一種藏藥組合物風濕塞隆制劑的質量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種藏藥組合物風濕塞隆制劑的質量檢測方法。本發(fā)明對現(xiàn)有的風濕塞隆制劑的質量標準進行了相應的提高，對原標準中紫草茸、木香的鑒別方法進行了優(yōu)化，并在原標準的基礎上增加了刺柏、丁香、綠絨蒿、藏茜草、豆蔻的鑒別，增加了總黃酮、印度獐牙菜的含量測定方法，馬兜鈴酸A的檢查方法，進一步確保了產品質量安全、有效、均一、穩(wěn)定、質量可控。
【專利說明】—種藏藥組合物風濕塞隆制劑的質量檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藏藥組合物的質量檢測方法，特別涉及一種藏藥組合物風濕塞隆制劑的質量檢測方法，屬于醫(yī)藥【技術領域】。
【背景技術】
[0002]風濕一詞起源于古希臘，公元前4世紀，《希波克拉底全集》有關人體解剖一文中認為:人體的體液由于濕冷而下注于四肢、內臟引起疾病，即為風濕。我國《黃帝內經》也把風寒濕三期雜合稱為痹。
[0003]藏醫(yī)對于風濕研究比較早。藏醫(yī)認為，隆、赤巴、血、培根所致的痛風癥，脈象短而實緊像血熱癥一樣脈象緩慢，尿象不定，呈熱證，確診無誤的癥狀是尿有焦角味，發(fā)病時關節(jié)干痛。濕痹是關節(jié)腔內熱邪與黃水積聚，滲入關節(jié)腔內或遍及肉、骨、脈、筋等處，關節(jié)如粉碎樣疼痛的一種疾病。藏醫(yī)學上用放血、瀉下、服藥三種方法來進行治療。藏民們長期生活在高原的寒冷環(huán)境中患風濕類疾病在所難免，藏民們在長期與疾病作斗爭的過程中發(fā)現(xiàn)了塞隆骨對于風濕類疾病有良效。藏醫(yī)們用塞隆骨加上其他藥材，在藏醫(yī)“干黃水，調節(jié)培根、隆等紊亂”的理論指導下，配制成了風濕塞隆膠囊。
[0004]風濕塞隆膠囊收載于國家藥品標準，標準編號:WS-10788 (ZD-0788)-20020風濕塞隆膠囊對風濕、類風濕引起的關節(jié)炎、頸肩痛、腰背痛、足跟痛關節(jié)腫脹手指關節(jié)、腕關節(jié)腫痛、肢帶肌疼痛，強直性脊柱炎均有確切療效，是一級新藥組方、風濕骨病良藥。
[0005]然而，現(xiàn)有風濕塞隆膠囊的質量檢測標準僅采用TLC薄層鑒別兩味藥材紫草茸與木香、HPLC測定一個藥效成分沒食子酸的含量，而且所選的鑒定項目量太少沒有代表性，且不能有效的控制其他主要成分的質量。因此現(xiàn)有質量檢測方法不能全面、準確的控制本品質量，質量標準有待提高。

【發(fā)明內容】

[0006]針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的是提供一種藏藥組合物風濕塞隆制劑的質量檢測方法。
[0007]發(fā)明概述
[0008]本發(fā)明對現(xiàn)有的風濕塞隆制劑的質量標準進行了相應的提高，對原標準中紫草茸、木香的鑒別方法進行了優(yōu)化，并在原標準的基礎上增加了刺柏、丁香、綠絨蒿、藏茜草、豆蘧的鑒別，增加了總黃酮、印度獐牙菜的含量測定方法，馬兜鈴酸A的檢查方法，進一步確保了產品質量安全、有效、均一、穩(wěn)定、質量可控。
[0009]術語說明:
[0010]風濕塞隆膠囊是國家中成藥標準匯編(中成藥地方標準上升國家標準部分)記載的藥品名稱。
[0011]風濕塞隆制劑包括風濕塞隆膠囊及用風濕塞隆膠囊原料藥配方制備的其他制劑。
[0012]本發(fā)明的技術方案如下:[0013]一種原料藥組成為塞隆骨3.2重量份、訶子36.3重量份、紅花21.1重量份、豆蘧28.5重量份、巖精膏10.6重量份、印度猜牙菜10.6重量份、刀豆10.6重量份、山帆葉10.6重量份、藏茜草10.6重量份、紫草茸10.6重量份、刺柏10.6重量份、冰片3.2重量份、天竺黃10.6重量份、丁香4.2重量份、肉豆蘧6.3重量份、草果9.0重量份、沉香5.3重量份、白檀香9.5重量份、紫檀香6.1重量份、綠絨蒿6.1重量份、木棉花11.3重量份、木香9.5重量份、香旱芹9.5重量份、木香馬兜鈴5.3重量份、肉桂9.5重量份、螺厴6.1重量份、石斛
6.1重量份、甘松8.2重量、石花14.7重量份、花苜蓿5.3重量份、毛訶子5.3重量份、余甘子6.3重量份的風濕塞隆制劑的質量檢測方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測定中的一種或幾種:
[0014]鑒別:
[0015](I)紫草茸的鑒別
[0016]取風濕塞隆固體制劑5?15g,加醋酸乙酯10?20mL,超聲處理20?40分鐘,濾過，濾液濃縮至I?2mL，作為供試品溶液；另取紫草茸對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5?10 μ L,分別點于同一娃膠G薄層板上，以體積比4?6:4?6:0.5:1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，分別置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點；
[0017](2)木香的鑒別
[0018]取風濕塞隆固體制劑2?5g，加二氯甲烷10?20mL，超聲處理20?40分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；取木香對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5?10 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比5?8:1?2的二氯甲烷-環(huán)己烷為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1%香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0019](3)刺柏的鑒別
