專利名稱：檢測(cè)牛奶中氟喹諾酮類藥物的膠體金試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及ー種檢測(cè)氟喹諾酮類藥物的試劑盒，特別是檢測(cè)牛奶中氟喹諾酮類藥物的試劑盒，屬于免疫學(xué)范疇。
背景技術(shù)：
喹諾酮類抗菌藥(4-quinolones),又稱卩比酮酸類或卩比唳酮酸類,是ー類較新的合成抗菌藥，該類藥物的開發(fā)可以追溯到1962年,Lesher從合成抗拒藥氯喹中分離出ー種副產(chǎn)品-萘啶酸，喹諾酮類歷經(jīng)40多年的發(fā)展，共開發(fā)出了四代喹諾酮類藥物，共計(jì)50多種藥物。喹諾酮類抗菌藥以細(xì)菌的脫氧核糖核酸(DNA)為靶位，通過選擇性的抑制細(xì)菌DNA促旋酶與拓?fù)洚悩?gòu)酶IV而造成染色體的不可逆損害，而使細(xì)菌細(xì)胞不再分裂，主要作 用于革蘭陰性菌的抗菌藥物，對(duì)革蘭陽性菌的作用較弱(某些品種對(duì)金黃色葡萄球菌有較好的抗菌作用)。已成為獸醫(yī)臨診和水產(chǎn)養(yǎng)殖中最重要的抗感染藥物之一，被大量用于治療、預(yù)防和促生長，由于其耐藥性和潛在的致癌性引起廣泛的關(guān)注。在組織中，恩諾沙星的標(biāo)示殘留物為恩諾沙星和環(huán)丙沙星，其中以肝臟組織和腎臟組織中的殘留物濃度最高，其次是肌肉和脂肪附著的皮膚組織，恩諾沙星其代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星(CIF)仍具有生物活性。氧氟沙星(OFL)其主要以原形藥物的形式存在于組織中；培氟沙星(PEF)在體內(nèi)代謝率接近100%，而其代謝產(chǎn)物是諾氟沙星(NOR)。目前，牛奶及生鮮奶中氟喹諾酮類藥物殘留的檢測(cè)方法依據(jù)不同的檢測(cè)原理，大體可分為三大類微生物受阻檢測(cè)、理化檢測(cè)法、免疫學(xué)分析法。微生物受阻檢測(cè)方法，主要有抑菌圈試驗(yàn)、渾濁度試驗(yàn)、變色型檢測(cè)金標(biāo)試劑盒方法，微生物檢測(cè)方法檢測(cè)成本價(jià)低，但是靈敏度低、耗時(shí)長、耐藥菌的存在容易導(dǎo)致誤檢；理化檢測(cè)方法，是目前檢測(cè)氟喹諾酮類藥物主要方法，有液相色譜法、色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、氣相色譜法等，理化檢測(cè)方法精確度高，但其存在檢測(cè)成本高、檢測(cè)設(shè)備復(fù)雜、對(duì)檢測(cè)人員的要求較高、檢測(cè)耗時(shí)長等缺點(diǎn)，目前常用的免疫學(xué)分析法，主要為酶聯(lián)免疫檢測(cè)法和放射免疫分析法，需要的檢測(cè)費(fèi)用還是較高，不適合企業(yè)低成本的檢測(cè)需要。因此，在實(shí)踐中有必要建立ー種敏感度高、操作簡單、成本低、檢測(cè)藥物種類多、適合大規(guī)模推廣的檢測(cè)方法。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是提供一種靈敏度高、檢測(cè)氟喹諾酮類藥物種類多、成本低、操作簡單、檢測(cè)時(shí)間短的檢測(cè)氟喹諾酮類藥物的試劑盒。本實(shí)用新型的試劑盒，其包括凍干有氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的微孔試劑條和試紙條，試紙條由底板、附著在底板上依次緊密相連的樣品吸收墊、反應(yīng)膜、吸水墊和保護(hù)膜組成，所述反應(yīng)膜上具有包被有氟喹諾酮類藥物-載體蛋白偶聯(lián)物構(gòu)成的檢測(cè)線印跡“ I ”和包被羊抗鼠抗抗體構(gòu)成的質(zhì)控線印跡“ I ”。