專利名稱：一種提取異輪生豐花草堿的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥化學(xué)領(lǐng)域，涉及ー種提取異輪生豐花草堿的方法。
背景技術(shù)：
異輪生豐花草堿(Isoborreverine),棕色無定形固體,是一種卩引哚類生物堿。分子式 C32H40N4，分子量為 480. 7。UV λ max (EtOH) nm (Ig ε ) :226(4. 28), 287 (4. 10), 294(4. OO) ο異輪生豐花草堿來源于菌草科(Rubiaceae)輪生豐花草iferreria verticillata (L.)G. F. ff. Meyer地上部分。具有抗微生物活性和細(xì)胞毒活性。其對金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、偶發(fā)分枝桿菌、肺炎球菌、綠色鏈球菌、淋病柰瑟球菌等有廣譜抗微生物作用。當(dāng)其濃度在3 6 μ g/mL吋，具有高的細(xì)胞毒作用。
目前國內(nèi)外尚未見制備異輪生豐花草堿的方法報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高效快速、從赤非夾竹桃木中提取異輪生豐花草堿的方法。為達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
將輪生豐花草的地上部分破碎，用4-10倍量的酸醇回流提取2-4次，合并提取液濃縮后加于陽離子樹脂柱上，先以水洗脫除雜，再用2-5%氯化鈉水溶液洗脫，收集氯化鈉洗脫液直至生物堿反應(yīng)陰性，經(jīng)脫鹽處理，濃縮得總生物堿浸膏，將浸膏與氧化鋁粉混合均勻上氧化鋁柱，用不同配比的混合有機溶劑分段洗脫井分段收集，收集異輪生豐花草堿高含量流分，合并后減壓濃縮，最后采用高速逆流色譜法分離純化，得到高含量異輪生豐花草堿產(chǎn)品O所述酸醇溶液為20%_80%的こ醇或甲醇溶液，鹽酸調(diào)節(jié)醇溶液pH至3-5. 5。所述陽離子樹脂可以是大孔型或凝膠型強酸性陽離子交換樹脂，樹脂柱徑高比為1:5-10。所述陽離子樹脂柱的上柱液濃度為每Iml相當(dāng)于生藥l_5g，上樣速度為2_5BV/h，洗脫速度為l_3BV/h。所述氧化鋁柱填料為中性或堿性氧化鋁，粒度為100-400目，混合有機溶劑為氯仿-こ酸こ酷-甲醇，體積比為4:2: f 1:2:4。所述高速逆流色譜分離條件己烷-氯仿-甲醇-水溶劑系統(tǒng)比例為(3-6)(20-25) :(30-42) :(15-20)，上相為固定相，下相為流動相，流速為l_3ml/min，正向轉(zhuǎn)速700-1000r/mino本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明步驟少、得率高、操作簡便，易于エ業(yè)化生；離子交換樹脂結(jié)合高速逆流色譜法用于異輪生豐花草堿的分離純化也屬首次，本發(fā)明為異輪生豐花草堿的進一步開發(fā)利用提供了藥理原料、理論和實踐支持。下面將結(jié)合具體實施方式
進ー步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式 實施例I:
