利用凝膠滲透色譜處理生物檢材的安眠鎮(zhèn)靜類藥物檢驗方法
【專利摘要】本發(fā)明公開利用凝膠滲透色譜處理生物檢材的安眠鎮(zhèn)靜類藥物檢驗方法，包括如下步驟：(1)在含有安眠鎮(zhèn)靜類藥物的生物檢材中加入有機溶劑A，離心，分離有機相，將得到的有機相濃縮至干，再用有機溶劑A溶解，過有機微孔濾膜后得提取液；(2)提取液進凝膠滲透色譜凈化柱，用有機溶劑B淋洗，收集淋洗液，在濃縮儀上吹干，用有機溶劑C溶解后得到待測液；凝膠滲透色譜凈化柱的填充相為苯乙烯-二乙烯苯共聚物；(3)利用氣相色譜儀對待測液進行檢測。本發(fā)明將凝膠滲透色譜技術(shù)應(yīng)用到毒物分析領(lǐng)域，針對安眠鎮(zhèn)靜類藥物，建立生物檢材中簡單、快速、靈敏度和回收率高的前處理技術(shù)，縮短前處理時間、減少分析成本、提高檢測結(jié)果的可靠，以解決毒物分析中檢材種類繁多、成分復(fù)雜的問題，為提高公安行業(yè)毒物分析檢驗工作的效率提供保障。
【專利說明】利用凝膠滲透色譜處理生物檢材的安眠鎮(zhèn)靜類藥物檢驗方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及刑事偵查領(lǐng)域的藥物、毒物檢測方法，特別涉及一種利用凝膠滲透色譜處理生物檢材的安眠鎮(zhèn)靜類藥物檢驗方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著技術(shù)的進步，對藥物、毒物分析檢驗的要求越來越高，包括高重現(xiàn)性、高回收率、低檢出限和操作簡單易行等，因而急需建立一種簡單、快速、靈敏度和回收率高的前處理方法。目前現(xiàn)有的前處理技術(shù)主要有液液萃取、固相萃取、固相微萃取等，這幾種前處理技術(shù)都是根據(jù)不同化合物的性質(zhì)對其進行分離提取，存在操作步驟繁瑣、容易出現(xiàn)漏檢情況。在樣品前處理技術(shù)中，凝膠滲透色譜技術(shù)作為一種新型的分析技術(shù)，儀器再生能力強，無可逆吸附，對所有樣品都能夠完全洗脫等優(yōu)點已顯現(xiàn)了其潛在的應(yīng)用前景。
[0003]凝膠滲透色譜的理論、試驗技術(shù)、儀器性能尤其是高效填充柱等方面的快速發(fā)展，其應(yīng)用范圍逐漸從生物化學(xué)和高分子化學(xué)擴展到工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥、衛(wèi)生等領(lǐng)域。目前國內(nèi)外的凝膠滲透色譜研究多集中于對植物性產(chǎn)品如蔬菜、水果、谷物等的處理。由于血液、尿液和肝組織等生物檢材中含有的蛋白質(zhì)及油脂等大分子雜質(zhì)難以去除，因此還沒有針對血液、尿液和肝組織等生物檢材中某類毒物的系統(tǒng)檢驗方法。在國內(nèi)公安系統(tǒng)的毒物分析檢測中，凝膠滲透色譜的應(yīng)用還處于起步階段，尚缺少有效可行的方法。因而建立液、尿液和肝組織等生物檢材中常見藥物、毒物的凝膠滲透色譜處理技術(shù)，并應(yīng)用于實際辦案中是當(dāng)前的一項關(guān)鍵任務(wù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種利用凝膠滲透色譜處理生物檢材的安眠鎮(zhèn)靜類藥物檢驗方法，提高對生物檢材中蛋白以及油脂等大分子雜質(zhì)的去除效率，使得對生物檢材中的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥進行檢測時分離效果好、靈敏度高。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的:
[0006]利用凝膠滲透色譜處理生物檢材的安眠鎮(zhèn)靜類藥物檢驗方法，包括如下步驟:(I)在含有安眠鎮(zhèn)靜類藥物的生物檢材中加入有機溶劑A，離心，分離有機相，將得到的有機相濃縮至干，再用有機溶劑A溶解，過有機微孔濾膜后得提取液；(2)提取液進凝膠滲透色譜凈化柱，用有機溶劑B淋洗，收集淋洗液，在濃縮儀上吹干，用有機溶劑C溶解后得到待測液；凝膠滲透色譜凈化柱的填充相為苯乙烯-二乙烯苯共聚物；(3)利用氣相色譜儀對待測液進行檢測。