[0020]取風濕塞隆固體制劑5?15g,加水50?150mL,按水蒸氣蒸懼法提取揮發(fā)油,揮發(fā)油作為供試品；取刺柏對照藥材0.5?lg，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各2?5 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比7?9:3?I的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為I %硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0021](4)藏茜草的鑒別
[0022]取風濕塞隆固體制劑5?IOg,加甲醇10?20mL,超聲處理20?40分鐘,濾過,濾液濃縮至約I?2mL，作為供試品溶液；另取藏茜草藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各2?5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比2?6:1?2的沸程為60?90°C石油醚-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0023](5)綠絨蒿的鑒別[0024]取風濕塞隆固體制劑5?10g，加體積比1%鹽酸溶液20?30mL，超聲處理30?40分鐘，濾過，濾液用1%氫氧化鈉調堿至pH為10，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解約2mL，作為供試品溶液；另取綠絨蒿藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法進行試驗，吸取上兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比10?8:4?5:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加兩滴氨水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0025](6) 丁香的鑒別
[0026]取風濕塞隆固體制劑5?10g，加沸程為60_90°C石油醚50?80mL超聲，超聲處理30?40分鐘，濾過，濾液濃縮至I?2mL作為供試品溶液；另取丁香藥材Ig,同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8?9:2?I的石油醚(60?90°C )-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為I %硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0027](7)豆蘧的鑒別
[0028]取風濕塞隆固體制劑10?20g,加水80?IOOmL,按水蒸氣蒸懼法提取揮發(fā)油,揮發(fā)油作為供試品；取豆蘧對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各2?3 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比8?9:2?I的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0029]含量測定
[0030](I)總黃酮的含量測定
[0031]對照品溶液的制備:精密稱取蘆丁對照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得；
[0032]標準曲線的制備:精密量取上述對照品液0.0mLU.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL,分別置25mL量瓶中，編號為I至6號；各加水至5.0mL,加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液ImL,混勻,放置6分鐘,加重量體積份數(shù)比8-10%硝酸招溶液ImL,搖勻,放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15-20分鐘，以I號為空白；照《中國藥典》2010年版一部附錄V A紫外-可見分光光度法進行試驗，在500nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線；
[0033]測定法:取藏藥組合物風濕塞隆制劑細粉lg，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL置IOOmL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液4.0mL，置25mL量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加水至5.0mL”起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量(μ g/mL)，計算，即得；
[0034]本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆制劑中總黃酮的含量按蘆丁(C27H3tlO16)計，不得少于25mg/g ；
[0035](2)印度獐牙菜的含量測定
[0036]照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進行測定；
[0037]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25:70-75的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長243nm ;理論板數(shù)按獐牙菜苦苷峰計算應不低于2500 ；
[0038]對照品溶液的制備:取獐牙菜苦苷對照品適量，加乙醇制成每ImL含45 μ g的溶液，即得；
