胃乃安片的質(zhì)量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種胃乃安片的質(zhì)量檢測方法，所述質(zhì)量檢測方法采用以下鑒別和含量測定項目中的一項或多項：黃芪的薄層鑒別；黃芪、紅參和三七的薄層鑒別；人工牛黃的薄層鑒別；胃乃安片的高效液相色譜定性定量鑒別方法；黃芪甲苷的高效液相色譜定量鑒別方法。本發(fā)明改進和修訂了原有胃乃安膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增訂了黃芪中四種黃酮類成分及黃芪甲苷的薄層鑒別，同時增訂了紅參的薄層鑒別，并對指標(biāo)成分黃芪甲苷、人參皂Rg1、Rb1及三七皂苷R1同時進行鑒別;采用HPLC-PDA-ELSD聯(lián)用技術(shù)結(jié)合建立其主要活性成分的含量測定及其特征圖譜，實現(xiàn)胃乃安片質(zhì)量的有效控制，并同時具有高效、定量準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好、精密度高和重復(fù)性佳的優(yōu)點。
【專利說明】胃乃安片的質(zhì)量檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種胃乃安片的質(zhì)量檢測方法。

【背景技術(shù)】
[0002]胃乃安膠囊主要由黃芪、三七、紅參、珍珠層粉、人工牛黃等組成，具有補氣健脾，活血止痛的功能，用于脾胃氣虛，淤血阻滯所致的胃痛，癥見胃脘隱痛或刺痛、納呆食少；慢性胃炎、胃及十二指腸潰瘍見上述癥候者，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)收載于《中國藥典》2010年版一部，中國專利號ZL200510037077.7，發(fā)明名稱為“一種治療消化性潰瘍的中成藥及其制備方法”的發(fā)明專利公開了其組合物及其制備方法。胃乃安片為保持胃乃安膠囊原組方不變的基礎(chǔ)上，以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，以臨床療效為基礎(chǔ)，應(yīng)用先進的現(xiàn)代中藥制劑新工藝、新設(shè)備、新技術(shù)和新材料對胃乃安膠囊進行二次開發(fā)而研制出的新劑型。其制備方法為黃芪、三七、紅參混合加水煎煮二次，濾過，濾液合并，濾液減壓濃縮成稠膏；珍珠層粉超微粉碎，與稠膏混合后干燥，粉碎，研配加入輔料及超微粉碎的人工牛黃；流化床制粒，干燥壓制成而成，包薄膜衣，即得，上述胃乃安片的制備方法已申請中國發(fā)明專利(專利申請?zhí)?201210267101.6)。
[0003]原胃乃安膠囊的質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn)相對比較落后，只對三七、人工牛黃及黃芪的部分活性物質(zhì)進行質(zhì)量檢測，不能對其質(zhì)量進行全面的檢測；本發(fā)明提供一種胃乃安片的高效、準(zhǔn)確的鑒別和含量測定方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]基于此，本發(fā)明提供一種胃乃安片的鑒別和含量測定方法。
[0005]解決上述技術(shù)問題的具體技術(shù)方案如下:
[0006]一種胃乃安片的測定方法，所述檢測方法采用以下鑒別和含量測定項目中的一項或多項:
[0007]( I)黃芪的薄層鑒別:
[0008]a制備供試品溶液:將胃乃安片研細(xì)，取1.8-2.28，加甲醇48-52!111，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28_32ml，合并上層乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇0.8-1.2ml使溶解，作為供試品溶液；
[0009]b制備黃芪對照藥材溶液:取黃芪對照藥材1.8-2.2g，加甲醇48_52ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28_32ml，合并上層乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為黃芪對照藥材溶液；
[0010]C制備對照品溶液:取芒柄花素對照品、毛蕊異黃酮對照品、芒柄花苷對照品及毛蕊異黃酮苷對照品，分別加甲醇制成每Iml甲醇含0.8-1.2mg上述對照品的甲醇溶液，作為對照品溶液；
[0011]d檢測:取步驟a所述供試品溶液、步驟b所述黃芪對照藥材溶液各9-10 μ I和步驟c所述對照品溶液1.8-2.2 μ 1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比19-21:19-21: 8-10的甲苯-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；再噴以0.08-0.12%的1，1- 二苯基-2-三硝基苯肼無水乙醇溶液，晾干，置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0012](2)黃芪、紅參和三七的薄層鑒別，步驟如下:
[0013]a制備供試品溶液:將胃乃安片研細(xì)，取1.8-2.28，加甲醇48-52!111，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28_32ml，合并下層水液，用水飽和正丁醇振搖提取3-4次，每次28-32ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2_3次，每次28-32ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，作為供試品溶液；
