專利名稱：雙層式免疫層析試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種雙層式免疫層析試紙。
背景技術(shù)：
據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球已有近1/3的人口感染了結(jié)核分枝桿菌，在某些發(fā)展中國(guó)家的成人中結(jié)核分枝桿菌攜帶率高達(dá)80%，其中約5% -10%攜帶者可發(fā)展為活動(dòng)性結(jié)核病。我國(guó)結(jié)核病人數(shù)居全球第二位，每年死于結(jié)核病的人是各類傳染病死亡人數(shù)總和的兩倍多。近二十年由于艾滋病的流行，感染了人類免疫缺陷病毒(HIV)的結(jié)核分枝桿菌攜帶者發(fā)展為活動(dòng)性結(jié)核病的可能性比未感染HIV者高30-50倍。結(jié)核病又成為了威脅人類健康的全球性衛(wèi)生問題，更是影響我國(guó)發(fā)展的重大社會(huì)和經(jīng)濟(jì)問題。結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷主要依賴細(xì)菌學(xué)涂片和培養(yǎng)檢查。由于方法所限，嚴(yán)重影響了結(jié)核病的及時(shí)診斷。因此，多年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者一直在尋找快速、敏感、特異、簡(jiǎn)便的實(shí)驗(yàn)室診斷方法。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題是提供一種使用簡(jiǎn)便快捷、靈敏度和特異性高的雙層式免疫層析試紙。為了解決上述問題，本實(shí)用新型提供一種雙層式免疫層析試紙，由背靠背相連的試紙組件I和試紙組件II組成；試紙組件I由上樣墊I、膠體金墊I、包被質(zhì)控線I和檢測(cè)線I的硝酸纖維素膜I、吸樣墊I以及支撐板I組成；在硝酸纖維素膜I的上表面分別設(shè)置膠體金墊I和吸樣墊I，上樣墊I位于膠體金墊I的上表面，硝酸纖維素膜I的下表面與支撐板I的正面固定相連；試紙組件II由上樣墊II、膠體金墊II、包被質(zhì)控線II和檢測(cè)線II的硝酸纖維素膜II、吸樣墊II以及支撐板II組成；在硝酸纖維素膜II的下表面分別設(shè)置膠體金墊II和吸樣墊II，上樣墊II位于膠體金墊II的下表面，硝酸纖維素膜II的上表面與支撐板II的正面固定相連；支撐板I的背面與支撐板II的背面固定相連。作為本實(shí)用新型的雙層式免疫層析試紙的改進(jìn)膠體金墊I為含有金標(biāo)記的抗CFP-10單克隆抗體TBCA6的膠體金墊；檢測(cè)線I為包被在硝酸纖維素膜I上的抗CFP-10單克隆抗體TBCD6 ;質(zhì)控線I為包被在硝酸纖維素膜I上的羊抗鼠IgG抗體；膠體金墊II為含有金標(biāo)記的抗ESAT-6單克隆抗體TBEA8的膠體金墊，檢測(cè)線II為包被在硝酸纖維素膜II上的抗ESAT-6單克隆抗體TBEF3，質(zhì)控線II為包被在硝酸纖維素膜II上的羊抗鼠IgG抗體。本實(shí)用新型還同時(shí)提供了另一種雙層式免疫層析試紙，由分別設(shè)置在支撐板正反兩面的試紙組件I和試紙組件II組成；試紙組件I由上樣墊I、膠體金墊I、包被質(zhì)控線I和檢測(cè)線I的硝酸纖維素膜I以及吸樣墊I組成；在硝酸纖維素膜I的上表面分別設(shè)置膠體金墊I和吸樣墊I，上樣墊I位于膠體金墊I的上表面，硝酸纖維素膜I的下表面與支撐板的正面固定相連；試紙組件II由上樣墊II、膠體金墊II、包被質(zhì)控線II和檢測(cè)線II的硝酸纖維素膜II以及吸樣墊II組成；在硝酸纖維素膜II的下表面分別設(shè)置膠體金墊II和吸樣墊II，上樣墊II位于膠體金墊II的下表面，硝酸纖維素膜II的上表面與支撐板的反面固定相連。