[0007]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明將凝膠滲透色譜技術(shù)應(yīng)用到毒物分析領(lǐng)域，選擇有代表性的6種安眠鎮(zhèn)靜類藥物，建立血液、尿液和肝組織中簡單、快速、靈敏度和回收率高的前處理技術(shù)，縮短前處理時間、減少分析成本、提高檢測結(jié)果的可靠，以解決毒物分析中檢材種類繁多、成分復(fù)雜的問題，為提高公安行業(yè)毒物分析檢驗工作的效率提供保障。[0008] 本發(fā)明優(yōu)選了提取劑，采用凝膠滲透色譜凈化，氣相色譜檢測，建立了一種快速、準(zhǔn)確、靈敏地測定血液、尿液、肝組織中6種安眠鎮(zhèn)靜類藥物的較理想的方法，具有以下幾個優(yōu)點:
[0009]I簡單、高效、自動化的樣品前處理方法。
[0010]利用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶液、乙酸乙酯、二氯甲烷、環(huán)己烷或環(huán)己醇和丁酸丙酯的混合物作為血液、尿液和肝組織中6種安眠鎮(zhèn)靜類藥物的提取溶劑，采用體積比為
I: I的環(huán)己烷和乙酸乙酯混合溶液作為流動相，使用凝膠滲透色譜能夠有效地凈化血液、尿液、肝組織提取液中的蛋白、油脂、色素等大分子雜質(zhì)，實現(xiàn)分離并富集安眠鎮(zhèn)靜類藥物。
[0011]2毛細管氣相色譜電子捕獲檢測器和氮磷檢測器測定生物檢材中6種安眠鎮(zhèn)靜類藥物。
[0012]該法檢測生物樣品中6種安眠鎮(zhèn)靜類藥物的最小檢出質(zhì)量比范圍30~80ng/mL，精密度1.7%~9.3%，不同添加濃度的平均回收率64.9~96.4%。通過GC/MS對6種安眠鎮(zhèn)靜類藥物進行確證，空白樣品中未檢出6種安眠鎮(zhèn)靜類藥物。
[0013]3對凝膠滲透色譜凈化條件進行了優(yōu)化、對外標(biāo)法定量、添加回收率以及GC-ECD、GC-NPD檢測進行了研究，建立了一種快速有效的檢測血液、尿液和肝組織中6種安眠鎮(zhèn)靜類藥物的較為理想的方法。
[0014]優(yōu)選使用環(huán)己醇和丁酸丙酯的混合物、異戊醚和環(huán)庚烷的混合溶液、以及環(huán)己酮和乙二醇二乙醚的混合溶液作為提取溶劑，并且使用凝膠滲透色譜凈化技術(shù)，能夠提高對血液、尿液和肝組織中蛋白以及油脂等大分子雜質(zhì)的去除效率，并且采用GC-ECD和GC-NPD檢測6種安眠鎮(zhèn)靜類藥物農(nóng)藥，使得本發(fā)明具有分離效果好、靈敏度高等優(yōu)點。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1A為地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖和三唑侖的標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖；
[0016]圖1B為氯丙嗪和異丙嗪的標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖；
[0017]圖2A空白血液中添加地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖和三唑侖標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖；圖2B空白血液中添加氯丙嗪和異丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖；
[0018]圖3A空白尿液中添加地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖和三唑侖標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖；圖3B空白尿液中添加氯丙嗪和異丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖；
[0019]圖4A空白肝組織中添加地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖和三唑侖標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖；圖4B空白肝組織中添加氯丙嗪和異丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖；