取IOkg輪生豐花草的地上部分破碎，用10倍量20%甲醇溶液(pH3)回流提取4次，合并提取液濃縮至每Iml相當(dāng)于生藥lg，將濃縮液加于大孔型強酸性陽離子交換樹脂上，上樣速度為5BV/h，先以水洗脫除雜，再用5%氯化鈉水溶液洗脫，洗脫速度為3BV/h，收集氯化鈉洗脫液直至生物堿反應(yīng)陰性，經(jīng)脫鹽處理，濃縮得總生物堿浸膏，將浸膏與堿性氧化鋁粉(400目)混合均勻上氧化鋁柱，用氯仿-こ酸こ酷-甲醇(4:2:廣1:2:4)分段洗脫井分段收集，收集異輪生豐花草堿高含量流分，合并后減壓濃縮得樣品溶液。取己烷-氯仿-甲醇-水按(3) :(20):(30) :(15)比例量取，置于分液漏斗中混合均勻，靜止分層，分離上下相，以上相為固定相，以下相為流動相，取上述粗提物適量溶于下相中待用，開啟制備型高速逆流色譜儀制備，以lml/min流速泵入流動相，當(dāng)流動相流出，開始連續(xù)進樣，首尾洗脫，轉(zhuǎn)速控制為lOOOr/min，通過檢測器收集，濃縮干燥得到高含量異輪生豐花草堿產(chǎn)品 I. 42g。實施例2
取IOkg輪生豐花草的地上部分破碎，用4倍量80%的こ醇溶液(pH5. 5)回流提取2次，合并提取液濃縮至每Iml相當(dāng)于生藥5g，將濃縮液加于凝膠型強酸性陽離子交換樹脂上，上樣速度為2BV/h，先以水洗脫除雜，再用2%氯化鈉水溶液洗脫，洗脫速度為lBV/h，收集氯化鈉洗脫液直至生物堿反應(yīng)陰性，經(jīng)脫鹽處理，濃縮得總生物堿浸膏，將浸膏與中性氧化鋁粉(100目)混合均勻上氧化鋁柱，用氯仿-こ酸こ酷-甲醇(4:2: f 1:2:4)分段洗脫井分段收集，收集異輪生豐花草堿高含量流分，合并后減壓濃縮得樣品溶液。取己烷-氯仿-甲醇-水按(6) :(25) :(42) :(20)比例量取，置于分液漏斗中混合均勻，靜止分層，分離上下相，以上相為固定相，以下相為流動相，取上述粗提物適量溶于下相中待用，開啟制備型高速逆流色譜儀制備，以3ml/min流速泵入流動相，當(dāng)流動相流出，開始連續(xù)進樣，首尾洗脫，轉(zhuǎn)速控制為700r/min，通過檢測器收集，濃縮干燥得到高含量異輪生豐花草堿產(chǎn)品I. ISgo實施例3:
取IOkg輪生豐花草的地上部分破碎，用8倍量40%的こ醇溶液(pH4)回流提取3次，合并提取液濃縮至每Iml相當(dāng)于生藥3g，將濃縮液加于大孔型強酸性陽離子交換樹脂上，上樣速度為3BV/h，先以水洗脫除雜，再用3%氯化鈉水溶液洗脫，洗脫速度為3BV/h，收集氯化鈉洗脫液直至生物堿反應(yīng)陰性，經(jīng)脫鹽處理，濃縮得總生物堿浸膏，將浸膏與中性氧化鋁粉(300目)混合均勻上氧化鋁柱，用氯仿-こ酸こ酷-甲醇(4:2: f 1:2:4)分段洗脫井分段收集，收集異輪生豐花草堿高含量流分，合并后減壓濃縮得樣品溶液。取己烷-氯仿-甲醇-水按(5) :(22):(35):(18)比例量取，置于分液漏斗中混合均勻，靜止分層，分離上下相，以上相為固定相，以下相為流動相，取上述粗提物適量溶于下相中待用，開啟制備型高速逆流色譜儀制備，以2ml/min流速泵入流動相，當(dāng)流動相流出，開始連續(xù)進樣，首尾洗脫，轉(zhuǎn)速控制為800r/min，通過檢測器收集，濃縮干燥得到高含量異輪生豐花草堿產(chǎn)品I. 53g。
實施例4:
