利用高效液相色譜法檢測冬蟲夏草中蟲草酸含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用高效液相色譜法檢測冬蟲夏草中蟲草酸含量的方法，主要包括下述步驟①供試品溶液制備；②對照品溶液制備；③建立標準曲線；④供試品溶液的色譜分析，得到供試品溶液中蟲草酸的峰面積，帶入標準曲線中計算即得到供試品溶液中蟲草酸的含量；本發(fā)明的檢測方法通過提取冬蟲夏草中化學物質(zhì)，采用HPLC-ELSD利用各物質(zhì)間的分配系數(shù)將各物質(zhì)分開，ELSD檢測器檢測蟲草酸的含量，檢測過程中排出干擾，經(jīng)加樣回收試驗驗證，檢測結(jié)果準確。
【專利說明】 利用高效液相色譜法檢測冬蟲夏草中蟲草酸含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種中藥材的檢測方法，具體是利用高效液相色譜法(HighPerformance Liquid Chromatography\HPLC)檢測冬蟲夏草中蟲草酸含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]冬蟲夏草，是麥角菌科真菌冬蟲夏草寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座及幼蟲尸體的復(fù)合體，是一種傳統(tǒng)的名貴滋補中藥材，有調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能、抗腫瘤、抗疲勞等多種功效。藥理學現(xiàn)代研究結(jié)果中，青海冬蟲夏草含有蟲草酸約7%，糖類28.9%，脂肪約8.4%，蛋白質(zhì)約25%。冬蟲夏草中82.2%為不飽和脂肪酸，此外，尚含有維生素B12、麥角脂醇、六碳糖醇、多種生物堿等。
[0003]據(jù)文獻資料報道:北冬蟲夏草中蟲草酸的含量為3.09克，野生的蟲草為5.54克，蟲草酸是一種D-甘露醇，甘露醇能提高血漿滲透壓，導(dǎo)致組織內(nèi)的水分進入血管內(nèi)，從而減輕組織水腫，補充血漿。蟲草酸多用于腦水腫，防治急性腎功能衰竭，有調(diào)節(jié)心、腦、血管的作用，促進人體的新陳代謝、改善人體的微循環(huán)、降血脂、降血壓。因此，蟲草酸含量的高低也是判斷冬蟲夏草質(zhì)量的重要指標之一。
[0004]查閱文獻資料得知:冬蟲夏草中蟲草酸含量的檢測方法主要是采用傳統(tǒng)的顯色方法或者測定吸光度的方法，這樣會由于雜質(zhì)的干擾而影響檢測結(jié)果的準確性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的就是為了解決現(xiàn)有蟲草酸含量檢測方法由于雜質(zhì)干擾導(dǎo)致檢測結(jié)果準確度較低的問題，提供一種能夠?qū)⑾x草酸與冬蟲夏草中其余化學物質(zhì)分離開來，再對蟲草酸進行準確定量的一種利用高效液相色譜法檢測冬蟲夏草中蟲草酸含量的方法。
[0006]本發(fā)明的檢測方法，由下述步驟組成:
[0007]①供試品溶液制備冬蟲夏草原藥材35°C下鼓風干燥3天后，初磨至毫米級，再用南京南大球磨機粉碎至0.1ym級；稱取0.1g冬蟲夏草藥材樣品至具塞錐形瓶中，精密稱定，加入水25mL，稱定重量，超聲提取30min，稱重，補足減失重量，以0.45 μ m濾膜過濾，取濾液作為供試品溶液備用；
[0008]②對照品溶液制備精密稱取55.5Img蟲草酸對照品于50mL容量瓶中，以水溶解定容，搖勻，即得濃度為1093.547mg/L的蟲草酸對照品溶液原液，再分別精密量取對照品原液
0.5mL、l.0mL,2.0mL,4.0mL,6.0mL置于IOmL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得到濃度分別為 54.67735mg/L、109.3547mg/L、218.7094mg/L、437.4188mg/L、656.1282mg/L 的對照品溶液；
[0009]③建立標準曲線蟲草酸的色譜分析采用氨基色譜柱，流動相為乙腈-水，體積比為83:17，流速1.0mL/min，進樣體積:10μ L，柱溫:30°C，蒸發(fā)光散射檢測器進行檢測，漂移管溫度為100°C，霧化氣體流速為2.5L/min ;在上述色譜條件下進行對照品溶液的色譜分析，得到各濃度對照品溶液的蟲草酸色譜峰的峰面積，以濃度的對數(shù)為橫坐標，相對應(yīng)的色譜峰面積的對數(shù)為縱坐標建立標準曲線；[0010]④供試品溶液的色譜分析按步驟③中所述的色譜條件進行供試品溶液的色譜分析，得到供試品溶液的蟲草酸色譜峰的峰面積，帶入標準曲線中計算即得到供試品溶液中蟲草酸的含量。