[0020]圖5A~圖5X為空白血液、空白尿液、空白肝組織中添加安眠鎮(zhèn)靜類藥物標(biāo)準(zhǔn)品在不同常溫下放置一定時間的GPC凈化效果比較(黑色:GPC凈化前；紫色:GPC凈化后)；其中:圖5A為空白血液中添加苯二氮卓類(在本發(fā)明中，苯二氮卓類包括:地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖和三唑侖)標(biāo)準(zhǔn)品并在4°C放置I星期；圖5B為空白血液中添加苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)品并在4°C放置2星期；圖5C為空白血液中添加苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)品并在常溫放置I星期；圖為空白血液中添加苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)品并在常溫放置2星期；圖5￡為空白尿液中添加苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)品并在4°C放置I星期；圖5F為空白尿液中添加苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)品并在4°C放置2星期；圖5G為空白尿液中添加苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)品并在常溫放置I星期；圖5H為空白尿液中添加苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)品并在常溫放置2星期；圖51為空白肝組織中添加苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)品并在4°C放置I星期；圖5J為空白肝組織中添加苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)品并在4°C放置2星期；圖5K為空白肝組織中添加苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)品并在常溫放置I星期；圖5L為空白肝組織中添加苯二氮卓類標(biāo)準(zhǔn)品并在常溫放置2星期；圖511為空白血液中添加噻吩嗪類標(biāo)準(zhǔn)品(在本發(fā)明中，噻吩嗪類包括:氯丙嗪和異丙嗪)標(biāo)準(zhǔn)品并在4°C放置I星期；圖5N為空白血液中添加噻吩嗪類標(biāo)準(zhǔn)品并在4°C放置2星期；圖50為空白血液中添加噻吩嗪類標(biāo)準(zhǔn)品并在常溫放置I星期；圖5P為空白血液中添加噻吩嗪類標(biāo)準(zhǔn)品并在常溫放置2星期；圖5Q為空白尿液中添加噻吩嗪類標(biāo)準(zhǔn)品并在4°C放置I星期；圖5R為空白尿液中添加噻吩嗪類標(biāo)準(zhǔn)品并在4°C放置2星期；圖5S為空白尿液中添加噻吩嗪類標(biāo)準(zhǔn)品并在常溫放置I星期；圖5T為空白尿液中添加噻吩嗪類標(biāo)準(zhǔn)品并在常溫放置2星期；圖5U為空白肝組織中添加噻吩嗪類標(biāo)準(zhǔn)品并在4°C放置I星期；圖5V為空白肝組織中添加噻吩嗪類標(biāo)準(zhǔn)品并在4°C放置2星期；圖5W為空白肝組織中添加噻吩嗪類標(biāo)準(zhǔn)品并在常溫放置I星期；圖5X為空白肝組織中添加噻吩嗪類標(biāo)準(zhǔn)品并在常溫放置2星期；圖6空白血液的GPC流出規(guī)律圖(NPD)【橫坐標(biāo)為時間，單位:分鐘】；圖7空白尿液的GPC流出規(guī)律圖(NPD)【橫坐標(biāo)為時間，單位:分鐘】；圖8空白肝臟的GPC流出規(guī)律圖(NPD)【橫坐標(biāo)為時間，單位:分鐘】；
[0021]圖9A~圖9F為6種安眠鎮(zhèn)靜類藥物單標(biāo)GPC色譜圖，其中:圖9A為地西泮的GPC色譜圖；圖98為艾司唑侖的GPC色譜圖；圖9C為阿普唑侖的GPC色譜圖；圖90為三唑侖的GPC色譜圖；圖9E為氯丙嗪的GPC色譜圖；圖9F為異丙嗪的GPC色譜圖；
[0022]圖1OA為地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖和三唑侖的GPC流出規(guī)律圖【橫坐標(biāo)為時間，單位:分鐘】；圖1OB為氯丙嗪和異丙嗪的GPC流出規(guī)律圖【橫坐標(biāo)為時間，單位:分鐘】。
【具體實施方式】