作為本實(shí)用新型的雙層式免疫層析試紙的改進(jìn)膠體金墊I為含有金標(biāo)記的抗CFP-10單克隆抗體TBCA6的膠體金墊；檢測(cè)線I為包被在硝酸纖維素膜I上的抗CFP-10單克隆抗體TBCD6 ;質(zhì)控線I為包被在硝酸纖維素膜I上的羊抗鼠IgG抗體；膠體金墊II為含有金標(biāo)記的抗ESAT-6單克隆抗體TBEA8的膠體金墊，檢測(cè)線II為包被在硝酸纖維素膜II上的抗ESAT-6單克隆抗體TBEF3，質(zhì)控線II為包被在硝酸纖維 素膜II上的羊抗鼠IgG抗體。本實(shí)用新型的雙層式免疫層析試紙的有益效果是可快速檢測(cè)液體培養(yǎng)基中的結(jié)核分枝桿菌分泌性抗原靶蛋白CFP-10和ESAT-6，從而鑒定是否為人的致病結(jié)核分枝桿菌，即使非專業(yè)人員也能輕易進(jìn)行操作，5-30分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，最少可檢出CFP-10蛋白1.2ng/ml、ESAT-6蛋白2. 4ng/ml。本實(shí)用新型的雙層式免疫層析試紙具有簡(jiǎn)便性、敏感性、特異性和快速性的優(yōu)點(diǎn)，而且價(jià)格便宜適于基層現(xiàn)場(chǎng)使用。
以下結(jié)合附圖
對(duì)本實(shí)用新型的具體實(shí)施方式
作進(jìn)一步詳細(xì)說明。圖I是本實(shí)用新型的一種雙層式免疫層析試紙的主視結(jié)構(gòu)的爆破示意圖；圖2是圖I的俯視示意圖；圖3是圖I的仰視示意圖；圖4是本實(shí)用新型的另一種雙層式免疫層析試紙的主視結(jié)構(gòu)的爆破示意圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本實(shí)用新型。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本實(shí)用新型而不用于限制本實(shí)用新型的范圍。實(shí)施例I、圖I 圖3結(jié)合給出了一種雙層式免疫層析試紙，由背靠背相連的試紙組件I和試紙組件II組成。試紙組件I由上樣墊I I、膠體金墊I 2、包被質(zhì)控線I 3和檢測(cè)線I 6的硝酸纖維素膜I 5、吸樣墊I 4以及支撐板I 7組成；在硝酸纖維素膜I 5的上表面分別設(shè)置膠體金墊I 2和吸樣墊I 4，上樣墊I I位于膠體金墊I 2的上表面，硝酸纖維素膜I 5的下表面與支撐板I 7的正面固定相連。膠體金墊I 2為含有金標(biāo)記的抗CFP-10單克隆抗體TBCA6的膠體金墊；檢測(cè)線I6為包被在硝酸纖維素膜I 5上的抗CFP-10單克隆抗體TB⑶6 ;質(zhì)控線I 3為包被在硝酸纖維素膜I 5上的羊抗鼠IgG抗體。試紙組件II由上樣墊II 11、膠體金墊II 12、包被質(zhì)控線II 13和檢測(cè)線II 16的硝酸纖維素膜II 15、吸樣墊II 14以及支撐板II 17組成；在硝酸纖維素膜II 15的下表面分別設(shè)置膠體金墊II 12和吸樣墊II 14，上樣墊II 11位于膠體金墊II 12的下表面，硝酸纖維素膜II 15的上表面與支撐板II 17的正面固定相連；膠體金墊II 12為含有金標(biāo)記的抗ESAT-6單克隆抗體TBEA8的膠體金墊，檢測(cè)線II 16為包被在硝酸纖維素膜II 15上的抗ESAT-6單克隆抗體TBEF3，質(zhì)控線II 13為包被在硝酸纖維素膜II 15上的羊抗鼠IgG抗體。