使骨源性的堿性磷酸酶催化底物反應(yīng)，使底物分解出磷酸?；?，磷酸酰基與受體物結(jié)合，生成游離的對(duì)硝基苯酚。對(duì)硝基苯酚在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色。在波長(zhǎng)405nm處監(jiān)測(cè)吸光度增高速率，與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)照，可以計(jì)算出人血清中骨源性堿性磷酸酶的濃度。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)方案為:骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，包括試劑R1、試劑R2、校準(zhǔn)品,所述試劑Rl包括受體物質(zhì),所述試劑R2包括底物,其特征在于,所述試劑Rl內(nèi)還包括肝源性堿性磷酸酶復(fù)合免疫抑制劑。
[0005]上述方案中，所述受體物質(zhì)為2-氨基-2-甲基-1-丙醇或乙二醇胺，所述試劑Rl內(nèi)還包括鎂離子制劑；所述試劑R2內(nèi)的底物為對(duì)硝基苯磷酸二鈉；所述校準(zhǔn)品為骨源性堿性磷酸酶校準(zhǔn)液。
[0006]上述方案中，所述肝源性堿性磷酸酶復(fù)合免疫抑制劑為肝源性堿性磷酸酶單克隆抗體復(fù)合免疫抑制劑。以肝源性堿性磷酸酶為抗原可以制備得特異性的肝源性堿性磷酸酶單克隆抗體，該單克隆抗體可以與肝源性堿性磷酸酶進(jìn)行高度特異性的抗原抗體反應(yīng)。而堿性磷酸酶的水解磷酸對(duì)硝基苯的位點(diǎn)可以被抑制劑所抑制。將抑制堿性磷酸酶的水解磷酸對(duì)硝基苯位點(diǎn)的抑制劑標(biāo)記到肝源性堿性磷酸酶單克隆抗體上，就可以得到肝源性堿性磷酸酶單克隆抗體復(fù)合免疫抑制劑，它具有特異性結(jié)合肝源性堿性磷酸酶并抑制其水解磷酸對(duì)硝基苯的能力。因此，本發(fā)明在受體試劑Rl中加入肝源性堿性磷酸酶單克隆抗體復(fù)合免疫抑制劑可以使血清中肝源性堿性磷酸酶失去水解磷酸對(duì)硝基苯的能力，從而僅使血清中骨源性的堿性磷酸酶催化底物反應(yīng)使底物分解出磷酸?；?，磷酸?；c受體物結(jié)合，生成游離的對(duì)硝基苯酚。對(duì)硝基苯酚在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色。在波長(zhǎng)405nm處監(jiān)測(cè)吸光度增高速率，與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)照，可以計(jì)算出人血清中骨源性堿性磷酸酶的濃度。
[0007]上述方案中，所述試劑Rl中受體物質(zhì)的摩爾濃度為1.0mmol/L，所述鎂離子制劑的摩爾濃度為2.0mmol/L，所述肝源性堿性磷酸酶單克隆抗體的重量百分比濃度為1% ;所述試劑R2中對(duì)硝基苯磷酸二鈉的摩爾濃度為30mmol/L ;所述骨源性堿性磷酸酶校準(zhǔn)液的酶活性濃度為300U/L。
[0008]上述方案中，所述鎂離子制劑為醋酸鎂或氯化鎂。
[0009]上述方案中，所述試劑盒還包括質(zhì)控品，所述質(zhì)控品包括骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液1、骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液2和骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液3。
[0010]上述方案中，所述質(zhì)控品包括骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液I的酶活性濃度為50?100U/L，骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液2的酶活性濃度為200?250U/L，骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液3的酶活性濃度為250?300U/L。
[0011]上述方案中，所述試劑Rl中還含有重量含量I %。的防腐劑；所述試劑R2中還含有重量含量1%。的防腐劑。
[0012]本發(fā)明還公開了骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒的用途:用于篩查或輔助診斷因鈣營(yíng)養(yǎng)不良引起的骨鈣化障礙或其它原因引起的代謝性骨病。
[0013]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果在于:本發(fā)明提供一種骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，可以定量檢測(cè)血清中堿性磷酸酶的含量，可以利用現(xiàn)有的全自動(dòng)生化分析儀并且操作簡(jiǎn)單，檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確迅速，檢驗(yàn)成本低。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1為本發(fā)明在OLYMPUS AU400/640/2700/5400全自動(dòng)生化分析儀的參數(shù)設(shè)定表