[0039]供試品溶液的制備:取藏藥組合物風濕塞隆制劑細粉約lg，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱定重量，回流提取I小時，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL，減壓濃縮至干，殘渣加水約20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，減壓濃縮至干，殘渣加乙醇溶解并定容至5mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0040]測定法:分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得;
[0041]本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆制劑中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)計，不得少于0.35mg/g ；
[0042](3)馬兜鈴酸A的檢查
[0043]照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進行測定；
[0044]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比40-45:55-60的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計算應不低于3000 ；
[0045]對照品溶液的制備:取馬兜鈴酸A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得；
[0046]供試品溶液的制備:取藏藥組合物風濕塞隆制劑細粉約10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL，低溫濃縮至干，殘渣加質量體積份數(shù)比0.5%氫氧化鈉溶液20mL使其完全溶解并轉移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20mL,萃取后堿液使用體積份數(shù)比5%鹽酸調節(jié)pH2?3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉移至ImL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0047]測定法:分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得;
[0048]本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆制劑中馬兜鈴酸A (C17H11NO7)的含量不得高于10 μ g/g°
[0049]優(yōu)選的，一種原料藥組成為塞隆骨3.2重量份、訶子36.3重量份、紅花21.1重量份、豆蘧28.5重量份、巖精膏10.6重量份、印度獐牙菜10.6重量份、刀豆10.6重量份、山帆葉10.6重量份、藏菌草10.6重量份、紫草鸞10.6重量份、刺柏10.6重量份、冰片3.2重量份、天竺黃10.6重量份、丁香4.2重量份、肉豆蘧6.3重量份、草果9.0重量份、沉香5.3重量份、白檀香9.5重量份、紫檀香6.1重量份、綠絨蒿6.1重量份、木棉花11.3重量份、木香9.5重量份、香旱療9.5重量份、木香馬5?鈴5.3重量份、肉桂9.5重量份、螺庵6.1重量份、石斛6.1重量份、甘松8.2重量、石花14.7重量份、花苜蓿5.3重量份、毛訶子5.3重量份、余甘子6.3重量份的風濕塞隆膠囊的質量檢測方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測定中的一種或幾種:
[0050]鑒別:
[0051](1)紫草茸的鑒別
[0052]取風濕塞隆膠囊內容物10g，加醋酸乙酯20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液；另取紫草茸對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各10 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5: 5: 0.5: 0.1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，分別置日光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點；
[0053](2)木香的鑒別
[0054]取風濕塞隆膠囊內容物3g，加二氯甲烷15mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；取木香對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各10 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8: I的二氯甲烷環(huán)己烷為展開劑，展開，取出，晾干，噴以I %香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0055](3)刺柏的鑒別
[0056]取風濕塞隆膠囊內容物10g，加水IOOmL,按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取刺柏對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0057](4)藏茜草的鑒別
[0058]取風濕塞隆膠囊內容物5g，加甲醇10mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約ImL,作為供試品溶液；另取藏茜草藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比為4:1的沸程為60~90°C石油醚丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0059](5)綠絨蒿的鑒別
