抗cgrp抗體和抗體片段用于在有需要的受試者、尤其是偏頭痛患者中預(yù)防或抑制畏光或 ...的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及使用抑制畏光、尤其是CGRP相關(guān)畏光的抗CGRP抗體或抗體片段在有需要的受試者中抑制或預(yù)防畏光的方法。這些抗體和片段可用于治療不同的與畏光相關(guān)的病癥如偏頭痛、叢集性頭痛等。本發(fā)明還提供使用轉(zhuǎn)基因巢蛋白/Ramp1嚙齒動物的測定法，其利用CGRP模型厭光行為模型來鑒定在有需要的受試者中抑制或預(yù)防畏光的治療上有效的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗CGRP抗體和其片段。本發(fā)明明確地涉及用于鑒定可用于治療CGRP相關(guān)病癥如偏頭痛的治療上有效的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體和其片段的方法。明確地說，本發(fā)明涉及使用本文所述用于抑制或預(yù)防畏光的抗體和其結(jié)合片段的測定法和療法，所述抗體包含本文所述的VH、VL和CDR多肽的序列，以及編碼其的多核苷酸。
【專利說明】抗CGRP抗體和抗體片段用于在有需要的受試者、尤其是偏頭痛患者中預(yù)防或抑制畏光或厭光的用途
[0001]相關(guān)申請
[0002]本申請要求了 2011年6月14日提交的名稱為“抗CGRP抗體和抗體片段用于在有需要的受試者、尤其是偏頭痛患者中預(yù)防或抑制畏光的用途(USE OF ANT1-CGRPANTIBODIES AND ANTIBODY FRAGMENTS TO PREVENT OR INHIBIT PHOTOPHOBIA IN SUBJECTSIN NEED THEREOF, ESPECIALLY MIGRAINE) ” 的美國臨時申請 N0.61/496，860 (代理人備案N0.67858.760000)以及2011年5月20日提交的名稱為“抗CGRP組合物及其用途(ANT1-CGRPC0MP0SITIONS AND USE THEREOF) ”的美國臨時申請 N0.61/488，660 (代理人備案N0.67858.730300)的權(quán)益，所述臨時申請各自特此以全文引用的方式并入。
[0003]本申請包含通過EFS-Web以ASCII格式提交的序列表并且特此以全文引用的方式并入。所述ASCII副本創(chuàng)建于2012年5月21日，命名為67858o730305.txt并且大小為203，941 字節(jié)。
[0004]發(fā)明背景
發(fā)明領(lǐng)域
[0005]本發(fā)明涉及以下發(fā)現(xiàn):抑制CGRP/CGRP受體相互作用的多肽和/或特異性結(jié)合CGRP或CGRP受體的抗體和抗體片段當(dāng)施用于有需要的受試者時可用于抑制CGRP誘發(fā)的畏光。用于本發(fā)明中的抑制CGRP/CGRP受體相互作用的多肽包括例如抑制CGRP與CGRP受體相互作用的對CGRP或CGRP受體以及CGRP或CGRP受體的片段或變體具有特異性的抗體和抗體片段。因為畏光為經(jīng)常與包括例如偏頭痛(有和無先兆)和其他頭痛病狀(以及下文公開的其他適應(yīng)癥)在內(nèi)的許多病癥相關(guān)的不良副作用，所以這些CGRP受體抑制劑，例如對CGRP或CGRP受體具有特異性的`抗體和抗體片段，應(yīng)完全適于抑制經(jīng)常與偏頭痛和其他頭痛病狀相關(guān)的畏光以及適于治療其他與畏光相關(guān)的病狀。結(jié)果還表明，如果預(yù)防性地施用所述抗體，則這些抗體和抗體片段可用于在有需要的受試者、例如由于偏頭痛(有或無先兆)、其他頭痛病狀、抑郁癥、廣場恐怖癥或其他傾向于畏光的病狀而具有慢性畏光病史的個體中預(yù)防畏光的發(fā)作。本發(fā)明涵蓋這些抗CGRP抗體和抗體片段以單一療法或與其他活性劑(例如，止痛劑、阿片類、抗抑郁劑或其他活性劑，取決于所治療的病狀和個體)一起的治療方式的使用。
[0006]本發(fā)明進(jìn)一步提供在特定動物模型中篩選CGRP受體抑制劑、例如對人類降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin Gene Related P印tide，下文為“CGRP”)或CGRP受體具有結(jié)合特異性的抗CGRP或抗CGRP受體抗體和其片段(包括Fab片段)以測定其體內(nèi)作用、最尤其是其拮抗CGRP的畏光副作用以及治療涉及畏光的病狀(包括例如偏頭痛)的能力的方法。
[0007]相關(guān)技術(shù)描述
[0008]降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)是以長度為37個氨基酸的多功能神經(jīng)肽形式產(chǎn)生。兩種形式的CGRP，即CGRP-α和CGRP-β形式，存在于人類中并且具有類似的活性。CGRP-a與CGRP-β在人類中相差三個氨基酸，并且是源自不同的基因。CGRP肽家族包括胰淀素(amyl in)、腎上腺髓質(zhì)素(adrenomedullin)以及降鈣素，但各自具有不同的受體和生物活性。Doods, H., Curr.0p.1nvest.Drugs, 2 (9): 1261-78 (2001)。
[0009]CGRP是從眾多組織如三叉神經(jīng)中釋放，當(dāng)被活化時在腦膜中釋放神經(jīng)肽，從而介導(dǎo)神經(jīng)源性炎癥，其特征為血管舒張、血管滲漏以及肥大細(xì)胞退化。Durham, P.L.，New Eng.J.Med.，350(11):1073-75(2004)。CGRP 的生物作用是通過 CGRP 受體(CGRP-R)介導(dǎo)，該CGRP受體由七次跨膜成分結(jié)合受體相關(guān)膜蛋白(RAMP)組成。CGRP-R進(jìn)一步需要受體成分蛋白(RCP)的活性，該受體成分蛋白(RCP)對于通過G蛋白與腺苷酸環(huán)化酶有效偶聯(lián)以及cAMP 的產(chǎn)生是必要的。Doods, H.，Curr.0p.1nvest.Drugs, 2 (9): 1261-78(2001)。
[0010]偏頭痛構(gòu)成影響美國約10%成年群體的神經(jīng)血管病癥，并且典型地伴隨著劇烈的頭痛。約20-30%的偏頭痛患者經(jīng)歷先兆，包括先于事件和/或伴隨事件的局灶性神經(jīng)現(xiàn)象。認(rèn)為CGRP在偏頭痛發(fā)展中起到顯著作用。例如，在偏頭痛的頭痛期間在頸靜脈血中鑒定出血漿CGRP濃度升高，排除其他神經(jīng)肽。此外，根據(jù)Arulmozhi等人，在偏頭痛患者中鑒定出下列:⑴血漿CGRP濃度與偏頭痛之間存在強相關(guān)性；(2)輸注CGRP產(chǎn)生類偏頭痛的頭痛；(3)基線CGRP水平升高；以及(4)在偏頭痛發(fā)作期間血漿CGRP水平的變化與頭痛強度顯著相關(guān)。Arulmozhi, D.K.等人，Vas.Pharma.，43:176-187 (2005)。另外，在 2011 年 6月06日在線公布的國際疼痛研究協(xié)會雜志(Journal of the International Associationfor the Study of Pain)PI1:S0304-3959(11)00313-7;do1:10.1016/j.pain.2011.04.033中，Hou等人報道了降鈣素基因相關(guān)肽β的角化細(xì)胞表達(dá)對于神經(jīng)性和炎癥性疼痛機制有影響。
[0011]一種有效的偏頭痛治療是施用曲坦類(triptans)，它們是基于色胺的藥物家族，包括舒馬曲坦(su matriptan)和利扎曲坦(rizatriptan)。這個家族的成員對包括5-HT1B、5-HT1D以及5-HT1f在內(nèi)的多種5-羥色胺受體具有親和力。這個家族成員的藥物選擇性地收縮腦血管，但也對冠狀血管造成血管收縮作用。Durham，P.L.，New Eng.J.Med.，350(11): 1073-75(2004)。在確定患有心臟病的患者中在施用后存在冠狀動脈痙攣的理論風(fēng)險，并且在服用曲坦類后心臟事件可能很少發(fā)生。應(yīng)注意，冠狀動脈血管疾病患者
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[0012]類似地，通?？赡芡ㄟ^施用某些麻醉劑或非留體抗炎藥物(NSAID)來解決疼痛問題。然而，這些治療的施用可能以某些負(fù)面后果為代價。NSAID有可能造成腎衰竭、腸道出血以及肝功能障礙。麻醉劑有可能造成惡心、嘔吐、精神功能受損以及成癮。因此，期望鑒定出替代的疼痛療法以避免這些負(fù)面后果中的某些。
[0013]除偏頭痛以外，認(rèn)為CGRP在包括但不限于其他頭痛病狀以及疼痛在內(nèi)的許多疾病和病癥中起作用。由于察覺到這些疾病和病癥中涉及CGRP，因此本領(lǐng)域中需要可用于預(yù)防或治療與CGRP相關(guān)的疾病和病癥并且同時避免不良副作用的組合物和方法。本領(lǐng)域中特別需要降低或抑制與CGRP相關(guān)的疾病或病癥如偏頭痛、頭痛以及疼痛中的畏光的組合物或方法。
[0014]偏頭痛患者當(dāng)暴露于光時典型地產(chǎn)生疼痛和偏頭痛惡化的癥狀，這種現(xiàn)象稱為畏光。畏光在眼部病癥如虹膜炎和葡萄膜炎以及顱內(nèi)病癥如腦膜炎中也是常見的。在經(jīng)典的視覺通路中，光激活視網(wǎng)膜中的視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞，所述細(xì)胞激活視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，其通過視神經(jīng)投射到外側(cè)膝狀核、上丘、然后視覺皮層。這個通路包括成像和非成像數(shù)據(jù)。一種新的通路(非成像信息)允許通過視交叉上核維持正常的晝夜節(jié)律并且由自主感光視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(intrinsically photosensitive retinal ganglion cell, ipRGC)調(diào)節(jié)。這些ipRGC獨立于視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞并且含有黑視素(一種感光色素)。
[0015]Noseda 等人(Noseda，R.等人，A neural mechanism for exacerbation ofheadache by light.Nat.Neurosc1.13，239-245 (2010))研究了患有偏頭痛的盲人個體并且將這些研究結(jié)果與涉及追蹤ipRGC投射至感受硬腦膜疼痛的區(qū)域的大鼠模型相關(guān)聯(lián)。在患有偏頭痛的盲人患者中，6名由于具有嚴(yán)重的視神經(jīng)損傷或雙邊剜除術(shù)而無光感。這些受試者經(jīng)歷異常的睡眠模式和不良的瞳孔光反應(yīng)。他們的偏頭痛沒有因光暴露而惡化。與之相比，14名能夠檢測到光盡管影像感知極微弱的盲人受試者具有正常的睡眠模式和正常的瞳孔光反射。盡管廣泛的視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞變性，但這些患者在偏頭痛發(fā)作期間在光暴露下具有惡化的偏頭痛癥狀，表明ipRGC而非視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞在畏光中是重要的。
[0016]這些非成像大腦區(qū)域的視網(wǎng)膜投射可投射至后丘腦的對側(cè)背尾區(qū)，如由大鼠中的順行追蹤所顯示。ipRGC向這個區(qū)域的輸入調(diào)節(jié)硬腦膜敏感性疼痛神經(jīng)元，它們也投射至這 個區(qū)域。對硬腦膜疼痛和光輸入雙重敏感的丘腦神經(jīng)元廣泛地投射至多個皮質(zhì)區(qū)，包括初級軀體感覺皮質(zhì)、初級和次級運動皮質(zhì)、頂葉聯(lián)合皮質(zhì)以及初級和次級視覺皮質(zhì)。這些皮質(zhì)投射可幫助解釋除畏光之外的其他常見偏頭痛癥狀，例如運動肌衰弱或不協(xié)調(diào)、視覺障礙以及注意力不集中。
[0017]畏光還伴隨著其他不太頻繁但同樣致殘的病狀，例如叢集性頭痛和其他三叉自主神經(jīng)性頭痛以及眼瞼痙攣。畏光的潛在機制涉及三叉神經(jīng)系統(tǒng)。盲人患者中的畏光表明來自非視覺通路的貢獻(xiàn)。另外，三叉自主神經(jīng)性頭痛(一組不太常見的原發(fā)性頭痛病癥)的特征為常常與同側(cè)畏光相關(guān)的單側(cè)三叉神經(jīng)介導(dǎo)的疼痛。
[0018]三叉神經(jīng)感覺神經(jīng)元的刺激導(dǎo)致神經(jīng)肽(包括P物質(zhì)和降鈣素基因相關(guān)肽)的釋放，產(chǎn)生血管擴張和肥大細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及血小板活化(神經(jīng)源性炎癥)，其導(dǎo)致偏頭痛。(Buzzi MG, Dimitriadou V, Theoharides TC, Moskowitz MA.5-Hydroxytryptaminereceptor agonists for the abortive treatment of vascular headaches blockmast cell,endothelial and platelet activation within the rat dura mater aftertrigeminal stimulation.Brain Res 1992; 583:137-149) ? 在急性偏頭痛疼痛期間，外頸靜脈血中的 CGRP 升高，(Goadsby PJ, Edvinsson L, Ekman R.Vasoactive peptiderelease in the extracerebral circulation of humans during migraine headache.Ann Neurol 1990; 28:183-187)并且曲坦類降低升高的CGRP水平。在動物模型中，對CGRP敏化的小鼠當(dāng)暴露于外源CGRP時顯示更加厭光的行為。在這些小鼠中施用CGRP受體拮抗劑奧賽格潘(olcegepant)可預(yù)防畏光。(參見 Recober A, Kaiser EA, Kuburas A, RussoAF.1nduction of multiple photophobic behaviors in a transgenic mouse sensitizedto CGRP.Neuropharmacology2010;58:156-165)。
[0019]然而，盡管已經(jīng)提出抗CGRP或抗CGRP受體抗體和片段治療偏頭痛的用途，但據(jù) 申請人:知曉，尚未有關(guān)于任何多肽CGRP拮抗劑或特別是抗CGRP或抗CGRP受體抗體或抗體片段能夠在體內(nèi)減輕或預(yù)防CGRP的畏光副作用的報道。充當(dāng)CGRP/CGRP受體相互作用的抑制劑的新穎多肽如抗CGRP或抗CGRP受體抗體或抗CGRP或抗CGRP受體抗體片段的開發(fā)將有益于對目前的偏頭痛治療劑如曲坦類無反應(yīng)或由于曲坦類的潛在血管收縮作用而不能服用或耐受它們的患者。
發(fā)明概要
[0020]本發(fā)明涉及以下發(fā)現(xiàn):抑制CGRP/CGRP受體相互作用的多肽如對人類降鈣素基因相關(guān)肽(下文為“CGRP”)具有結(jié)合特異性的抗CGRP或抗CGRP受體抗體和抗CGRP或抗CGRP受體抗體片段(包括Fab片段)以及抑制CGRP/CGRP受體相互作用的CGRP和CGRP受體的片段可用于預(yù)防或抑制畏光，尤其是CGRP相關(guān)畏光。本文中特別示例了下文被鑒定為Ab3的抗CGRP抗體，它極其有效地減輕或預(yù)防畏光，尤其是CGRP的畏光作用。用于所要求的療法中的其他優(yōu)選例子是Ab6和AblO等。
[0021]基于上文，本發(fā)明涉及抑制CGRP/CGRP受體相互作用的多肽如對人類降鈣素基因相關(guān)肽(下文為“CGRP”)具有結(jié)合特異性的抗CGRP或抗CGRP受體抗體和抗CGRP或抗CGRP受體抗體片段(包括Fab片段)以及抑制CGRP/CGRP受體相互作用的CGRP和CGRP受體的片段、優(yōu)選地抗CGRP抗體和抗CGRP抗體片段用于治療或預(yù)防畏光的用途。本發(fā)明涵蓋對于任何畏光的治療或預(yù)防，并且特別地包括對于與偏頭痛相關(guān)的畏光、和其他與畏光相關(guān)的病癥如叢集性頭痛和其他三叉自主神經(jīng)性頭痛以及眼瞼痙攣、抑郁癥、雙相情感障礙、廣場恐怖癥、腦膜炎、以及與眼睛相關(guān)病狀、自閉癥、慢性疲勞綜合征、月經(jīng)期偏頭痛和其他畏光相關(guān)病狀相關(guān)的畏光的 治療或預(yù)防。
[0022]本發(fā)明還涉及在特定的畏光動物模型(例如，下文公開的巢蛋白(nestin)/hRAMPl嚙齒動物模型)中篩選抑制CGRP/CGRP受體相互作用的多肽如對人類CGRP具有結(jié)合特異性的抗CGRP或抗CGRP受體抗體和抗CGRP或抗CGRP受體結(jié)合抗體片段(包括Fab片段)以及抑制CGRP/CGRP受體相互作用的CGRP和CGRP受體的片段，以測定其體內(nèi)作用，尤其是這些多肽在體內(nèi)抑制CGRP/CGRP受體相互作用并且從而拮抗CGRP的不良體內(nèi)副作用(包括畏光)以及治療涉及CGRP相關(guān)畏光的CGRP病狀(包括偏頭痛和其他與畏光相關(guān)的病癥，例如叢集性頭痛和其他三叉自主神經(jīng)性頭痛和眼瞼痙攣、抑郁癥、雙相情感障礙以及本文鑒定的其他畏光相關(guān)病狀)的能力的方法。
[0023]本發(fā)明還特別地涉及一種評估抑制CGRP/CGRP受體相互作用的候選多肽如對CGRP具有結(jié)合特異性的抗CGRP或抗CGRP受體抗體和抗CGRP或抗CGRP受體抗體片段(包括Fab片段)以及抑制CGRP/CGRP受體相互作用的CGRP和CGRP受體的片段、優(yōu)選地抗CGRP或抗CGRP受體抗體或抗體片段的潛在體內(nèi)功效的方法，該方法包括與在不存在候選CGRP/CGRP受體抑制劑多肽的情況下施用了 CGRP的嚙齒動物的厭光行為相比，在施用了 CGRP的展現(xiàn)厭光的轉(zhuǎn)基因嚙齒動物中測定該多肽(例如，抗體)是否抑制厭光行為。
[0024]此外，本發(fā)明涉及一種評估抑制CGRP/CGRP受體相互作用的候選多肽如抗CGRP或抗CGRP受體抗體和抗CGRP或抗CGRP受體抗體片段(包括Fab片段)以及抑制CGRP/CGRP受體相互作用的CGRP和CGRP受體的片段、優(yōu)選地抗CGRP抗體或抗CGRP受體抗體或抗體片段用于治療特征為CGRP水平增加(其導(dǎo)致畏光)的神經(jīng)性病狀或其他病狀的潛在體內(nèi)功效的方法。
[0025]此外，本發(fā)明明確地涉及一種評估抑制CGRP/CGRP受體相互作用的候選多肽如抗CGRP或抗CGRP受體抗體和抗CGRP或抗CGRP受體抗體片段以及抑制CGRP/CGRP受體相互作用的CGRP物質(zhì)和CGRP受體的片段或變體、優(yōu)選地抗CGRP或抗CGRP受體抗體或抗體片段用于治療或預(yù)防偏頭痛或慢性偏頭痛、月經(jīng)期或更年期或其他激素相關(guān)性偏頭痛、叢集性頭痛或與頭痛相關(guān)的疼痛病癥中的畏光的潛在體內(nèi)功效的方法。
[0026]更進(jìn)一步，本發(fā)明涉及一種基于候選多肽CGRP/CGRP受體抑制劑(例如，抗CGRP或抗CGRP受體抗體或抗體片段)在下文詳細(xì)描述的厭光行為巢蛋白/hRAMPl嚙齒動物模型中的作用測定所述多肽(例如，抗體或抗體片段)在人類中的合適的治療劑量或給藥方式的方法。
[0027]此外，本發(fā)明涉及基于在嚙齒動物CGRP (巢蛋白/hRAMPl動物模型)中的結(jié)果評估候選多肽(例如，抗CGRP或抗CGRP受體抗體或抗體片段)在人類中的合適的治療劑量或給藥方式的方法。
[0028]在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明是針對于對CGRP具有結(jié)合特異性的特異性抗體和其片段、特別是具有所需表位特異性、高親和力或親合力和/或功能特性的抗體的治療用途。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的抗體的測定法和用途，所述抗體包含本文所述的VH、'以及CDR多肽的序列，以及編碼其的多核苷酸。本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案是針對能夠結(jié)合至CGRP或CGRP受體和/或抑制由CGRP與CGRP受體(“CGRP-R”)結(jié)合而介導(dǎo)的生物活性的嵌合或人源化抗體和其片段(包括Fab片段)。
[0029]在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案中，所述測定法和療法使用可抑制由CGRP-α、CGRP-β以及大鼠CGRP驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的全長抗體和其Fab片段。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案中，涵蓋在施用后于接受者中降低血管舒張和抑制或預(yù)防畏光的全長和其Fab片段。
[0030]在本發(fā)明的另一個實施方案中，能夠結(jié)合于CGRP或CGRP受體的嵌合或人源化抗體和其片段(包括Fab片段)可用于針對降低、治療或預(yù)防與一種或多種下列病狀相關(guān)的畏光的方法中:偏頭痛(有或 無先兆)、癌癥或腫瘤、與癌癥或腫瘤生長相關(guān)的血管生成、與癌癥或腫瘤存活相關(guān)的血管生成、體重減輕、疼痛、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、月經(jīng)期偏頭痛、偏頭痛性神經(jīng)痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、潮熱、慢性陣發(fā)性半側(cè)顱痛、由于頭或頸中的潛在結(jié)構(gòu)問題而致的繼發(fā)性頭痛、腦神經(jīng)痛、竇性頭痛(例如與竇炎相關(guān))、無頭痛的偏頭痛、腹型偏頭痛以及過敏癥誘發(fā)的頭痛或偏頭痛。
[0031]畏光的常見原因包括偏頭痛、白內(nèi)障或嚴(yán)重的眼科疾病如葡萄膜炎或角膜擦傷。與畏光相關(guān)的病癥的更詳盡列表包括眼睛相關(guān)原因如色盲、無虹膜、抗膽堿能藥物可能通過麻痹虹膜括約肌而引起的畏光、無晶狀體(眼睛不存在晶狀體)、牛眼(角膜與虹膜之間的異常窄角)、白內(nèi)障、視錐細(xì)胞營養(yǎng)不良、先天性眼睛異常、病毒性結(jié)膜炎(“紅眼病”)、角膜擦傷、角膜營養(yǎng)不良、角膜潰瘍、角膜上皮破壞(例如由角膜異物或角膜炎引起)、晶狀體異位、眼內(nèi)炎、由疾病、損傷或感染引起的眼外傷如瞼板腺囊腫、鞏膜外層炎、青光眼、圓錐角膜、或視神經(jīng)發(fā)育不良、水眼、或先天性青光眼、虹膜炎、視神經(jīng)炎、色素播散綜合征、瞳孔擴張(自然或化學(xué)誘導(dǎo))、視網(wǎng)膜脫離、角膜或鞏膜的疤痕以及葡萄膜炎。
[0032]另外，畏光具有神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)或泌尿道原因，包括:自閉癥譜系障礙、Chiari畸形、誦讀困難、腦炎(包括肌痛性腦脊髓炎，也被稱為慢性疲勞綜合征)、腦膜炎、蛛網(wǎng)膜下腔出血、后顱窩腫瘤，以及其他原因如強直性脊柱炎、白化病、核黃素缺乏癥、苯二氮苯類(苯二氮笨類的長期使用或戒斷)、化學(xué)療法、基孔肯雅病(Chikungunya)、胱氨酸癥(Cystinosis)、埃勒斯_當(dāng)洛綜合征(Ehlers-Danlos syndrome)、宿醉、流感、傳染性單核細(xì)胞增多癥、鎂缺乏、汞中毒、偏頭痛、狂犬病以及II型酪氨酸血癥(也被稱為“里奇納-漢哈特綜合征(Richner-Hanhart syndrome) ”)。另外，已知在抑郁癥、雙相情感障礙以及廣場恐怖癥中畏光程度升高。
[0033]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于治療或預(yù)防畏光的這些抗體和人源化形式可能源自兔免疫細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞)并且可根據(jù)它們與人類生殖系序列的同源性(序列同一性)進(jìn)行選擇。這些抗體可能需要最小序列修飾或無序列修飾，從而促進(jìn)人源化后功能特性的保留。本發(fā)明的另一個實施方案是針對來自涵蓋例如源自兔免疫細(xì)胞的Vh、'和CDR多肽的抗CGRP或抗CGRP受體抗體的片段和編碼其的多核苷酸，以及這些抗體片段和編碼其的多核苷酸在產(chǎn)生能夠結(jié)合于CGRP和/或CGRP/CGRP-R復(fù)合物的新穎抗體和多肽組合物中的用途。
[0034]本發(fā)明還涵蓋用于治療或預(yù)防畏光的抗CGRP或抗CGRP受體抗體和其結(jié)合片段綴合于一種或多種功能性或可檢測部分的綴合物。本發(fā)明還涵蓋制造用于治療或預(yù)防畏光的所述嵌合或人源化抗CGRP或抗CGRP-R抗體或抗CGRP/CGRP-R復(fù)合物抗體和其結(jié)合片段的方法。在一個實施方案中，結(jié)合片段包括但不限于Fab、Fab’、F (ab’)2、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫藥物)、駱駝抗體、納米抗體以及IgNAR。
[0035]本發(fā)明的實施方案涉及多肽CGRP/CGRP受體抑制劑、例如抗CGRP或抗CGRP-R抗體或抗體片段和CGRP或CGRP-R片段、優(yōu)選地抗CGRP或抗CGRP-R抗體和其結(jié)合片段用于診斷、評估和治療與CGRP或其異常表達(dá)相關(guān)的疾病和病癥、尤其是用于治療或預(yù)防畏光的用途。本發(fā)明還涵蓋多肽CGRP/CGRP受體抑制劑、例如抗CGRP或抗CGRP受體抗體或CGRP或CGRP受體片段、尤其是抗CGRP抗體的片段用于診斷、評估和治療與CGRP或其異常表達(dá)相關(guān)的疾病和病癥、尤其是用于治療或預(yù)防畏光的用途。本發(fā)明的其他實施方案涉及抗CGRP或抗CGRP受體抗體或其片段在重組宿主細(xì)胞、例如哺乳動物細(xì)胞如CHO、NSO或HEK293細(xì)胞、或酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬(diploid Pichia))以及其他酵母菌株中的產(chǎn)生。
`[0036]附圖簡要說明
[0037]圖1提供對應(yīng)于全長抗體Abl的多核苷酸和多肽序列。
[0038]圖2提供對應(yīng)于全長抗體Ab2的多核苷酸和多肽序列。
[0039]圖3提供對應(yīng)于全長抗體Ab3的多核苷酸和多肽序列。
[0040]圖4提供對應(yīng)于全長抗體Ab4的多核苷酸和多肽序列。
[0041]圖5提供對應(yīng)于全長抗體Ab5的多核苷酸和多肽序列。
[0042]圖6提供對應(yīng)于全長抗體Ab6的多核苷酸和多肽序列。
[0043]圖7提供對應(yīng)于全長抗體Ab7的多核苷酸和多肽序列。
[0044]圖8提供對應(yīng)于全長抗體AbS的多核苷酸和多肽序列。
[0045]圖9提供對應(yīng)于全長抗體Ab9的多核苷酸和多肽序列。
[0046]圖10提供對應(yīng)于全長抗體AblO的多核苷酸和多肽序列。
[0047]圖11提供對應(yīng)于全長抗體Abll的多核苷酸和多肽序列。
[0048]圖12提供對應(yīng)于全長抗體Abl2的多核苷酸和多肽序列。
[0049]圖13提供對應(yīng)于全長抗體Abl3的多核苷酸和多肽序列。
[0050]圖14提供對應(yīng)于全長抗體Abl4的多核苷酸和多肽序列。[0051]圖15提供遵循下文實施例1中的方案而獲得的關(guān)于抗體Abl、Ab2、Ab3以及Ab4的CGRP-a ELISA結(jié)合數(shù)據(jù)。
[0052]圖16提供遵循下文實施例1中的方案而獲得的關(guān)于抗體Ab5、Ab6、Ab7以及Ab8的CGRP-a ELISA結(jié)合數(shù)據(jù)。