檢測(cè)線和質(zhì)控線平行，檢測(cè)線位于距離樣品吸收墊ー側(cè)5 8mm，所述質(zhì)控線位于距離檢測(cè)線4 7mm，試紙條兩端貼有保護(hù)膜，覆蓋在吸水端上的為手柄端，覆蓋在樣品吸收墊上的為檢測(cè)端，檢測(cè)端保護(hù)膜上有MAX標(biāo)記線，微孔試劑條的反應(yīng)孔上具有膠塞。為了便于運(yùn)輸和使用，試劑盒還有固定用具及固定于其中用于盛裝微孔試劑條和試紙條的試劑桶，所述試劑桶上具有密封蓋。本實(shí)用新型試劑盒中試紙條底板可為PVC底板或其他硬質(zhì)不吸水的材料；樣品吸收墊可為吸濾紙或?yàn)V油紙；吸水墊為吸水紙；反應(yīng)膜可為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜；保護(hù)膜為PE材質(zhì)保護(hù)膜；試劑盒盒體為硬紙盒；試劑桶為塑料試劑桶；固定用具為硬質(zhì)支撐材料。本實(shí)用新型試劑盒具有如下有益效果I.靈敏度高。氟喹諾酮類藥物檢測(cè)試劑盒以膠體金標(biāo)記高親和カ的單克隆抗體 為基礎(chǔ)制備而成，金標(biāo)抗體中金顆粒與抗體分子之間無價(jià)健形成，二者通過異性電荷間的范德華カ相結(jié)合，膠體金對(duì)單克隆抗體特異性和親和カ影響很小，且具有較高的標(biāo)記率。其中的氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-肢體金標(biāo)記物凍干在微孔試劑條中，在檢測(cè)過程中，能夠使金標(biāo)抗體與待檢樣品液充分接觸，充分反應(yīng)，從而減少誤差，増加整個(gè)體系的反應(yīng)靈敏度。因此，本實(shí)用新型試劑盒具有較高的特異性和靈敏度。本試劑盒對(duì)恩諾沙星、沙拉沙星、雙氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、依諾沙星、培氟沙星、氟甲喹、噁喹酸、達(dá)氟沙星檢測(cè)靈敏度分別為 20 μ g/L,20 μ g/L,20 μ g/L,20 μ g/L,20 μ g/L,20 μ g/L,40 μ g/L,20 μ g/L、20 μ g/L、40 μ g/L、20 μ g/L。2.操作簡便快速。使用試劑盒檢測(cè)時(shí)無需任何其它試劑，只要將待檢樣品溶液滴加于微孔試劑中，混勻后，孵育5min，將試紙標(biāo)有MAX線標(biāo)記端向下，插入孵育后的微孔試劑后計(jì)時(shí)，5min內(nèi)觀察結(jié)果。3.顯示檢測(cè)結(jié)果形象、直觀準(zhǔn)確。檢測(cè)試紙條以顯示紅線色“ I ”及“ I I ”印跡作為陽性和陰性標(biāo)記，即在硝酸纖維素膜上顯示一條紅線“ I ”印跡表示在被檢測(cè)樣本液中氟喹諾酮類藥物的含量高于或等于試劑盒對(duì)氟喹諾酮類藥物的最低檢測(cè)限，兩條紅線“ 11 ”印跡表示在被檢測(cè)樣本中氟喹諾酮類藥物含量低于試劑盒對(duì)氟喹諾酮類藥物的最低檢測(cè)限，結(jié)果判定形象、直觀、準(zhǔn)確、簡單明了，不容易出現(xiàn)結(jié)果誤判。4.成本低，投資少。使用本實(shí)用新型試劑盒，不需另配儀器設(shè)備及其他試劑，使現(xiàn)場檢測(cè)一歩到位，成本低廉，投資少，見效快。5.易于大范圍推廣應(yīng)用。試劑盒操作簡單，能較好滿足不同層次人員的需要，如專業(yè)化驗(yàn)、海關(guān)檢疫、衛(wèi)生防疫、質(zhì)量監(jiān)測(cè)、乳業(yè)企業(yè)等，具有廣闊的市場前景和較大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。