[0060]取風濕塞隆膠囊內容物10g，加體積比1%鹽酸溶液30mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液用1%氫氧化鈉調堿至PH為10，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解至2mL，作為供試品溶液；另取綠絨蒿藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比為10:4:1正己烷-乙酸乙酯-甲醇，再滴加兩滴氨水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0061](6) 丁香的鑒別
[0062]取風濕塞隆膠囊內容物10g，加沸程為60_90°C的石油醚50mL超聲，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至ImL作為供試品溶液；另取丁香藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8:2的沸程60-90°C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0063](7)豆蘧的鑒別
[0064]取風濕塞隆膠囊內容物10g，加水IOOmL,按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取豆蘧對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0065]含量測定
[0066](I)總黃酮的含量測定
[0067]對照品溶液的制備:精密稱取蘆丁對照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得；
[0068]標準曲線的制備:精密量取上述對照品液0.0mLU.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL,分別置25mL量瓶中，編號為I至6號；各加水至5.0mL,加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液ImL,混勻,放置6分鐘,加重量體積份數(shù)比10%硝酸招溶液ImL,搖勻,放置6分鐘,加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以I號為空白；照《中國藥典》2010年版一部附錄V A紫外-可見分光光度法進行試驗，在500nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線；
[0069]測定法:取藏藥組合物風濕塞隆膠囊內容物lg，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL置IOOmL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液4.0mL,置25mL量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加水至5.0mL”起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量(μ g/mL)，計算，即得；
[0070]本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆膠囊中總黃酮的含量按蘆丁(C27H3tlO16)計，不得少于25mg/g。
[0071](2)印度獐牙菜的含量測定
[0072]照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進行測定；
[0073]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25:75的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長243nm ;理論板數(shù)按獐牙菜苦苷峰計算應不低于2500 ；[0074]對照品溶液的制備:取獐牙菜苦苷對照品適量，加乙醇制成每ImL含45 μ g的溶液，即得；
[0075]供試品溶液的制備:取藏藥組合物風濕塞隆膠囊內容物約lg，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱定重量，回流提取I小時，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL，減壓濃縮至干，殘渣加水約20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，減壓濃縮至干，殘渣加乙醇溶解并定容至5mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0076]測定法:分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得;
[0077]本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆膠囊中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)計，不得少于0.35mg/g。
[0078](3)馬兜鈴酸A的檢查
[0079]照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進行測定；
[0080]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比40:60的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計算應不低于3000 ；
[0081]對照品溶液的制備:取馬兜鈴酸A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得；