取IOkg輪生豐花草的地上部分破碎，用6倍量50%的甲醇溶液(pH4. 5)回流提取4次，合并提取液濃縮至每Iml相當(dāng)于生藥4g，將濃縮液加于凝膠型強酸性陽離子交換樹脂上，上樣速度為4BV/h，先以水洗脫除雜，再用4%氯化鈉水溶液洗脫，洗脫速度為2. 5BV/h,收集氯化鈉洗脫液直至生物堿反應(yīng)陰性，經(jīng)脫鹽處理，濃縮得總生物堿浸膏，將浸膏與中性氧化鋁粉(200目)混合均勻上氧化鋁柱，用氯仿-こ酸こ酷-甲醇(4:2: f 1:2:4)分段洗脫井分段收集，收集異輪生豐花草堿高含量流分，合并后減壓濃縮得樣品溶液。取己烷-氯仿-甲醇-水按(4) :(23) :(40) :(20)比例量取，置于分液漏斗中混合均勻，靜止分層，分離上下相，以上相為固定相，以下相為流動相，取上述粗提物適量溶于下相中待用，開啟制備型高速逆流色譜儀制備，以2. 5ml/min流速泵入流動相，當(dāng)流動相流出，開始連續(xù)進樣，首尾洗脫，轉(zhuǎn)速控制為850r/min，通過檢測器收集，濃縮干燥得到高含量異輪生豐 花草堿產(chǎn)品 I. 38g。
權(quán)利要求
1.ー種提取異輪生豐花草堿的方法，其特征在于包括以下步驟 將輪生豐花草的地上部分破碎，用4-10倍量的酸醇回流提取2-4次，合并提取液濃縮后加于陽離子樹脂柱上，先以水洗脫除雜，再用2-5%氯化鈉水溶液洗脫，收集氯化鈉洗脫液直至生物堿反應(yīng)陰性，經(jīng)脫鹽處理，濃縮得總生物堿浸膏，將浸膏與氧化鋁粉混合均勻上氧化鋁柱，用不同配比的混合有機溶劑分段洗脫井分段收集，收集異輪生豐花草堿高含量流分，合并后減壓濃縮，最后采用高速逆流色譜法分離純化，得到高含量異輪生豐花草堿產(chǎn)品O
2.如權(quán)利要求I所述的ー種提取異輪生豐花草堿的方法，其特征在于所述酸醇溶液為20%-80%的こ醇或甲醇溶液，鹽酸調(diào)節(jié)醇溶液pH至3-5. 5。
3.如權(quán)利要求I所述的ー種提取異輪生豐花草堿的方法，其特征在于所述陽離子樹脂可以是大孔型或凝膠型強酸性陽離子交換樹脂，樹脂柱徑高比為1:5-10。
4.如權(quán)利要求I所述的ー種提取異輪生豐花草堿的方法，其特征在于所述陽離子樹脂柱的上柱液濃度為每Iml相當(dāng)于生藥l_5g，上樣速度為2-5BV/h，洗脫速度為l_3BV/h。
5.如權(quán)利要求I所述的ー種提取異輪生豐花草堿的方法，其特征在于所述氧化鋁柱填料為中性或堿性氧化鋁，粒度為100-400目，混合有機溶劑為氯仿-こ酸こ酷-甲醇，體積比為 4:2:1 1:2:4。
6.如權(quán)利要求I所述的ー種提取異輪生豐花草堿的方法，其特征在于所述高速逆流色譜分離條件:己烷-氯仿-甲醇-水溶劑系統(tǒng)比例為(3-6) :(20-25) :(30-42) (15-20)，上相為固定相，下相為流動相，流速為l_3ml/min，正向轉(zhuǎn)速700_1000r/min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提取異輪生豐花草堿的方法，其特征在于工藝步驟包括將輪生豐花草的地上部分破碎，用酸醇回流提取，提取液濃縮后加于陽離子樹脂柱上，先以水洗脫除雜，再用2-5%氯化鈉水溶液洗脫，收集氯化鈉洗脫液直至生物堿反應(yīng)陰性，經(jīng)脫鹽處理，濃縮得總生物堿浸膏，將浸膏與氧化鋁粉混合均勻上氧化鋁柱，用不同配比的混合有機溶劑分段洗脫并分段收集，收集異輪生豐花草堿高含量流分，合并后減壓濃縮，最后采用高速逆流色譜法分離純化，得到高含量異輪生豐花草堿產(chǎn)品。本發(fā)明提取分離異輪生豐花草堿快速、高效，產(chǎn)品含量高，并可有效降低成本和減少環(huán)境污染。
文檔編號C07D487/04GK102690272SQ20121018452
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月7日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司