[0014]b制備對照藥材溶液:取黃芪對照藥材1.8-2.2g，加甲醇48_52ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28_32ml，合并下層水液，用水飽和正丁醇振搖提取3-4次，每次28-32ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2_3次，每次28-32ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，作為黃芪對照藥材溶液；另取紅參對照藥材0.45-0.55g與三七對照藥材0.65-0.75g，分別加水90-110ml，煎煮55-65min，過濾，濾液用乙酸乙酯提取3_4次，每次28_32ml，棄去乙酸乙酯液，再用水飽和正丁醇振搖提取3-4次，每次28-32ml，合并正丁醇液，后用氨試液洗滌2_3次，每次28-32ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，分別制得紅參對照藥材溶液和三七對照藥材溶液；
[0015]C制備對照品混合溶液:取黃芪甲苷對照品、人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品及三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每Iml甲醇各含0.8-1.2mg的上述對照品的混合溶液，作為對照品混合溶液；
[0016]d檢測:取步驟a所述供試品溶液與步驟c所述對照品混合溶液各1.8-2.2 μ 1、步驟b所述黃芪對照藥材溶液8-12 μ 1、紅參對照藥材溶液5-7 μ I和三七對照藥材溶液
0.8-1.2 μ I,分別點于同一娃膠G薄層板上，以體積比3.5-4.5:1:4.5-5.5的正丁醇-乙酸乙酯-稀氨的上層溶液為展開劑，置于濃氨試液預(yù)飽和20分鐘的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以9-11%硫酸乙醇溶液，在100-110°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；置365nm紫外光燈下檢視，顯相同顏色的熒光斑點；
[0017](3)人工牛黃的薄層鑒別:
[0018]a制備供試品溶液:將胃乃安片研細(xì)，取0.18-0.22g，加甲醇18_22ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加甲醇0.8-1.2ml使溶解，作為供試品溶液；
[0019]b制備對照藥材溶液:取人工牛黃對照藥材8_12mg,加甲醇1.5-2.5ml,超聲處理，離心，取上清液作為對照藥材溶液；
[0020]c制備對照品溶液:取膽酸對照品、豬去氧膽酸對照品，分別加甲醇制成每Iml甲醇中含0.8-1.2mg上述對照品的溶液，作為膽酸對照品溶液和豬去氧膽酸對照品溶液；
[0021]d檢測:取步驟a所述供試品溶液、步驟b所述對照藥材溶液和步驟c所述膽酸對照品溶液和豬去氧膽酸對照品溶液各0.8-1.2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為18-22:23-27:2.5-3.5:1.5-2.5的環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸的上層溶液為展開齊U，展開，取出，晾干，噴以9-11%硫酸乙醇溶液，在105°c加熱至斑點顯色清晰，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的突光斑點；
[0022](4)胃乃安片的高效液相色譜定性鑒別方法，包括如下步驟:
[0023]a色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈為流動相A，0.1%甲酸為流動相B，梯度洗脫，PDA/ELSD串聯(lián)檢測；所述PDA的檢測波長為260nm ；ELSD參數(shù)為:漂移管溫度:60°C，載氣流速:35psi，增益值:200 ;理論板數(shù)按毛蕊異黃酮苷峰和人參皂苷Rb1峰計算均應(yīng)不低于5000 ;所述梯度洗脫為:0-32min，5% — 18%乙腈；32_38min，18% — 22%乙腈；38-58min, 22% 乙腈；58_70min，22% — 32% 乙腈；70_84min，32% — 34% 乙腈；84_96min，34% 乙腈；96-102min,34% — 40% 乙腈；102-125min, 40% — 67% 乙腈；
[0024]b制備參照物溶液:取毛蕊異黃酮苷與人參皂苷Rb1對照品，分別加甲醇制成濃度為38-42 μ g/ml的毛蕊異黃酮苷甲醇溶液和濃度為0.13-0.17mg/ml的人參皂苷Rb1甲醇溶液；
[0025]c制備供試品溶液:將胃乃安片研細(xì)，取粉末0.8-1.2g，加甲醇48_52ml，超聲處理，放至室溫后，用甲醇補足減少的重量，搖勻，過濾，取濾液23-27ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；
[0026]d檢測:在步驟a所述色譜條件下進行檢測；
[0027](5)胃乃安片的高效液相色譜定量鑒別方法，包括如下步驟:
[0028]a色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈為流動相A，0.1%甲酸為流動相B，梯度洗脫，用PDA/ELSD串聯(lián)檢測；所述PDA的檢測波長為260nm ；ELSD參數(shù)為:漂移管溫度:60°C，載氣流速:35psi，增益值:200 ;理論板數(shù)按毛蕊異黃酮苷峰和人參皂苷Rb1峰計算均應(yīng)不低于5000 ;所述梯度洗脫為:0?32min:5% — 18%乙腈；32?38min:18%—22% 乙腈；38 ?58min:22% 乙腈；58 ?70min:22%—32% 乙腈；70 ?84min:32%^ 34%乙腈；84 ?96min:34% 乙腈；96 ?102min:34% — 40% 乙腈；102 ?125min:40% — 67% 乙腈；
[0029]b制備混合對照品溶液:取毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、膽酸與豬去氧膽酸對照品，加甲醇制成每Iml甲醇含毛蕊異黃酮苷38-42 μ g、芒柄花苷7-9 μ g、毛蕊異黃酮18_22 μ g、芒柄花素5-7 μ g、三七皂苷R10.13-0.17mg、人參皂苷Rg10.28-0.32mg、人參皂苷Re38_42 μ g、人參皂苷Rb10.13-0.17mg、膽酸0.45-0.55mg、豬去氧膽酸0.35-0.45mg的混合對照品溶液；
[0030]c制備供試品溶液:將胃乃安片研細(xì)，取粉末0.8-1.2g，加甲醇48_52ml，超聲處理，放至室溫后，用甲醇補足減少的重量，搖勻，過濾，取濾液23-27ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；
[0031]d檢測:在步驟a所述的色譜條件下，吸取對照品溶液5 μ 1、20 μ 1，供試品溶液20μ 1，注入液相色譜儀，測定，其中PDA檢測以外標(biāo)一點法計算，ELSD檢測以外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算，即得；
[0032](5)黃芪甲苷的高效液相色譜定量鑒別方法:
[0033]a色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為30: 70的乙腈-水為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器檢測；理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于5000 ；
[0034]b對照品溶液的制備:取黃芪甲苷對照品加甲醇制成濃度為0.45-0.55mg/ml的黃芪甲苷對照品甲醇溶液；
[0035]c供試品溶液的制備:將胃乃安片研細(xì)，取粉末1.3-1.78，加甲醇48-521111，超聲處理，放至室溫后，用甲醇補足減少的重量，搖勻，濾過，取濾液23-27ml，蒸干，殘渣加水18-22ml使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3-4次，每次38_42ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2-3次，每次38-42ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；
[0036]d檢測:吸取對照品溶液5 μ 1、15 μ 1，供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算，即得。
[0037]在其中一些實施例中，胃乃安片的高效液相色譜定性鑒別方法和胃乃安片的高效液相色譜定量鑒別方法中步驟a所述色譜條件的流速為0.8-1.2ml/min ;柱溫為30°C。
[0038]在其中一些實施例中，胃乃安片的高效液相色譜定性鑒別方法中步驟a所述色譜條件的進樣量:20μ1。
[0039]本發(fā)明所述的一種胃乃安片的檢測方法具有以下優(yōu)點和有益效果:
[0040]1、采用本發(fā)明所述檢測方法中的一項或聯(lián)合應(yīng)用多項方法，改進和修訂了原有胃乃安膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，同時可實現(xiàn)對胃乃安片成品質(zhì)量的有效控制，該方法具有高效、定量準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好、精密度高、重復(fù)性佳的優(yōu)點。
[0041]2、本發(fā)明所述檢測方法中的薄層鑒別方法，增訂了黃芪中四種黃酮類成分毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素及黃芪甲苷的薄層鑒別，同時還增訂了紅參的薄層鑒別，并對指標(biāo)成分黃芪甲苷、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1同時進行鑒別。
[0042]3、本發(fā)明提所述的檢測方法中的高效液相定量鑒別方法，采用HPLC-PDA-ELSD聯(lián)用技術(shù)，建立胃乃安片的主要活性成分黃芪中的特征成分毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素，三七中的特征成分三七皂苷Rl，紅參中的特征成分人參皂苷Rgl、人參皂苷Re和人參皂苷Rbl，人工牛黃中的特征成分膽酸和豬去氧膽酸的含量測定及特征圖譜。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0043]圖1為實施例4供試品PDA檢測的特征圖譜；
[0044]圖2為實施例4供試品ELSD檢測的特征圖譜。

【具體實施方式】