[0015]圖2為本發(fā)明實(shí)施例1的測(cè)試進(jìn)程圖
[0016]圖3為本發(fā)明實(shí)施例2的測(cè)試進(jìn)程圖
【具體實(shí)施方式】
[0017]下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步描述。以下實(shí)施例僅用于更加清楚地說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而不能以此來限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0018]實(shí)施例1
[0019]本發(fā)明是一種骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，包括試劑R1、試劑R2、校準(zhǔn)品，試劑Rl包括受體物質(zhì)2-氨基-2-甲基-1-丙醇、醋酸鎂以及肝源性堿性磷酸酶單克隆抗體復(fù)合免疫抑制劑、防腐劑，其中2-氨基-2-甲基-1-丙醇的摩爾濃度為l.0mmol/L，醋酸鎂的摩爾濃度為2.0mmol/L,肝源性堿性磷酸酶單克隆抗體復(fù)合免疫抑制劑的重量含量為1%，為了延長(zhǎng)試劑的使用時(shí)間，在試劑Rl內(nèi)還包含重量含量為1%。的防腐劑；試劑R2包括底物對(duì)硝基苯磷酸二鈉和防腐劑，對(duì)硝基苯磷酸二鈉的摩爾濃度為30mmol/L，防腐劑的重量含量為1%。;校準(zhǔn)品為骨源性堿性磷酸酶校準(zhǔn)液，其酶活性濃度為300U/L。試劑盒內(nèi)試劑的包裝規(guī)格為試劑R145mlXl ;試劑R215mlXl。試劑盒置于2_8°C避光密封保存，自生產(chǎn)之日起可穩(wěn)定12個(gè)月。
[0020]按照?qǐng)D1所示參數(shù)表設(shè)定奧林巴斯2700全自動(dòng)生化分析儀，標(biāo)準(zhǔn)品濃度和位置根據(jù)實(shí)際使用情況輸入。
[0021]待測(cè)血液樣本A采集后進(jìn)行離心處理，取血清待用；使用奧林巴斯2700全自動(dòng)生化分析儀，將試劑Rl加入比色杯中，十秒內(nèi)加入待測(cè)血清；將比色杯置于37°C孵育4分鐘；然后加入試劑R2，充分?jǐn)嚢?；延遲1.5分鐘后，連續(xù)測(cè)定1.5到3分鐘的吸光度數(shù)值，并記錄。通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照，可以計(jì)算得樣品中的骨源性堿性磷酸酶的酶活性濃度為150U/L。測(cè)試進(jìn)程圖見圖2，其主波長(zhǎng):405nm ;副波長(zhǎng):700nm ;反應(yīng)方法:速率法；反應(yīng)方向:正；定標(biāo)方式:線性LINEAR。
[0022]實(shí)施例2
[0023]本發(fā)明是一種骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，包括試劑R1、試劑R2、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，試劑Rl包括受體物質(zhì)乙二醇胺、氯化鎂鎂以及肝源性堿性磷酸酶單克隆抗體復(fù)合免疫抑制劑、防腐劑，其中乙二醇胺的摩爾濃度為l.0mmol/L，氯化鎂的摩爾濃度為
2.0mmol/L,肝源性堿性磷酸酶單克隆抗體復(fù)合免疫抑制劑的重量含量為1%，為了延長(zhǎng)試劑的使用時(shí)間，在試劑Rl內(nèi)還包含重量含量為1%。的防腐劑；試劑R2包括底物對(duì)硝基苯磷酸二鈉和防腐劑，對(duì)硝基苯磷酸二鈉的摩爾濃度為30mmol/L，防腐劑的重量含量為1%。;校準(zhǔn)品為骨源性堿性磷酸酶校準(zhǔn)液，其酶活性濃度為300U/L ;質(zhì)控品為骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液1、骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液2、骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液3，骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液I的酶活性濃度為50?100U/L，骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液2的酶活性濃度為200?250U/L，骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液3的酶活性濃度為250?300U/L。