圖I為本實(shí)用新型試紙條結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本實(shí)用新型試紙條俯視圖；圖3為本實(shí)用新型微孔試劑圖；圖4. a、圖4. b、圖4. C、圖4. d為本實(shí)用新型試紙條檢測(cè)結(jié)果判定圖；圖5為本實(shí)用新型試劑桶結(jié)構(gòu)示意圖；圖6為本實(shí)用新型固定用具的俯視圖；[0021]圖7為本實(shí)用新型盒體與固定用具的側(cè)視圖。
具體實(shí)施方式
一、氟喹諾酮類藥物檢測(cè)試劑盒的組裝制備I)試紙條樣品吸收墊I、反應(yīng)膜2、吸水墊3和保護(hù)膜依次按順序黏貼在所述底板6上，樣品吸收墊的末端與反應(yīng)膜始端相連，反應(yīng)膜的末端與吸水墊相連，樣品吸收墊的始端與底板的始端對(duì)齊，吸水墊的末端與底板的末端對(duì)齊，試紙兩端黏貼有保護(hù)膜，保護(hù)膜7-1覆蓋在吸水墊上手柄端，保護(hù)膜7-2覆蓋在樣品吸收墊的檢測(cè)端，在檢測(cè)端保護(hù)膜上印有MAX標(biāo)記線，檢測(cè)線4包被有氟喹諾酮類藥物-載體蛋白偶聯(lián)物，質(zhì)控線5包被有羊抗鼠抗抗體。 底板為PVC底板，樣品吸收墊為吸濾紙，反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜，吸水墊為吸水紙，保護(hù)膜為PE材質(zhì)保護(hù)膜。2)微孔試劑條微孔試劑條8具有膠塞9，板孔中凍干有氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物。3)將I)試紙條和2)微孔試劑條裝入具有密封蓋的塑料試劑桶10，將塑料試劑桶放置于試劑盒盒體12內(nèi)的固定用具11中。ニ、試劑盒的使用待檢牛奶樣品溶液滴加200 μ I到微孔試劑中，混勻后，孵育5min，將試紙標(biāo)有MAX線標(biāo)記端向下，插入孵育后的微孔試劑后計(jì)吋，5min內(nèi)觀察結(jié)果。三、檢測(cè)結(jié)果分析氟喹諾酮類藥物在樣本中的含量高于或等于試劑盒對(duì)其的最低檢測(cè)限吋，氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物與氟喹諾酮類藥物結(jié)合，金標(biāo)抗體上的抗原結(jié)合位點(diǎn)被封閉，從而在檢測(cè)區(qū)內(nèi)因?yàn)楦偁幏磻?yīng)，不會(huì)與氟喹諾酮類藥物-載體蛋白偶聯(lián)物結(jié)合而不出現(xiàn)紅色條帯。陰性樣本在檢測(cè)過程中由于缺少抗原抗體競爭反應(yīng)，將會(huì)在檢測(cè)線和質(zhì)控線上出現(xiàn)紅色條帶。如圖4. a、圖4. b、圖4. C、圖4. d所示。陽性當(dāng)質(zhì)控線(C)顯示一條紅色條帶，而檢測(cè)線(T)不顯色，試紙條以顯示紅線色“ I”，判為陽性，如圖4. a圖所示。陰性當(dāng)質(zhì)控線(C)顯示一條紅色條帯，檢測(cè)線(T)同時(shí)也顯示出一條紅色條帯，且檢測(cè)線(T)顔色接近或淺于質(zhì)控線(C)時(shí)，試紙條以顯示紅線色為“I |”，判為陰性，如圖