[0045]本發(fā)明所涉及的胃乃安片的組方為:黃芪、三七、紅參、珍珠層粉、人工牛黃。
[0046]所述胃乃安片的制備方法為:將上述黃芪、三七、紅參按組方比例混合加水煎煮二次，濾過，濾液合并，濾液減壓濃縮成稠膏；珍珠層粉超微粉碎，與稠膏混合后干燥，粉碎，研配加入輔料及超微粉碎的人工牛黃；流化床制粒，干燥壓制成片，即得。
[0047]以下將結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步說明。
[0048]實施例1胃乃安片中黃芪的薄層鑒別
[0049]一種胃乃安片的檢測方法，所述檢測方法采用薄層色譜鑒別方法測定黃芪，包括如下步驟:
[0050]a制備供試品溶液:將胃乃安片成品研細(xì)，取2g，加甲醇50ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水20ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并所得的上層乙酸乙酯液，將乙酸乙酯液蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；
[0051 ] b制備黃芪對照藥材溶液:取黃芪對照藥材2g，加甲醇50ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水20ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并所得的上層乙酸乙酯液，將上層乙酸乙酯液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為黃芪對照藥材溶液；
[0052]c制備對照品溶液:取芒柄花素對照品、毛蕊異黃酮對照品、芒柄花苷對照品及毛蕊異黃酮苷對照品，分別加甲醇制成每Iml甲醇含Img上述對照品的甲醇溶液，作為對照品溶液；
[0053]d檢測:取步驟a所述供試品溶液、步驟b所述黃芪對照藥材溶液各8 μ I和步驟c所述的對照品溶液2μ1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為20: 20: 9的甲苯-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；再噴以0.1%的1，1- 二苯基-2-三硝基苯肼無水乙醇溶液，晾干，置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0054]實施例2胃乃安片中黃芪、紅參和三七同時進行薄層色譜鑒別
[0055]一種胃乃安片的檢測方法，所述檢測方法采用薄層色譜鑒別方法同時測定胃乃安片中黃芪、紅參和三七，包括如下步驟:
[0056]a制備供試品溶液:將胃乃安片成品研細(xì)，取2g，加甲醇50ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水20ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并下層水液，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；
[0057]b制備對照藥材溶液:取黃芪對照藥材2g，加甲醇50ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘洛加水20ml使溶解,再用乙酸乙酯提取3次,每次30ml，合并下層水液，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為黃芪對照藥材溶液；另取紅參對照藥材0.5g與三七對照藥材0.1g,分別加水100ml,煎煮60min,過濾，濾液用乙酸乙酯提取3次,每次30ml，棄去乙酸乙酯液，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，分別制得紅參對照藥材溶液和三七對照藥材溶液；
[0058]c制備對照品混合溶液:取黃芪甲苷對照品、人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品及三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每Iml甲醇各含Img的上述對照品的混合溶液，作為對照品混合溶液；
[0059]d檢測:取供試品溶液與對照品混合溶液各2 μ 1、黃芪對照藥材溶液10 μ 1、紅參對照藥材溶液6 μ 1、三七對照藥材溶液I μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為4:1:5的正丁醇-乙酸乙酯-稀氨(取濃氨試液5ml，加水稀釋至50ml，即得)的上層溶液為展開劑，置于濃氨試液預(yù)飽和20分鐘的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；置365nm紫外光燈下檢視，顯相同顏色的熒光斑點。
[0060]實施例3胃乃安片中人工牛黃的薄層色譜鑒別
[0061]一種胃乃安片的檢測方法，所述檢測方法采用薄層色譜鑒別方法測定人工牛黃，包括如下步驟:
[0062]a制備供試品溶液:將胃乃安片成品研細(xì)，取0.2g，加甲醇20ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；
[0063]b制備對照藥材溶液:取人工牛黃對照藥材10mg，加甲醇2ml，超聲處理，離心，取上清液作為對照藥材溶液；
[0064]c制備對照品溶液:取膽酸對照品、豬去氧膽酸對照品，分別加甲醇制成每Iml甲醇中含Img上述對照品的溶液，作為膽酸對照品溶液和豬去氧膽酸對照品溶液；