[0011]本發(fā)明的檢測方法通過提取冬蟲夏草中化學物質(zhì)，采用HPLC-ELSD利用各物質(zhì)間的分配系數(shù)將各物質(zhì)分開，ELSD檢測器檢測蟲草酸的含量，檢測過程中排出干擾，經(jīng)加樣回收試驗驗證，檢測結(jié)果準確。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1是蟲草酸標準曲線圖；
[0013]圖2是批號為20130506-1的蟲草酸色譜圖；
[0014]圖3是批號為20130506-2的蟲草酸色譜圖；
[0015]圖4是批號為20130506-3的蟲草酸色譜圖；
[0016]圖5是批號為20130506-4的蟲草酸色譜圖；
[0017]圖6是批號為20130506-5的蟲草酸色譜圖；
[0018]圖7是批號為20130506-6的蟲草酸色譜圖。
【具體實施方式】
[0019]實施例1
[0020]①供試品溶液制備冬 蟲夏草原藥材35°C下鼓風干燥3天后，初磨至毫米級，再用南京南大球磨機粉碎至0.1ym級；稱取0.1g冬蟲夏草藥材樣品至具塞錐形瓶中，精密稱定，加入水25mL，稱定重量，超聲提取30min，稱重，補足減失重量，以0.45 μ m濾膜過濾，取濾液作為供試品溶液備用；
[0021]②對照品溶液制備精密稱取55.5Img蟲草酸對照品于50mL容量瓶中，以水溶解定容，搖勻，即得濃度為1093.547mg/L的蟲草酸對照品溶液原液，再分別精密量取對照品原液0.5mL、l.0mL,2.0mL,4.0mL,6.0mL置于IOmL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得到濃度分別為(I ) 54.67735mg/L (II) 109.3547mg/L (III) 218.7094mg/L (IV) 437.4188mg/L(V) 656.1282mg/L的五份對照品溶液；
[0022]③建立標準曲線蟲草酸的色譜分析采用氨基色譜柱，流動相為乙腈-水，體積比為83:17,流速1.0mL/min,進樣體積:10yL,柱溫:30°C，蒸發(fā)光散射檢測器進行檢測，漂移管溫度為100°C，霧化氣體流速為2.5L/min ;在上述色譜條件下分別對上述五份對照品溶液進行色譜分析，得到各濃度的對照品溶液的蟲草酸色譜峰的峰面積，以濃度的對數(shù)為橫坐標，相對應(yīng)的色譜峰面積的對數(shù)為縱坐標建立標準曲線;標準曲線圖如圖1中所示。相關(guān)數(shù)據(jù)如表1中所示:
[0023]表1蟲草酸標準曲線建立相關(guān)數(shù)據(jù)
[0024]
【權(quán)利要求】
1.利用高效液相色譜法檢測冬蟲夏草中蟲草酸含量的方法，其特征在于由下述步驟組成: ①供試品溶液制備冬蟲夏草原藥材35°c下鼓風干燥3天后，初磨至毫米級，再用南京南大球磨機粉碎至0.1 μ m級；稱取0.1g冬蟲夏草藥材樣品至具塞錐形瓶中，精密稱定，加入水25mL,稱定重量,超聲提取30min,稱重,補足減失重量，以0.45 μ m濾膜過濾,取濾液作為供試品溶液備用； ②對照品溶液制備精密稱取55.5Img蟲草酸對照品于50mL容量瓶中，以水溶解定容，搖勻，即得濃度為1093.547mg/L的蟲草酸對照品溶液原液，再分別精密量取對照品原液0.5mL、1.0mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL置于IOmL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得到濃度分別為 54.67735mg/L、109.3547 mg/L、218.7094 mg/L、437.4188 mg/L、656.1282 mg/L的對照品溶液； ③建立標準曲線蟲草酸的色譜分析采用氨基色譜柱，流動相為乙腈-水，體積比為83:17,流速1.0mL/min,進樣體積:10μ L,柱溫:30°C,蒸發(fā)光散射檢測器進行檢測,漂移管溫度為100°C，霧化氣體流速為2.5L/min ;在上述色譜條件下進行對照品溶液的色譜分析，得到各濃度對照品溶液的蟲草酸色譜峰的峰面積，以濃度的對數(shù)為橫坐標，相對應(yīng)的色譜峰面積的對數(shù)為縱坐標建立標準曲線； ④供試品溶液的色譜分析按步驟③中所述的色譜條件進行供試品溶液的色譜分析，得到供試品溶液的蟲草酸色譜峰的峰面積，帶入標準曲線中計算即得到供試品溶液中蟲草酸的含量。
【文檔編號】G01N30/88GK103558327SQ201310560050
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月12日
【發(fā)明者】李先芝, 毛瓊麗, 嚴玲, 劉源才, 王喆 申請人:勁牌有限公司