4.b所示。無效當(dāng)質(zhì)控線(C)不顯示出紅色條帯，則無論檢測(cè)線(T)顯示出紅色條帶與否，該試紙條判為無效，如圖4. c、4. d所示。四、檢測(cè)試劑盒中用到的材料制備方法I、氟喹諾酮類藥物-載體蛋白偶聯(lián)物的合成與鑒定氟喹諾酮類藥物是小分子物質(zhì)，只有免疫反應(yīng)性，沒有免疫原性，不能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，必須與大分子載體蛋白偶聯(lián)后才具有免疫原性。I)諾氟沙星衍生物合成將諾氟沙星Immol，溶于55ml三氯甲烷中，加入DCC 2mmol，DMAP催化劑適量，對(duì)氨基苯こ酸こ酯I. 5mmol,室溫?cái)嚢?h, TLC監(jiān)測(cè)原料消失,過濾,將液相水洗,無水NaS2O4干燥，柱層析純化(洗脫劑，こ酸こ酷/石油醚，1/5)。將上述產(chǎn)物溶于甲醇中，加NaOH O. 76g，60 V室溫?cái)嚢?h，TLC監(jiān)測(cè)原料消失，減壓脫溶劑，將得到的粘稠物溶于Imo 1/L NaOH溶液，調(diào)節(jié)pH3 5，こ酸こ酯萃取，干燥，柱層析純化(洗脫劑，こ酸こ酯/石油醚，1/1)，得喹諾酮類半抗原。2)免疫原的制備-氟喹諾酮類藥物與牛血清白蛋白偶聯(lián)物合成取15mg諾氟沙星半抗原，溶解于ImL DMF中，取15mg EDC用O. 2ml水充分溶解后加入諾氟沙星溶解液中，室溫下攪拌24h，即可得到反應(yīng)液A。稱取BSA 40mg，使之充分溶解在3mL PBS(PH 7.2)中，將反應(yīng)液A逐滴緩慢滴加到蛋白溶液中，并于室溫下攪拌24h，用
O.Olmol/L PBS 4°C透析3d姆天換3次透析液，以除去未反應(yīng)的小分子物質(zhì)。分裝,于_20°C保存?zhèn)溆谩?)包被原的制備-氟喹諾酮類藥物與卵清蛋白偶聯(lián)物合成 取20mg諾氟沙星半抗原，溶解于ImL DMF中，取15mg EDC用O. 2ml水充分溶解后加入諾氟沙星溶解液中，室溫下攪拌24h，即可得到反應(yīng)液A。稱取OVA 30mg,使之充分溶解在3mL PBS(PH 7.2)中，將反應(yīng)液A逐滴緩慢滴加到蛋白溶液中，并于室溫下攪拌24h，用
O.01mol/L PBS 4°C透析3d姆天換3次透析液，以除去未反應(yīng)的小分子物質(zhì)。分裝，于_20で保存?zhèn)溆谩?)氟喹諾酮類藥物-載體偶聯(lián)物的鑒定將載體蛋白、氟喹諾酮類藥物、氟喹諾酮類藥物-載體蛋白偶聯(lián)物用pH7. 4的PBS配成O. 5mg/ml的溶液，以O(shè). 01mol/L ρΗ7· 4PBS調(diào)零，用紫外分光光度計(jì)在波長200_800nm范圍內(nèi)掃描，得到載體蛋白、氟喹諾酮類藥物、氟喹諾酮類藥物-載體蛋白偶聯(lián)物的吸收曲線。三者出現(xiàn)不同的吸收曲線，表明氟喹諾酮類藥物與載體蛋白偶聯(lián)成功。2、氟喹諾酮類藥物單克隆抗體的制備A.動(dòng)物免疫將步驟I得到的免疫原注入到Balb/c小鼠體內(nèi)，免疫劑量為150 μ g/只，使其產(chǎn)
生抗血清。B.細(xì)胞融合和克隆化取免疫Balb/c小鼠脾細(xì)胞，按9 I (數(shù)量配比)比例與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選得到穩(wěn)定分泌氟喹諾酮類藥物單克隆抗體的氟喹諾酮類藥物單克隆雜交瘤細(xì)胞株。C.細(xì)胞凍存和復(fù)蘇將雜交瘤細(xì)胞用凍存液制成IX IO9個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，在液氮中長期保存。復(fù)蘇時(shí)取出凍存管，立即放入37°C水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)。D.單克隆抗體的制備與純化增量培養(yǎng)法將雜交瘤細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)基中，在37°C條件下進(jìn)行培養(yǎng)，用辛酸-飽和硫酸銨法將得到的培養(yǎng)液進(jìn)行純化，得到單克隆抗體，_20°C保存。