[0065]d檢測:取步驟a所述的供試品溶液、步驟b所述的對照藥材溶液和步驟c所述的膽酸對照品溶液和豬去氧膽酸對照品溶液各I μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為20:25:3:2的環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
[0066]實施例4胃乃安片的高效液相色譜定性鑒別
[0067]一種胃乃安片的檢測方法，所述檢測方法采用高效液相色譜定性鑒別胃乃安片，包括如下步驟:
[0068]a色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈為流動相A，0.1%甲酸為流動相B，梯度洗脫；流速為1.0ml/min ;柱溫為30°C ;進樣量:參照物溶液及供試品溶液各20 μ I ;采用PDA/ELSD串聯(lián)檢測，所述PDA的檢測波長為260nm ；ELSD參數(shù)為:漂移管溫度:60°C，載氣流速:35psi，增益值:200 ;理論板數(shù)按毛蕊異黃酮苷峰和人參皂苷Rb1峰計算均應(yīng)不低于5000 ;所述梯度洗脫參見表1:
[0069]表I高效液相色譜法的梯度洗脫
時間(分鐘)_流動相A ( % )_流動相B ( % )
_0~32_5—18_95—82
_32~38_18—22_82->78
[0070]38~582278
_58-70_22—32_78—68
_70 ~ 84_32—34_68—66
_84~96_34_66
96~ 10234—4066—60
[0071]
_?02~ 125_40—67_60—33
[0072]b制備參照物溶液:取毛蕊異黃酮苷與人參皂苷Rb1對照品，分別加甲醇制成濃度為40 μ g/ml的毛蕊異黃酮苷甲醇溶液和濃度為0.15mg/ml的人參皂苷Rb1甲醇溶液；
[0073]c制備供試品溶液:將胃乃安片研細(xì)，取粉末1.0g,加甲醇50ml，超聲處理，放至室溫后，用甲醇補足減少的重量，搖勻，過濾，取濾液25ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；
[0074]d檢測:在步驟a所述的色譜條件下，PDA檢測獲得的供試品特征圖譜中有4個特征峰(參見圖1)，與毛蕊異黃酮苷參照峰相對應(yīng)的峰為I (SI)峰，其余3個峰為峰2 (芒柄花苷)、峰3 (毛蕊異黃酮)、峰4 (芒柄花素)，計算這3個特征峰與SI峰的相對保留時間，其相對保留時間應(yīng)在規(guī)定值的±5%之內(nèi)，規(guī)定值為:1.00(峰31)、1.49(峰2)、1.69(峰3)、
2.52 (峰4);ELSD檢測獲得的供試品特征圖譜中有19個特征峰(參見圖2)，與人參皂苷Rbi參照物峰相對應(yīng)的峰為S2峰，計算峰5 (三七皂苷R1)、峰6 (人參皂苷Rgl )、峰7 (人參皂苷Re)、峰10 (人參皂苷Rbl)、峰13 (黃芪甲苷)、峰16 (膽酸)、峰17 (豬去氧膽酸)號特征峰與S2峰的相對保留時間，其相對保留時間應(yīng)在規(guī)定值的±5%之內(nèi)，規(guī)定值為:0.58 (峰
5),0.63 (峰 6)、0.64 (峰 7)、L00 (峰 S2)、1.07 (峰 13)、1.30 (峰 16)、1.36 (峰 17)。
[0075]實施例5胃乃安片的高效液相色譜定量測定
[0076]一種胃乃安片的檢測方法，所述檢測方法采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器-蒸發(fā)光散射檢測器聯(lián)用技術(shù)定量鑒別胃乃安片，包括如下步驟:
[0077]a色譜條件:色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相為乙腈-0.1%甲酸，梯度洗脫；流速為1.0ml/min ;柱溫為30°C ;進樣量:對照品溶液5 μ L、20 μ L，供試品溶液20 μ L ;采用PDA/ELSD串聯(lián)檢測，所述PDA的檢測波長為260nm ；ELSD參數(shù)為:漂移管溫度:60°C，載氣流速:35psi，增益值:200 ;理論板數(shù)按毛蕊異黃酮苷峰和人參皂苷Rb1峰計算均應(yīng)不低于5000 ;所述梯度洗脫為:0?32min:5%乙腈一18%乙腈；32?38min:18%乙腈一22%乙腈；38 ?58min:22% 乙腈；58 ?70min:22% 乙腈—32% 乙腈；70 ?84min:32% 乙腈—34%乙臆；84 ?96min:34% 乙臆；96 ?102min:34% 乙臆—40% 乙臆；102 ?125min:40% 乙臆—67%乙臆；
[0078]b制備混合對照品溶液:取毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、膽酸與豬去氧膽酸對照品適量，加甲醇制成每Iml甲醇含毛蕊異黃酮苷40 μ g、芒柄花苷8 μ g、毛蕊異黃酮20 μ g/ml、芒柄花素6 μ g、三七皂苷R10.15mg、人參皂苷Rg10.3mg、人參皂苷Re40 μ g、人參皂苷Rb10.15mg、膽酸
0.5mg、豬去氧膽酸0.4mg的混合對照品溶液；
[0079]c制備供試品溶液:將胃乃安片研細(xì)，取粉末1.0g，加甲醇50ml，超聲處理，放至室溫后，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取濾液25ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；