[0082]供試品溶液的制備:取藏藥組合物風濕塞隆膠囊內容物約10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL，低溫濃縮至干，殘渣加質量體積份數(shù)比0.5%氫氧化鈉溶液20mL使其完全溶解并轉移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20mL,萃取后堿液使用體積份數(shù)比5%鹽酸調節(jié)pH2?3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉移至ImL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0083]測定法:分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得;
[0084]本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆膠囊中馬兜鈴酸A (C17H11NO7)的含量不得高于10 μ g/g°
[0085]本發(fā)明重量份和體積份的關系為g/mL或kg/L的關系。
[0086]本發(fā)明的有益效果:
[0087]風濕塞隆膠囊原質量標準項下只有紫草茸、木香的薄層鑒別項及沒食子酸的含量測定項，不能有效的控制其他主要成分的質量。本發(fā)明對原標準進行了相應的提高，對原標準中紫草茸、木香的鑒別方法進行了優(yōu)化，并在原標準的基礎上增加了刺柏、丁香、綠絨蒿、藏茜草、豆蘧的鑒別，增加了總黃酮、印度獐牙菜的含量測定方法，馬兜鈴酸A的檢查方法，進一步確保了產品的安全性、均一性、穩(wěn)定性，使產品質量更有保證，進而確保產品的臨床療效和廣大患者的身體健康。同時本法還可用于風濕塞隆的其他制劑，如風濕塞隆顆粒、風濕塞隆丸、風濕塞隆片等。
[0088]下面的實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。[0089]所檢測的風濕塞隆膠囊為青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司生產。
[0090]實驗例1:鑒別實驗
[0091]1、紫草茸的鑒別
[0092]( I)供試品溶液制備方法研究:
[0093]甲醇超聲提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加甲醇30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。
[0094]醋酸乙酯提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2mL溶解，作為供試品溶液。
[0095]石油醚提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加沸程30_60°C的石油醚30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2mL溶解，作為供試品溶液。
[0096](2)薄層條件的研究:
[0097]采用硅膠G板，展開劑用甲苯-氯仿-丙酮-甲酸系統(tǒng)，比較了不同體積比例(4:4:0.6:0.1),(5:5:0.5:0.1)、(6:6:0.4:0.1)的展開效果，檢視方法為日光下檢視。
[0098]采用硅膠G板，展開劑用二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸系統(tǒng)，比較了不同比例(4:4:0.6:0.1),(5:5:0.5:0.1)、(6:6:0.4:0.1)的展開效果，檢視方法為日光下檢視。
[0099]采用硅膠G板，展開劑用環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸系統(tǒng)，比較了不同比例(4:1:1)、(4:2:1)、(4:0.5:1)的展開效果,檢視方法為置紫外光燈(365nm)下檢視。
[0100]采用硅膠G板，展開劑用甲苯-二氯甲烷-丙酮系統(tǒng)，比較了不同比例(4:5:0.5)、(5:5:0.5) (6:5:1)的展開效果，顯色劑選用體積分數(shù)為10%硫酸乙醇溶液,檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0101]本實驗還選用了體積比6:5:0.5的二甲苯-二氯甲烷-甲酸、體積比1:1沸程為60-90°C的石油醚-乙酸乙酯、體積比1:1的二甲苯-丙酮等展開系統(tǒng)；質量體積比為1%的香草醛硫酸乙醇溶液、質量體積比為5%硫酸乙醇溶液等顯色劑。
[0102]通過上述系統(tǒng)實驗，選出試驗條件為:
[0103]供試品溶液制備方法:乙酸乙酯提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加醋酸乙酯20mL,超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液。
[0104]展開系統(tǒng):體積比為5: 5: 0.5: 0.1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸
[0105]檢視方法:日光下檢視。
[0106]具體試驗方法為:
[0107]取風濕塞隆膠囊內容物5?15g，加醋酸乙酯10?20mL，超聲處理20?40分鐘，濾過，濾液濃縮至I?2mL，作為供試品溶液。另取紫草茸對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5?10 μ L,分別點于同一娃膠G薄層板上，以體積比4?6:4?6:0.5:1的二甲苯_ 二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，分別置日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點，陰性無干擾。
[0108]結果分析:紫草茸TLC結果顯示，展開劑以體積比為4?6:4?6:0.5:1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸條件下有較好的展開效果，體積分數(shù)比5: 5: 0.5: 0.1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸條件下展開效果最好，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾，結果見圖1。此方法可以作為風濕塞隆膠囊中紫草茸的鑒別方法。