支撐板I 7的背面與支撐板II 17的背面固定相連。試紙組件I例如可按照如下方法進(jìn)行制備I、制備并純化抗CFP-10小鼠單克隆抗體TB⑶6和TBCA6I)、單抗腹水的誘導(dǎo)在接種雜交瘤細(xì)胞前一周，給BALB/C小鼠腹腔注射降植烷 每只O. 5ml，然后每只接種5X IO6能產(chǎn)生TB⑶6或TBCA6的陽性雜交瘤細(xì)胞，10天后收集腹水離心，測(cè)定抗體效價(jià)。上述能產(chǎn)生小鼠單克隆抗體TB⑶6或TBCA6的陽性雜交瘤細(xì)胞來源于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心；保藏編號(hào)分別為CCTCC NO C201082 ；CCTCC NO :C201083。其在已公開發(fā)表的專利中均有明確告知。2)單克隆抗體的純化利用Protein G親和純化法純化腹水中的TB⑶6或TBCA6
單克隆抗體。2、制作包被檢測(cè)線I 6和質(zhì)控線I 3的硝酸纖維素膜I 5 ;g卩，將TB⑶6單克隆抗體溶液以及羊抗鼠IgG溶液分別噴到硝酸纖維素膜I 5上，晾干后將其(包被檢測(cè)線I 6和質(zhì)控線I 3的硝酸纖維素膜I 5)粘貼在支撐板I 7上；包被檢測(cè)線I 6和質(zhì)控線I 3的硝酸纖維素膜I 5的制作方法如下I)、用O. 01mol/L PH7. 4磷酸鹽PBS緩沖液將抗CFP-10單克隆抗體TBCD6配制成濃度為O. 3mg/ml的溶液，用噴膜儀在硝酸纖維素膜I 5的下表面以O(shè). 8 I. 2ul/cm(最佳為lul/cm)的參數(shù)劃線，包被成檢測(cè)線I 6 ；2)、用O. 01mol/LPH7. 4磷酸鹽PBS緩沖液將羊抗鼠IgG抗體配制成2. 4mg/ml的溶液，用噴膜儀在硝酸纖維素膜I 5的上表面以O(shè). 8 I. 2ul/cm(最佳為lul/cm)的參數(shù)劃線，包被成質(zhì)控線I 3 ；3)、將劃線后的硝酸纖維素膜I 5于37°C的溫度和小于30% (例如為20% 29%)的相對(duì)濕度的條件下干燥8 10小時(shí)，得包被了檢測(cè)線I 6和質(zhì)控線I 3的硝酸纖維素膜I 5。3、制備抗CFP-10免疫膠體金探針和相應(yīng)的TBCA6抗體金標(biāo)墊I)、將O. 01% (質(zhì)量濃度)HAuCL4水溶液加熱煮沸，每50ml HAuCL4水溶液在磁力加熱(于100-110°C )攪拌下迅速一次性加入I. 75ml的1% (質(zhì)量濃度)檸檬酸三鈉水溶液，繼續(xù)加熱(于100°C )攪拌10分鐘，得膠體金溶液。2)、膠體金顆粒的電鏡觀察透射電鏡下可見膠體金溶液中的膠體金顆粒呈圓形或橢圓形，大小均勻一致，計(jì)數(shù)100個(gè)金顆粒，顆粒直徑約為19. 5nm。結(jié)果表明，按照以上技術(shù)路線制備的膠體金顆粒合格。3)、確定最低偶聯(lián)抗體濃度調(diào)節(jié)膠體金溶液至PH5. 5(可利用常規(guī)的弱酸、弱堿溶液進(jìn)行調(diào)節(jié))用于稀釋抗體TBCA6。分別取5ul，10ul，15ul，20ul，25ul等體積的抗體TBCA6加入各自對(duì)應(yīng)的Iml膠體金溶液中，混勻后于室溫下放置5min，加入10% (質(zhì)量濃度)NaCL水溶液O. Iml混勻后靜置，10_20min后膠體金溶液顏色不變時(shí)所含最少抗體量，為穩(wěn)定Iml膠體金溶液所需最低偶聯(lián)抗體量；4)、在本實(shí)施例中，最少抗體量對(duì)應(yīng)的是O. 6mg每IOOml膠體金溶液的比例。