[0053]圖17提供遵循下文實施例1中的方案而獲得的關(guān)于抗體Ab9、AblO以及Abl4的CGRP-a ELISA結(jié)合數(shù)據(jù)。
[0054]圖18提供遵循下文實施例1中的方案而獲得的關(guān)于抗體Abll、Abl2以及Abl3的CGRP-a ELISA結(jié)合數(shù)據(jù)。[0055]圖19顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abl、Ab2以及Ab4對于CGRP- α驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0056]圖20顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab3對于CGRP-α驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0057]圖21顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab5和Ab6對于CGRP- α驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0058]圖22顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab7、Ab8、Ab9以及AblO對于CGRP- α驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0059]圖23顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abll、Abl2以及Abl3對于CGRP- α驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0060]圖24顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abl4對于CGRP-α驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0061]圖25顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abl、Ab2以及Ab3對于CGRP- β驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0062]圖26顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab4、Ab5以及Ab6對于CGRP- β驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0063]圖27顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab7和Ab8對于CGRP- β驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0064]圖28顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab9、AblO以及Abl4對于CGRP- β驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0065]圖29顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abll、Abl2以及Abl3對于CGRP- β驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0066]圖30顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abl、Ab2、Ab4以及Ab5對于大鼠CGRP驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0067]圖31顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab3和Ab6對于大鼠CGRP驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0068]圖32顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab7和Ab8對于大鼠CGRP驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0069]圖33顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab9對于大鼠CGRP驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0070]圖34顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體AblO對于大鼠CGRP驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0071]圖35顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abll和Abl2對于大鼠CGRP驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0072]圖36顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Abl3對于大鼠CGRP驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0073]圖37顯示遵循下文實施例1中的方案而獲得的抗體Ab 14對于大鼠CGRP驅(qū)動的cAMP產(chǎn)生的抑制作用。
[0074]圖38顯示遵循下文實施例6中的方案而獲得的抗體Abl_Abl3對于經(jīng)放射性標(biāo)記的CGRP與CGRP-R結(jié)合的抑制作用。
[0075]圖39顯示遵循下文實施例7中的方案而獲得的通過在大鼠模型中施用辣椒素(capsaicin)之后再施用抗體Ab3和Ab6而獲得的相對于對照抗體的血管舒張減少。
[0076]圖40顯示遵循下文實施例7中的方案而獲得的通過在大鼠模型中施用辣椒素之后再施用不同濃度的抗體Ab6而獲得的相對于對照抗體的血管舒張減少。 [0077]圖41顯示ICV注射CGRP在hRAMPltg小鼠和對照同窩出生小鼠中的作用并且特別地包含顯示CGRP施用在hRAMPItg小鼠中相對于其對照同窩出生仔畜減少了光行為時間的數(shù)據(jù)。在麻醉下通過ICV對小鼠注射hCGRP(2yg)并且使其恢復(fù)30分鐘。將小鼠單獨地放置在雙室光照/黑暗箱中并且記錄運動30分鐘。每次于六個不同的箱中平行操作六只小鼠。每一組由七至九只小鼠組成。
[0078]圖42包含比較全身性(IP)注射抗CGRP抗體(Ab3)對CGRP驅(qū)動的厭光的影響的數(shù)據(jù)。含Ab3的媒介物、媒介物以及含對照抗體的媒介物以30mg/kg的劑量施用于巢蛋白/RAMPl小鼠中并且然后通過ICV施用向小鼠施用CGRP。該圖左側(cè)的數(shù)據(jù)為在CGRP施用后的前10分鐘的光照總時間(秒)，并且該圖右側(cè)的數(shù)據(jù)為在CGRP注射后測量的前20分鐘的光照總時間(秒)。所述數(shù)據(jù)揭示接受抗CGRP抗體Ab3 (公開于下文)的小鼠相對于接受對照物的小鼠在光照中花費的時間量具有統(tǒng)計上顯著的增加。
[0079]優(yōu)選實施方案的詳細(xì)說明
[0080]定義
[0081]應(yīng)理解，本發(fā)明并不限于所述的具體方法、方案、細(xì)胞系、動物物種或?qū)僖约霸噭驗檫@些可能會有變化。還應(yīng)理解，本文所用的術(shù)語僅為描述具體的實施方案，而不意欲限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍僅由所附權(quán)利要求書限制。除非上下文另外明確指出，否則如本文所用的單數(shù)形式“一”和“該”包括復(fù)數(shù)個指示物。因此，例如，提及“一個細(xì)胞”包括多個此類細(xì)胞以及提及“該蛋白質(zhì)”包括提及一種或多種蛋白質(zhì)以及為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其等效物，諸如此類。除非另外明確指出，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員所通常理解相同的含義。
[0082]降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP):如本文所用，CGRP不僅涵蓋可獲自AmericanPeptides (Sunnyvale CA)和 Bachem (Torrance, CA)的下列智人 CGRP-α 和智人 CGRP-β 氨
基酸序列:
[0083]CGRP- q:ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGWKNNFVPTNVGSKAF_NH2 (SEQ ID NO: 281)，其中
N端苯丙氨酸被酰胺化；
[0084]CGRP-β:ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF-NH2 (SEQ ID NO:282)，其中N端苯丙氨酸被酰胺化；而且涵蓋這些CGRP氨基酸序列的任何膜結(jié)合形式，以及這種序列的突變體(突變蛋白)、剪接變體、同種型、直系同源物、同源物以及變體。特別地，本文的CGRP涵蓋嚙齒動物(大鼠或小鼠)CGRP以及來自其他哺乳動物的CGRP。[0085]“CGRP受體”或“CGRP-R”是指CGRP的受體結(jié)合配偶體，優(yōu)選地為人類CGRP受體，但涵蓋其他物種CGRP-R，尤其是嚙齒動物(大鼠或小鼠)、非人靈長類動物以及其他哺乳動物 CGRP-R。
[0086]本文的“CGRP/CGRP受體抑制劑”是指任何抑制CGRP與CGRP受體的相互作用的多肽，例如，抗CGRP或抗CGRP-R抗體或抗體片段以及CGRP或CGRP-R多肽的片段。優(yōu)選地這些抑制劑將在體外和體內(nèi)抑制這種相互作用并且將抑制CGRP的不良副作用(包括厭光或畏光)。
[0087]本文的“畏光”是指對光的視覺感知異常不能容忍的癥狀，有時另外由異?；虿缓侠淼奈窇止饣蛴裳劬Υ嬖趯嶋H的物理光敏感性所定義。在本發(fā)明中，畏光特別地包括與偏頭痛、叢集性頭痛以及可觸發(fā)偏頭痛或叢集性頭痛的厭光行為的其他神經(jīng)性原因相關(guān)的厭光。患者由于與眼睛或神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)的若干種不同的醫(yī)學(xué)病狀而產(chǎn)生畏光。畏光可由在視覺系統(tǒng)中的任何步驟起始的對光的反應(yīng)增加而造成，例如:(i)過多的光進(jìn)入眼睛；(ii)如果眼睛被損傷，例如由于角膜擦傷和視網(wǎng)膜損傷，或如果瞳孔不能正常地收縮(在動眼神經(jīng)損傷時可見)，則過多的光可以進(jìn)入眼睛；(iii)視網(wǎng)膜中光感受器的過度刺激；(iv)對視神經(jīng)的過度電脈沖；以及(V)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的過度反應(yīng)。
[0088]畏光的常見原因包括偏頭痛、白內(nèi)障或嚴(yán)重的眼科疾病如葡萄膜炎或角膜擦傷。與畏光相關(guān)的病癥的更詳盡列表包括眼睛相關(guān)原因如色盲、無虹膜、抗膽堿能藥物可能通過麻痹虹膜括約肌而引起的畏光、無晶狀體(眼睛不存在晶狀體)、牛眼(角膜與虹膜之間的異常窄角)、白內(nèi)障、視錐細(xì)胞營養(yǎng)不良、先天性眼睛異常、病毒性結(jié)膜炎(“紅眼病”)、角膜擦傷、角膜營養(yǎng)不良、角膜潰瘍、角膜上皮破壞(例如由角膜異物或角膜炎引起)、晶狀體異位、眼內(nèi)炎、由疾病、損傷或感染引起的眼外傷如瞼板腺囊腫、鞏膜外層炎、青光眼、圓錐角膜、或視神經(jīng)發(fā)育不良、水眼、或先天性青光眼、虹膜炎、視神經(jīng)炎、色素播散綜合征、瞳孔擴張(自然或化學(xué)誘導(dǎo))、視網(wǎng)膜脫離、角膜或鞏膜的疤痕以及葡萄膜炎。
[0089]另外，畏光具有神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)或泌尿道原因，包括:自閉癥譜系障礙、Chiari畸形、誦讀困難、腦炎(包括肌痛性腦脊髓炎，也被稱為慢性疲勞綜合征)、腦膜炎、蛛網(wǎng)膜下腔出血、后顱窩腫瘤，以及其他原因如強直性脊柱炎、白化病、核黃素缺乏癥、苯二氮簞類(苯
二氮革類的長期使用或戒斷)、化學(xué)療法、基孔肯雅病、胱氨酸癥、埃勒斯-當(dāng)洛綜合征、宿醉、流感、傳染性單核細(xì)胞增多癥、鎂缺乏、汞中毒、偏頭痛、狂犬病以及II型酪氨酸血癥(也被稱為“里奇納-漢哈特綜合征”)。另外，已知在抑郁癥、雙相情感障礙以及廣場恐怖癥中畏光程度升高。
[0090]“偏頭痛(migraine) ”來自希臘詞hemi (意指一半)和kranion (意指頡骨),它是一種特征為中度至重度頭痛以及惡心的令人衰弱的病狀。其在女性中比男性中更常見約三倍。典型的偏頭痛為單側(cè)的(影響頭的一半)并且本質(zhì)上脈動并持續(xù)4至72小時；癥狀包括惡心、嘔吐、畏光(對光的敏感性增加)、畏聲(對聲音的敏感性增加);所述癥狀一般通過日?；顒蛹又亍４蠹s三分之一的罹患偏頭痛的人感知到先兆:作為偏頭痛將很快發(fā)生的征象的不尋常的視覺、嗅覺或其他感官體驗。偏頭痛的初始治療典型地是利用用于頭痛的止痛劑、用于惡心的止吐劑以及避免觸發(fā)病狀。關(guān)于雙胞胎的研究指示對于其患上偏頭痛的傾向存在60%至65%的遺傳影響。此外，波動的激素水平指示偏頭痛關(guān)聯(lián):75%的成年患者為女性，但偏頭痛影響到大約相等數(shù)目的青春期前男孩和女孩；已知偏頭痛傾向在妊娠期間消失，但在一些婦女中在妊娠期間偏頭痛可能變得更頻繁。
[0091]本文的“有效治療或預(yù)防畏光”是指在有需要的受試者、例如具有活躍性偏頭痛發(fā)作或叢集性頭痛的受試者或易患上偏頭痛或叢集性頭痛或本文鑒定的其他畏光相關(guān)病癥中的一者的受試者中，在施用有效量的根據(jù)本發(fā)明的CGRP/CGRP受體抑制劑多肽、例如根據(jù)本發(fā)明的抗CGRP抗體或抗體片段之后，抑制厭光行為或畏光或抑制厭光行為或畏光的發(fā)作。可以單一療法或聯(lián)合另一種活性劑如例如托吡酯(Topirimate)或雙氫麥角胺(dihydroergotamine)來實現(xiàn)治療。
[0092]交配感受態(tài)酵母物種:在本發(fā)明中，意欲廣泛地涵蓋可以在培養(yǎng)物中生長的任何二倍體或四倍體酵母。此類酵母物種可以單倍體、二倍體或其他多倍體形式存在。給定倍性的細(xì)胞可在適當(dāng)條件下以所述形式增殖無限代數(shù)。二倍體細(xì)胞也可以孢子化以形成單倍體細(xì)胞。連續(xù)交配可通過二倍體菌株的進(jìn)一步交配或融合而產(chǎn)生四倍體菌株。本發(fā)明涵蓋單倍體酵母以及例如通過交配或原生質(zhì)球融合而產(chǎn)生的二倍體或其他多倍體酵母細(xì)胞的用途。
[0093]在本發(fā)明的一個實施方案中，交配感受態(tài)酵母為酵母科(Saccharomycetaceae)成員，其包括阿斯霉屬(Arxiozyma) ;Ascobotryozyma ;固囊酵母屬(Citeromyces);德巴利酵母屬(Debaryomyces);德克酵母屬(Dekkera);假囊酵母屬(Eremothecium);伊薩酵母屬(Issatchenkia);哈薩克酵母屬(Kazachstania);克魯維酵母屬(Kluyveromyces)；柯達(dá)酵母屬(Kodamaea);婁德酵母屬(Lodderomyces);管囊酵母屬(Pachysolen);畢赤酵母屬(Pichia);酵母屬(Saccharomyces) ；Saturnispora ；Tetrapisispora ;有抱圓酵母屬(Torulaspora);擬威爾酵母屬(Williopsis);以及接合酵母屬(Zygosaccharomyces)。潛在地可用于本發(fā)明中的其他類型的酵母包括子囊菌酵母屬(Yairowia);紅冬孢酵母屬(Rhodosporidium);假絲酵母屬(Candida);漢遜酵母屬(Hansenula);線黑粉酵母屬(Filobasium);鎖擲酵母屬(Sporidiobolus);布勒擲孢酵母屬(Bullera);白冬孢酵母屬(Leucosporidium)以及線黑粉菌屬(Filobasidella)。
[0094]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，交配感受態(tài)酵母是畢赤酵母屬成員。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案中，畢赤酵母屬的交配感受態(tài)酵母是以下物種之一:巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)、甲醇畢赤酵母(Pichia methanolica)以及多形漢遜酵母(Hansenula poIymorpha)(安格斯畢赤酵母(Pichia angusta))。在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，畢赤酵母屬的交配感受態(tài)酵母為物種巴斯德畢赤酵母。
[0095]單倍體酵母細(xì)胞:具有其正?；蚪M(染色體組)補體的各基因的單拷貝的細(xì)胞。
[0096]多倍體酵母細(xì)胞:具有其正?；蚪M(染色體組)補體的多于一個拷貝的細(xì)胞。
[0097]二倍 體酵母細(xì)胞:具有其正?；蚪M補體的基本上每個基因的兩個拷貝(等位基因)的細(xì)胞，其典型地通過兩個單倍體細(xì)胞融合(交配)的方法而形成。
[0098]四倍體酵母細(xì)胞:具有其正?；蚪M補體的基本上每個基因的四個拷貝(等位基因)的細(xì)胞，其典型地通過兩個單倍體細(xì)胞融合(交配)的方法而形成。四倍體可攜帶兩個、三個、四個或更多個不同的表達(dá)盒。此類四倍體可在釀酒酵母(s.cerevisiae)中通過選擇性交配純合基因的異宗配合a/a和α/α 二倍體而獲得以及在畢赤酵母中通過單倍體的連續(xù)交配以獲得營養(yǎng)缺陷型二倍體而獲得。例如，[met his]單倍體可以與[ade his]單倍體交配來獲得二倍體[his];并且[met arg]單倍體可以與[ade arg]單倍體交配來獲得二倍體[arg];然后二倍體[his] X 二倍體[arg]來獲得四倍體原養(yǎng)型微生物。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，提及二倍體細(xì)胞的益處和用途還可適用于四倍體細(xì)胞。
[0099]酵母交配:通過兩個單倍體酵母細(xì)胞天然地融合以形成一個二倍體酵母細(xì)胞的方法。
[0100]減數(shù)分裂:通過二倍體酵母細(xì)胞經(jīng)受減少性的分裂以形成四個單倍體孢子產(chǎn)物的方法。每一孢子然后可發(fā)芽并形成單倍體植物性生長細(xì)胞系。
[0101]可選擇標(biāo)記物:可選擇標(biāo)記物為對例如通過轉(zhuǎn)化事件接收該基因的細(xì)胞賦予生長表型(物理生長特征)的基因或基因片段?？蛇x擇標(biāo)記物允許該細(xì)胞在選擇性生長培養(yǎng)基中在不接收該可選擇標(biāo)記基因的細(xì)胞不能生長的條件下存活和生長?？蛇x擇標(biāo)記基因通常屬于幾種類型，包括陽性可選擇標(biāo)記基因，例如賦予細(xì)胞對于抗生素或其他藥物的抗性、當(dāng)雜交兩個溫度敏感性(“ts”)突變體或轉(zhuǎn)化ts突變體時賦予溫度抗性的基因；陰性可選擇標(biāo)記基因，例如賦予細(xì)胞以在不含特定營養(yǎng)物的培養(yǎng)基中生長的能力的生物合成基因，而不具有該生物合成基因的所有細(xì)胞都需要這種營養(yǎng)物；或賦予細(xì)胞以不能利用不具有野生型基因的細(xì)胞而生長的誘變型生物合成基因；等。合適的標(biāo)記物包括但不限于:ZE0 ；G418 ；LYS3 ；MET1 ；ME T3a ；ADE1 ；ADE3 ；URA3 ;等。
[0102]表達(dá)載體:這些DNA載體包含便于外來蛋白質(zhì)在目標(biāo)宿主細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)操作的元件。方便起見，序列的操作和用于轉(zhuǎn)化的DNA的產(chǎn)生首先在細(xì)胞宿主、例如大腸桿菌(E.coli)中進(jìn)行，并且通常載體將包括便于此類操作的序列，包括細(xì)菌復(fù)制起點和適當(dāng)?shù)募?xì)菌選擇標(biāo)記物。選擇標(biāo)記物對在選擇性培養(yǎng)基中生長的轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞的存活或生長而言必需的蛋白質(zhì)進(jìn)行編碼。未用包含選擇基因的載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞將不在該培養(yǎng)基中存活。典型的選擇基因編碼具有以下功能的蛋白質(zhì):(a)賦予對于抗生素或其他毒素的抗性，(b)補充營養(yǎng)缺陷型缺陷，或(c)供應(yīng)不能從復(fù)合培養(yǎng)基中獲得的關(guān)鍵營養(yǎng)物。用于轉(zhuǎn)化酵母的不例性載體和方法描述于例如Burke, D., Dawson, D.和Stearns, T.(2000).Methodsin yeast genetics: a Cold Spring Harbor Laboratory course manual.Plainview, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press 中。
[0103]用于本發(fā)明的方法中的表達(dá)載體將進(jìn)一步包括酵母特異性序列，其包括可選擇營養(yǎng)缺陷型或藥物標(biāo)記物以用于鑒定轉(zhuǎn)化的酵母菌株。藥物標(biāo)記物此外可用于在酵母宿主細(xì)胞中擴增載體的拷貝數(shù)。
[0104]所關(guān)注的編碼多肽的序列可操作地連接至轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控序列，所述調(diào)控序列提供多肽在酵母細(xì)胞中的表達(dá)。這些載體成分可包括但不限于下列一種或多種:增強子元件、啟動子以及轉(zhuǎn)錄終止序列。還可以包括用于分泌多肽的序列，例如信號序列等。酵母復(fù)制起點為任選的，因為表達(dá)載體通常整合到酵母基因組中。在本發(fā)明的一個實施方案中，所關(guān)注的多肽可操作地連接或融合至提供多肽從酵母二倍體細(xì)胞中優(yōu)化分泌的序列。
[0105]當(dāng)核酸與另一核酸序列發(fā)生功能關(guān)系時為“可操作地連接”。例如，如果信號序列的DNA以參與多肽分泌的前蛋白形式表達(dá)，則其與多肽的DNA可操作地連接；如果啟動子或增強子影響序列的轉(zhuǎn)錄，則其與編碼序列可操作地連接。通常，“可操作地連接”意味著所連接的DNA序列為相鄰的，并且，在分泌前導(dǎo)序列的情況下，為相鄰的并且在閱讀框中。然而，增強子不必需是相鄰的。連接可以通過在適宜的限制性位點接合或可選地通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的PCR/重組方法來實現(xiàn)(GatewayK Technology; Invitrogen, CarlsbadCalifornia)。如果此類位點不存在，則根據(jù)常規(guī)實踐使用合成的寡核苷酸適配子或連接子。
[0106]啟動子為位于結(jié)構(gòu)基因(通常在約100至1000bp內(nèi))的起始密碼子的上游(5’)的非翻譯序列，其控制與其可操作地連接的特定核酸序列的轉(zhuǎn)錄和翻譯。此類啟動子屬于幾類:誘導(dǎo)型、組成型以及阻抑型啟動子(其應(yīng)答于阻遏子的缺失而增加轉(zhuǎn)錄水平)。誘導(dǎo)型啟動子可應(yīng)答于培養(yǎng)條件的某些變化，例如營養(yǎng)物的存在或不存在或者溫度變化，而引發(fā)來自它們控制下的DNA的轉(zhuǎn)錄水平的增加。
[0107]酵母啟動子片段還可用作用于同源重組和將表達(dá)載體整合到酵母基因組中的相同位點的位點；可選地，可選擇標(biāo)記物用作用于同源重組的位點。畢赤酵母屬轉(zhuǎn)化描述于Cregg 等人(1985)Mol.Cell.Biol.5:3376-3385 中。
[0108]來自畢赤酵母屬的合適啟動子的例子包括AOXl和啟動子(Cregg等人(1989)1^Cell.Biol.9:1316~1323):ICL1 啟動子(Menendez 等人(2003) Yeast20 (13):1097-108):甘油醛-3-磷酸脫氫酶啟動子(GAP) (Waterham 等人(1997)Genel86 (I):37-44);以及 FLDl啟動子(Shen等人(1998)Gene216(l):93_102)。GAP啟動子為強組成型啟動子并且AOX和FLDl啟動子為誘導(dǎo)型。
[0109]其他酵母啟動子包括ADHl、醇脫氫酶I1、GAL4、PH03、PH05、Pyk以及從其衍生的嵌合啟動子。另外，非酵母啟動子可用于本發(fā)明中，例如哺乳動物、昆蟲、植物、爬行動物、兩棲動物、病毒以及鳥類啟動子。最典型地該啟動子將包括哺乳動物啟動子(可能對所表達(dá)的基因來說是內(nèi)源性的)或?qū)?在酵母系統(tǒng)中提供有效轉(zhuǎn)錄的酵母或病毒啟動子。
[0110]所關(guān)注的多肽不僅可以直接重組地產(chǎn)生，而且可以作為與異源多肽、例如信號序列或在成熟蛋白或多肽的N端具有特定裂解位點的其他多肽的融合多肽形式產(chǎn)生。一般來說，信號序列可為載體的成分，或其可為插入載體中的多肽編碼序列的一部分。優(yōu)選的異源信號序列為通過宿主細(xì)胞內(nèi)可獲得的標(biāo)準(zhǔn)途徑之一識別并加工的異源信號序列。釀酒酵母α因子前原信號已經(jīng)證明在各種來自巴斯德畢赤酵母的重組蛋白的分泌中有效。其他酵母信號序列包括α交配因子信號序列、轉(zhuǎn)化酶信號序列以及衍生自其他分泌的酵母多肽的信號序列。另外，這些信號肽序列可以被工程改造以提供在二倍體酵母表達(dá)系統(tǒng)中的增強的分泌。所關(guān)注的其他分泌信號還包括哺乳動物信號序列，其可能與所分泌的蛋白質(zhì)是異源的，或可能為所分泌的蛋白質(zhì)的天然序列。信號序列包括前肽序列，并且在一些情況下可包括原肽序列。許多此類信號序列在本領(lǐng)域是已知的，包括在免疫球蛋白鏈中發(fā)現(xiàn)的信號序列，例如Κ28前原毒素序列、PHA-E, FACE、人類MCP-1、人類血清白蛋白信號序列、人類Ig重鏈、人類Ig輕鏈等。例如參見Hashimoto等人Protein Engll (2) 75 (1998);以及Kobayashi 等人 Therapeutic Apheresis2 (4) 257 (1998)。
[0111]轉(zhuǎn)錄可以通過將轉(zhuǎn)錄激活子序列插入載體來增強。這些激活子是DNA的順式作用元件，通常約10至300bp，其作用在啟動子上以增強其轉(zhuǎn)錄。轉(zhuǎn)錄增強子相對獨立地定位和定向，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)于轉(zhuǎn)錄單元的5’和3’、在內(nèi)含子內(nèi)以及在編碼序列本身內(nèi)。增強子可以在編碼序列的5’或3’位置剪接至表達(dá)載體中，但是優(yōu)選位于從啟動子起的5’位點。
[0112]用于真核宿主細(xì)胞中的表達(dá)載體還可以包含對于轉(zhuǎn)錄終止和對于使mRNA穩(wěn)定所需的序列。此類序列通常可從真核或病毒DNA或cDNA的非翻譯區(qū)中翻譯終止密碼子的3’獲得。這些區(qū)域包含轉(zhuǎn)錄為在mRNA的非翻譯部分中的多腺苷酸化片段的核苷酸區(qū)段。