[0109]2、木香的鑒別
[0110](I)供試品溶液制備方法研究:
[0111]甲醇超聲提取:取風濕塞隆膠囊內容物3g，加甲醇30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。
[0112]醋酸乙酯提取:取風濕塞隆膠囊內容物3g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2mL溶解，作為供試品溶液。
[0113]石油醚提取:取風濕塞隆膠囊內容物3g，加沸程30_60°C的石油醚30mL，超聲處理30min,濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯2mL溶解，作為供試品溶液。
[0114]二氯甲烷提取:取風濕塞隆膠囊內容物3g，加二氯甲烷30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加二氯甲烷2mL溶解，作為供試品溶液。
[0115]提取揮發(fā)油:取風濕塞隆膠囊內容物3g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；
[0116](2)薄層條件的研究:
[0117]采用硅膠G板，展開劑用正己烷-醋酸乙酯系統(tǒng)，比較了不同體積比例(5:1)、(5:2),(5:3)的展開效果，顯色劑選用質量體積比為1%香草醛硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0118]采用硅膠G板，展開劑用石油醚-醋酸乙酯系統(tǒng)，比較了不同體積比例(6:2)、(6:1)、(6:3)的展開效果，顯色劑選用質量體積比為1%香草醛硫酸溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0119]采用硅膠G板，展開劑用乙酸乙酯-環(huán)己烷系統(tǒng)，比較不同體積比例(5:1 )、(6:1 )、(4:1)下層的展開效果，顯色劑選用質量體積比1%香草醛硫酸溶液，檢視方法為日光下檢視。
[0120]采用硅膠G板，展開劑用二氯甲烷-環(huán)己烷系統(tǒng)，比較了不同體積比例(8:1)、(5:1),(4:1)的展開效果，顯色劑選用體積分數(shù)為10%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0121]本實驗還選用了體積比5:1的氯仿-正己烷、體積比5:1的環(huán)己烷-醋酸乙酯、體積比5:2的二甲苯-環(huán)己烷等展開系統(tǒng)；質量體積比為1%硫酸乙醇溶液、質量體積比為1%的硫酸溶液、質量體積比為1%香草醛硫酸溶液等顯色劑。
[0122]通過上述系統(tǒng)實驗，選出實驗條件為:
[0123]供試品溶液制備方法:二氯甲烷超聲提取:取風濕塞隆膠囊內容物5g，加二氯甲烷15mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。
[0124]展開系統(tǒng):二氯甲烷-環(huán)己烷。
[0125]顯色劑:質量體積比為1%香草醛硫酸乙醇溶液。
[0126]檢視方法:105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0127]具體試驗方案為:
[0128]取風濕塞隆膠囊內容物2?5g，加二氯甲烷10?50mL，超聲處理20?40分鐘，濾過，濾液濃縮至I?5mL,作為供試品溶液；另取木香對照藥材0.5g,同法制成對照藥材溶液；另取按處方比例配制的缺木香的陰性對照樣品，同法制成陰性對照溶液。照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取木香對照藥材溶液I?5 μ L，供試品溶液3?8 μ L，陰性對照溶液3?8 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5?8:1?3的二氯甲烷-環(huán)己烷為展開劑，展開，取出，晾干，噴以質量體積比為1%香草醛硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。
[0129]結果分析:檀香TLC結果顯示，展開劑以體積比為5?8:1?3的二氯甲烷-環(huán)己烷條件下有較好的展開效果，在體積比為8:1的二氯甲烷-環(huán)己烷條件下展開效果最好，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾，結果見圖2。此方法可以作為風濕塞隆膠囊中木香藥材的鑒別方法。
[0130]3、藏茜草的鑒別
[0131](I)供試品溶液制備方法研究:
[0132]甲醇超聲提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加甲醇30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。
[0133]醋酸乙酯提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2mL溶解，作為供試品溶液。
[0134]正丁醇提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加正丁醇30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。
[0135]甲醇超聲，調pH值，二氯甲烷提取:取本品內容物10g，加甲醇30mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加體積比為1%鹽酸20mL使溶解，濾過，濾液加氨水調至堿性，用二氯甲烷振搖提取2次，每次20mL，合并二氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為供試品溶液。
[0136]石油醚(60_90°C)回流提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加石油醚(60_90°C)30mL,回流提取30min，濾過，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液。