5)、將120%倍的上述最低偶聯(lián)抗體量的抗體TBCA6按比例加入到50ml膠體金溶液中(即將抗體TBCA6按O. 72mg每IOOml膠體金溶液的比例偶聯(lián)，該膠體金溶液已調(diào)節(jié)至PH5. 5)，混勻后室溫靜置I小時(shí)，得TBCA6的免疫膠體金探針溶液；將TBCA6的免疫膠體金探針溶液4°C 15000r/min離心30min后輕輕棄去上清，以I體積倍(即50ml)的重懸液重懸沉淀物，得TBCA6單克隆抗體膠體金探針溶液；重懸液的制備方法如下在濃度為O. 01mol/L,PH7. 4的PB緩沖液I升中加入IOg 的 BSA、35g 的蔗糖和 O. 3g 的 PEG20000 ；6)、將上述5)的溶液(TBCA6單克隆抗體膠體金探針溶液)按Iml溶液鋪25cm2的比例均勻地鋪在親水玻璃纖維膜或相對(duì)親水聚酯纖維膜(厚度約為O. 25-0. 8mm)上，再置干燥間，于20-25°C小于30%濕度(例如為20%的相對(duì)濕度)的條件下干燥2_4小時(shí)，制成膠體金墊I 2備用。該膠體金墊I 2為含有金標(biāo)記的抗CFP-10單克隆抗體TBCA6的膠體金墊。4、試紙組件I的組裝試紙組件I由上樣墊I I、包被了檢測(cè)線I 6和質(zhì)控線I 3的硝酸纖維素膜I 5(以下簡(jiǎn)稱包被抗體的硝酸纖維素膜I 5)、膠體金墊I 2、吸樣墊I 4和支撐板I 7這五部分組成。將制備好的包被抗體的硝酸纖維素膜I 5粘貼在支撐板I 7上(硝酸纖維素膜I5的下表面與支撐板I 7的正面相接觸)，膠體金墊I 2右端的下表面與包被抗體的硝酸纖維素膜I 5左端的上表面固定相連(以粘貼的方式實(shí)現(xiàn))；上樣墊I I右端的下表面與膠體金墊12左端的上表面固定相連(以粘貼的方式實(shí)現(xiàn))。吸樣墊I 4左端的下表面與包被抗體的硝酸纖維素膜I 5右端的上表面固定相連(以粘貼的方式實(shí)現(xiàn))；最后按寬度O. 25cm-0. 5cm切割(如圖2所示)，即得試紙組件I。試紙組件II例如可按照如下方法進(jìn)行制備I、制備并純化抗ESAT-6小鼠單克隆抗體TBEF3和TBEA8I)、單抗腹水的誘導(dǎo)在接種雜交瘤細(xì)胞前一周，給BALB/C小鼠腹腔注射降植烷每只O. 5ml，然后每只接種5X IO6能產(chǎn)生TBEF3或TBEA8的陽性雜交瘤細(xì)胞，10天后收集腹水離心，測(cè)定抗體效價(jià)。上述能產(chǎn)生小鼠單克隆抗體TBEF3或TBEA8的陽性雜交瘤細(xì)胞來源于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心；保藏編號(hào)分別為CCTCC NO C201080和CCTCC NO :C201081。其在已公開發(fā)表的專利中均有明確告知。2)、單克隆抗體的純化利用Protein G親和純化法純化腹水中的TBEF3或TBEA8單克隆抗體。2、制作包被檢測(cè)線II 16和質(zhì)控線II 13的硝酸纖維素膜II 15 ;將TBEF3單克隆抗體溶液以及羊抗鼠IgG溶液分別噴到硝酸纖維素膜II 15上，晾干后將其粘貼在支撐板II 17上；包被檢測(cè)線II 16和質(zhì)控線II 13的硝酸纖維素膜II 15的制作方法如下I)、用O. 01mol/L PH7. 4磷酸鹽PBS緩沖液將抗ESAT-6單克隆抗體TBEF3配制成濃度為O. 5mg/ml的溶液，用噴膜儀在硝酸纖維素膜II 15的上表面以lul/cm的參數(shù)劃線，包被成檢測(cè)線II 16 ;2)、用O. 01mol/LPH7. 4磷酸鹽PBS緩沖液將羊抗鼠IgG抗體配制成O. 