[0113]包含一種或多種以上所列成分的合適載體的構(gòu)建使用標(biāo)準(zhǔn)接合技術(shù)或PCR/重組方法。分離的質(zhì)粒或DNA片段以需要產(chǎn)生所需質(zhì)粒的形式或通過重組方法被裂解、修改和再接合。為了分析以確認(rèn)所構(gòu)建質(zhì)粒中的正確序列，使用接合混合物來轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，并且在適當(dāng)時通過抗生素抗性(例如氨芐青霉素或博萊霉素(Zeocin))來選擇成功的轉(zhuǎn)化株。制備來自轉(zhuǎn)化株的質(zhì)粒，通過限制性核酸內(nèi)切酶消化進(jìn)行分析和/或測序。
[0114]作為片段的限制和接合的替代方案，可使用基于att位點和重組酶的重組方法來將DNA序列插入載體中。此類方法由例如Landy (1989) Ann.Rev.Biochem.58:913-949描述；并且為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知。此類方法利用分子間DNA重組，其由λ和大腸桿菌編碼的重組蛋白的混合物介導(dǎo)。重組出現(xiàn)在相互作用DNA分子上的特異性附著(att)位點之間。對于 att 位點的描述，參見Weisberg和 Landy (1983) Site-Specific Recombination inPhage Lambda, in Lambda II，Weisberg編(Cold Spring Harbor, NY:Cold Spring HarborPress),第211-250頁。使側(cè)接重組位點的DNA區(qū)段交換，以使得重組后，att位點為由各親本載體貢獻(xiàn)的序列所構(gòu)成的雜交序列。重組可以在任何拓?fù)鋵W(xué)的DNA之間發(fā)生。
[0115]可以通過以下步驟將att位點引入所關(guān)注的序列中:將所關(guān)注的序列接合入適當(dāng)?shù)妮d體；通過使用特定的引物產(chǎn)生包含att B位點的PCR產(chǎn)物；產(chǎn)生克隆入包含att位點的適當(dāng)載體中的cDNA文庫；等等。
[0116]如本文所用的折疊是指多肽和蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)，其中氨基酸殘基之間的相互作用用于穩(wěn)定該結(jié)構(gòu)。盡管非共價相互作用在確定結(jié)構(gòu)上是重要的，但所關(guān)注的蛋白質(zhì)通常將具有由兩個半胱氨酸殘基形`成的分子內(nèi)和/或分子間共價二硫鍵。對于天然存在的蛋白質(zhì)和多肽或其衍生物和變體，適當(dāng)?shù)恼郫B典型地為導(dǎo)致最佳生物活性的排列，并且可以方便地通過活性測定法、例如配體結(jié)合、酶促活性等來監(jiān)測。
[0117]在一些情況下，例如其中所需產(chǎn)品是合成來源時，基于生物活性的測定法將較無意義。此類分子的正確折疊可基于物理性質(zhì)、能量考慮、建模研究等確定。
[0118]表達(dá)宿主可通過引入編碼一種或多種酶的序列來進(jìn)一步修飾，所述一種或多種酶將增強折疊和二硫鍵形成，即折疊酶、伴侶蛋白等。此類序列可使用本領(lǐng)域已知的載體、標(biāo)記物等在酵母宿主細(xì)胞中組成性或誘導(dǎo)性地表達(dá)。優(yōu)選地包括足以用于所需表達(dá)模式的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件的序列，通過靶向方法穩(wěn)定地整合入酵母基因組。
[0119]例如，真核PDI不僅是蛋白質(zhì)半胱氨酸氧化和二硫鍵異構(gòu)化的有效催化劑，而且展現(xiàn)伴侶蛋白活性。PDI的共同表達(dá)可以促進(jìn)具有多個二硫鍵的活性蛋白的產(chǎn)生。此外所關(guān)注的是BIP (免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白)、親環(huán)素(cyclophilin)等的表達(dá)。在本發(fā)明的一個實施方案中，每一單倍體親本菌株表達(dá)不同的折疊酶，例如一個菌株可以表達(dá)BIP，而另一菌株可以表達(dá)PDI或其組合。
[0120]術(shù)語“所需蛋白”或“所需抗體”可互換使用并且通常指對標(biāo)靶具有特異性的親本抗體，即如本文所述的CGRP或CGRP受體或者衍生自其的嵌合或人源化抗體或者其結(jié)合部分。術(shù)語“抗體”意欲包括具有適合并識別表位的特定形狀的任何包含多肽鏈的分子結(jié)構(gòu)，其中一種或多種非共價結(jié)合相互作用使分子結(jié)構(gòu)和表位之間的復(fù)合物穩(wěn)定化。原型抗體分子為免疫球蛋白，并且認(rèn)為來自所有來源、例如人類、嚙齒動物、兔、牛、綿羊、豬、狗、其他哺乳動物、雞、其他鳥類等的所有類型的免疫球蛋白IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等為“抗體”。用于產(chǎn)生用作根據(jù)本發(fā)明的起始物質(zhì)的抗體的優(yōu)選來源為兔。已經(jīng)描述了許多抗體編碼序列；以及其他可通過本領(lǐng)域眾所周知的方法產(chǎn)生。其例子包括嵌合抗體、人類抗體以及其他非人類哺乳動物抗體、人源化抗體、單鏈抗體(例如scFv)、駱駝抗體、納米抗體、IgNAR (源自鯊魚的單鏈抗體)、小模塊免疫藥物(SMIP)，以及抗體片段如 Fab、Fab，、F(ab，)2 等。參見 Streltsov VA 等人，Structure of a shark IgNARantibody variable domain and modeling of an early-developmental isotype, ProteinSc1.2005 年 11 月；14(11):2901-9.電子版 2005 年 9 月 30 日；Greenberg AS 等人，Anew antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensivesomatic diversification in sharks, Nature.1995 年 3 月 9 日；374(6518):168-73 ;Nuttall SD等人，Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks, anduse as a scaffold for the display of protein loop libraries, Mol Tmmunol.2001年 8 月；38(4): 313-26 ;Hamers-Casterman C 等人，Naturally occurring antibodiesdevoid of light chains, Nature.1993 年 6 月 3 日；363(6428):446-8 ;Gill DS 等人，Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds, Curr OpinBiotechnol.2006 年 12 月;17 (6): 653-8.電子版 2006 年 10 月 19 日。
[0121]例如，抗體或抗原結(jié)合片段可以通過基因工程產(chǎn)生。在這種技術(shù)中，如其他方法一樣，抗體產(chǎn)生細(xì)胞對所需抗原或免疫原敏感。從抗體產(chǎn)生細(xì)胞分離的信使RNA用作模板以使用PCR擴增制備cDNA。各自包含保持初始抗原特異性的一個重鏈基因和一個輕鏈基因的載體的文庫通過將擴增的免疫球蛋白cDNA的適當(dāng)部分插入表達(dá)載體中而產(chǎn)生。通過將重鏈基因文庫與輕鏈基因文庫組合來構(gòu)建組合文庫。這產(chǎn)生了共同表達(dá)重鏈和輕鏈(類似于抗體分子的Fab片段或抗原結(jié)合片段)的克隆的文庫。將攜帶這些基因的載體共同轉(zhuǎn)染入宿主細(xì)胞。當(dāng)在轉(zhuǎn)染的宿主中誘導(dǎo)抗體基因合成時，重鏈和輕鏈蛋白自組裝以產(chǎn)生活性抗體，所述活性抗體可以通過用抗原或免疫原篩選來檢測。
[0122]所關(guān)注的抗體編碼序列包括被以下編碼的那些:天然序列，以及借助于基因編碼的簡并性而在序列上與所公開核酸不相同的核酸，和其變體。變體多肽可以包括氨基酸(aa)取代、添加或缺失。氨基酸取代可以為保守性氨基酸取代或為消除非必需氨基酸的取代，例如以改變糖基化位點，或通過取代或缺失一個或多個對于功能不必需的半胱氨酸殘基而使錯誤折疊最小化。變體可以設(shè)計成保持或具有蛋白質(zhì)特定區(qū)域(例如，功能域、催化性氨基酸殘基等)的增強的生物活性。變體還包括本文公開的多肽的片段，特別是生物學(xué)活性片段和/或?qū)?yīng)于功能域的片段。用于克隆基因的體外誘變技術(shù)是已知的。本發(fā)明中還包括這樣的多肽，其已經(jīng)使用普通分子生物技術(shù)修飾以改進(jìn)其對蛋白水解降解的抗性或以優(yōu)化溶解度性質(zhì)或以使其更適合作為治療劑。 [0123]嵌合抗體可以利用重組手段通過將獲自一個物種的抗體產(chǎn)生細(xì)胞的可變輕鏈區(qū)和可變重鏈區(qū)('和Vh)與來自另一物種的恒定輕鏈區(qū)和恒定重鏈區(qū)組合而制得。典型地嵌合抗體利用嚙齒 動物或兔可變區(qū)和人類恒定區(qū)，以產(chǎn)生具有主要人類結(jié)構(gòu)域的抗體。此類嵌合抗體的產(chǎn)生在本領(lǐng)域是眾所周知的，并且可利用標(biāo)準(zhǔn)手段實現(xiàn)(如例如美國專利N0.5，624，659中所述，該專利以全文引用的方式并入本文中)。此外涵蓋本發(fā)明的嵌合抗體的人類恒定區(qū)可選自IgGl、IgG2、IgG3和IgG4恒定區(qū)。
[0124]人源化抗體被工程改造以包含甚至更多類人免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，并且只并入動物源抗體的互補決定區(qū)。這通過仔細(xì)地檢查單克隆抗體的可變區(qū)的高變環(huán)的序列并且使它們適合人類抗體鏈的結(jié)構(gòu)來實現(xiàn)。盡管表面上復(fù)雜，但實際上該過程是簡單的。參見例如美國專利N0.6，187，287，其以引用的方式完全并入本文中。
[0125]除了完整免疫球蛋白(或其重組對應(yīng)物)之外，還可合成包括表位結(jié)合位點的免疫球蛋白片段(例如，F(xiàn)ab’、F(ab’)2或其他片段)?？衫弥亟M免疫球蛋白技術(shù)來設(shè)計“片段”或最小免疫球蛋白。例如，用于本發(fā)明的“Fv”免疫球蛋白可以通過合成融合的可變輕鏈區(qū)和可變重鏈區(qū)而產(chǎn)生?？贵w的組合也令人關(guān)注，例如雙功能抗體，其包括兩種不同的Fv特異性。在本發(fā)明的另一個實施方案中，免疫球蛋白片段涵蓋SMIP (小分子免疫藥物)、駱駝抗體、納米抗體以及IgNAR。
[0126]免疫球蛋白和其片段可以被翻譯后修飾，例如添加效應(yīng)子部分如化學(xué)連接子、可檢測部分如熒光染料、酶、毒素、底物、生物發(fā)光材料、放射性材料、化學(xué)發(fā)光部分等，或特異性結(jié)合部分如鏈霉親和素(streptavidin)、親和素(avidin)或生物素等可用于本發(fā)明的方法和組合物中。另外的效應(yīng)子分子的例子在下文提供。
[0127]如果按照遺傳密碼翻譯多核苷酸序列產(chǎn)生多肽序列，則該多核苷酸序列與該多肽序列相“對應(yīng)”(即，該多核苷酸序列“編碼”該多肽序列);如果兩個序列編碼相同的多肽序列，則一個多核苷酸序列與另一個多核苷酸序列相“對應(yīng)”。
[0128]DNA構(gòu)建體的“異源”區(qū)或結(jié)構(gòu)域為較大DNA分子內(nèi)可鑒定的DNA區(qū)段，其在自然界中未發(fā)現(xiàn)與該較大分子相連。因此，當(dāng)異源區(qū)編碼哺乳動物基因時，該基因?qū)⑼ǔＭㄟ^在來源有機體的基因組中不側(cè)接哺乳動物基因組DNA的DNA所側(cè)接。異源區(qū)的另一個例子為其中編碼序列本身未在自然界中發(fā)現(xiàn)的構(gòu)建體(例如，其中基因組編碼序列包含內(nèi)含子的cDNA，或具有不同于天然基因的密碼子的合成序列)。等位變異或天然存在的突變事件不產(chǎn)生如本文定義的DNA的異源區(qū)。
[0129]“編碼序列”為密碼子的同框序列，其(考慮到遺傳密碼)對應(yīng)于或編碼蛋白質(zhì)或肽序列。如果序列或其互補序列編碼相同的氨基酸序列，則兩個編碼序列彼此相一致。與適當(dāng)?shù)恼{(diào)控序列相連的編碼序列可被轉(zhuǎn)錄和翻譯成多肽。多腺苷酸化信號和轉(zhuǎn)錄終止序列將通常位于編碼序列的3’?！皢幼有蛄小睘槟軌蚪Y(jié)合細(xì)胞中的RNA聚合酶并且啟動下游(3’方向)編碼序列的轉(zhuǎn)錄的DNA調(diào)控區(qū)域。啟動子序列典型地包含用于結(jié)合影響編碼序列的轉(zhuǎn)錄的調(diào)控分子(例如，轉(zhuǎn)錄因子)的另外的位點。當(dāng)RNA聚合酶結(jié)合細(xì)胞中的啟動子序列并且將編碼序列轉(zhuǎn)錄成mRNA，該mRNA然后又翻譯成由編碼序列編碼的蛋白質(zhì)時，編碼序列在啟動子序列的“控制下”或“可操作地連接”至啟動子。
[0130]使用載體將外來物質(zhì)如DNA、RNA或蛋白質(zhì)引入有機體或宿主細(xì)胞中。典型的載體包括重組病毒(用于多核苷酸)和脂質(zhì)體(用于多肽)?！癉NA載體”為復(fù)制子如質(zhì)粒、噬菌體或粘粒，另一個多核苷酸區(qū)段可連接至其以引起所連接區(qū)段的復(fù)制?！氨磉_(dá)載體”為DNA載體，其包含將通過適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞引導(dǎo)多肽合成的調(diào)控序列。這通常意味著結(jié)合RNA聚合酶并啟動mRNA的轉(zhuǎn)錄的啟動子，以及核糖體結(jié)合位點和引導(dǎo)mRNA翻譯成多肽的起始信號。在適當(dāng)?shù)奈稽c處和在正確的閱讀框中將多核苷酸序列并入表達(dá)載體中，然后通過載體轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞，能夠產(chǎn)生由所述多核苷酸序列編碼的多肽。
[0131]多核苷酸序列的“擴增”為體外產(chǎn)生特定核酸序列的多個拷貝。擴增序列通常為DNA形式。用于進(jìn)行此類擴增的各種技術(shù)描述于VanBrunt的綜述文章(1990，Bio/Technol.，8 (4):291-294)中。聚合酶鏈反應(yīng)或PCR為核酸擴增的原型，并且本文的PCR的使用應(yīng)該被認(rèn)為是其他合適擴增技術(shù)的示例。
[0132]現(xiàn)在已充分理解脊椎動物中抗體的一般結(jié)構(gòu)(Ede lman, G.M., Ann.N.Y.Acad.Sc1.，190:5(1971))。抗體由分子量約23，000道爾頓的兩條相同的輕多肽鏈(“輕鏈”)和分子量53，000-70, 000的兩條相同的重鏈(“重鏈”)組成。四條鏈通過二硫鍵以“Y”形構(gòu)型結(jié)合，其中輕鏈在“Y”形構(gòu)型的口處括住重鏈?！癥”形構(gòu)型的“分枝”部分稱為Fab區(qū)域；“Y”形構(gòu)型的莖部分稱為Fe區(qū)域。氨基酸序列定向是從“Y”形構(gòu)型頂部的N末端至各鏈底部的C末端。N末端擁有對引發(fā)其的抗原具有特異性的可變區(qū)，并且長度約100個氨基酸，在輕鏈和重鏈之間以及在不同抗體之間存在輕微的變化。
[0133]在各鏈中可變區(qū)連接至恒定區(qū)，該恒定區(qū)延伸鏈的剩余長度并且在特定種類的抗體內(nèi)不隨抗體的特異性(即，引發(fā)其的抗原)而變化。存在五種已知的主要種類的恒定區(qū)，其確定免疫球蛋白分子的種類(對應(yīng)于Y、U、α、δ以及ε重鏈恒定區(qū)的IgG、IgM、IgA、IgD以及IgE)。恒定區(qū)或種類決定抗體的后續(xù)效應(yīng)子功能，包括補體的激活(Kabat, E.A.，Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry,第 2版，第 413-436 頁，Holt, Rinehart, Winston (1976)),和其他細(xì)胞應(yīng)答(Andrews, Ο-ν?等人 ,Clinical Immunobiology,第 1-18 頁，W.B.Sanders (1980) ；Kohl, S.等人，Immunology， 48:187(1983));而可變區(qū)決定將與其反應(yīng)的抗原。輕鏈被分類為K (kappa)或λ (lambda)。各重鏈種類可以用κ或λ輕鏈制備。當(dāng)通過雜交瘤或通過B細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白時，輕鏈和重鏈彼此共價地鍵合，并且兩個重鏈的“尾”部分通過共價二硫鍵彼此鍵合。
[0134]表述“可變區(qū)”或“VR”是指在抗體中各輕鏈和重鏈對內(nèi)的結(jié)構(gòu)域，其直接參與抗體與抗原的結(jié)合。各重鏈在一端具有可變域(Vh)，接著為多個恒定域。各輕鏈在一端具有可變域并且在另一端具有恒定域；輕鏈的恒定域與重鏈的第一個恒定域?qū)R，并且輕鏈可變域與重鏈的可變域?qū)R。
[0135]表述“互補決定區(qū)”、“高變區(qū)”或“CDR”是指在抗體的輕鏈或重鏈的可變區(qū)中存在的一個或多個高變區(qū)或互補決定區(qū)(⑶R)(參見Kabat, Ε.Α.等人，Sequences of Proteinsof Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md.，(1987)X這些表述包括如由 Kabat 等人(“Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest, ” Kabat E.等人，US Dept, of Health and Human Services, 1983)定義的高變區(qū)或在抗體的三維結(jié)構(gòu)中的高變環(huán)(Chothia和Lesk，J Mol.Biol.196901-917(1987))。在各鏈中的CDR由框架區(qū)保持緊密接近，并且與其他鏈的CDR —起形成抗原結(jié)合位點。在CDR內(nèi)存在選定的氨基酸，其已經(jīng)描述為代表在抗體-抗原相互作用中CDR所用的關(guān)鍵接觸殘基的選擇性決定區(qū)(SDR) (Kashmiri, S., Methods, 36:25-34 (2005))。
[0136]表述“框架區(qū)”或“FR”是指抗體的輕鏈和重鏈的可變區(qū)內(nèi)的一個或多個框架區(qū)(參見 Kabat, E.A.等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest, NationalInstitutes of Health, Bethesda, Md., (1987) )?這些表述包括置于抗體的輕鏈和重鏈的可變區(qū)內(nèi)的CDR之間的那些氨基酸序列區(qū)域。
[0137]對CGRP具有結(jié)合活性的抗CGRP抗體和其結(jié)合片段
[0138]杭體Abl
[0139]本發(fā)明廣泛地涵蓋通過施用能夠有效治療或預(yù)防畏光的有效量的CGRP/CGRP受體抑制劑多肽、例如抗CGRP或抗CGRP受體抗體或其片段或CGRP或CGRP受體的片段在有需要的受試者、例如偏頭痛患者或另一種畏光相關(guān)病癥患者中抑制或預(yù)防畏光。這可例如使用適當(dāng)?shù)捏w內(nèi)模型如實施例8中公開的轉(zhuǎn)基因小鼠模型來測定。
[0140]在一個示例性實施方案中，本發(fā)明包括對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的源自Abl的嵌合抗體:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSS⑶CFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:1)。
[0141]本發(fā)明還包括對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSS⑶CFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:2)。
[0142]本發(fā)明進(jìn)一步 包括對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIffGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:3)。
[0143]本發(fā)明還包括對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDffLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:4)。
[0144]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋抗體，其包含對應(yīng)于SEQ ID NO:1的可變輕鏈序列或SEQ IDNO: 2的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6以及SEQ IDNO:7的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQ ID NO:3的可變重鏈序列或SEQ IDN0:4的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9以及SEQ IDNO: 10的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0145]本發(fā)明還涵蓋對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO:1或SEQ ID N0:2的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO:3 或 SEQ ID NO:4 的多肽序列。
[0146]在本發(fā)明的另一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID NO:1的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:2的輕鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO:5,SEQ ID N0:6以及SEQ ID N0:7的多肽序列中的一種或多種。
[0147]在本發(fā)明的另一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID NO:3的可變重鏈序列或SEQ ID NO:4的重鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9以及SEQ ID N0:10的多肽序列中的一種或多種。
[0148]本發(fā)明還涵蓋包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO:1的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID NO: 3的可變重鏈區(qū)；SEQ ID NO:1的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 5 ；SEQ ID N0:6;以及SEQ ID N0:7);以及SEQ ID NO: 3的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:8 ；SEQ ID NO:9 ；以及 SEQ ID NO: 10)。
[0149]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，嵌合抗CGRP抗體為Abl，其包含SEQ IDNO: 2和SEQ ID NO:4或可選地由SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO:4組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0150]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab (片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Abl，F(xiàn)ab片段包括SEQID NO:1的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:3的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQ ID N0:1和/或SEQ ID NO: 3的添加、缺失以及變體。
[0151]在本文(下文)所 述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Abl的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Abl或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CH0、NS0或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0152]杭體Ab2
[0153]在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASV⑶RVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSS⑶CFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:11)。
[0154]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:12)。
[0155]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQffVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:13)。
[0156]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:14)。
[0157]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ ID NO: 11的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:12的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ IDNO: 15, SEQ ID N0:16以及SEQ ID NO: 17的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQID NO: 13的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 14的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO: 18,SEQ ID NO: 19以及SEQ ID NO:20的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0158]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ IDN0:11或SEQ ID N0:12的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 14的多肽序列。