[0080]d檢測:在步驟a所述的色譜條件下，吸取對照品溶液5 μ 1、20 μ 1，供試品溶液20μ 1，注入液相色譜儀，測定，其中PDA檢測以外標(biāo)一點法計算，ELSD檢測以外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算，即可。
[0081]A:線性關(guān)系考察
[0082]分別精密吸取步驟b所述的混合對照品溶液2 μ L、5 μ L、10 μ L、15 μ L、20 μ L、30 μ L注入液相色譜儀中，按步驟(I)所述的色譜條件進行測定，記錄各色譜峰面積，其中PDA檢測的毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素以各對照品進樣量(X，Hg)為橫坐標(biāo)，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)；ELSD檢測的三七皂苷R1、人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbl、膽酸和豬去氧膽酸以各對照品進樣量的對數(shù)值(X，μ g)為橫坐標(biāo)，以峰面積對數(shù)值(Y)為縱坐標(biāo)，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進行線性回歸計算，得各成分標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢測限及定量限，結(jié)果見表2:
[0083]表2各組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線及其檢測限和定量限
[0084]
成分回歸方程相關(guān)系數(shù)Γ 線性范圍/pg 檢測限/pg 定量限/pg
[0085]
毛蕊異黃 Y=3298057.5184X-
0.9992 0.081 ~ 1.214 0.002 42 0.006 06
_苷4059.76
芒柄花苷 Υ=3935051.2235Χ-
0.9999 0.017 ~ 0.249 0.001 59 0.007 94

4069.529!
毛蕊異黃 Υ=4791660.0096Χ-
0.9998 0.038 ~ 0.566 0,002 99 0.009 98
酮2373.9234
芒柄花素 Υ=6928346.5387Χ -
0.9999 0.012 -0.179 0.001 59 0.007 96

7245.2734
三七皂苷 Υ=1.6116Χ +

0.9996 0.304 ~ 4.560 0.492O Π、
Rl10.4607
人參皂苷 Y=1.5567 X +
0.9996 0.612 -9.187 0.471 3 0.785 5
Rgl10.0762
人參皂苷 Y=1.7683 X +
0.9996 0.208 I 24^ 0.219 25 0.365 41
Re10.4025
人參皂苷 Y= 1.6226 X +
0.9997 0.299 ~ 4.487 0.261 32 0.391 98
Rbl10.6007
膽酸Y=I SS41 \ +

0.9992 1.009- 15.138 0.2010.502 5

10.3402
豬去氧膽 Y= 1.5734 X +
0.9993 0.806-12.085 0.199 15 0.358 47
酸〗0.7405
[0086]B:重復(fù)性試驗
[0087]取同一批重量差異項下的供試品(批號:20110301 )6份，按步驟c所述的供試品溶液制備方法平行制備，依法測定，結(jié)果見表3:結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。
[0088]C:精密度試驗
[0089]取B項下重復(fù)性試驗的同一瓶供試品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進樣6次，測定峰面積并計算RSD，結(jié)果見表3 ;表明該儀器精密度良好。
[0090]D:穩(wěn)定性試驗
[0091]取B項下重復(fù)性試驗的同一瓶供試品溶液，分別于0h、5h、10h、20h、30h、72h進樣，測定峰面積并計算RSD，結(jié)果見表3 ;表明供試品溶液在72h內(nèi)基本穩(wěn)定。
[0092]E:加樣回收率試驗
[0093]取上述已知含量的供試品(批號:20110301) 6份，取0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶種，分別精密加入上述各對照品適量(約與供試品中所含的量相當(dāng))，按步驟c所述的供試品溶液制備方法平行制備，依法測定，計算出回收率結(jié)果見表3。
[0094]表3方法學(xué)驗證結(jié)果
[0095]

【權(quán)利要求】
1.一種胃乃安片的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述檢測方法采用以下鑒別和含量測定項目中的一項或多項: (1)黃芪的薄層鑒別: a制備供試品溶液:將胃乃安片研細(xì)，取1.8-2.2g,加甲醇48-52ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28_32ml，合并上層乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇0.8-1.2ml使溶解，作為供試品溶液； b制備黃芪對照藥材溶液:取黃芪對照藥材1.8-2.2g，加甲醇48-52ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28_32ml，合并上層乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，作為黃芪對照藥材溶液； c制備對照品溶液:取芒柄花素對照品、毛蕊異黃酮對照品、芒柄花苷對照品及毛蕊異黃酮苷對照品，分別加甲醇制成每Iml甲醇含0.8-1.2mg上述對照品的甲醇溶液，作為對照品溶液； d檢測:取步驟a所述供試品溶液、步驟b所述黃芪對照藥材溶液各9-10 