食用植物油中9種營養(yǎng)物的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種食用植物油中9種營養(yǎng)物的檢測方法，包括：一、將食用植物油溶解在體積比為1:1的環(huán)己烷和乙酸乙酯的混合溶劑中得食用植物油溶液；二、將第一步中制得的食用植物油溶液注入至制備型凝膠滲透色譜儀中進(jìn)行凈化，凈化條件為：凝膠色譜柱300mm×20mm；進(jìn)樣量為5mL；流動相為體積比為1:1的環(huán)己烷和乙酸乙酯混合溶劑；流速4.7mL/min；流出液收集時間為第7’40’’～第15’00’’，流出液吹干所得的殘渣溶解后過濾得目標(biāo)分析溶液；三、將第二步得到的目標(biāo)分析溶液注入至液相色譜—質(zhì)譜儀中進(jìn)行測定，采用外標(biāo)法進(jìn)行分析得9種營養(yǎng)物——高根二醇、熊果醇、麥角固醇、菜籽甾醇、菜油甾醇、巖藻甾醇、豆甾醇、膽固醇、β-谷甾醇的含量。
【專利說明】食用植物油中9種營養(yǎng)物的檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物油中營養(yǎng)物檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及食用植物油中的植物留醇和 三萜烯二醇中9種營養(yǎng)物的檢測方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 食用植物油的主要成分包括甘油三脂（95-98% )和不皂化物（2-5% )。不皂化物 中的主要成分為植物留醇和三萜烯二醇，植物留醇和三萜烯二醇中主要的9種營養(yǎng)物為： 高根二醇、熊果醇、麥角固醇、菜籽留醇、菜油留醇、巖藻留醇、豆留醇、膽固醇、谷甾醇， 該9種營養(yǎng)物在食用植物油中的營養(yǎng)價值已得到普遍認(rèn)同，添加相關(guān)營養(yǎng)物的營養(yǎng)強(qiáng)化植 物油已經(jīng)逐漸走向市場。
[0003] 傳統(tǒng)的食用植物油中的植物留醇和三萜烯二醇的檢測方法較多，檢測方法中的關(guān) 鍵一步是：將食用植物油中的甘油三脂與不皂化物進(jìn)行分離后得到不皂化物，即對食用植 物油進(jìn)行凈化前處理。如目前國內(nèi)留醇測定的標(biāo)準(zhǔn)方法GB/T25223-2010 (等同IS012228 : 1999)中采用氣相色譜儀（GC-FID)進(jìn)行檢測，其前處理工作包括皂化、萃取、薄層層析、硅 烷化四個步驟，這四個步驟均需要進(jìn)行手工操作，操作起來繁瑣、復(fù)雜，而且還容易導(dǎo)致重 復(fù)性差等問題，并且利用該方法檢測需要三天左右的時間，耗時極為漫長；此外，國際上還 有一種高效液相色譜質(zhì)譜法（HPLC-MS)，此方法的前處理過程中雖然省去了薄層層析和硅 烷化步驟，但依然需要皂化、萃取，而皂化和萃取依然需要手工操作，因此該方法操作起來 仍然十分繁瑣復(fù)雜。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是：提供一種易操作、自動化程度高、穩(wěn)定性好、靈敏度高、檢測時間 短的食用植物油中9種營養(yǎng)物的檢測方法。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：食用植物油中9種營養(yǎng)物的檢測方 法，所述的9種營養(yǎng)物為高根二醇、熊果醇、麥角固醇、菜籽留醇、菜油留醇、巖藻留醇、豆甾 醇、膽固醇、谷留醇，所述的檢測方法包括以下步驟：一、將待測的食用植物油溶解在體 積比為1 : 1的環(huán)己烷和乙酸乙酯的混合溶劑中制得食用植物油溶液，所述的食用植物油 溶液的濃度為10?50g/L;二、將第一步中制得的食用植物油溶液注入至制備型凝膠滲透 色譜儀中進(jìn)行凈化，所述的制備型凝膠色譜儀的凈化條件為：凝膠色譜柱為300mmX20mm， 進(jìn)樣量為5mL，流動相為體積比為1 : 1的環(huán)己烷和乙酸乙酯混合溶劑，流速4.7mL/min， 流出液收集至接收管中、且收集時間為第7' 40"?第15' 00"，將接收管中的流出液進(jìn)行吹 干，吹干后所得的殘渣溶解后過濾得目標(biāo)分析溶液；三、將第二步得到的目標(biāo)分析溶液注入 至液相色譜-質(zhì)譜儀中進(jìn)行測定，采用外標(biāo)法進(jìn)行分析得到9種營養(yǎng)物--高根二醇、熊果 醇、麥角固醇、菜籽留醇、菜油留醇、巖藻留醇、豆留醇、膽固醇、谷留醇的含量。