[0159]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:11的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 12的輕鏈序列`的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16以及SEQ ID NO: 17的多肽序列中的一種或多種。
[0160]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID NO: 13的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 14的重鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19以及SEQ ID N0:20的多肽序列中的一種或多種。
[0161]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO: 11的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID NO: 13的可變重鏈區(qū)；SEQ ID NO: 11的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 15 ；SEQ ID NO:16;以及 SEQ ID NO: 17);以及 SEQ ID NO: 13 的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 18 ；SEQ ID NO: 19;以及 SEQ ID NO: 20)。
[0162]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的人源化抗CGRP抗體為Ab2，其包含SEQ ID NO: 12和SEQ ID NO: 14或可選地由SEQ ID NO: 12和SEQ IDNO: 14組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0163]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab (片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Ab2，F(xiàn)ab片段包括SEQ ID NO: 11的可變輕鏈序列和SEQ ID NO: 13的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQ IDNO: 11和/或SEQ ID NO: 13的添加、缺失以及變體。
[0164]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Ab2的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab2或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CH0、NS0或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0165]杭體 Ab3
[0166]在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明包括對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體。如實施例8中所公開，這種抗體已經(jīng)在轉(zhuǎn)基因小鼠厭光行為模型中顯示可有效地抑制CGRP相關(guān)畏光: [0167]VLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSS⑶CFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:21)。
[0168]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:22)。
[0169]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQffVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:23)。
[0170]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:24)。
[0171]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ ID N0:21的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:22的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ IDNO:25, SEQ ID N0:26以及SEQ ID N0:27的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQID NO: 23的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 24的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO:28,SEQ ID NO:29以及SEQ ID NO:30的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0172]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ IDN0:21或SEQ ID N0:22的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:23或SEQ ID N0:24的多肽序列。
[0173]在本發(fā)明的另一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID NO:21的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:22的輕鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26以及SEQ ID N0:27的多肽序列中的一種或多種。[0174]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:23的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 24的重鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO:28, SEQ ID NO: 29以及SEQ ID N0:30的多肽序列中的一種或多種。
[0175]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID N0:21的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID NO:23的可變重鏈區(qū)；SEQ ID NO:21的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 25;SEQ ID NO: 26;以及 SEQ ID NO: 27);以及 SEQ ID NO: 23 的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:28 ；SEQ ID N0:29;以及 SEQ ID N0:30)。
[0176]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于治療或預(yù)防畏光的嵌合抗CGRP抗體為 Ab3，其包含 SEQ ID NO: 22 和 SEQ ID NO: 24 或可選地由 SEQ ID NO: 22 和 SEQ ID NO: 24組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0177]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab (片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Ab3，F(xiàn)ab片段包括SEQID N0:21的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:23的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQ ID N0:21和/或SEQ ID NO:23的添加、缺失以及變體。
[0178]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Ab3的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab3或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CH0、NS0或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0179]杭體 Ab4
[0180]在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:31)。
[0181]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:32)。
[0182]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQID NO:33)。
[0183]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:34)。
[0184]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ ID N0:31的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:32的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ IDNO:35, SEQ ID N0:36以及SEQ ID N0:37的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQID NO: 33的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 34的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO:38,SEQ ID NO:39以及SEQ ID NO:40的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0185]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ IDN0:31或SEQ ID N0:32的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:33或SEQ ID N0:34的多肽序列。
[0186]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:31的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 32的輕鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36以及SEQ ID N0:37的多肽序列中的一種或多種。
[0187]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:33的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 34的重鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39以及SEQ ID N0:40的多肽序列中的一種或多種。
[0188]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID N0:31的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID NO:33的可變重鏈區(qū)；SEQ ID NO:31的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:35 ；SEQ ID NO:36;以及 SEQ ID NO:37);以及 SEQ ID NO:33 的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:38 ；SEQ ID N0:39;以及 SEQ ID N0:40)。
[0189]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的人源化抗CGRP抗體為Ab4，其包含SEQ ID N0:32和SEQ ID NO:34或可選地由SEQ ID N0:32和SEQ IDNO: 34組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0190]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab (片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Ab4，F(xiàn)ab片段包括SEQ ID N0:31的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:33的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQ IDNO:31和/或SEQ ID NO:33的添加、缺失以及變體。
[0191]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Ab4的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab4或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CH0、NS0或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0192]杭體Ab5
[0193]在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASV⑶RVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID N 0:41)。
[0194]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:42)。
[0195]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:43)。
[0196]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:44)。
[0197]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ ID NO:41的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:42的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ IDNO:45, SEQ ID N0:46以及SEQ ID N0:47的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQID NO:43的可變重鏈序列或SEQ ID N0:44的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO:48,SEQ ID NO:49以及SEQ ID NO:50的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。[0198]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ IDN0:41或SEQ ID NO:42的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:43或SEQ ID NO:44的多肽序列。
[0199]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:41的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:42的輕鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:46以及SEQ ID N0:47的多肽序列中的一種或多種。
[0200]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:43的可變重鏈序列或SEQ ID N0:44的重鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49以及SEQ ID N0:50的多肽序列中的一種或多種。
[0201]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO:41的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID N0:43的可變重鏈區(qū)；SEQ ID N0:41的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:45 ；SEQ ID N0:46;以及 SEQ ID N0:47);以及 SEQ ID NO:43 的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:48 ；SEQ ID N0:49;以及 SEQ ID N0:50)。
[0202]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的嵌合抗CGRP抗體為Ab5，其包含SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44或可選地由SEQ ID NO:42和SEQ IDNO:44組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0203]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab (片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Ab5，F(xiàn)ab片段包括SEQ ID NO:41的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:43的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQ IDNO:41和/或SEQ ID NO:43的添加、缺失以及變體。
[0204]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Ab5的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab5或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CH0、NS0或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0205]杭體 Ab6
[0206]在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:51)。
[0207]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:52)。
[0208]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:53)。
[0209]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:54)。
[0210]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ ID N0:51的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:52的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ IDNO:55, SEQ ID N0:56以及SEQ ID N0:57的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQID NO: 53的可變重鏈序列或`SEQ ID NO: 54的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO:58,SEQ ID NO:59以及SEQ ID NO:60的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0211]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ IDN0:51或SEQ ID N0:52的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:53或SEQ ID N0:54的多肽序列。
[0212]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:51的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 52的輕鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56以及SEQ ID N0:57的多肽序列中的一種或多種。
[0213]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:53的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 54的重鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59以及SEQ ID N0:60的多肽序列中的一種或多種。
[0214]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID N0:51的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID NO:53的可變重鏈區(qū)；SEQ ID NO:51的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 55;SEQ ID NO: 56;以及 SEQ ID NO: 57);以及 SEQ ID NO: 53 的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 58 ；SEQ ID NO: 59 ;以及 SEQ ID NO:60)。
[0215]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的人源化抗CGRP抗體為Ab6，其包含SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:54或可選地由SEQ ID NO:52和SEQ IDNO: 54組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0216]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab (片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Ab6，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段包括SEQ ID NO: 51的可變輕鏈序列和SEQID NO: 53的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQ ID NO: 51和/或SEQ ID NO: 53的添加、缺失以及變體。
[0217]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Ab6的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab6或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CH0、NS0或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0218]杭體Ab7
[0219]在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSIODCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID N0:61)。
[0220]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTCDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:62)。
[0221]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的嵌合抗體:QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIffGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:63)。
[0222]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的嵌合抗體:QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:64)。
[0223]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ ID N0:61的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:62的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ IDNO:65, SEQ ID N0:66以及SEQ ID N0:67的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQID NO:63的可變重鏈序列或SEQ ID N0:64的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO:68,SEQ ID NO:69以及SEQ ID NO:70的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0224]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:61或SEQ ID NO:62的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:63或SEQ ID NO:64的多肽序列。
[0225]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:61的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:62的輕鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO:66以及SEQ ID N0:67的多肽序列中的一種或多種。