μ I和步驟c所述對照品溶液1.8-2.2 μ 1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比19-21:19-21: 8-10的甲苯-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；再噴以0.08-0.12%的1，1- 二苯基-2-三硝基苯肼無水乙醇溶液，晾干，置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點； (2)黃芪、紅參和三七的薄層鑒別，步驟如下: a制備供試品溶液:將胃乃安片研細(xì)，取1.8-2.2g,加甲醇48-52ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28_32ml，合并下層水液，用水飽和正丁醇振搖提取3-4次，每次28-32ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2_3次，每次28-32ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，作為供試品溶液；b制備對照藥材溶液:取黃芪對照藥材1.8-2.2g，加甲醇48-52ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28_32ml，合并下層水液，用水飽和正丁醇振搖提取3-4次，每次28-32ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2_3次，每次28-32ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，作為黃芪對照藥材溶液；另取紅參對照藥材0.45-0.55g與三七對照藥材0.65-0.75g，分別加水90_110ml，煎煮55-65min，過濾，濾液用乙酸乙酯提取3_4次，每次28_32ml，棄去乙酸乙酯液，再用水飽和正丁醇振搖提取3-4次，每次28-32ml，合并正丁醇液，后用氨試液洗滌2_3次，每次28-32ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，分別制得紅參對照藥材溶液和三七對照藥材溶液； c制備對照品混合溶液:取黃芪甲苷對照品、人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品及三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每Iml甲醇各含0.8-1.2mg的上述對照品的混合溶液，作為對照品混合溶液； d檢測:取步驟a所述供試品溶液與步驟c所述對照品混合溶液各1.8-2.2 μ 1、步驟b所述黃芪對照藥材溶液8-12 μ 1、紅參對照藥材溶液5-7 μ I和三七對照藥材溶液0.8-1.2 μ I,分別點于同一娃膠G薄層板上，以體積比3.5-4.5:1:4.5-5.5的正丁醇-乙酸乙酯-稀氨的上層溶液為展開劑，置于濃氨試液預(yù)飽和20分鐘的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以9-11%硫酸乙醇溶液，在100-110°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；置365nm紫外光燈下檢視，顯相同顏色的熒光斑點； (3)人工牛黃的薄層鑒別: a制備供試品溶液:將胃乃安片研細(xì)，取0.18-0.22g，加甲醇18_22ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加甲醇0.8-1.2ml使溶解，作為供試品溶液； b制備對照藥材溶液:取人工牛黃對照藥材8-12mg，加甲醇1.5-2.5ml，超聲處理，離心，取上清液作為對照藥材溶液； c制備對照品溶液:取膽酸對照品、豬去氧膽酸對照品，分別加甲醇制成每Iml甲醇中含0.8-1.2mg上述對照品的溶液，作為膽酸對照品溶液和豬去氧膽酸對照品溶液； d檢測:取步驟a所述供試品溶液、步驟b所述對照藥材溶液和步驟c所述膽酸對照品溶液和豬去氧膽酸對照品溶液各0.8-1.2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為18-22:23-27:2.5-3.5:1.5-2.5的環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以9-11%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； (4)胃乃安片的高效液相色譜定性鑒別，包括如下步驟: a色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈為流動相A，0.1%甲酸為流動相B，梯度洗脫，PDA/ELSD串聯(lián)檢測；所述PDA的檢測波長為260nm ；ELSD參數(shù)為:漂移管溫度:60°C，載氣流速:35psi，增益值:200 ;理論板數(shù)按毛蕊異黃酮苷峰和人參皂苷Rb1峰計算均應(yīng)不低于5000 ;所述梯度洗脫為:0-32min，5% — 18%乙腈；32_38min，18% — 22%乙腈；38-58min，22% 乙腈；58-70min, 