5mg/ml的溶液，用噴膜儀在硝酸纖維素膜II 15的下表面以lul/cm的參數(shù)劃線，包被成質(zhì)控線II 13;3)、將上述劃線后的硝酸纖維素膜II 15于37°C的溫度和小于30% (例如為20% 30% )的相對(duì)濕度的條件下干燥8 10小時(shí)，得包被了檢測(cè)線II 16和質(zhì)控線II13的硝酸纖維素膜II 15。3、制備含有金標(biāo)記的抗ESAT-6單克隆抗體TBEA8的膠體金墊II 12 (即制備抗ESAT-6免疫膠體金探針和相應(yīng)的TBEA8抗體金標(biāo)墊)I)、將O. 01 % (質(zhì)量濃度)HAuCL4水溶液加熱煮沸，每50ml HAuCL4水溶液在磁力加熱(于100-110°C )攪拌下迅速一次性加入I. 75ml的1% (質(zhì)量濃度)檸檬酸三鈉水溶液，繼續(xù)加熱(于100°C )攪拌10分鐘，得膠體金溶液；2)、膠體金顆粒的電鏡觀察透射電鏡下可見膠體金溶液中的膠體金顆粒呈圓形或橢圓形，大小均勻一致，計(jì)數(shù)100個(gè)金顆粒，顆粒直徑約為19. 5nm。結(jié)果表明，按照以上技術(shù)路線制備的膠體金顆粒合格。3)、確定最低偶聯(lián)抗體濃度調(diào)節(jié)膠體金溶液至pH7. O (可利用濃度為O. lmol/L K2CO3進(jìn)行調(diào)節(jié))用于稀釋抗體 TBEA8。分別取5ul，10ul，15ul，20ul，25ul抗體加入各自對(duì)應(yīng)的Iml膠體金溶液中，混勻后于室溫下放置5min，加入10% (質(zhì)量濃度)NaCL水溶液O. Iml混勻后靜置，10 20min后膠體金溶液顏色不變時(shí)所含最少抗體量，為穩(wěn)定Iml膠體金溶液所需最低偶聯(lián)抗體量；4)、在本實(shí)施例中，最少抗體量對(duì)應(yīng)的是O. 75mg每IOOml膠體金溶液的比例。5)、將120%重量倍的上述最低偶聯(lián)抗體量的抗體TBEA8按比例加入到50ml膠體金溶液中(即將抗體TBEA8按O. 9mg每IOOml膠體金溶液的比例偶聯(lián))，混勻后室溫靜置I小時(shí)。4°C 15000r/min離心30min后輕輕棄去上清，以1/2體積(即25ml)的重懸液重懸沉淀物，得TBEA8單克隆抗體膠體金探針溶液；該重懸液為O. 01mol/L pH7. 4 的 PBS 緩沖液(含 I % BSA，5 % 蔗糖，0. 3mg/mLPEG20000)，即，該重懸液的制備方法如下在每L O. 01mol/L ρΗ7· 4的PBS緩沖液中加入IOg的BSA、50g的蔗糖、0. 3g的PEG20000制備而得；6)、將上述5)的TBEA8單克隆抗體膠體金探針溶液按Iml溶液鋪25cm2的比例均勻地鋪在親水玻璃纖維膜或相對(duì)親水聚酯纖維膜(厚度約為0. 25-0. 8mm)上，再置干燥間，于20-25°C小于30%相對(duì)濕度的條件下干燥2-4小時(shí)，制成膠體金墊II 12，備用。該膠體金墊II 12為含有金標(biāo)記的抗ESAT-6單克隆抗體TBEA8的膠體金墊。4、試紙組件II的組裝試紙組件II由上樣墊II 11、包被了檢測(cè)線II 16和質(zhì)控線II 13的硝酸纖維素膜II 15(以下簡(jiǎn)稱包被抗體的硝酸纖維素膜II 15)、膠體金墊II 12、吸樣墊II 14和支撐板II 17五部分組成。將制備好的包被抗體的硝酸纖維素膜II 15粘貼在支撐板II 17上(硝酸纖維素膜II 15的上表面與支撐板II 17的正面相接觸，S卩，檢測(cè)線II 16正對(duì)支撐板II 17)，膠體金墊II 12右端的上表面與包被抗體的硝酸纖維素膜II 15左端的下表面固定相連(以粘貼的方式實(shí)現(xiàn))；上樣墊II 11右端的上表面與膠體金墊II 12左端的下表面固定相連(以粘貼的方式實(shí)現(xiàn))。