[0226]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或 可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:63的可變重鏈序列或SEQ ID N0:64的重鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69以及SEQ ID N0:70的多肽序列中的一種或多種。
[0227]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO:61的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID NO:63的可變重鏈區(qū)；SEQ ID NO:61的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:65 ；SEQ ID N0:66;以及SEQ ID N0:67);以及SEQ IDN0:63的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:68 ;SEQ ID N0:69;以及SEQ ID N0:70)。
[0228]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的嵌合抗CGRP抗體為Ab7，其包含SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:64或可選地由SEQ ID NO:62和SEQ IDNO:64組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0229]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab (片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Ab7，F(xiàn)ab片段包括SEQ ID N0:61的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:63的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQ IDN0:61和/或SEQ ID NO:63的添加、缺失以及變體。[0230]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Ab7的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗CGRP抗體如Ab7或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CH0、NSO或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0231]杭體 Ab8
[0232]在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASV⑶RVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTCDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID N0:71)。
[0233]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:72)。
[0234]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQffVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:73)。 [0235]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:74)。
[0236]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ ID N0:71的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:72的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ IDNO:75, SEQ ID N0:76以及SEQ ID N0:77的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQID NO: 73的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 74的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO:78,SEQ ID NO:79以及SEQ ID N0:80的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0237]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ IDN0:71或SEQ ID N0:72的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:73或SEQ ID N0:74的多肽序列。
[0238]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:71的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 72的輕鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76以及SEQ ID N0:77的多肽序列中的一種或多種。
[0239]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:73的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 74的重鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79以及SEQ ID N0:80的多肽序列中的一種或多種。
[0240]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO:71的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID NO:73的可變重鏈區(qū)；SEQ ID NO:71的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:75 ；SEQ ID N0:76;以及SEQ ID N0:77);以及SEQ IDN0:73的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:78 ；SEQ ID N0:79;以及SEQ ID N0:80)。
[0241]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的人源化抗CGRP抗體為Ab8，其包含SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:74或可選地由SEQ ID NO:72和SEQ IDNO: 74組成，并且具有 至少一種本文所示的生物活性。
[0242]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab (片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Ab8，F(xiàn)ab片段包括SEQ ID N0:71的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:73的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQ IDN0:71和/或SEQ ID NO:73的添加、缺失以及變體。
[0243]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Ab8的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Ab8或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CH0、NS0或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0244]杭體 Ab9
[0245]在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID N0:81)。
[0246]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:82)。
[0247]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEffIGVIGSDGKTYYATffAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSS(SEQID NO:83)。
[0248]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:84)。
[0249]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ ID N0:81的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:82的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ IDNO:85, SEQ ID N0:86以及SEQ ID NO:87的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQID NO:83的可變重鏈序列或SEQ ID N0:84的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO:88,SEQ ID NO:89以及SEQ ID N0:90的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0250]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ IDN0:81或SEQ ID NO:82的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:83或SEQ ID N0:84的多肽序列。
[0251]在本發(fā)明的另一個`實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID NO:81的可變輕鏈序列或SEQ ID NO:82的輕鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:86以及SEQ ID N0:87的多肽序列中的一種或多種。
[0252]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:83的可變重鏈序列或SEQ ID N0:84的重鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:89以及SEQ ID N0:90的多肽序列中的一種或多種。
[0253]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO:81的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID NO:83的可變重鏈區(qū)；SEQ ID NO:81的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:85 ；SEQ ID N0:86;以及SEQ ID N0:87);以及SEQ IDN0:83的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:88 ;SEQ ID N0:89;以及SEQ ID N0:90)。
[0254]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的嵌合抗CGRP抗體為Ab9，其包含SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:84或可選地由SEQ ID NO:82和SEQ IDNO:84組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0255]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab (片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Ab9，F(xiàn)ab片段包括SEQ ID N0:81的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:83的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQ IDNO:81和/或SEQ ID NO:83的添加、缺失以及變體。
[0256]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Ab9的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗CGRP抗體如Ab9或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CH0、NSO或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。 [0257]杭體 AblO
[0258]在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASV⑶RVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID N0:91)。
[0259]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:92)。
[0260]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQffVRQAPGKGLEffVGVIGSDGKTYYATffAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:93)。
[0261]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:94)。
[0262]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ ID N0:91的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:92的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ IDNO:95, SEQ ID N0:96以及SEQ ID N0:97的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQID NO:93的可變重鏈序列或SEQ ID N0:94的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO:98, SEQ ID NO:99以及SEQ ID NO: 100的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0263]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ IDN0:91或SEQ ID NO:92的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:93或SEQ ID N0:94的多肽序列。
[0264]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:91的可變輕鏈序列或SEQ ID N0:92的輕鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96以及SEQ ID N0:97的多肽序列中的一種或多種。
[0265]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:93的可變重鏈序列或SEQ ID N0:94的重鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:99以及SEQ ID NO: 100的多肽序列中的一種或多種。
[0266]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID N0:91的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID N0:93的可變重鏈區(qū)；SEQ ID N0:91的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:95 ；SEQ ID N0:96;以及 SEQ ID N0:97);以及 SEQ ID NO:93 的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO:98 ；SEQ ID N0:99;以及 SEQ ID NO: 100)。
[0267]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的人源化抗CGRP抗體為 Ab 10，其包含 SEQ ID NO:92 和 SEQ ID NO:94 或可選地由 SEQ ID NO:92 和 SEQ IDNO:94組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0268]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab (片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Ab 10，F(xiàn)ab片段包括SEQ ID NO:91的可變輕鏈序列和SEQ ID NO:93的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQ IDN0:91和/或SEQ ID N0:93的添加、缺失以及變體。
[0269]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過AblO的 酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如AblO或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CHO、NSO或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0270]杭體 Abll
[0271]在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:101)。
[0272]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的嵌合抗體:QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:102)。
[0273]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQID NO:103)。 [0274]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的嵌合抗體:QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:104)。
[0275]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ IDNO: 101的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 102的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO: 105, SEQ ID NO: 106以及SEQ ID NO: 107的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQID NO: 103的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 104的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ ID NO: 108,SEQ ID NO: 109以及SEQID NO: 110的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0276]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ IDN0:101或SEQ ID N0:102的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:103或SEQ ID N0:104的多肽序列。
[0277]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:101的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 102的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ ID NO: 105、SEQ IDNO: 106以及SEQ ID NO: 107的多肽序列中的一種或多種。
[0278]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:103的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 104的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ ID NO: 108、SEQ IDNO: 109以及SEQ ID NO: 110的多肽序列中的一種或多種。[0279]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID N0:101的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID NO: 103的可變重鏈區(qū)；SEQ ID NO: 101的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 105 ；SEQ ID NO: 106;以及 SEQ ID NO: 107);以及 SEQ ID NO: 103 的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 108 ；SEQ ID NO: 109;以及 SEQ ID NO: 110)。
[0280]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的嵌合抗CGRP抗體為 Abll，其包含 SEQ ID NO: 102 和 SEQ ID NO: 104 或可選地由 SEQ ID NO: 102 和 SEQID NO: 104組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0281]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab (片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Abll，F(xiàn)ab片段包括SEQ ID NO: 101的可變輕鏈序列和SEQ ID NO: 103的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQID NO: 101和/或SEQ ID NO: 103的添加、缺失以及變體。
[0282]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Abll的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體如Abll或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CHO、NSO或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0283]杭體 Abl2
[0284]在一個實施方案 中，本發(fā)明包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASV⑶RVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:111)。
[0285]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:112)。
[0286]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQffVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:113)。
[0287]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:114)。
[0288]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ IDNO: 111的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 112的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO: 115, SEQ ID NO: 116以及SEQ ID NO: 117的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQ ID NO: 113的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 114的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ ID NO: 118,SEQ ID NO: 119以及SEQ ID NO: 120的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0289]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ IDNO: 111或SEQ ID NO: 112的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO: 113或SEQ ID NO: 114的多肽序列。
[0290]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:111的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 112的輕鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO: 115、SEQ IDNO: 116以及SEQ ID N O: 117的多肽序列中的一種或多種。
[0291]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:113的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 114的重鏈序列的互補決定區(qū)(CDR或高變區(qū))的SEQ ID NO: 118、SEQ IDNO: 119以及SEQ ID NO: 120的多肽序列中的一種或多種。