22% — 32% 乙腈；70-84min, 32% — 34% 乙腈；84_96min，34%乙腈；96-102min,34% — 40% 乙腈；102-125min, 40% — 67% 乙腈； b制備參照物溶液:取毛蕊異黃酮苷與人參皂苷Rb1對照品，分別加甲醇制成濃度為38-42 μ g/ml的毛蕊異黃酮苷甲醇溶液和濃度為0.13-0.17mg/ml的人參皂苷Rb1甲醇溶液； c制備供試品溶液:將胃乃安片研細(xì)，取粉末0.8-1.2g，加甲醇48-52ml，超聲處理，放至室溫后，用甲醇補足減少的重量，搖勻，過濾，取濾液23-27ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得； d檢測:在步驟a所述色譜條件下進行檢測； (5)胃乃安片的高效液相色譜定量測定，包括如下步驟: a色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈為流動相A，0.1%甲酸為流動相B，梯度洗脫，用PDA/ELSD串聯(lián)檢測；所述PDA的檢測波長為260nm ；ELSD參數(shù)為:漂移管溫度:60°C，載氣流速:35psi，增益值:200 ;理論板數(shù)按毛蕊異黃酮苷峰和人參皂苷Rb1峰計算均應(yīng)不低于5000 ;所述梯度洗脫為:0?32min:5% — 18%乙腈；32?38min:18% — 22%乙腈；38 ?58min:22% 乙腈；58 ?70min:22% — 32% 乙腈；70 ?84min:32% — 34% 乙腈；84 ?96min:34% 乙腈；96 ?102min:34% — 40% 乙腈；102 ?125min:40% — 67% 乙腈；b制備混合對照品溶液:取毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、膽酸與豬去氧膽酸對照品，加甲醇制成每Iml甲醇含毛蕊異黃酮苷38-42 μ g、芒柄花苷7-9 μ g、毛蕊異黃酮18_22 μ g、芒柄花素5-7 μ g、三七皂苷R10.13-0.17mg、人參皂苷Rg10.28-0.32mg、人參皂苷Re38_42 μ g、人參皂苷Rb10.13-0.17mg、膽酸0.45-0.55mg、豬去氧膽酸0.35-0.45mg的混合對照品溶液； c制備供試品溶液:將胃乃安片研細(xì)，取粉末0.8-1.2g，加甲醇48-52ml，超聲處理，放至室溫后，用甲醇補足減少的重量，搖勻，過濾，取濾液23-27ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得； d檢測:在步驟a所述的色譜條件下，吸取對照品溶液5 μ 1、20 μ 1，供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，其中PDA檢測以外標(biāo)一點法計算，ELSD檢測以外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算，即得； (6)黃芪甲苷的高效液相色譜定量測定: a色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為30: 70的乙腈-水為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器檢測；理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于5000 ； b對照品溶液的制備:取黃芪甲苷對照品加甲醇制成濃度為0.45-0.55mg/ml的黃芪甲苷對照品甲醇溶液； c供試品溶液的制備:將胃乃安片研細(xì)，取粉末1.3-1.7g，加甲醇48-52ml，超聲處理，放至室溫后,用甲醇補足減少的重量,搖勻，濾過,取濾液23-27ml，蒸干，殘渣加水18_22ml使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3-4次，每次38-42ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2_3次，每次38-42ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得； d檢測:吸取對照品溶液5 μ 1、15 μ 1，供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胃乃安片的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述胃乃安片的高效液相色譜定性鑒別和胃乃安片的高效液相色譜定量測定中步驟a所述色譜條件中流速為 0.8-1.2ml/min ;柱溫為 25-35。。。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胃乃安片的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述胃乃安片的高效液相色譜定性測定中步驟a所述色譜條件中進樣量:20 μ I。
【文檔編號】G01N30/90GK104165962SQ201310180746
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2013年5月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月15日
【發(fā)明者】陳蔚文, 嚴(yán)萍, 詹若挺, 蘇碧茹, 梁小銀, 林文華, 張敏, 林傳權(quán), 鄧慧敏, 賴曉明, 劉文惠, 謝潔娜 申請人:廣州白云山中一藥業(yè)有限公司