[0023]實施例1
[0024]一、生物樣品的準(zhǔn)備
[0025]空白血液和空白尿液均采自一周內(nèi)未服用任何藥物的健康志愿者；空白肝組織采自于一周內(nèi)未服用任何藥物的生豬。地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖、氯丙嗪和異丙嗪均購于國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心。
[0026]二、實驗條件
[0027]2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
[0028]標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制:分別稱取地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖、氯丙嗪和異丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品各10mg，分別置于IOmL容量瓶中，分別加少量甲醇溶解并定容至刻度，分別配制成lmg/mL的地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖、氯丙嗪和異丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，4°C冰箱中保存，備用。
[0029]分別移取一定量的單個安眠鎮(zhèn)靜類藥物標(biāo)準(zhǔn)品儲備液配制安眠鎮(zhèn)靜類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，即:安眠鎮(zhèn)靜類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中的溶質(zhì)為地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖、氯丙嗪和異丙嗪。
[0030]標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制:分別取配制好的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，稀釋為所需濃度的工作溶液，于4°C冰箱中保存，備用。
[0031]2.2色譜條件
[0032]2.2.1凝膠滲透色譜條件[0033]凈化柱:300mmX 20mm,內(nèi)裝苯乙烯-二乙烯苯共聚物(Bio-Beads SX-3)填料；流動相:乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶液(二者體積比1:1);流速:4.7mL/min ;進樣量:5mL ；檢測波長為254nm ;開始收集時間:IImin ;結(jié)束收集時間:18min ;在線濃縮溫度和真空度:
I區(qū):42°C 30.0KPa ；2 區(qū):51 °C 24.0KPa ；3 區(qū):52°C 22.0KPa0
[0034]2.2.2 氣相色譜條件(GC/ECD)
[0035]2010 氣相色譜儀(GC/ECD)條件:DB-1 (30mX 0.25_X 0.25 y m)石英毛細管柱，載氣為高純氮氣(99.99 % )，流量1.0mL/min，柱溫200°C (lmin) - 10 °C /min — 280°C (IOmin);進樣口溫度280°C，分流進樣；檢測器溫度300°C。
[0036]2.2.3 氣相色譜條件(GC/NPD)
[0037]2010 氣相色譜儀(GC/NPD)條件:DB-1 (30mX 0.25_X 0.25 y m)石英毛細管柱，載氣為高純氮氣(99.99 % )，流量1.0mL/min，柱溫200°C (lmin) - 10 °C /min — 280°C (Ilmin);進樣口溫度280°C，分流進樣；檢測器溫度300°C。
[0038]2.2.4氣相色譜-質(zhì)譜條件(GC/MS)
[0039]苯二氮卓類藥物:2010氣相色譜-質(zhì)譜儀(GC/MS)條件:DB-5MS(30mX0.25mmX0.25 u m)毛細管柱，載氣高純氮氣(99.99 %)，流量 1.0mL/min，柱溫:在100°C保持2min、然后以30°C /min的速度升溫到280°C、在280°C保持17min ;傳輸線溫度230°C;進樣口溫度250°C，分流進樣。質(zhì)譜條件:NCI電離源，電子能量70eV，離子源溫度200°C。調(diào)諧方式為自動調(diào)諧，倍增電壓1102V，發(fā)射電流100 u A0全掃描定性分析，掃描起始時間3min,掃描范圍40amu~450amu。
