一種竹筍中多酚的提取和檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種竹筍中多酚的提取和檢測方法，步驟是：（1）備料：選取新鮮竹筍，液氮冷凍后敲碎去殼，筍肉于-70℃保存，備用；（2）選取丙酮作提取溶劑，超聲波低溫輔助溶劑提取竹筍中多酚；（3）Folin-ciocalteu法檢測：檢測體系為：多酚提取液0.25ml、水1.75ml、稀釋6倍的Folin-ciocalteu顯色劑1ml、5%～15%Na2CO31ml；檢測條件：反應(yīng)溫度：水浴25～35℃，反應(yīng)時間：0.5～3.5h，檢測波長：755nm～770nm。本發(fā)明優(yōu)化并建立了檢測新鮮竹筍中多酚含量的體系和提取竹筍中多酚的體系，檢測快速方便，提取效率高，能夠為竹筍的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。
【專利說明】一種竹筍中多酚的提取和檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)，具體地說是涉及一種竹筍中多酚的提取和檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]多酚是植物中具有促進人體健康功效的化合物；存在于一些常見的植物性食物中，如可可豆，茶，大豆，紅酒，蔬菜和水果。多酚類物質(zhì)具有很強的抗氧化作用。氧化損傷是導(dǎo)致許多慢性病，如心血管病，癌癥和衰老的重要原因。多酚的抗氧化功能可以對這些慢性病起到預(yù)防作用。比如巧克力中的多酚是很強的抗氧化劑，它可以抑制低密度脂蛋白(LDL)膽固醇氧化。多酚除了具有抗氧化作用外，據(jù)2008年I月FEDERATION of AMERICANSOCIETIES for EXPERIMENTAL BIOLOGY (FASEB)雜志報道，以色列研究人員首次發(fā)現(xiàn)在進食高脂食物的同時攝入多酚可以減輕高脂食物對人體健康的威脅，這說明多酚可以有效預(yù)防高脂食物在人體代謝過程中所產(chǎn)生的衍生物，如自由基的危害性。
[0003]盡管多酚廣泛存在于植物性食物中，但是它在不同植物中的活性成分物質(zhì)及其結(jié)構(gòu)、含量有很大差異。而且，植物中多酚的含量受諸多因素影響，如品種、加工過程及儲存條件等。
[0004]竹筍為禾本科竹亞科植物的嫩苗，又稱竹萌、竹芽。據(jù)分析，生筍富含蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪、糖類、鈣、磷、鐵、胡蘿卜素和維生素B1、維生素B2、維生素C等成分。除了富含多種營養(yǎng)物質(zhì)，竹筍還有較高的藥用價值。中醫(yī)認為，竹筍味甘、部分品種微苦，性寒，能化痰下氣，清熱除煩，通利二便；《名醫(yī)別錄》認為竹筍“主消渴，利水道，益氣，可久食”；《本草綱目拾遺》指出竹筍“利九鸞，通血脈，化痰涎，消食脹”，尤其善于清化熱痰。目前，關(guān)于竹筍保健效用的開發(fā)研究尚屬空白；同時我們在多次的研究中發(fā)現(xiàn)另一種重要的植物保健物質(zhì)——黃酮在竹筍中含量很低，用常規(guī)檢測方法幾乎檢測不出含量，因此推測多酚很可能是竹筍中的主要保健物質(zhì)。此外，關(guān)于竹筍多酚的提取、檢測方法也缺乏系統(tǒng)研究報道。所以，我們對竹筍多酚的提取和檢測方法進行了詳細的研究，為竹筍的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)中關(guān)于竹筍多酚的檢測方法缺乏系統(tǒng)研究，提供一種竹筍中多酚的提取和檢測方法，該方法提取效率高，檢測方便。本發(fā)明的目的在于:優(yōu)化并建立檢測新鮮竹筍中多酚含量的體系，以及提取竹筍中多酚的體系。
[0006]相比較于現(xiàn)有的竹筍多酚提取方法，本發(fā)明中竹筍的保存、處理及提取過程均在低溫進行，可以有效保護多酚中活性物質(zhì)；并且直接采用丙酮作為提取溶劑可有效提高多酌提取效率；之外，超聲波的利用可以進一步提聞提取效率。
[0007]為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
[0008]一種竹筍中多酚的提取和檢測方法，該方法的步驟為:
[0009](I)備料:選取新鮮竹筍，液氮冷凍后敲碎、將筍肉混合于_70°C保存，備用；