[0292]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID N0:111的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID NO: 113的可變重鏈區(qū)；SEQ ID NO: 111的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 115 ；SEQ ID NO: 116;以及 SEQ ID NO: 117);以及 SEQ ID NO: 113 的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 118 ；SEQ ID NO:119;以及 SEQ ID NO: 120)。
[0293]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的人源化抗CGRP抗體為 Abl2，其包含 SEQ ID NO: 112 和 SEQ ID NO: 114 或可選地由 SEQ ID NO: 112 和 SEQID NO: 114組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0294]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab (片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Abl2，F(xiàn)ab片段包括SEQ ID NO: 111的可變輕鏈序列和SEQ ID NO: 113的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQID NO: 111和/或SEQ ID NO: 113的添加、缺失以及變體。
[0295]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Abl2的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗CGRP抗體如Abl2或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CH0、NSO或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0296]杭體Abl3[0297]在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的嵌合抗體:AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKR(SEQ ID NO:121)。
[0298]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的嵌合抗體:AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:122)。
[0299]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的嵌合抗體:QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGIIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLffGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:123)。
[0300]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的嵌合抗體:QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGCIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:124)。
[0301]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ IDNO: 121的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 122的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO: 125, SEQ ID NO: 126以及SEQ ID NO: 127的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQ ID NO: 123的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 124的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ ID NO: 128,SEQ ID NO: 129以及SEQID NO: 130的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0302]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ IDN0:121或SEQ ID N0:122的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:123或SEQ ID N0:124的多肽序列。
[0303]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:121的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 122的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ ID NO: 125, SEQ IDNO: 126以及SEQ ID NO: 127的多肽序列中的一種或多種。
[0304]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:123的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 124的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ ID NO: 128、SEQ IDNO: 129以及SEQ ID NO: 130的多肽序列中的一種或多種。
[0305]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO: 121的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID NO: 123的可變重鏈區(qū)；SEQ ID NO: 121的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 125 ；SEQ ID NO: 126;以及SEQ ID NO: 127);以及SEQ ID NO: 123的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 128 ；SEQ ID N0:129;以及SEQ IDNO:130)。[0306]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的嵌合抗CGRP抗體為 Abl3，其包含 SEQ ID NO: 122 和 SEQ ID NO: 124 或可選地由 SEQ ID NO: 122 和 SEQID NO: 124組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0307]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab(片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Abl3，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段包括SEQ ID NO: 121的可變輕鏈序列和SEQID NO: 123的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQ ID NO: 121和/或SEQ ID NO: 123的添加、缺失以及變體。
[0308]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Abl3的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗CGRP抗體如Abl3或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CH0、NSO或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0309]杭體 Ab 14
[0310]在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:131)。
[0311]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的輕鏈序列的人源化抗體:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:132)。
[0312]本發(fā)明進(jìn)一步包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的可變重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQffVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:133)。
[0313]本發(fā)明還包括用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性并且具有包含下文所示序列的重鏈序列的人源化抗體:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:134)。
[0314]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體，其包含對應(yīng)于SEQ IDNO: 131的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 132的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQID NO: 135, SEQ ID NO: 136以及SEQ ID NO: 137的多肽序列中的一種或多種，和/或?qū)?yīng)于SEQ ID NO: 133的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 134的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ ID NO: 138,SEQ ID NO: 139以及SEQ ID NO: 140的多肽序列中的一種或多種，或這些多肽序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體或其片段包含以下或可選地由以下組成:一個或多個上文所示的CDR、可變重鏈和可變輕鏈序列以及重鏈和輕鏈序列(包括它們?nèi)?的組合。
[0315]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID N0:131或SEQ ID NO: 132的多肽序列。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本發(fā)明的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:SEQ ID NO: 133 或 SEQ ID NO: 134 的多肽序列。
[0316]在本發(fā)明的另`一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:131的可變輕鏈序列或SEQ ID NO: 132的輕鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ ID NO: 135、SEQ IDNO: 136以及SEQ ID NO: 137的多肽序列中的一種或多種。
[0317]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:對應(yīng)于SEQ ID N0:133的可變重鏈序列或SEQ ID NO: 134的重鏈序列的互補決定區(qū)(⑶R或高變區(qū))的SEQ ID NO: 138、SEQ IDNO: 139以及SEQ ID NO: 140的多肽序列中的一種或多種。
[0318]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的包括一種或多種本文所述的抗體片段的抗體片段。在本發(fā)明的一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體的片段包含以下或可選地由以下組成:一個、兩個、三個或更多個(包括全部)下列抗體片段:SEQ ID NO: 131的可變輕鏈區(qū)；SEQ ID NO: 133的可變重鏈區(qū)；SEQ ID NO: 131的可變輕鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 135 ；SEQ ID NO: 136;以及 SEQ ID NO: 137);以及 SEQ ID NO: 133 的可變重鏈區(qū)的互補決定區(qū)(SEQ ID NO: 138 ；SEQ ID NO:139;以及 SEQ ID NO: 140)。
[0319]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的人源化抗CGRP抗體為 Abl4，其包含 SEQ ID NO: 132 和 SEQ ID NO: 134 或可選地由 SEQ ID NO: 132 和 SEQID NO: 134組成，并且具有至少一種本文所示的生物活性。
[0320]在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段包含以下或可選地由以下組成:對CGRP具有結(jié)合特異性的Fab(片段抗原結(jié)合)片段。關(guān)于抗體Abl4，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段包括SEQ ID NO: 131的可變輕鏈序列和SEQID NO: 133的可變重鏈序列。本發(fā)明的這個實施方案進(jìn)一步涵蓋在保持對CGRP的結(jié)合特異性的同時所述Fab中SEQ ID NO: 131和/或SEQ ID NO: 133的添加、缺失以及變體。
[0321]在本文(下文)所述的本發(fā)明的一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的Fab片段可通過Abl4的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而產(chǎn)生。在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗CGRP抗體如Ab 14或其Fab片段可通過在哺乳動物細(xì)胞如CH0、NSO或HEK293細(xì)胞，真菌、昆蟲或微生物系統(tǒng)如酵母細(xì)胞(例如二倍體酵母如二倍體畢赤酵母屬)和其他酵母菌株中表達(dá)而產(chǎn)生。合適的畢赤酵母屬物種包括但不限于巴斯德畢赤酵母。
[0322]在另一個實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗體片段可以一種或多種下列非限制性形式存在:Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv以及單鏈Fv抗體形式。在一個優(yōu)選實施方案中，本文所述的用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗CGRP抗體進(jìn)一步包括包含下文所示序列的K恒定輕鏈序列:
[0323]VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:283)。
[0324]在另一個優(yōu)選實施方案中，用于潛在治療或預(yù)防畏光的本文所述的抗CGRP抗體進(jìn)一步包括包含下文所示序列的Y-1恒定重鏈多肽序列:
[0325]ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:284)。
[0326]在另一個實施方案中，本發(fā)明涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的分離的抗CGRP抗體，其包含選自以下的 Vh 多肽序列:SEQ ID N0:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，或其變體；并且進(jìn)一步包含選自以下的Vl多肽序列:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131，或其變體，其中所述￥11或￥1多肽中的一個或多個框架殘基(FR殘基)已經(jīng)被另一個氨基酸殘基取代，產(chǎn)生用于潛在治療或預(yù)防畏光的特異性結(jié)合CGRP的抗CGRP抗體。本發(fā)明涵蓋這些抗體的人源化和嵌合形式。用于潛在治療或預(yù)防畏光的此類嵌合抗體可包括衍生自IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgGlO, IgGlU IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18 或 IgG19 恒定區(qū)的 Fe。
[0327]在本發(fā)明的一個實施方案中，抗體或Vh或\多肽源自或選自在本文所述人源化過程開始之前的一種或多種兔B細(xì)胞群體。
[0328]在本發(fā)明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體和其片段不具有對CGRP-R的結(jié)合特異性。在本發(fā)明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體和其片段抑制CGRP與CGRP-R的締合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，抗CGRP抗體和其片段抑制CGRP與CGRP-R和/或另外的蛋白質(zhì)和/或其多聚體的締合，和/或拮抗其生物效應(yīng)。[0329]如本文中所述，抗體和其片段可被翻譯后修飾以添加效應(yīng)子部分如化學(xué)連接子、可檢測部分如例如熒光染料、酶、底物、生物發(fā)光材料、放射性材料以及化學(xué)發(fā)光部分，或功能性部分如例如鏈霉親和素、親和素、生物素、細(xì)胞毒素、細(xì)胞毒性劑以及放射性材料。
[0330]抗體或其片段也可以被化學(xué)修飾以提供另外的優(yōu)點，例如多肽的溶解性、穩(wěn)定性以及循環(huán)時間(體內(nèi)半衰期)增加，或免疫原性降低(參見美國專利N0.4，179，337)。用于衍生化的化學(xué)部分可選自水溶性聚合物，例如聚乙二醇、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇等。抗體和其片段可在分子內(nèi)的任意位置或在分子內(nèi)的預(yù)定位置被修飾并且可包括一個、兩個、三個或更多個連接的化學(xué)部分。
[0331]聚合物可具有任何分子量，并且可為分枝或未分枝的。對于聚乙二醇來說，為便于處理和制造，優(yōu)選的分子量介于約IkDa與約IOOkDa之間(術(shù)語“約”指示在制備聚乙二醇時，一些分子的重量將比所述分子量更大或略小)。取決于所需治療概況(例如，所需持續(xù)釋放的持續(xù)時間、對生物活性的影響(如果存在的話)、處理簡易性、聚乙二醇與治療蛋白或類似物的抗原性和其他已知作用的程度或缺乏)，可使用其他大小。例如，聚乙二醇可具有約 200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10，000、10，500、11，000、11，500、12，000、12，500、13，000、13，500、14，000、14，500、15，000、15，500、16，000、16，500、17，000、17，500、18，000、18，500、19，000、19，500、20，000、25，000、30，000、35，000,40,000,50,000,55,000,60,000,65,000,70,000,75, 000,80, 000,85, 000、90，000,95, 000或100，OOOkDa的平均分子量。分枝聚乙二醇描述于例如美國專利N0.5, 643, 575 ；Morpurgo 等人,Appl.Biochem.Biotechnol.56:59-72(1996) ；Vorobjev等人,Nucleosides NucIeotides 18:2745-2750 (1999)；以及 Caliceti 等人,Bioconjug.Chem.10:638-646(1999)中，其各自的公開內(nèi)容以引用的方式并入本文中。
[0332]存在多種為本領(lǐng)域技術(shù)人員可用的連接方法。參見例如EP0401384，其以引用的方式并入本文中(將PEG偶聯(lián)至G-CSF)。也參見Malik等人，Exp.Hematol.20:1028-1035 (1992)(報道使用三氟代乙烷磺酰氯進(jìn)行GM-CSF的聚乙二醇化)。例如，聚乙二醇可經(jīng)由反應(yīng)性基團(tuán)(例如游離氨基或羧基)通過氨基酸殘基共價結(jié)合。反應(yīng)性基團(tuán)為可結(jié)合至活化的聚乙二醇分子的那些基團(tuán)。具有游離氨基的氨基酸殘基可包括賴氨酸殘基和N端氨基酸殘基；具有游離羧基的氨基酸殘基可包括天冬氨酸殘基、谷氨酸殘基以及C端氨基酸殘基。巰基也可以用作反應(yīng)性基團(tuán)以連接聚乙二醇分子。對于治療目的優(yōu)選的是在氨基處連接，例如在N端或賴氨酸基團(tuán)處連接。
[0333]如上文所示，聚乙二醇可經(jīng)由鍵聯(lián)至多種氨基酸殘基中的任一個而連接至蛋白質(zhì)。例如，聚乙二醇可經(jīng)由與賴氨酸、組氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸殘基的共價鍵而鍵聯(lián)至多肽?？墒褂靡环N或多種反應(yīng)化學(xué)來連接聚乙二醇與特定氨基酸殘基(例如，賴氨酸、組氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸)或多于一種類型的氨基酸殘基(例如，賴氨酸、組氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸以及其組合)。
[0334]可選地，抗體或其片段可經(jīng)由與白蛋白(包括但不限于重組人類血清白蛋白或其片段或變體(參見例如1999年3月2日頒予的美國專利N0.5，876，969 ;歐洲專利0413622 ；以及1998年6月16日頒予的美國專利N0.5，766，883，以全文引用的方式并入本文中))或其他循環(huán)血蛋白如轉(zhuǎn)鐵蛋白或鐵蛋白融合而具有增加的體內(nèi)半衰期。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的多肽和/或抗體(包括其片段或變體)與人類血清白蛋白的成熟形式(即，如歐洲專利0322094的圖1和圖2中所示的人類血清白蛋白的氨基酸1_585，該文獻(xiàn)以全文引用的方式并入本文中)融合。本發(fā)明還涵蓋了編碼本發(fā)明的融合蛋白的多核苷酸。
[0335]關(guān)于可檢測部分，另外的示例性酶包括但不限于辣根過氧化物酶、乙酰膽堿酯酶、堿性磷酸酶、β_半乳糖苷酶以及熒光素酶。另外的示例性熒光材料包括但不限于羅丹明(rhodamine)、突光素、異硫氰酸突光素、傘形酮(umbelIiferone)、二氯三嗪胺、藻紅蛋白(phycoerythrin)以及丹磺酰氯(dansyl chloride)。另外的示例性化學(xué)發(fā)光部分包括但不限于魯米諾(Iuminol)。另外的示例性生物發(fā)光材料包括但不限于熒光素和水母發(fā)光蛋白(aequorin)。另外的示例性放射性材料包括但不限于碘125 (125I)、碳14 (14C)、硫35 (35S)、氚(3H)以及磷32 (32P)。
[0336]關(guān)于功能性部分，示例性細(xì)胞毒性劑包括但不限于甲氨蝶呤(methotrexate)、氨基蝶呤(aminopterin)、6_巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧唳、達(dá)卡巴嚷(decarbazine);燒化劑如氣芥(mechlorethamine)、賽替派(thioepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法侖(melphalan)、卡莫司汀(carmustine) (BSNU)、絲裂霉素C (mitomycin C)、洛莫司汀(1mustine) (CCNU)、1-甲基亞硝基脲、環(huán)磷酰胺(cyclothosphamide)、氮芥、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、鏈脲佐菌素(streptozotocin)、絲裂霉素C、順式二氯二氨合鉬(II) (DDP)順鉬以及卡鉬(鉬爾定(paraplatin));蒽環(huán)類包括柔紅霉素(以前的道諾霉素)、阿霉素(亞德里亞霉素)、地托比星(detorubicin)、洋紅霉素(carminomycin)、伊達(dá)比星(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽酉昆(mitoxantrone)以及比生群(bisantrene);抗生素包括更生霉素(放線菌素D)、博萊霉素、卡奇霉素、光神霉素以及安曲霉素(AMC);以及抗有絲分裂劑如長春花生物堿、長春新堿(vincristine)以及長春堿(vinblastine)。其他細(xì)胞毒性劑包括紫杉醇(泰素)、蓖 麻毒素、假單胞菌外毒素(pseudomonas exotoxin)、吉西他濱(gemcitabine)、細(xì)胞松弛素 B(cytochalasin B)、短桿菌肽 D(gramicidin D)、溴化乙錠(ethidium bromide)、依米丁 (emetine)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、秋水仙素(colchicin)、二羥基炭疽菌素二酮、1-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾(propranolol)、嘌呤霉素、丙卡巴肼(procarbazine)、羥基脲、天冬酰胺酶、皮質(zhì)類固醇、米托坦(0，P’-(DDD))、干擾素以及這些細(xì)胞毒性劑的混合物。
[0337]另外的細(xì)胞毒性劑包括但不限于化學(xué)治療劑如卡鉬、順鉬、太平洋紫杉醇、吉西他濱、卡奇霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、絲裂霉素C、放線菌素D、環(huán)磷酰胺、長春新堿以及博萊霉素。來自植物和細(xì)菌的毒性酶如蓖麻毒素、白喉毒素以及假單胞菌毒素可以綴合至人源化或嵌合抗體或其結(jié)合片段，以產(chǎn)生細(xì)胞類型特異性殺傷試劑(Youle等人，Proc.Nat，I Acad.Sc1.USA77:5483 (1980) ;Gilliland 等人，Proc.Nat，I Acad.Sc1.USA77:4539 (1980) ；Krolick 等人，Proc.Nat，I Acad.Sc1.USA77:5419 (1980))。