[0040]吩噻嗪類藥物:2010氣相色譜-質(zhì)譜儀(GC/MS)條件:DB-5MS(30mX0.25mmX0.25 u m)毛細管柱，載氣高純氮氣(99.99 %)，流量 1.0mL/min，柱溫:在100°C保持2min、然后以30°C /`min的速度升溫到280°C、在280°C保持17min ;傳輸線溫度230°C ;進樣口溫度250°C，分流進樣。質(zhì)譜條件:EI電離源，電子能量70eV，離子源溫度200°C。調(diào)諧方式為自動調(diào)諧，倍增電壓1.lkV，發(fā)射電流IOOii A。全掃描定性分析，掃描起始時間3min,掃描范圍40amu~450amu。
[0041]2.3實驗方法
[0042]2.3.1樣品制備
[0043]取新鮮豬肝組織或豬肉在自動勻漿機內(nèi)勻漿后放入潔凈的密閉容器中低溫保存。
[0044]2.3.2空白生物樣品提取液的制備
[0045]2.3.2.1取ImL空白血液【注:本發(fā)明中的空白血液是指不含有擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的血液，同理:本發(fā)明中的空白尿液和空白肝組織分別指不含有擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的尿液和肝組織】，放入15mL離心管中，混勻振蕩，放置30min。加入pHIO的緩沖液1.5mL,振蕩混勻，在離心管中加入IOmL乙酸乙酯-環(huán)己燒(1:1),振蕩IOmin, 8000rpm離心IOmin,分離有機相后，再加入IOmL乙酸乙酯-環(huán)己烷(I: I)第二次提取，合并兩次提取液，置于50°C快速濃縮儀上濃縮至干，用乙酸乙酯-環(huán)己烷(I: I)流動相定容至8mL，過0.45iim有機濾膜，作為提取液。
[0046]2.3.2.2分別取ImL空白尿液，其余步驟同步驟2.3.2.1，得空白尿液的提取液。
[0047]2.3.2.3取勻漿后的Ig肝組織，混勻振蕩，放置30min。加入0.2mL甲醇充分混旋，加入PHlO緩沖液1.5mL，振蕩混勻，在離心管中加入IOmL乙酸乙酯-環(huán)己烷(I: I),振蕩10min,8000rpm離心IOmin,分離有機相后,剩余殘洛再加入IOmL乙酸乙酯-環(huán)己燒(I: 1)，振蕩10min，8000rpm離心lOmin，分離有機相。合并兩次有機相，置于35°C快速濃縮儀上濃縮至干，用乙酸乙酯-環(huán)己烷(I: I)流動相定容至8mL，過0.45 有機濾膜，作為提取液。
[0048]2.3.3、含安眠鎮(zhèn)靜類藥物標(biāo)準(zhǔn)品的生物樣品的提取液的制備
[0049]2.3.3.1、添加安眠鎮(zhèn)靜類藥物標(biāo)準(zhǔn)品的血液的提取液
[0050]取ImL添加安眠鎮(zhèn)靜類藥物標(biāo)準(zhǔn)品的血液，提取安眠鎮(zhèn)靜類藥物，操作步驟同
2.3.2.1，得到添加安眠鎮(zhèn)靜類藥物標(biāo)準(zhǔn)品的血液的提取液。
[0051]2.3.3.2、添加安眠鎮(zhèn)靜類藥物標(biāo)準(zhǔn)品的尿液的提取液
[0052]取ImL添加安眠鎮(zhèn)靜類藥物標(biāo)準(zhǔn)品的尿液，提取安眠鎮(zhèn)靜類藥物，操作步驟同
2.3.2.2，得到添加安眠鎮(zhèn)靜類藥物標(biāo)準(zhǔn)品的尿液的提取液。
[0053]2.3.3.3、添加安眠鎮(zhèn)靜類藥物標(biāo)準(zhǔn)品的肝組織的提取液
[0054]取Ig添加安眠鎮(zhèn)靜類藥物標(biāo)準(zhǔn)品的勻漿后的肝組織，提取安眠鎮(zhèn)靜類藥物，操作步驟同2.3.2.3，得到添加 安眠鎮(zhèn)靜類藥物標(biāo)準(zhǔn)品的肝組織的提取液。
[0055]2.3.3凝膠滲透色譜凈化條件
[0056]2.3.3.1凝膠滲透色譜洗脫曲線