[0006] 進(jìn)一步地，前述的食用植物油中9種營養(yǎng)物的檢測方法，其中，第三步中液 相色譜-質(zhì)譜儀的儀器條件為：色譜部分：色譜柱為EclipseXDB-C18, 5iim粒徑， 4. 6mmX150mm;柱溫為30°C;進(jìn)樣量10yL;停止時間35min;采用乙腈、甲醇和甲酸水溶液 三種物料混合形成的流動相，所述的流動相按照流動相梯度表提供的參數(shù)進(jìn)行梯度洗脫， [0007]流動相梯度表

【權(quán)利要求】
1. 食用植物油中9種營養(yǎng)物的檢測方法，所述的9種營養(yǎng)物為高根二醇、熊果醇、麥角 固醇、菜籽留醇、菜油留醇、巖藻留醇、豆留醇、膽固醇、￠-谷留醇，所述的檢測方法包括以 下步驟：一、將待測的食用植物油溶解在體積比為I : 1的環(huán)己烷和乙酸乙酯的混合溶劑中 制得食用植物油溶液，所述的食用植物油溶液的濃度為10?50g/L ;二、將第一步中制得的 食用植物油溶液注入至制備型凝膠滲透色譜儀中進(jìn)行凈化，所述的制備型凝膠色譜儀的凈 化條件為：凝膠色譜柱為300mmX 20mm，進(jìn)樣量為5mL，流動相為體積比為I : 1的環(huán)己燒 和乙酸乙酯混合溶劑，流速4. 7mL/min，流出液收集至接收管中、且收集時間為第7' 40"? 第15'00"，將接收管中的流出液進(jìn)行吹干，吹干后所得的殘渣溶解后過濾得目標(biāo)分析溶液； 三、將第二步得到的目標(biāo)分析溶液注入至液相色譜-質(zhì)譜儀中進(jìn)行測定，采用外標(biāo)法進(jìn)行 分析得到9種營養(yǎng)物--高根二醇、熊果醇、麥角固醇、菜籽留醇、菜油留醇、巖藻留醇、豆甾 醇、膽固醇、￠-谷甾醇的含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的食用植物油中9種營養(yǎng)物的檢測方法，其特征在于：第三 步中液相色譜-質(zhì)譜儀的儀器條件為：色譜部分：色譜柱為Eclipse XDB-C18, 5 ii m粒徑， 4. 6mmX 150mm ;柱溫為30°C ;進(jìn)樣量10 y L ;停止時間35min ;采用乙腈、甲醇和甲酸水溶液 三種溶劑混合形成的流動相，所述的流動相按照流動相梯度表提供的參數(shù)進(jìn)行梯度洗脫， 流動相梯度表
其中：A為體積濃度為0. 15%的甲酸水溶液，B為乙腈，D為甲醇，表1內(nèi)A、B、D按體積 百分比進(jìn)行配比；質(zhì)譜部分：干燥氣流速6L/min ;干燥氣溫度為350°C ;霧化器壓力60psi ; 蒸發(fā)室溫度為350°C;毛細(xì)管電壓3500V ;電暈針電流A ;APCI離子源；正離子掃描；選擇 離子監(jiān)測模式，離子監(jiān)測模式的具體參數(shù)按照待測物的保留時間及SIM參數(shù)表 待測物的保留時間及SIM參數(shù)表
O
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的食用植物油中9種營養(yǎng)物的檢測方法，其特征在于：第二 步中流出液吹干過程為：將接收管內(nèi)的流出液轉(zhuǎn)移至全自動定量濃縮儀的濃縮管內(nèi)后在 35°C下氮氣吹干，吹干所得的殘渣用2. OmL乙腈溶解后由孔徑為0. 22 y m的濾膜過濾得目 標(biāo)分析溶液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的食用植物油中9種營養(yǎng)物的檢測方法，其特征在于：將接收 管內(nèi)的流出液轉(zhuǎn)移至全自動濃縮儀中的濃縮管中后，用乙酸乙酯蕩洗兩次接收管，并將兩 次的蕩洗液合并至全自動濃縮儀中的濃縮管中，然后再進(jìn)行吹干。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的食用植物油中9種營養(yǎng)物的檢測方法，其特征在于：第二步 中使用的凝膠色譜柱為快速柱。
【文檔編號】G01N30/06GK104330496SQ201410620656
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月6日
【發(fā)明者】顧強(qiáng), 乙小娟, 石晶, 劉一軍, 張慧, 陳忍忍, 申進(jìn)玲, 王玥, 邵景東 申請人:中華人民共和國張家港出入境檢驗檢疫局