[0338]其他細(xì)胞毒性劑包括由Goldenberg在美國專利N0.6，653，104中所述的細(xì)胞毒性核糖核酸酶。本發(fā)明的實施方案還涉及放射免疫綴合物，其中使用或不使用復(fù)合物形成劑，使發(fā)射α或β粒子的放射性核素穩(wěn)定地偶聯(lián)至抗體或其結(jié)合片段。此類放射性核素包括 β 發(fā)射體，例如磷-32 (32P)、鈧-47 (47Sc)、銅-67 (67Cu)、鎵-67 (67Ga)、釔-88 (88Y)、釔-90 (90Y)、碘-125 (125I)、碘-131 (131I)、釤-153 (153Sm)、镥-177 (177Lu)、錸-186 (186Re)或錸-188 (188Re);以及 α 發(fā)射體，例如砹-211 (211At)、鉛-212 (212Pb)、鉍-212 (212Bi)或鉍-213 (213Bi)或錒-2 2 5 (225Ac)。
[0339]用于將抗體或其結(jié)合片段結(jié)合至可檢測部分等的方法在本領(lǐng)域是已知的，例如由 Hunter 等人,Naturel44:945 (1962) ；David 等人,Biochemistryl3:1014 (1974)；Pain 等人，J.1mmunol.Meth.40:219 (1981)；以及 Nygren, J.，Histochem.andCytochem.30:407(1982)描述的那些方法。
[0340]本文所述的實施方案進(jìn)一步包括與本文所示的抗體、抗體片段、雙功能抗體、SMIP、駱駝抗體、納米抗體、IgNAR、多肽、可變區(qū)以及⑶R基本上同源的變體和等效物。這些物質(zhì)可包含例如保守性取代突變(即一個或多個氨基酸被類似的氨基酸取代)。例如，保守性取代是指氨基酸被同一通用類別內(nèi)的另一氨基酸取代，例如一個酸性氨基酸被另一酸性氨基酸取代，一個堿性氨基酸被另一堿性氨基酸取代，或一個中性氨基酸被另一中性氨基酸取代。保守性氨基酸取代所預(yù)期的內(nèi)容在本領(lǐng)域眾所周知。
[0341]在另一個實施方案中，本發(fā)明涵蓋與任何一種或多種本文所示的抗體片段、可變區(qū)以及CDR的多肽序列具有至少90%或更大的序列同源性的多肽序列。更優(yōu)選地，本發(fā)明涵蓋與任何一種或多種本文所示的抗體片段、可變區(qū)以及CDR的多肽序列具有至少95%或更大的序列同源性、甚至更優(yōu)選至少98%或更大的序列同源性以及再更優(yōu)選至少99%或更大的序列同源性的多肽序列。用于測定核酸與氨基酸序列之間的同源性的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知。
[0342]在另一個實施方案中，本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋進(jìn)一步具有抗CGRP活性的本文所示抗體片段、可變區(qū)以及CDR的上述多肽同源物。本文例如在下文的段落-中闡述抗CGRP活性的非限制性例子。
[0343]在另一個實施方案中，本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋結(jié)合任何上述序列的抗獨特型抗體的產(chǎn)生和使用。在一個示例性實施方案中，此類抗獨特型抗體可以施用于已接受抗CGRP抗體的受試者以調(diào)節(jié)、降低或中和抗CGRP抗體的作用。此類抗獨特型抗體還可以用于治療特征在于存在抗CGRP抗體的自身免疫疾病。此類抗獨特型抗體的另一個示例性用途為檢測本發(fā)明的抗CGRP抗體，例如監(jiān)測在受試者的血液或其他體液中存在的抗CGRP抗體的水平。
[0344]本發(fā)明還涵蓋用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗CGRP抗體，其包含用于取代本文所述的任何其他多核苷酸序列的本文所述的任何多肽或多核苷酸序列。例如，但不限于此，本發(fā)明涵蓋包含本文所述的任何可變輕鏈和可變重鏈序列的組合的抗體，并且進(jìn)一步涵蓋由本文所述的任何CDR序列取代本文所述的任何其他CDR序列而產(chǎn)生的抗體。
[0345]本發(fā)明的另外的示例性實施方案
[0346]在另一個實施方案中，本發(fā)明涵蓋一種或多種用于潛在治療或預(yù)防畏光的抗人類抗CGRP抗體或其抗體片段，其特異性結(jié)合于在完整人類CGRP多肽或其片段上與選自以下的抗人類CGRP抗體相同或重疊的線性或構(gòu)象表位和/或競爭結(jié)合于在完整人類CGRP多肽或其片段上與選自以下的抗人類CGRP抗體相同或重疊的線性或構(gòu)象表位:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、Abl3 或 Abl4。在一個優(yōu)選實施方案中，抗人類CGRP抗體或其片段特異性結(jié)合于在完整人類CGRP多肽或其片段上與Ab3、Ab6、Abl3或Abl4并且最優(yōu)選Ab3相同的重疊線性或構(gòu)象表位和/或競爭結(jié)合于在完整人類CGRP多肽或其片段上與Ab3、Ab6、Abl3或Abl4并且最優(yōu)選Ab3相同的重疊線性或構(gòu)象表位。[0347]本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案是針對于對CGRP具有結(jié)合特異性并抑制由CGRP與CGRP受體結(jié)合而介導(dǎo)的生物活性、尤其用于治療或預(yù)防畏光的嵌合或人源化抗體和其片段(包括Fab片段)。在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選實施方案中，嵌合或人源化抗CGRP抗體是選自Ab3、Ab6、Abl3 或 Abl4，或更優(yōu)選 Ab3。
[0348]本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案是針對在動物模型中篩選對人類降鈣素基因相關(guān)肽(下文為“CGRP”)具有結(jié)合特異性的抗體和其片段(包括Fab片段)以測定其體內(nèi)作用、尤其是其拮抗CGRP的不良副作用以及治療涉及過量CGRP的病狀的能力、尤其是其治療或預(yù)防畏光(例如，偏頭痛中)的能力的方法。
[0349]本發(fā)明的一個更具體的優(yōu)選實施方案涉及一種評估候選CGRP/CGRP受體抑制劑多肽、例如抗CGRP或抗CGRP抗體或抗體片段的潛在體內(nèi)功效的方法，其包括與在不存在候選抗CGRP抗體或抗體片段的情況下施用了 CGRP的嚙齒動物相比，在施用了 CGRP的嚙齒動物中測定該抗體是否抑制厭光行為。
[0350]本發(fā)明的一個更具體的優(yōu)選實施方案涉及一種評估候選抗CGRP抗體或抗體片段治療特征為CGRP水平增加和畏光的神經(jīng)性病狀的潛在體內(nèi)功效的方法。
[0351]本發(fā)明的另一個更具體的優(yōu)選實施方案涉及一種評估候選抗CGRP抗體或抗體片段治療與畏光相關(guān)的CGRP相關(guān)病癥的潛在體內(nèi)功效的方法，所述CGRP相關(guān)病癥如偏頭痛或慢性偏頭痛(有或無先兆)、或例如以下病狀:體重減輕、癌癥或腫瘤、與癌癥或腫瘤生長相關(guān)的血管生成、與癌癥或腫瘤存活相關(guān)的血管生成、腹瀉、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛性神經(jīng)痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、潮熱、慢性陣發(fā)性半側(cè)顱痛、由于頭或頸中的潛在結(jié)構(gòu)問題而致的繼發(fā)性頭痛、腦神經(jīng)痛、竇性頭痛(例如與竇炎相關(guān))、過敏癥誘發(fā)的頭痛或偏 頭痛、疼痛、無頭痛的偏頭痛、腹型偏頭痛、炎性疼痛、手術(shù)后切口疼痛、復(fù)雜區(qū)域性疼痛綜合征、癌癥疼痛、原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性骨癌疼痛、骨折疼痛、慢性疼痛、骨質(zhì)疏松性骨折疼痛、由灼傷產(chǎn)生的疼痛、骨質(zhì)疏松癥、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)疼痛、腹痛、與鐮狀細(xì)胞危象相關(guān)的疼痛和其他傷害性疼痛，以及肝細(xì)胞癌、乳腺癌、肝硬化、經(jīng)痛、神經(jīng)源性疼痛、神經(jīng)性疼痛、傷害性疼痛、三叉神經(jīng)痛、帶狀皰疹后神經(jīng)痛、幻肢痛、纖維肌痛、經(jīng)痛、卵巢痛、反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)不良、神經(jīng)源性疼痛、骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疼痛、下背痛、糖尿病性神經(jīng)病變、坐骨神經(jīng)痛，或與以下相關(guān)的疼痛或內(nèi)臟疼痛:胃-食管反流、消化不良、腸易激綜合征、激惹性結(jié)腸、痙攣性結(jié)腸、粘液性結(jié)腸炎、炎癥性腸病、克羅恩病(Crohn’s disease),回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、腎絞痛、痛經(jīng)、膀胱炎、月經(jīng)期、分娩、更年期、前列腺炎、胰腺炎、腎絞痛、痛經(jīng)、膀胱炎(包括間質(zhì)性膀胱炎(IC))、與腸梗阻相關(guān)的手術(shù)、憩室炎、腹膜炎、心包炎、肝炎、目尾炎、結(jié)腸炎、膽囊炎、子宮內(nèi)膜異位、慢性和/或急性胰腺炎、心肌梗塞、腎臟疼痛、胸膜疼痛、前列腺炎、骨盆痛、器官創(chuàng)傷、慢性傷害性疼痛、慢性神經(jīng)性疼痛、慢性炎性疼痛、纖維肌痛、爆發(fā)性疼痛以及持續(xù)性疼痛。本發(fā)明的另一個優(yōu)選的實施方案涉及一種基于候選抗CGRP抗體或抗體片段在下文詳細(xì)描述的厭光行為嚙齒動物模型中的作用測定所述抗體或抗體片段在人類中的合適的治療劑量或給藥方式以治療選自本文鑒定的那些畏光相關(guān)病狀的方法。畏光的常見原因包括偏頭痛、白內(nèi)障或嚴(yán)重的眼科疾病如葡萄膜炎或角膜擦傷。與畏光相關(guān)的病癥的更詳盡列表包括眼睛相關(guān)原因如色盲、無虹膜、抗膽堿能藥物可能通過麻痹虹膜括約肌而引起的畏光、無晶狀體(眼睛不存在晶狀體)、牛眼(角膜與虹膜之間的異常窄角)、白內(nèi)障、視錐細(xì)胞營養(yǎng)不良、先天性眼睛異常、病毒性結(jié)膜炎(“紅眼病”)、角膜擦傷、角膜營養(yǎng)不良、角膜潰瘍、角膜上皮破壞(例如由角膜異物或角膜炎引起)、晶狀體異位、眼內(nèi)炎、由疾病、損傷或感染引起的眼外傷如瞼板腺囊腫、鞏膜外層炎、青光目艮、圓錐角膜、或視神經(jīng)發(fā)育不良、水眼、或先天性青光眼、虹膜炎、視神經(jīng)炎、色素播散綜合征、瞳孔擴張(自然或化學(xué)誘導(dǎo))、視網(wǎng)膜脫離、角膜或鞏膜的疤痕以及葡萄膜炎。另外，畏光具有神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)或泌尿道原因，包括:自閉癥譜系障礙、Chiari畸形、誦讀困難、腦炎(包括肌痛性腦脊髓炎，也被稱為慢性疲勞綜合征)、腦膜炎、蛛網(wǎng)膜下腔出血、后顱窩腫瘤，以及其他原因如強直性脊柱炎、白化病、核黃素缺乏癥、苯二氮萆類(苯二氮萆類的長期使用
或戒斷)、化學(xué)療法、基孔肯雅病、胱氨酸癥、埃勒斯-當(dāng)洛綜合征、宿醉、流感、傳染性單核細(xì)胞增多癥、鎂缺乏、汞中毒、偏頭痛、狂犬病以及II型酪氨酸血癥(也被稱為“里奇納-漢哈特綜合征”)。另外，已知在抑郁癥、雙相情感障礙以及廣場恐怖癥中畏光程度升高。
[0352]本發(fā)明的此外另一個優(yōu)選的實施方案涉及基于嚙齒動物CGRP動物模型中的結(jié)果評估候選抗CGRP抗體或抗體片段在人類中的合適的治療劑量或給藥方式的方法。
[0353]本發(fā)明的其他優(yōu)選的實施方案是針對于用于治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的特異性抗體和其片段、特別是具有所需表位特異性、高親和力或親合力和/或功能特性的抗體的篩選測定法和治療用途。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的抗體的測定法和用途，所述抗體包含本文所述的VH、Vl以及CDR多肽的序列，以及編碼其的多核苷酸。本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案是針對能夠結(jié)合至CGRP和/或抑制由CGRP與CGRP受體(“CGRP-R”)結(jié)合而介導(dǎo)的生物活性的嵌合或人源化抗體和其片段(包括Fab片段)。
[0354]在本發(fā)明的另一個實施方案中涵蓋一種降低、治療或預(yù)防與CGRP相關(guān)的疾病或病癥的方法，該方法通過影響經(jīng)由CGRP介導(dǎo)的那些生物活性，尤其是抑制或預(yù)防畏光，從而避免經(jīng)由CGRP與CGRP-R的結(jié)合而介導(dǎo)的不良生物活性。在一個實施方案中，該與畏光相關(guān)的疾病或病癥為偏頭痛、頭痛、疼痛、或與畏光相關(guān)的前述其他病狀。本文提供與CGRP相關(guān)的疾病和病癥的另一個非限制性列表。
[0355]本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案涵蓋Fab多肽序列在患者中用于治療偏頭痛和頭痛以及尤其用于治療或預(yù)防畏光的用途。本公開中他處提供可使用Fab多肽序列治療的偏頭痛和頭痛的非限制性類型。
[0356]在本發(fā)明的另一個實施方案中，用于治療或預(yù)防畏光的抗人類CGRP抗體為特異性結(jié)合于在完整CGRP多肽或其片段上由Ab3、Ab6、Abl3或Ab 14特異性結(jié)合的相同的重疊線性或構(gòu)象表位的抗體，如使用橫跨天然人類CGRP多肽的全長的重疊線性肽片段通過表位定位所確定。
[0357]本發(fā)明還涉及一種用于治療或預(yù)防畏光的抗CGRP抗體，其與和本文公開的抗體或抗體片段相同的CGRP表位結(jié)合和/或與抗CGRP抗體競爭結(jié)合于CGRP，包括但不限于選自 Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、Abl3 或 Abl4、優(yōu)選地Ab6、AblO、Abl2或Ab3的抗CGRP抗體。如所述，畏光的常見原因包括偏頭痛、白內(nèi)障或嚴(yán)重的眼科疾病如葡萄膜炎或角膜擦傷。與畏光相關(guān)的病癥的更詳盡列表包括眼睛相關(guān)原因如色盲、無虹膜、抗膽堿能藥物可能通過麻痹虹膜括約肌而引起的畏光、無晶狀體(眼睛不存在晶狀體)、牛眼(角膜與虹膜之間的異常窄角)、白內(nèi)障、視錐細(xì)胞營養(yǎng)不良、先天性眼睛異常、病毒性結(jié)膜炎(“紅眼病”)、角膜擦傷、角膜營養(yǎng)不良、角膜潰瘍、角膜上皮破壞(例如由角膜異物或角膜炎引起)、晶狀體異位、眼內(nèi)炎、由疾病、損傷或感染引起的眼外傷如瞼板腺囊腫、鞏膜外層炎、青光眼、圓錐角膜、或視神經(jīng)發(fā)育不良、水眼、或先天性青光眼、虹膜炎、視神經(jīng)炎、色素播散綜合征、瞳孔擴張(自然或化學(xué)誘導(dǎo))、視網(wǎng)膜脫離、角膜或鞏膜的疤痕以及葡萄膜炎。
[0358]另外，畏光具有神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)或泌尿道原因，包括:自閉癥譜系障礙、Chiari畸形、誦讀困難、腦炎(包括肌痛性腦脊髓炎，也被稱為慢性疲勞綜合征)、腦膜炎、蛛網(wǎng)膜下腔出血、后顱窩腫瘤，以及其他原因如強直性脊柱炎、白化病、核黃素缺乏癥、苯二氮苯類(苯二氮革類的長期使用或戒斷)、化學(xué)療法、基孔肯雅病、胱氨酸癥、埃勒斯-當(dāng)洛綜合征、宿醉、流感、傳染性單核細(xì)胞增多癥、鎂缺乏、汞中毒、偏頭痛、狂犬病以及II型酪氨酸血癥(也被稱為“里奇納-漢哈特綜合征”)。另外，已知在抑郁癥、雙相情感障礙以及廣場恐怖癥中畏光程度升高。
[0359]在另一個實施方案中，本發(fā)明還涉及一種用于治療或預(yù)防畏光的分離的抗CGRP抗體或抗體片段，其包含一個或多個在選自以下的Vh多肽序列中所含的⑶R:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，或其變體，和/或一個或多個在選自以下的\多肽序列中所含的 CDR:1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121 或 131，或其變體。 [0360]在本發(fā)明的一個實施方案中，在前面兩個段落中所討論的用于治療或預(yù)防畏光的抗人類CGRP抗體在可變輕鏈和可變重鏈區(qū)中各包含至少2個互補決定區(qū)(⑶R)，其與選自以下的抗人類 CGRP 抗體中所含的 CDR 相同:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、Abl3 或 Abl4。
[0361]在一個優(yōu)選的實施方案中，用于治療或預(yù)防畏光的上文討論的抗人類CGRP抗體在可變輕鏈和可變重鏈區(qū)中各包含至少2個互補決定區(qū)(CDR)，其與Ab3或Ab6中所含的CDR相同。在另一個實施方案中，上文討論的抗人類CGRP抗體的所有CDR都與選自以下的抗人類 CGRP 抗體中所含的 CDR 相同:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Ab 11、Ab 12、Ab 13或Ab 14。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，上文討論的抗人類CGRP抗體的所有CDR都與選自Ab3、AblO、Abl2或Ab6的抗人類CGRP抗體中所含的CDR相同。
[0362]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋用于治療或預(yù)防畏光的上文討論的一種或多種抗人類CGRP抗體，其為未糖基化的或最小程度地被糖基化，例如，缺乏N-糖基化并包含一些O-糖基化，例如少許一個或多個甘露糖殘基；例如，其包含已被修飾以改變效應(yīng)功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化的Fe區(qū)；其為人類抗體、人源化抗體、單鏈抗體或嵌合抗體；以及其為源自兔(親本)抗人類CGRP抗體的人源化抗體。
[0363]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋一種或多種用于治療或預(yù)防畏光的抗人類CGRP抗體，其中所述抗體的可變輕鏈區(qū)和可變重鏈區(qū)中的框架區(qū)(FR)分別為未被修飾或已通過用親本兔抗體的相應(yīng)FR殘基取代可變輕鏈或重鏈區(qū)中的一個或多個人類FR殘基而被修飾的人類FR，并且其中所述人類FR已經(jīng)來源于人類可變重鏈和輕鏈抗體序列，所述人類可變重鏈和輕鏈抗體序列已基于其相對于文庫中所含的其他人類生殖系抗體序列與相應(yīng)的兔可變重鏈或輕鏈區(qū)的高同源性水平而從人類生殖系抗體序列文庫中選出。
[0364]在本發(fā)明的一個實施方案中，用于治療或預(yù)防畏光的抗人類CGRP抗體或片段特異性結(jié)合于表達(dá)CGRP的人類細(xì)胞和/或結(jié)合于體內(nèi)循環(huán)的可溶性CGRP分子，包括在與表達(dá)CGRP的細(xì)胞相關(guān)的疾病患者中于人類細(xì)胞上表達(dá)或通過人類細(xì)胞表達(dá)的CGRP。[0365]在另一個實施方案中，該疾病是選自與一種或多種下列疾病相關(guān)的畏光或厭光:偏頭痛(有或無先兆)、月經(jīng)期頭痛、月經(jīng)期偏頭痛、更年期偏頭痛或另一種激素相關(guān)性偏頭痛、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛性神經(jīng)痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、與潮熱相關(guān)的偏頭痛、慢性陣發(fā)性半側(cè)顱痛、由于頭或頸中的潛在結(jié)構(gòu)問題而致的繼發(fā)性頭痛、腦神經(jīng)痛、竇性頭痛(例如與竇炎相關(guān))、過敏癥誘發(fā)的頭痛或偏頭痛、無頭痛的偏頭痛以及腹型偏頭痛。
[0366]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋直接或間接連接至可檢測標(biāo)記或治療劑的用于治療或預(yù)防畏光的抗人類CGRP抗體或片段。
[0367]本發(fā)明還涵蓋產(chǎn)生如上文所示的用于治療或預(yù)防畏光的抗人類CGRP抗體或抗體片段的表達(dá)的一種或多種核酸序列，包括包含酵母或人類偏愛密碼子或可選地由酵母或人類偏愛密碼子組成的核酸序列。本發(fā)明還涵蓋包含所述核酸序列的載體(包括質(zhì)?；蛑亟M病毒載體)。本發(fā)明還涵蓋表達(dá)至少一種上文所示抗體的宿主細(xì)胞或重組宿主細(xì)胞，包括哺乳動物、酵母、細(xì)菌以及昆蟲細(xì)胞。在一個優(yōu)選實施方案中，宿主細(xì)胞為酵母細(xì)胞。在另一個優(yōu)選實施方案中，酵母細(xì)胞為二倍體酵母細(xì)胞。在一個更優(yōu)選實施方案中，酵母細(xì)胞為畢赤酵母。
[0368]本發(fā)明還涵蓋一種治療方法，其包括向患有與表達(dá)CGRP的細(xì)胞相關(guān)的疾病或病狀的患者施用治療有效量的至少一種用于治療或預(yù)防畏光的本文所述的抗人類CGRP抗體或片段。本發(fā)明還涵蓋該治療方法可包括施用兩種或更多種抗CGRP抗體或其片段并公開于本文中。如果向患者施用多于一種的抗體，則多種抗體可同時或并行施用，或其施用可交錯進(jìn)行?？芍委煹募膊〕尸F(xiàn)于上文和本文他處所示的非限制性列表中。在一個優(yōu)選實施方案中，與畏光相關(guān)的疾病選自偏頭痛、頭痛、疼痛、腹瀉、癌癥疼痛或神經(jīng)性疼痛。在另一個實施方案中，治療進(jìn)一步包括施用選自化學(xué)療法、放射療法、細(xì)胞因子施用或基因療法的另一種治療劑或方式。
[0369]在本發(fā)明的一個非限制性實施方案中，另一種治療劑或方式包括阿片類、止痛劑如NSAID、泰素(紫杉醇)或`其衍生物、鉬化合物如卡鉬或順鉬、蒽環(huán)類如阿霉素、烷化劑如環(huán)磷酰胺、抗代謝物如5-氟尿嘧啶、或依托泊苷。
[0370]本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋一種體內(nèi)成像方法，其檢測表達(dá)CGRP的細(xì)胞的存在，該方法包括施用診斷有效量的至少一種抗人類CGRP抗體。在一個實施方案中，所述施用進(jìn)一步包括在表達(dá)CGRP的疾病位點施用促進(jìn)抗體檢測的放射性核素或熒光團(tuán)。在另一個實施方案中，使用所述體內(nèi)成像方法的結(jié)果來促進(jìn)適當(dāng)?shù)闹委煼绞降脑O(shè)計，包括包含放射療法、化學(xué)療法或其組合的治療方式。
[0371]用于治療或預(yù)防畏光的對CGRP具有結(jié)合特異性的本發(fā)明的抗CGRP抗體和其片段的抗CGRP活性還可以通過其對于CGRP的結(jié)合強度或其親和力來描述。在本發(fā)明的一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的本發(fā)明的抗CGRP抗體和其片段以小于或等于 5 X 10-7Μ、10-7Μ、5 X 10-8Μ、10-8Μ、5 X 10-9Μ、10-9Μ、5 X I(T10M、I(T10M、5 X 10-ηΜ、10-ηΜ、5 X 10-12Μ、10-12Μ、5 X IO-13M或10-13Μ的解離常數(shù)(KD)結(jié)合于CGRP。優(yōu)選地，抗CGRP抗體和其片段以小于或等于10_nM、5X10_12M或10_12M的解離常數(shù)結(jié)合CGRP。在本發(fā)明的另一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的本發(fā)明的抗CGRP抗體和其片段結(jié)合于線性或構(gòu)象CGRP表位。[0372]在本發(fā)明的另一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的本發(fā)明的抗CGRP抗體和其片段的抗CGRP活性以小于或等于IO-4S-1AX ΙΟ?'ΙΟ?'δΧ IO-6S-1UO-6S'5 X ΙΟΙ—1或10-?-1的解離速率結(jié)合于CGRP。
[0373]在本發(fā)明的另一個實施方案中，對CGRP具有結(jié)合特異性的本發(fā)明的抗CGRP抗體和其片段的抗CGRP活性通過預(yù)防、改善或減少與CGRP相關(guān)的疾病和病癥的癥狀或可選地治療與CGRP相關(guān)的疾病和病癥、尤其是治療或預(yù)防畏光而展現(xiàn)抗CGRP活性。本文示出與CGRP相關(guān)的疾病和病癥以及與畏光相關(guān)的病狀的非限制性例子。
[0374]編碼抗CGRP抗體多肽的多核苷酸
[0375]杭體Abl
[0376]本發(fā)明進(jìn)一步針對編碼對CGRP具有結(jié)合特異性的抗體多肽的多核苷酸。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的多核苷酸包含編碼SEQ ID NO:1的可變輕鏈多肽序列的下列多核苷酸序列或可選地由編碼SEQ ID NO:1的可變輕鏈多肽序列的下列多核苷酸序列組成:
[0377]CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:141)。
[0378]在本發(fā) 明的一個實施方案中，本發(fā)明的多核苷酸包含編碼SEQ ID N0:2的輕鏈多肽序列的下列多核苷酸序列或可選地由編碼SEQ ID N0:2的輕鏈多肽序列的下列多核苷酸序列組成:
[0379]CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:142)。
[0380]在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的多核苷酸包含編碼SEQ ID N0:3的可變重鏈多肽序列的下列多核苷酸序列或可選地由編碼SEQ ID NO: 3的可變重鏈多肽序列的下列多核苷酸序列組成:
[0381]CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:143)。
[0382]在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的多核苷酸包含編碼SEQ ID NO:4的重鏈多肽序列的下列多核苷酸序列或可選地由編碼SEQ ID N0:4的重鏈多肽序列的下列多核苷酸序列組成:
【權(quán)利要求】