[0057]進4.8mL濃度為I y g/ml的安眠鎮(zhèn)靜類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液到GPC凈化系統(tǒng)，采用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶液(二者體積比為1:1)作為流動相進行淋洗，流量為5ml/min,檢測波長為254nm。每Imin收集于一個試管中，收集20個,分別濃縮儀上濃縮至干,分別用色譜純甲醇定容至0.lmL，得到待測液I。
[0058]空白血液、空白尿液、空白肝組織的提取液分別進GPC上做空白洗脫曲線，得到待測液2、3和4。
[0059]2.3.3.2凝膠滲透色譜洗脫曲線
[0060]添加安眠鎮(zhèn)靜類藥物的血液、尿液、肝組織的提取液進GPC凈化系統(tǒng)，收集第7min~16min流出物，于J2-Scientific在線濃縮系統(tǒng)下將流出液濃縮至干，用色譜純甲醇定容至0.lmL，得到待測液5、6和7，進行6種安眠鎮(zhèn)靜類藥物的分析檢驗。
[0061]2.3.4氣相色譜定性、定量分析6種安眠鎮(zhèn)靜類藥物
[0062]2.3.4.1氣相色譜定性、定量分析
[0063]待測液I采用島津氣相色譜檢測【在本發(fā)明中，苯二氮卓類安眠鎮(zhèn)靜類藥物(地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖和三唑侖)采用GC-E⑶檢測，吩噻嗪類安眠鎮(zhèn)靜藥物(氯丙嗪和異丙嗪)采用GC-NH)檢測)各段流出液中藥物的含量，繪制出安眠鎮(zhèn)靜類藥物在凝膠滲透色譜上的流出曲線【參見圖3-1A~3-1B】，從而確定淋洗溶劑的體積以及收集體積。待測液
5、6和7在該色譜上進行檢測(參見圖3-2A、圖3-2B、圖3-3A、圖3-3B、圖3-4A、圖3-4B)，取得精密度以及回收率實驗數(shù)據(jù)，并且可以通過外標(biāo)法進行定量。
[0064]2.3.4.2GC-MS (氣相色譜儀-質(zhì)譜聯(lián)用儀)確證
[0065]表3-26種安眠鎮(zhèn)靜類藥物的碎片離子
[0066]
【權(quán)利要求】
1.利用凝膠滲透色譜處理生物檢材的安眠鎮(zhèn)靜類藥物檢驗方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)在含有安眠鎮(zhèn)靜類藥物的生物檢材中加入有機溶劑A，離心，分離有機相，將得到的有機相濃縮至干，再用有機溶劑A溶解，過有機微孔濾膜后得提取液； (2)提取液進凝膠滲透色譜凈化柱，用有機溶劑B淋洗，收集淋洗液，在濃縮儀上吹干，用有機溶劑C溶解后得到待測液；凝膠滲透色譜凈化柱的填充相為苯乙烯-二乙烯苯共聚物； (3)利用氣相色譜儀對待測液進行檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用凝膠滲透色譜處理生物檢材的安眠鎮(zhèn)靜類藥物檢驗方法，其特征在于，在步驟(1)中，生物檢材為血液、尿液或肝組織，安眠鎮(zhèn)靜類藥物為地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖、氯丙嗪和異丙嗪中的一種或多種；有機微孔濾膜的孔徑為0.35~0.55 ym;在步驟(2)中，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶液進行淋洗；有機溶劑C為色譜純甲醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用凝膠滲透色譜處理生物檢材的安眠鎮(zhèn)靜類藥物檢驗方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)分別將含有安眠鎮(zhèn)靜類藥物的血液樣品、含有安眠鎮(zhèn)靜類藥物的尿液樣品和含有安眠鎮(zhèn)靜類藥物的勻漿肝樣品加入到離心管中，混勻振蕩，放置，加入PH為10的磷酸鹽緩沖溶液使混合溶液PH等于10，向離心管中加入乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶液、乙酸乙酯、二氯甲烷、環(huán)己烷或環(huán)己醇和丁酸丙酯的混合物，振蕩，離心，分離有機相，再向離心管中加入乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶液、乙酸乙酯、二氯甲烷、環(huán)己烷、環(huán)己醇和丁酸丙酯的混合物、異戊醚和環(huán)庚烷的混合溶`液或環(huán)己酮和乙二醇二乙醚的混合溶液，振蕩，離心，分離有機相，合并兩次獲得的有機