所述細(xì)胞培養(yǎng)基為向RPMI-1640培養(yǎng)基中添加小牛血清和碳酸氫鈉，使小牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)基中的終濃度為20% (質(zhì)量百分含量)，使碳酸氫鈉在細(xì)胞培養(yǎng)基中的終濃度為0. 2% (質(zhì)量百分含量)；所述細(xì)胞培養(yǎng)基的pH為7. 4。3、羊抗鼠抗抗體的制備[0058]以羊作為免疫動(dòng)物，以鼠源抗體為免疫原對(duì)無病原體羊進(jìn)行免疫，得到羊抗鼠抗抗體。4、氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的制備(I)膠體金的制備用雙蒸去離子水將I %氯金酸(購于sigma公司，產(chǎn)品目錄號(hào)T09041)稀釋成
O.01% (質(zhì)量百分含量)，置磁力加熱棒攪拌器上攪拌煮沸，每IOOml O. 01%氯金酸加入
2.5ml I %檸檬酸三鈉(購于廣州化學(xué)試劑廠，產(chǎn)品目錄號(hào)BGl I-AR-01KG)，繼續(xù)攪拌加熱反應(yīng)至液體呈紅色時(shí)停止加熱，冷卻至室溫后補(bǔ)足失水。制備好的膠體金外觀純凈、透亮、無沉淀和漂浮物。(2)氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的制備在磁力攪拌下,用O. 2mol/L碳酸鉀調(diào)膠體金的pH值至7. O,按50 100 μ g抗體/ml膠體金的標(biāo)準(zhǔn)向膠體金溶液中加入上述氟喹諾酮類藥物單克隆抗體，繼續(xù)攪拌混勻30min，加入10% BSA至BSA在膠體金溶液中的終濃度為1% (體積百分含量)，靜置30min。12000rpm、4°C離心30min,棄上清液,沉淀用復(fù)溶緩沖液洗漆兩次,用體積為初始膠體金體積1/20的復(fù)溶緩沖液將沉淀重懸，得到的氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-肢體金標(biāo)記物溶液的濃度為50 μ g單抗/ml溶液，置4°C備用。復(fù)溶緩沖液含酪蛋白、吐溫-80的O. 02mol/L,pH7. 2的磷酸鹽溶液，其中酪蛋白在復(fù)溶緩沖液中的終濃度為O. 05-0. I % (體積百分含量)，吐溫-80在復(fù)溶緩沖液中的終濃度為O. 05-0. 15% (質(zhì)量百分含量)。5、將氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物凍干到微孔試劑上向微孔試劑微孔板中加入100 μ I氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物，放入冷凍干燥機(jī)中，冷阱溫度為-70°C條件下，預(yù)凍4h后，再凍干14h，即可取出，得到凍干有氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的微孔試劑。6、樣品吸收墊的準(zhǔn)備將樣品吸收墊置于含牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在緩沖液中的終濃度為O. 5%(體積百分含量))、pH為7. 2、0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中浸泡2h，37°C烘2h備用。7、反應(yīng)膜的制備包被過程用磷酸緩沖液將氟喹諾酮類藥物-卵清蛋白偶聯(lián)物稀釋到10mg/mL，用Biodot點(diǎn)膜儀將其包被于硝酸纖維素膜上的檢測(cè)線，包被量為I. Oy g/cm2 ;用O. Olmol/L、pH 7. 4PBS緩沖液將羊抗鼠IgG抗體稀釋到200 μ g/ml，用Biodot點(diǎn)膜儀將其包被于硝酸纖維素膜上的質(zhì)控線，包被量為l.Oyg/cm2。將包被好的反應(yīng)膜置于37°C條件下干燥2h，備用。