[0010](2)超聲波輔助有機溶劑低溫提取竹筍中多酚:提取時，取出一定量竹筍置于研缽中，加入液氮研碎，選取丙酮作提取溶劑，向竹筍中加入丙酮，樣品充分勻漿后收集到離心管中，于10°C以下低溫超聲提取15~60min，離心取上清，即得竹筍多酚提取液；
[0011](3)竹筍中多酚的檢測:
[0012]Folin-ciocalteu法檢測:新鮮竹筍中多酚檢測體系為:多酚提取液0.25mL、水1.75mL、稀釋 6 倍的 Folin-ciocalteu 顯色劑 ImL,5% ~15%Na2C03lmL ；
[0013]檢測條件:反應(yīng)溫度:水浴20~35°C，反應(yīng)時間:0.5~3.5h，檢測波長:755nm~770nmo
[0014]進一步，步驟(2)中，選取30%丙酮作提取溶劑，按Ig竹筍加入5~30mL30%丙酮，樣品充分勻漿后收集到50mL離心管中，于10°C以下低溫超聲提取15~60min，離心取上清，即得竹筍多酚提取液。
[0015]進一步，按Ig竹筍優(yōu)選加入10mL30%丙酮進行提取。
[0016]進一步，超聲提取頻率為40kHz，超聲功率150W，提取時間為45min。
[0017]進一步,步驟(3)中,Folin-ciocalteu法檢測:新鮮竹笑中多酹檢測體系為:多酹提取液 0.25mL、水 1.75mL、稀釋 6 倍的 Folin-ciocalteu 顯色劑 lmL、15%Na2C03lmL ；
[0018]檢測條件:反應(yīng)溫度:水浴25°C，反應(yīng)時間:1.5h，檢測波長:755nm。
[0019]本發(fā)明具有以下優(yōu)點:
[0020]本發(fā)明提供了竹筍中多酚的提取和檢測方法。本發(fā)明考慮到植物多酚中有些活性成分會隨著溫度的升高而氧化失活，在竹筍樣品保存、粉碎處理以及多酚提取等過程中均采取低溫處理，從而充分保護了多酚中的活性成分；在竹筍保存過程中，直接將完整竹筍用液氮冷凍，之后敲碎筍殼和筍肉就有效地分離，不用專門花費勞力剝筍殼；該方法采用超聲波輔助有機溶劑低溫提取竹筍中多酚，并以丙酮作為提取溶劑，可有效提高提取效率，所提取的多酚抗氧化活性更強；本發(fā)明采用Folin-Ciocalteu法檢測竹筍中多酚含量，并給出了優(yōu)化的檢測體系及檢測條件，具有設(shè)備要求低、操作簡單、效率高、精密度高、穩(wěn)定性和可重復(fù)性好的優(yōu)點；采用本發(fā)明的多酚測定方法可以直接測量有機溶劑提取的多酚含量，不需要蒸餾去除有機溶劑，從而可用于快速檢測大規(guī)模的樣品。
【具體實施方式】
[0021]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0022]本發(fā)明實施例提供的竹筍中多酚的提取和檢測方法，該竹筍中多酚的提取和檢測方法按照如下步驟進行:
[0023](I)備料:選取新鮮竹筍去殼，液氮冷凍后敲碎、將筍肉混合于_70°C保存，備用；
[0024](2)超聲波輔助有機溶劑低溫提取竹筍中多酚:提取時，取出一定量竹筍置于研缽中，加入液氮研碎，選取丙酮作提取溶劑，向竹筍中加入丙酮，樣品充分勻漿后收集到離心管中，于10°C以下低溫超聲提取15~60min，離心取上清，即得竹筍多酚提取液；
[0025](3)竹筍中多酚的檢測:
[0026]Folin-ciocalteu法檢測:新鮮竹筍中多酚檢測體系為:多酚提取液0.25mL、水1.75mL、稀釋 6 倍的 Folin-ciocalteu 顯色劑 ImL,5% ~15%Na2C03lmL ；[0027]檢測條件:反應(yīng)溫度:水浴20~35°C，反應(yīng)時間:0.5~3.5h，檢測波長:755nm~770nmo
[0028]作為本發(fā)明實施例的一優(yōu)化方案，步驟(2)中，選取30%丙酮作提取溶劑，按Ig竹筍加入5~30mL30%丙酮，樣品充分勻漿后收集到50mL離心管中，于10°C以下低溫超聲提取15~60min，離心取上清，即得竹筍多酚提取液。
[0029]作為本發(fā)明實施例的一優(yōu)化方案，按Ig竹筍優(yōu)選加入10mL30%丙酮進行提取。
[0030]作為本發(fā)明實施例的一優(yōu)化方案，超聲提取頻率為40kHz，超聲功率150W，提取時間為45min。