[0137](2)薄層條件的研究:
[0138]采用硅膠G板，展開劑用石油醚(60-90°C)-甲酸乙酯-甲酸系統(tǒng)，比較了不同比例(15:5:1)、( 4:1:1)、( 15:10:1)的展開效果，顯色劑選用質量體積比為5%香草醛硫酸溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0139]采用硅膠G板，展開劑用石油醚(60-90 °C )-丙酮系統(tǒng)，比較了不同體積比例(4:1)、(5:1)、(5:2)的展開效果,檢視方法為紫外光燈(365nm)下檢視。
[0140]采用硅膠GF254板，展開劑用二甲苯-丙酮系統(tǒng)，比較了不同比例(4:1)、(6:1)、(2:1)的展開效果，檢視方法為紫外光燈(254nm)下檢視，然后再噴以5%香草醛硫酸溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0141]本實驗還選用了體積比4:1的二甲苯-醋酸乙酯、體積比4:1的環(huán)己烷醋酸乙酯、體積比9:1的二甲苯-甲醇等展開系統(tǒng)。
[0142]通過上述系統(tǒng)實驗，選出實驗條件為:
[0143]供試品溶液制備方法:取風濕塞隆膠囊內容物5g，加甲醇30mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約lmL，作為供試品溶液。
[0144]展開系統(tǒng):體積比4:1的石油醚(60?90°C)_丙酮[0145]檢視方法:置365nm紫外光燈下檢視。
[0146]具體試驗方案為:
[0147]取風濕塞隆膠囊內容物5?15g，加甲醇10?50mL，超聲處理20?40分鐘，濾過，濾液濃縮至約lmL，作為供試品溶液。取藏茜草對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。另取按處方比例配制的缺藏茜草的陰性對照樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取對照藥材溶液2?8 μ L,供試品及陰性對照溶液各5?15 μ L,分別點于同一娃膠G薄層板上，以體積比2?6:1?2的石油醚(60?90°C)-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。
[0148]結果分析:藏茜草TLC結果顯示，展開劑以體積比2?6:1?2的二甲苯-乙醇條件下有較好的展開效果，在體積比為4:1的石油醚(60?90°C)_丙酮條件下展開效果最好，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾，結果見圖3。此方法可以作為風濕塞隆膠囊中藏茜草藥材的鑒別方法。
[0149]4、刺柏的鑒別
[0150](I)供試品溶液制備方法研究:
[0151]體積分數(shù)95%乙醇提取:取風濕塞隆膠囊內容物5g，加體積分數(shù)95%乙醇30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加體積分數(shù)為95%醇2mL溶解，作為供試品溶液。
[0152]醋酸乙酯提取:取風濕塞隆膠囊內容物5g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2mL溶解，作為供試品溶液。
[0153]石油醚(60?90°C)提取:取風濕塞隆膠囊內容物5g，加石油醚(60?90°C)30mL，超聲處理30min,濾過,濾液濃縮至ImL,作為供試品溶液。
[0154]提取揮發(fā)油:取風濕塞隆膠囊內容物5g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；
[0155](2)薄層條件的研究:
[0156]采用硅膠G板，展開劑用三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸系統(tǒng)，比較了不同體積比例(6:4:1),(6:6:1),(6:8:1)的展開效果，顯色劑選用質量體積比為1%三氯化鐵乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0157]采用硅膠G板，展開劑用二甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水的上層溶液系統(tǒng)，比較了不同體積比例(7:10:3:4)、(10:10:3:4)、(4:10:3:4)的展開效果，顯色劑選用質量體積比為1%三氯化鐵乙醇溶液，日光下檢視。
[0158]采用硅膠GF254板，展開劑用二甲苯-丙酮系統(tǒng)，比較了不同體積比例(4:1)、(6:1)、(2:1)的展開效果，檢視方法為紫外光燈(254nm)下檢視，然后再噴以質量體積比5%香草醛硫酸溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0159]采用硅膠G板，展開劑用石油醚-醋酸乙酯系統(tǒng)，比較了不同體積比例(8:2)、(9:1),(8.5:1.5)的展開效果，顯色劑選用體積分數(shù)為10%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0160]本實驗還選用了體積比7:3:1的二甲苯-醋酸乙酯-甲酸、4:1環(huán)己烷-醋酸乙酯、1:1 二甲苯-醋酸乙酯等展開系統(tǒng)；質量體積比為1%三氯化鋁乙醇溶液、質量體積比為5%磷鑰酸乙醇溶液等顯色劑。
[0161]通過上述系統(tǒng)實驗，選出試驗條件為:
[0162]供試品溶液制備方法:取風濕塞隆膠囊內容物5g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及ImL醋酸乙酷)，?Η煮完成后，收集醋Ife乙酷部分，作為供試品溶液；
[0163]展開劑:石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)。
[0164]展開劑:體積比為8.5:1.5。