相，置于濃縮儀上濃縮至干，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶液溶解，過有機微孔濾膜，得到提取液； (2)提取液進凝膠滲透色譜凈化柱，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶液淋洗，收集淋洗液，在濃縮儀上吹干，色譜純甲醇溶解后得到待測液；凝膠色譜條件:凝膠滲透色譜凈化柱:300mmX20mm,凝膠滲透色譜凈化柱的填充相為苯乙烯-二乙烯苯共聚物,流動相:乙酸乙酯和環(huán)己燒的混合溶液，流速:4.7mL/min,進樣量:5mL,檢測波長為254nm,開始收集時間:llmin，結(jié)束收集時間:18min，在線濃縮溫度和真空度:1區(qū):42°C、30.0KPa，2區(qū):51°C、`24.0KPa, 3 區(qū):52 °C >22.0KPa ； (3)分別利用帶電子捕獲檢測器的氣相色譜儀和帶氮磷檢測器的氣相色譜儀對待測液進行檢測: 帶電子捕獲檢測器的氣相色譜儀的氣相色譜條件:30mX0.25mmX0.25 y m的DB-1石英毛細管柱，載氣為純度為99.99%的氮氣，流量1.0mL/min，柱溫:200°C保持lmin、然后以IO0C /min的速度升溫至280°C、保持IOmin ;進樣口溫度280°C，分流進樣，電子捕獲檢測器溫度300°C ； 帶氮磷檢測器的氣相色譜儀的氣相色譜條件:30mX0.25mmX0.25 ii m的DB-1石英毛細管柱，載氣為純度為99.99%的氮氣，流量1.0mL/min，柱溫:200°C保持lmin、然后以IO0C /min的速度升溫到280°C、280°C保持Ilmin ;進樣口溫度280°C，分流進樣，氮磷檢測器溫度300°C ；并利用氣相色譜儀-質(zhì)譜聯(lián)用儀進行安眠鎮(zhèn)靜類藥物的確證，檢測苯二氮卓類藥物的氣相色譜-質(zhì)譜條件:30mX0.25mmX0.25 y m的DB-5MS毛細管柱，載氣為純度為99.99%的氮氣，流量1.0mL/min，柱溫:在100°C保持2min、然后以30°C /min的速度升溫到280°C、在280°C保持17min ;傳輸線溫度230°C ;進樣口溫度250°C，分流進樣；質(zhì)譜條件:NCI電離源，電子能量70eV，離子源溫度200°C。調(diào)諧方式為自動調(diào)諧，倍增電壓1102V，發(fā)射電流100 u A ;全掃描定性分析，掃描起始時間3min，掃描范圍40amu~450amu ;檢測吩噻嗪類藥物的氣相色譜-質(zhì)譜條件:30m X0.25mm X0.25 y m的DB-5MS毛細管柱，載氣為純度為.99.99%的氮氣，流量1.0mL/min，柱溫:在100°C保持2min、然后以30°C /min的速度升溫到.280°C、在280°C保持17min ;傳輸線溫度230°C;進樣口溫度250°C，分流進樣；質(zhì)譜條件:EI電離源，電子能量70eV，離子源溫度200°C ;調(diào)諧方式為自動調(diào)諧，倍增電壓1.lkV，發(fā)射電流100 Ii A ;全掃描定性分析,掃描起始時間3min,掃描范圍40amu~450amu。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用凝膠滲透色譜處理生物檢材的安眠鎮(zhèn)靜類藥物檢驗方法，其特征在于，在步驟(1)和步驟(2)中:乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶液中乙酸乙酯和環(huán)己烷體積比為1:1 ;在步驟(1)中:環(huán)己醇和丁酸丙酯的混合物中環(huán)己醇和丁酸丙酯體積比為2: 11，異戊醚和環(huán)庚烷的混合溶液中異戊醚和環(huán)庚烷的體積比為3: 5，環(huán)己酮和乙二醇二乙醚的混合溶液中環(huán)己酮和乙二醇二乙醚的體積比為4: 3。
【文檔編號】G01N30/02GK103558300SQ201310340446
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年8月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月7日
【發(fā)明者】欒玉靜, 王瑞花, 董穎, 張蕾萍, 杜鴻雁, 常靖, 王芳琳, 王炯, 張云峰, 侯小平, 于忠山, 何毅, 崔冠峰 申請人:公安部物證鑒定中心