[0031]作為本發(fā)明實施例的一優(yōu)化方案,步驟(3)中，F(xiàn)olin-ciocalteu法檢測:新鮮竹筍中多酚檢測體系為:多酚提取液0.25mL、水1.75mL、稀釋6倍的Folin-ciocalteu顯色劑lmL、15%Na2C03lmL ；
[0032]檢測條件:反應(yīng)溫度:水浴25°C，反應(yīng)時間:1.5h，檢測波長:755nm。
[0033]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的應(yīng)用原理作進一步描述。
[0034]一、新鮮竹筍中多酚檢測體系的優(yōu)化與建立
[0035]實施例1:
[0036]多酹檢測體系的構(gòu)成包括:多酹提取液0.25mL、水1.75mL、Folin_ciocalteu顯色劑lmL、Na2CO3lmL。檢測條件包括反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間、檢測波長。
[0037]多酚檢測體系中Na2C03濃度和反應(yīng)溫度的優(yōu)化:
[0038]采集五月季竹和茶桿竹的新鮮竹筍，剪碎合并，以丙酮為溶劑提取其中的多酚作為檢測材料。Folin-ciocalteu顯色劑稀釋倍數(shù)設(shè)置為3倍和4倍，Na2CO3濃度設(shè)置為5%、10%和15%，反應(yīng)溫度設(shè)置為20°C、25°C、30°C、35°C。實驗證明當(dāng)Na2CO3濃度為20%和30%時，水浴反應(yīng)后形成沉淀，因此Na2CO3濃度設(shè)置的上限為15%。
[0039]將各個反應(yīng)樣品在水浴中反應(yīng)I小時后，在765nm波長下檢測各個樣品的吸光值，吸光值越高意味著檢測效果越靈敏。結(jié)果見表1。
[0040]表1各個反應(yīng)樣品在765nm波長下的吸光值
[0041]
【權(quán)利要求】
1.一種竹筍中多酚的提取和檢測方法，其特征在于:該方法的步驟為: (1)備料:選取新鮮竹筍，液氮冷凍后敲碎去殼，筍肉于_70°C保存，備用； (2)超聲波輔助有機溶劑低溫提取竹筍中多酚:提取時，取出一定量竹筍置于研缽中，加入液氮研碎，選取丙酮作提取溶劑，向竹筍中加入丙酮，樣品充分勻漿后收集到離心管中，于10°C以下低溫超聲提取15~60min，離心取上清，即得竹筍多酚提取液； (3)竹筍中多酚的檢測: Folin-ciocalteu法檢測:新鮮竹筍中多酚檢測體系為:多酚提取液0.25mL、水1.75mL、稀釋 6 倍的 Folin-ciocalteu 顯色劑 ImL,5% ~15%Na2C03lmL ； 檢測條件:反應(yīng)溫度:水浴20~35°C，反應(yīng)時間:0.5~3.5h，檢測波長:755nm~770nmo
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種竹筍中多酚的提取和檢測方法，其特征在于:步驟(2)中，選取30%丙酮作提取溶劑，按Ig竹筍加入5~30mL30%丙酮，樣品充分勻漿后收集到50mL離心管中，于10°C以下低溫超聲提取15~60min，離心取上清，即得竹筍多酚提取液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種竹筍中多酚的提取和檢測方法，其特征在于:按Ig竹筍優(yōu)選加入10mL30%丙酮進行提取。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種竹筍中多酚的提取和檢測方法，其特征在于:超聲提取頻率為40kHz，超聲功率150W，提取時間為45min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1·所述的一種竹筍中多酚的提取和檢測方法，其特征在于:步驟(3)中，F(xiàn)olin-ciocalteu法檢測:新鮮竹筍中多酚檢測體系為:多酚提取液0.25mL、水1.75mL、稀釋 6 倍的 Folin-ciocalteu 顯色劑 lmL、15%Na2C03lmL ； 檢測條件:反應(yīng)溫度:水浴25°C，反應(yīng)時間:1.5h，檢測波長:755nm。
【文檔編號】G01N21/31GK103585498SQ201310504273
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月23日
【發(fā)明者】劉長國 申請人:浙江農(nóng)林大學(xué)