吸樣墊II 14左端的上表面與包被抗體的硝酸纖維素膜II 15右端的下表面固定相連(以粘貼的方式實(shí)現(xiàn))；最后按寬度O. 25cm-0. 5cm切割(如圖3所示)，即得試紙組件II。將支撐板I 7的背面與支撐板II 17的背面固定相連(以粘貼的方式實(shí)現(xiàn))，得雙層式免疫層析試紙，加干燥劑后密封保存。為了顯著的區(qū)分試紙組件I和試紙組件II，可在上樣墊I I處標(biāo)注代號(hào)“I”，在上樣墊II 11處標(biāo)注代號(hào)“II”。并在產(chǎn)品說明書中明確告知“I”顯示的是CFP-10的檢測(cè)結(jié)果，而“II”顯示的是ESAT-6的檢測(cè)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)、結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白CFP-10和ESAT-6的敏感性檢測(cè)試驗(yàn)以 Fitzgerald Industries International 公司購(gòu)買的重組蛋白 CFP-10 為標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)生理鹽水有限稀釋后，作為樣品檢測(cè)液I。以Creative Biomart公司購(gòu)買的重組蛋白ESAT-6為標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)生理鹽水有限稀釋后，作為樣品檢測(cè)液II。取實(shí)施例I所得的雙層式免疫層析試紙，分別浸入不同CFP-10濃度的樣品檢測(cè)液I和不同ESAT-6濃度的樣品檢測(cè)液II中。2分鐘后開始觀察結(jié)果，15分鐘觀察終止。結(jié)果 艮告在試紙組件I上出現(xiàn)I條紅色(對(duì)照)沉淀線為陰性，即無CFP-10檢出；出現(xiàn)2條紅色(樣品和對(duì)照)沉淀線為陽性，即有CFP-10檢出。CFP-10可檢出最低限為1.2ng/ml ο在試紙組件II上出現(xiàn)I條紅色(對(duì)照)沉淀線為陰性，即無ESAT-6檢出；出現(xiàn)2條紅色(樣品和對(duì)照)沉淀線為陽性，即有ESAT-6檢出。ESAT-6可檢出最低限2. 4ng/ml。具體檢測(cè)結(jié)果如表I所述。表I、試紙條敏感性
權(quán)利要求1.一種雙層式免疫層析試紙，其特征是由背靠背相連的試紙組件I和試紙組件II組成； 所述試紙組件I由上樣墊I (I)、膠體金墊I (2)、包被質(zhì)控線I (3)和檢測(cè)線I ￠)的硝酸纖維素膜I (5)、吸樣墊I (4)以及支撐板I (7)組成；在硝酸纖維素膜I (5)的上表面分別設(shè)置膠體金墊1(2)和吸樣墊I (4)，上樣墊I(I)位于膠體金墊1(2)的上表面，硝酸纖維素膜I (5)的下表面與支撐板I (7)的正面固定相連； 試紙組件II由上樣墊II (11)、膠體金墊II (12)、包被質(zhì)控線II (13)和檢測(cè)線II (16)的硝酸纖維素膜II (15)、吸樣墊II (14)以及支撐板II (17)組成；在硝酸纖維素膜II (15)的下表面分別設(shè)置膠體金墊II (12)和吸樣墊II (14)，上樣墊II (11)位于膠體金墊II (12)的下表面，硝酸纖維素膜11(15)的上表面與支撐板11(17)的正面固定相連； 支撐板I (7)的背面與支撐板II (17)的背面固定相連。