權(quán)利要求1.一種檢測(cè)牛奶中氟喹諾酮類藥物的膠體金試劑盒，其特征在于包括凍干有氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-肢體金標(biāo)記物的微孔試劑條和試紙條，試紙條由底板、附著在底板上依次緊密相連的樣品吸收墊、反應(yīng)膜、吸水墊和保護(hù)膜組成，所述反應(yīng)膜上具有包被有氟喹諾酮類藥物-載體蛋白偶聯(lián)物構(gòu)成的檢測(cè)線印跡“ I ”和包被羊抗鼠抗抗體構(gòu)成的質(zhì)控線印跡“ I ”。
2.如權(quán)利要求I所述的膠體金試劑盒，其特征在于所述檢測(cè)線與質(zhì)控線平行。
3.如權(quán)利要求I或2所述的膠體金試劑盒，其特征在于所述的檢測(cè)線位于距離樣品吸收墊ー側(cè)5 8mm，所述質(zhì)控線位于距離檢測(cè)線Γ7πιπι。
4.如權(quán)利要求I所述的膠體金試劑盒，其特征在于，所述試紙條兩端貼有保護(hù)膜，覆蓋在吸水端上的為手柄端，覆蓋在樣品吸收墊上的為檢測(cè)端，檢測(cè)端保護(hù)膜上有MAX標(biāo)記線。
5.如權(quán)利要求I所述的膠體金試劑盒，其特征在于所述微孔試劑條的反應(yīng)孔上具有膠塞。
6.如權(quán)利要求I所述的檢膠體金試劑盒,所述底板可為PVC底板或其他硬質(zhì)不吸水的材料，樣品吸收墊可為吸濾紙或?yàn)V油紙，吸水墊為吸水紙，反應(yīng)膜可為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜，保護(hù)膜為PE材質(zhì)保護(hù)膜。
7.如權(quán)利要求I所述的膠體金試劑盒，其特征在于所述試劑盒中還有固定用具及固定其中用于盛裝微孔試劑條和試紙條的試劑桶。
8.如權(quán)利要求書7所述的膠體金試劑盒，其特征在于所述試劑盒盒體為硬紙盒，試劑桶為塑料試劑桶，固定用具是硬質(zhì)支撐材料。
9.如權(quán)利要求8所述的膠體金試劑盒，其特征在于所述試劑桶上具有密封蓋。
專利摘要本實(shí)用新型提供了一種檢測(cè)牛奶中氟喹諾酮類藥物的膠體金試劑盒，包括凍干有氟喹諾酮類藥物單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的微孔試劑條和試紙條，試紙條由底板、附著在底板上依次緊密相連的樣品吸收墊、反應(yīng)膜、吸水墊和保護(hù)膜組成，所述反應(yīng)膜上具有包被有氟喹諾酮類藥物-載體蛋白偶聯(lián)物構(gòu)成的檢測(cè)線印跡“︱”和包被羊抗鼠抗抗體構(gòu)成的質(zhì)控線印跡“︱”。本實(shí)用新型試劑盒具有便攜性好，靈敏度高，檢測(cè)時(shí)間短等特點(diǎn)，可以在牛奶中氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)中發(fā)揮重要作用。
文檔編號(hào)G01N33/558GK202631541SQ201220110529
公開日2012年12月26日 申請(qǐng)日期2012年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月22日
發(fā)明者馮才偉, 吳鵬, 馮靜, 朱亮亮, 田甜, 王子健, 王建霞, 趙赫 申請(qǐng)人:北京勤邦生物技術(shù)有限公司