1.一種在有需要的受試者中抑制畏光或厭光或阻止畏光或厭光的發(fā)作的方法，其包括施用有效量的抗CGRP抗體或抗體片段、抗CGRP受體抗體或片段、或包含CGRP或CGRP受體的片段的多肽，其中所述抗體或抗體片段或CGRP或CGRP受體的片段減少或預(yù)防CGRP相關(guān)的畏光或厭光。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述被施用的分子包含抗CGRP抗體或抗體片段。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述被治療的受試者罹患下列中的一種或多種:慢性偏頭痛、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛性神經(jīng)痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、潮熱、慢性陣發(fā)性半側(cè)顱痛、由于頭或頸中的潛在結(jié)構(gòu)問題而致的繼發(fā)性頭痛、腦神經(jīng)痛、竇性頭痛、過敏癥誘發(fā)的頭痛、更年期偏頭痛、月經(jīng)期偏頭痛、或頭痛、無頭痛的偏頭痛、腹型偏頭痛或其他偏頭痛病狀。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述受試者具有選自以下的與畏光相關(guān)的眼部病癥:色盲、無虹膜、由抗膽堿能藥物造成的畏光、無晶狀體(眼睛不存在晶狀體)、牛眼(角膜與虹膜之間的異常窄角)、白內(nèi)障、視錐細(xì)胞營養(yǎng)不良、先天性眼睛異常、病毒性結(jié)膜炎(“紅眼病”)、角膜擦傷、角膜營養(yǎng)不良、角膜潰瘍、角膜上皮破壞、晶狀體異位、眼內(nèi)炎、由疾病、損傷或感染引起的眼外傷如瞼板腺囊腫、鞏膜外層炎、青光眼、圓錐角膜、或視神經(jīng)發(fā)育不良、水眼、或先天性青光眼、虹膜炎、視神經(jīng)炎、色素播散綜合征、瞳孔擴張(自然或化學(xué)誘導(dǎo))、視網(wǎng)膜脫離、角膜或鞏膜的疤痕以及葡萄膜炎。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述受試者具有選自以下的與畏光相關(guān)的神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)或泌尿道病狀:自閉癥譜系障礙、Chiari畸形、誦讀困難、腦炎(包括肌痛性腦脊髓炎，也被稱為慢性疲勞綜合征)、腦膜炎、蛛網(wǎng)膜下腔出血、后顱窩腫瘤、強直性脊柱炎、白化病、核黃素缺乏癥、苯二氮革類(苯二氮簟類的長期使用或戒斷)、化學(xué)療法、基孔肯雅病、胱氨酸癥、埃勒斯-當(dāng)洛綜合征、宿醉、流感、傳染性單核細(xì)胞增多癥、鎂缺乏、汞中毒、偏頭痛、狂犬病以及II型酪氨酸血癥(也被稱為“里奇納-漢哈特綜合征”)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述受試者具有選自以下的畏光相關(guān)病癥:偏頭痛(有或無先兆)、虹膜炎、葡萄膜炎、腦膜炎、抑郁癥、雙相情感障礙、叢集性頭痛或另一種三叉自主神經(jīng)性頭痛或眼瞼痙攣、抑郁癥、廣場恐怖癥或雙相情感障礙。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述受試者罹患偏頭痛。
8.一種評估候選抗CGRP抗體或抗體片段、抗CGRP受體抗體或抗體片段或者CGRP或CGRP受體的片段用于治療可通過施用與畏光相關(guān)的CGRP拮抗劑而治療的病狀的潛在體內(nèi)功效的方法，其包括與在所述候選抗CGRP抗體或抗體片段不存在的情況下施用了 CGRP的嚙齒動物相比，在施用了 CGRP的巢蛋白/Rampl嚙齒動物中測定所述抗體或抗體片段是否抑制厭光行為。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中這種測定法被用于評估所述抗體或抗體片段是否可用于治療特征為CGRP水平增加的神經(jīng)性病狀。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中這種測定法被用于評估所述抗CGRP抗體或抗體片段是否可用于治療偏頭痛、月經(jīng)期偏頭痛或慢性偏頭痛。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中這種測定法被用于評估所述抗CGRP抗體或抗體片段是否可用于治療偏頭痛(有或無先兆)、體重減輕、癌癥或腫瘤、與癌癥或腫瘤生長相關(guān)的血管生成、與癌癥或腫瘤存活相關(guān)的血管生成、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛性神經(jīng)痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、無頭痛的偏頭痛、腹型偏頭痛、潮熱、慢性陣發(fā)性半側(cè)顱痛、由于頭或頸中的潛在結(jié)構(gòu)問題而致的繼發(fā)性頭痛、腦神經(jīng)痛、竇性頭痛、過敏癥誘發(fā)的頭痛或偏頭痛、疼痛、炎性疼痛、手術(shù)后切口疼痛、復(fù)雜區(qū)域性疼痛綜合征、癌癥疼痛、原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨質(zhì)疏松性骨折疼痛、由灼傷產(chǎn)生的疼痛、骨質(zhì)疏松癥、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)疼痛、與鐮狀細(xì)胞危象相關(guān)的疼痛和其他傷害性疼痛，以及肝細(xì)胞癌、乳腺癌、肝硬化、神經(jīng)源性疼痛、神經(jīng)性疼痛、傷害性疼痛、三叉神經(jīng)痛、帶狀皰疹后神經(jīng)痛、幻肢痛、纖維肌痛、經(jīng)痛、卵巢痛、反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)不良、神經(jīng)源性疼痛、骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疼痛、下背痛、糖尿病性神經(jīng)病變、坐骨神經(jīng)痛，或與以下相關(guān)的內(nèi)臟疼痛:胃-食管反流、消化不良、腸易激綜合征、炎癥性腸病、克羅恩病、回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、腎絞痛、痛經(jīng)、膀胱炎、月經(jīng)期、分娩、更年期、前列腺炎或胰腺炎。
12.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其包括施用用于治療偏頭痛的活性劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗CGRP抗體或抗體片段是以單一療法施用。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述抗體與另一種活性劑一起于相同或不同的組合物中施用。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述受試者為偏頭痛患者并且所述療法包括止痛劑、曲坦類、托吡酯、雙氫麥角胺或阿片類。
16.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段為特異性結(jié)合于完整 CGRP 多肽或其片段上與選自 Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abl1、Abl2、Abl3或Ab l4的抗人類CGRP抗體相同或重疊的線性或構(gòu)象表位和/或競爭結(jié)合于完整 CGRP 多肽或其片段上與選自 Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab 10、Abll、Abl2、Abl3或Abl4的抗人類CGRP抗體相同或重疊的線性或構(gòu)象表位的抗人類CGRP抗體或抗體片段。
17.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段特異性結(jié)合于完整人類CGRP多肽或其片段上與Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Abl3或Abl4相同或重疊的線性或構(gòu)象表位和/或競爭結(jié)合于完整人類CGRP多肽或其片段上與Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Abl3或Ab 14相同或重疊的線性或構(gòu)象表位。
18.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段特異性結(jié)合于完整人類CGRP多肽或其片段上與Ab2、Ab3、Ab5或Ab6相同或重疊的線性或構(gòu)象表位和/或競爭結(jié)合于完整人類CGRP多肽或其片段上與Ab2、Ab3、Ab5或Ab6相同或重疊的線性或構(gòu)象表位。
19.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體片段選自Fab片段、Fab’片段或F (ab’)2片段。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述片段為Fab片段。
21.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段包含包括SEQID NO:25 的 CDRl 序列、SEQ ID NO:26 的 CDR2 序列以及 SEQ ID NO:27 的 CDR3 序列的可變輕鏈，和/或包括SEQ ID NO:28的CDRl序列、SEQ ID NO:29的CDR2序列以及SEQ IDNO:30的⑶R3序列的可變重鏈。
22.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段包含包括SEQID NO:55 的 CDRl 序列、SEQ ID NO:56 的 CDR2 序列以及 SEQ ID NO:57 的 CDR3 序列的可變輕鏈，和/或包括SEQ ID NO:58的CDRl序列、SEQ ID NO:59的CDR2序列以及SEQ IDNO:60的⑶R3序列的可變重鏈。
23.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段在所述可變輕鏈區(qū)和所述可變重鏈區(qū)中各包含至少2個互補決定區(qū)(CDR)，所述CDR與選自以下的抗人類 CGRP 抗體中所含的 CDR 相同:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab 10, AblUAbl2、Abl3 或Abl4。
24.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段在所述可變輕鏈區(qū)和所述可變重鏈區(qū)中各包含至少2個互補決定區(qū)(⑶R)，所述⑶R與Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Abl3 或 Abl4 中所含的 CDR 相同。
25.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段為完全未糖基化的或缺乏N-糖基化或僅包含甘露糖殘基。
26.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段包含已被修飾以改變效應(yīng)功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化的Fe區(qū)。
27.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段為人源化、單鏈或嵌合抗體。
28.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段特異性結(jié)合于表達(dá)CGRP的人類細(xì)胞和/或結(jié)合于體內(nèi)循環(huán)的可溶性CGRP分子。
29.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段包含選自以下的 Vh 多肽序列:SEQ ID N0:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123 或 133，或其變體；并且進(jìn)一步包含選自以下的八多肽序列:SEQ ID ΝΟ:1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131，或與其具有至少90%序列同一性的其變體，其中所述Vh或'多肽中的一個或多個框架(FR)或CDR殘基已經(jīng)被另一個氨基酸殘基取代，產(chǎn)生特異性結(jié)合CGRP的抗CGRP抗體。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中一個或多個所述FR殘基被親本兔抗CGRP抗體中相應(yīng)位點處存在的氨基酸取代，所述Vh*'多肽中所含的互補決定區(qū)(CDR)已經(jīng)源自所述親本兔抗CGRP抗體；或被保守性氨基酸取代。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述抗體或抗體片段為人源化的。
32.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述抗體或抗體片段為嵌合的。
33.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述抗體包含單鏈抗體。
34.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述嵌合抗體包含人類F。。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述人類F。是源自IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。
36.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段抑制CGRP與CGRP-R和/或其多聚體、一種或多種另外的蛋白質(zhì)以CGRP-CGRP-R復(fù)合物形式的締合，和/或拮抗其生物效應(yīng)。
37.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述抗體或抗體片段包含與其中所述的多肽序列中的兩者具有至少90%或更大的同源性的多肽序列。
38.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述抗體或抗體片段包含與其中所述的多肽序列中的任一者具有至少95%或更大的同源性的多肽序列。
39.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述抗體或抗體片段以小于或等于10_4S'5 X IO-V5 X IO-6S^15 X IO^V IO-7S-1 的解離速率(Koff)結(jié)合于 CGRP。
40.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述抗體或抗體片段抑制CGRP與CGRP-R和/或其多聚體的產(chǎn)生，和/或CGRP與CGRP-R和一種或多種另外的蛋白質(zhì)以復(fù)合物形式的產(chǎn)生。
41.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗CGRP抗體結(jié)合于與選自Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Abl0、Abll、Abl2、Abl3 或 Ab 14 的抗 CGRP 抗體相同或重疊的CGRP表位。
42.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗CGRP抗體或片段包含一個或多個在選自以下的Vh多肽序列中所含的CDR:SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，和/或一個或多個在選自以下的\多肽序列中所含的CDR:SEQ IDN0:l、ll、21、31、41、51、61、71、81、91、101、lll、121 或 131。
43.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗CGRP抗體或片段包含至少2個在選自以下的Vh多肽序列中所含的CDR:SEQ ID NO: 3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，和/或至少2個在選自以下的Vl多肽序列中所含的CDR:SEQ ID NO: K11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121 或 131。
44.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗CGRP抗體或片段包含全部3個在選自以下的Vh多肽序列中所含的CDR:SEQ ID NO: 3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，和/或全部3個在選自以下的Vl多肽序列中所含的CDR:SEQ ID NO: K11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121 或 131。
45.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段是經(jīng)肌肉內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、經(jīng)直腸、通過輸液、經(jīng)口、經(jīng)皮或經(jīng)由吸入施用的。
46.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述抗體或抗體片段是經(jīng)靜脈內(nèi)施用的。
47.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述治療進(jìn)一步包括施用選自抗組胺、抗炎劑或抗生素的另一種治療劑或方式。
48.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述對CGRP具有結(jié)合特異性的抗CGRP抗體或抗體片段包含選自下列的可變輕鏈⑶R1XDR2和⑶R3多肽序列以及可變重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3多肽序列:
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗體片段為scFv、駱駝抗體、納米抗體、IgNAR (源自鯊魚的單鏈抗體)、Fab、Fab’或F (ab’)2片段。
50.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗體片段為Fab片段。
51.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗體或片段包含選自下列的可變輕鏈多肽序列和可變重鏈多肽序列:I可變輕鏈I可變重鏈
52.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗體或片段包含選自下列的輕鏈多肽序列和重鏈多肽序列:___
53.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗體或片段包含各自分別與SEQID NO: K11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131的可變輕鏈多肽序列之一具有至少90%同一性以及與 SEQ ID N0:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123 或 133 的可變重鏈多肽序列之一具有至少90%同一性的可變輕鏈和可變重鏈多肽序列。
54.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗體或片段包含各自分別與SEQID NO: K11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131的可變輕鏈多肽序列之一具有至少95%同一性以及與 SEQ ID N0:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123 或 133 的可變重鏈多肽序列之一具有至少95%同一性的可變輕鏈和可變重鏈多肽序列。
55.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗體或片段為嵌合或人源化的。
56.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗體或抗體片段為完全未糖基化的或缺乏N-糖基化或僅包含甘露糖殘基。
57.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗體或抗體片段包含人類恒定域。
58.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗體或抗體片段為IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗體。
59.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗體或抗體片段包含已被修飾以改變效應(yīng)功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化中的至少一種的Fe區(qū)。
60.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗體或抗體片段具有包含改變或消除所有糖基化或者減少或消除N-糖基化的突變的Fe區(qū)。
61.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗體或抗體片段直接或間接連接至可檢測標(biāo)記或治療劑。
62.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗體或抗體片段進(jìn)一步包含效應(yīng)子部分。
63.根據(jù)權(quán)利要求62所述的方法，其中所述效應(yīng)子部分為可檢測部分或功能性部分。
64.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其中所述可檢測部分為熒光染料、酶、底物、生物發(fā)光材料、放射性材料或化學(xué)發(fā)光材料。
65.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其中所述功能性部分為鏈霉親和素、親和素、生物素、細(xì)胞毒素、細(xì)胞毒性劑或放射性材料。
66.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括施用β_阻斷劑、氟桂利嗪、丙戊酸、托吡酯、阿米替林、文拉法辛、加巴噴丁、甲氧萘丙酸、款冬根、維生素Β2以及鎂中的至少一者。
67.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括施用至少一種選自止痛劑、抗組胺、退熱劑、抗炎劑、抗生素、抗病毒劑以及抗細(xì)胞因子劑的其他活性劑。
68.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中其他活性劑是選自下列激動劑、拮抗劑和調(diào)節(jié)劑:TNF- a、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN- a、IFN- y、BAFF, CXCLl3,IP-10、VEGF, EPO, EGF, HRG、肝細(xì)胞生長因子(HGF)、鐵調(diào)素，包括針對任何上述物的反應(yīng)性抗體，以及針對任何其受體的反應(yīng)性抗體。
69.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括施用活性劑，所述活性劑包括但不限于2-芳基丙酸、乙酰氯芬酸、阿西美辛、乙酰水鹽酸(阿司匹林)、阿氯芬酸、阿明洛芬、阿莫西品、氨基安替比林、芳基鏈烷酸、阿扎丙酮、撲炎痛/貝諾酯、苯惡洛芬、溴芬酸、卡布洛芬、塞來考昔、水楊酸膽堿鎂、氯非宗、C0X-2抑制劑、右布洛芬、右酮洛芬、雙氯芬酸、二氟尼柳、屈惡昔康、乙水楊胺、依托度酸、艾托考昔、菲斯胺、芬那酸、芬布芬、非諾洛芬、氟芬那酸、氟諾洛芬、氟比洛芬、布洛芬、異丁普生、噴哚美辛、噴哚洛芬、酮保泰松、酮洛芬、酮咯酸、氯諾昔康、氯索洛芬、羅美昔布、水楊酸鎂、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、安乃近、水楊酸甲酯、莫非保松、萘丁美酮、甲氧萘丙酸、N-芳基鄰氨基苯甲酸、神經(jīng)生長因子(NGF)、奧沙美辛、奧沙普秦、昔康類、羥保松、帕瑞考昔、非那宗、保泰松、保泰松、吡羅昔康、吡洛芬、普魯芬、丙谷美辛、吡唑烷衍生物、羅非考昔、雙水楊酸、水楊酰胺、水楊酸酯、P物質(zhì)、磺吡酮、舒林酸、舒洛芬、替諾昔康、噻洛芬酸、托芬那酸、托美汀以及伐地考昔。
70.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括施用抗組胺活性劑，所述抗組胺活性劑包括但不限于阿伐斯汀、阿司咪唑、阿扎他定、氮卓斯汀、貝托斯汀、溴苯那敏、布克利嗪、西替利嗪、西替利嗪類似物、撲爾敏、氯馬斯汀、CS560、賽庚啶、地氯雷他定、右氯苯那敏、依巴斯汀、依匹斯汀、非索非那定、HSR609、羥嗪、左卡巴斯汀、氯雷他定、甲基東莨菪堿、咪唑斯汀、諾司咪唑、苯茚胺、異丙嗪、吡拉明、特非那定以及曲尼司特。
71.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括施用抗生素活性劑，所述抗生素活性劑包括但不限于丁胺卡那霉素、氨基糖苷類、阿莫西林、氨芐青霉素、安沙霉素類、胂凡納明、阿奇霉素、阿洛西林、氨曲南、桿菌肽、碳頭孢烯、碳青霉烯類、羧芐青霉素、頭孢克洛、頭孢輕氨節(jié)、頭孢氨節(jié)、頭孢噻吩(Cefalothin)、頭孢噻吩(Cefalotin)、頭孢孟多、頭孢唑林、頭孢地尼、頭孢托侖、頭孢吡肟、頭孢克肟、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢西丁、頭孢泊肟、頭孢丙烯、頭孢他啶、頭孢布坦、頭孢唑肟、頭孢吡普、頭孢曲松、頭孢呋辛、頭孢菌素類、氯霉素、西司他丁、環(huán)丙沙星、克拉霉素、克林霉素、氯唑西林、粘菌素、復(fù)方新諾明、達(dá)福普汀、地美環(huán)素、雙氯青霉素、地紅霉素、多利培南、強力霉素、依諾沙星、厄他培南、紅霉素、乙胺丁醇、氟氯西林、磷霉素、呋喃唑酮、夫西地酸、加替沙星、格爾德霉素、慶大霉素、糖肽類、除莠霉素、亞胺培南、異煙肼、卡那霉素、左氧氟沙星、林肯霉素、利奈唑胺、洛米沙星、氯拉卡比、大環(huán)內(nèi)酯類、磺胺米隆、美羅培南、甲氧西林、甲硝噠唑、美洛西林、米諾環(huán)素、單環(huán)內(nèi)酰胺類、莫西沙星、莫匹羅星、萘夫西林、新霉素、奈替米星、硝基呋喃妥因、諾氟沙星、氧氟沙星、苯唑西林、土霉素、巴龍霉素、青霉素、青霉素類、哌拉西林、平板霉素、多粘菌素B、多肽、百浪多息、批嗪酰胺、喹諾酮、奎奴普丁、利福平(Rifampicin)、利福平(Rifampin)、羅紅霉素、大觀霉素、鏈霉素、磺胺醋酰、磺胺甲二唑、磺胺二甲異噁唑、柳氮磺胺吡啶、磺胺異噁唑、磺胺類、替考拉寧、泰利霉素、四環(huán)素、四環(huán)素類、替卡西林、替硝唑、妥布霉素、甲氧芐氨嘧啶、甲氧芐氨嘧啶-磺胺甲噁唑、醋竹桃霉素、曲伐沙星以及萬古霉素。
72.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括施用活性劑，所述活性劑包括但不限于醛固酮、倍氯米松、倍他米松、皮質(zhì)類固醇類、氫化皮質(zhì)醇、醋酸可的松、醋酸脫氧皮質(zhì)酮、地塞米松、醋酸氟氫可的松、糖皮質(zhì)激素類、氫化可的松、甲潑尼龍、潑尼松龍、潑尼松、類固醇類和曲安西龍以及其組合。
73.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括施用活性劑，所述活性劑包括但不限于布洛芬、甲氧萘丙酸、舒馬曲坦、雙醋氨酚/對乙酰氨基酚、咖啡因、曲坦如麥角胺類如麥角胺、皮質(zhì)類固醇、包括但不限于甲氧氯普胺的止吐劑以及其組合。
74.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括施用活性劑組合，所述活性劑組合包括但不限于(阿司匹林與甲氧氯普胺)、(雙醋氨酚/可待因用于止痛，布克利嗪作為止吐劑)以及雙醋氨酚/甲 氧氯普胺。
【文檔編號】G01N33/53GK103702685SQ201280035852
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2012年5月21日 優(yōu)先權(quán)日:2011年5月20日
【發(fā)明者】A·F·拉索, E·A·凱澤, A·雷科伯, A·庫布拉斯, A·C·拉丹特, B·R·科瓦切維奇, J·A·萊瑟姆, J·T·L·史密斯, L·F·加西亞-馬丁內(nèi)斯 申請人:奧爾德生物控股有限責(zé)任公司, 衣阿華大學(xué)研究基金會