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的雙層式免疫層析試紙，其特征是 所述膠體金墊I (2)為含有金標(biāo)記的抗CFP-IO單克隆抗體TBCA6的膠體金墊；所述檢測(cè)線I (6)為包被在硝酸纖維素膜I (5)上的抗CFP-10單克隆抗體TB⑶6 ;所述質(zhì)控線I (3)為包被在硝酸纖維素膜I (5)上的羊抗鼠IgG抗體； 所述膠體金墊II (12)為含有金標(biāo)記的抗ESAT-6單克隆抗體TBEA8的膠體金墊，所述檢測(cè)線II (16)為包被在硝酸纖維素膜II (15)上的抗ESAT-6單克隆抗體TBEF3，所述質(zhì)控線11(13)為包被在硝酸纖維素膜11(15)上的羊抗鼠IgG抗體。
3.—種雙層式免疫層析試紙，其特征是由分別設(shè)置在支撐板(10)正反兩面的試紙組件I和試紙組件II組成； 所述試紙組件I由上樣墊I (I)、膠體金墊I (2)、包被質(zhì)控線I (3)和檢測(cè)線I ￠)的硝酸纖維素膜I (5)以及吸樣墊I (4)組成；在硝酸纖維素膜I (5)的上表面分別設(shè)置膠體金墊1(2)和吸樣墊I (4)，上樣墊I (I)位于膠體金墊I (2)的上表面，硝酸纖維素膜1(5)的下表面與支撐板(10)的正面固定相連； 試紙組件II由上樣墊II (11)、膠體金墊II (12)、包被質(zhì)控線II (13)和檢測(cè)線II (16)的硝酸纖維素膜II (15)以及吸樣墊II (14)組成；在硝酸纖維素膜II (15)的下表面分別設(shè)置膠體金墊II (12)和吸樣墊II (14)，上樣墊II(Il)位于膠體金墊II (12)的下表面，硝酸纖維素膜II (15)的上表面與支撐板(10)的反面固定相連。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙層式免疫層析試紙，其特征是 所述膠體金墊I (2)為含有金標(biāo)記的抗CFP-10單克隆抗體TBCA6的膠體金墊；所述檢測(cè)線I (6)為包被在硝酸纖維素膜I (5)上的抗CFP-10單克隆抗體TB⑶6 ;所述質(zhì)控線I (3)為包被在硝酸纖維素膜I (5)上的羊抗鼠IgG抗體； 所述膠體金墊II (12)為含有金標(biāo)記的抗ESAT-6單克隆抗體TBEA8的膠體金墊，所述檢測(cè)線II (16)為包被在硝酸纖維素膜II (15)上的抗ESAT-6單克隆抗體TBEF3，所述質(zhì)控線11(13)為包被在硝酸纖維素膜11(15)上的羊抗鼠IgG抗體。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種雙層式免疫層析試紙，由背靠背相連的試紙組件I和試紙組件II組成；試紙組件I包含上樣墊I(1)等，在硝酸纖維素膜I(5)的上表面分別設(shè)置膠體金墊I(2)和吸樣墊I(4)，上樣墊I(1)位于膠體金墊I(2)的上表面；試紙組件II包含上樣墊II(11)等；在硝酸纖維素膜II(15)的下表面分別設(shè)置膠體金墊II(12)和吸樣墊II(14)，上樣墊II(11)位于膠體金墊II(12)的下表面；支撐板I(7)的背面與支撐板II(17)的背面固定相連。本實(shí)用新型還同時(shí)公開了另一種雙層式免疫層析試紙。該雙層式免疫層析試紙能用于同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白CFP-10和ESAT-6。
文檔編號(hào)G01N33/577GK202631542SQ20122013290
公開日2012年12月26日 申請(qǐng)日期2012年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月31日
發(fā)明者徐寧, 姚航平 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)