[0024]試劑盒內(nèi)試劑的包裝規(guī)格為試劑R150mlX2 ;試劑R210mlX2。試劑盒置于2_8°C避光密封保存，自生產(chǎn)之日起可穩(wěn)定12個(gè)月。
[0025]待測(cè)血液樣本B采集后進(jìn)行離心處理，取血清待用；使用奧林巴斯2700全自動(dòng)生化分析儀，將試劑Rl加入比色杯中，十秒內(nèi)加入待測(cè)血清；將比色杯置于37°C孵育5分鐘；然后加入試劑R2，充分?jǐn)嚢?；延遲I分鐘后，連續(xù)測(cè)定1.5到3分鐘的吸光度數(shù)值，并記錄。采用K因子法，可以計(jì)算得樣品中的骨源性堿性磷酸酶的酶活性濃度為250U/L。測(cè)試進(jìn)程圖見圖3，其主波長(zhǎng):405nm ;副波長(zhǎng):700nm ;反應(yīng)方法:速率法；反應(yīng)方向:正；定標(biāo)方式:線性 LINEAR。
[0026]使用本發(fā)明定量檢測(cè)骨源性堿性磷酸酶的濃度還可以使用于日立7180;羅氏COBAS ;奧林帕斯2700 ;貝克曼CX9、DXC800 ;東芝40 ;杜邦RXL ;雅培C8000 ;西門子2400、邁瑞B(yǎng)S300等型號(hào)的全自動(dòng)生化分析儀。
[0027]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，包括試劑Rl、試劑R2、校準(zhǔn)品，所述試劑Rl包括受體物質(zhì)，所述試劑R2包括底物，其特征在于，所述試劑Rl內(nèi)還包括肝源性堿性磷酸酶復(fù)合免疫抑制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述受體物質(zhì)為2-氨基-2-甲基-1-丙醇或乙二醇胺，所述試劑Rl內(nèi)還包括鎂離子制劑；所述試劑R2內(nèi)的底物為對(duì)硝基苯磷酸二鈉；所述校準(zhǔn)品為骨源性堿性磷酸酶校準(zhǔn)液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述肝源性堿性磷酸酶復(fù)合免疫抑制劑為肝源性堿性磷酸酶單克隆抗體復(fù)合免疫抑制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑Rl中受體物質(zhì)的摩爾濃度為1.0mmol/L，所述鎂離子制劑的摩爾濃度為2.0mmol/L，所述肝源性堿性磷酸酶單克隆抗體的重量百分比濃度為1% ;所述試劑R2中對(duì)硝基苯磷酸二鈉的摩爾濃度為30mmol/L ;所述骨源性堿性磷酸酶校準(zhǔn)液的酶活性濃度為300U/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求2?4任一所述的骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述鎂離子制劑為醋酸鎂或氯化鎂。
6.根據(jù)權(quán)利要求1?4任一所述的骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括質(zhì)控品，所述質(zhì)控品包括骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液1、骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液2和骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液3。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述質(zhì)控品包括骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液I的酶活性濃度為50?100U/L，骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液2的酶活性濃度為200?250U/L，骨源性堿性磷酸酶質(zhì)控液3的酶活性濃度為250?300U/L0
8.根據(jù)權(quán)利要求1?4任一所述的骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑Rl中還含有重量含量1%。的防腐劑；所述試劑R2中還含有重量含量1%。的防腐劑。
9.骨源性堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒用于篩查或輔助診斷因鈣營(yíng)養(yǎng)不良引起的骨鈣化障礙或其它原因引起的代謝性骨病。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK103675282SQ201310624570
【公開日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2013年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月27日
【發(fā)明者】董靜平 申請(qǐng)人:新昌縣美迪生物科技有限公司