[0165]檢視方法:噴以體積比I %硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0166]具體試驗方案為:
[0167]取風濕塞隆膠囊內容物5~10g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；取刺柏對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。另取按處方比例配制的刺柏的陰性對照樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比8~9:2~I石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，105°C烘至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。
[0168]結果分析:刺柏TLC結·果顯示，以體積比為8~9:2~I的石油醚-乙酸乙酯為展開劑條件下有較好的展開效果，在體積比為8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯條件下效果最好，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾，結果見圖4。此方法可以作為風濕塞隆膠囊中刺柏的鑒別方法。
[0169]5、綠絨蒿的鑒別
[0170](I)供試品溶液制備方法研究:
[0171]甲醇超聲提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加甲醇30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。
[0172]醋酸乙酯提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2mL溶解，作為供試品溶液。
[0173]石油醚提取:取風濕塞隆膠囊內容物IOg,加石油醚30mL,超聲處理30min,濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯2mL溶解，作為供試品溶液。
[0174]酸液煎煮，調pH，二氯甲烷提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加體積比1%鹽酸溶液30mL,超聲處理30min,濾過,濾液用1%氫氧化鈉調堿至pHIO,再用二氯甲燒等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解約2mL，作為供試品溶液。
[0175](2)薄層條件的研究::
[0176]采用硅膠G板，展開劑用石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)，比較了不同體積體積比例(8:2)、(8:1),(8.5:1.5)的展開效果，顯色劑選用體積比為10%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0177]采用硅膠GF254板，展開劑用醋酸乙酯-甲醇-水系統(tǒng)，比較了不同體積比例(5:1:0.5),(5:0.5:0.5),(5:1.5:0.5)的展開效果，檢視方法為置254nm紫外光燈下檢視。
[0178]采用硅膠G板，展開劑用正己烷-乙酸乙酯-甲醇再加兩滴氨水溶液系統(tǒng)，比較了不同體積比例(10:4:0.1),(10:2:0.5),(10:8:1)的展開效果，顯色劑選用稀碘化鉍鉀溶液，檢視方法日光下檢視。
[0179]本實驗還選用了體積比10:1:0.5三氯甲烷-甲醇-水、體積比10:1.5:0.5的二甲苯-甲酸乙酯-二氯甲烷等展開系統(tǒng)；質量體積比為1%三氯化鋁乙醇溶液、質量體積比為1%的香草醛硫酸乙醇溶液、質量體積比為％硫酸乙醇溶液等顯色劑。
[0180]通過上述系統(tǒng)實驗，選出試驗條件為:
[0181]供試品溶液制備方法:取風濕塞隆膠囊內容物5g，加體積比1%鹽酸溶液30mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液用1%氫氧化鈉調堿至pHIO，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解約2mL，作為供試品溶液。
[0182]展開系統(tǒng):體積比10:4:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇，再滴加兩滴氨水系統(tǒng)。
[0183]顯色劑:稀碘化鉍鉀溶液。
[0184]檢視方法:日光下檢視。
[0185]具體試驗方案為:
[0186]取風濕塞隆膠囊內容物5?10g，加體積比1%鹽酸溶液30?40mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液用1%氫氧化鈉調堿至PH10，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解約2mL，作為供試品溶液。另取綠絨蒿藥材lg，同法制成對照藥材溶液。照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8?10:4?6:1正己烷-乙酸乙酯-甲醇，再滴加兩滴氨水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下見識。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾。
[0187]結果分析:綠絨蒿TLC結果顯示，展開劑以體積比為8?10:4?6:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加兩滴氨水條件下有較好的展開效果，在體積比為10:4:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再加兩滴氨水條件下展開效果最好，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾，結果見圖5。此方法可以作為風濕塞隆膠囊中綠絨蒿藥材的鑒別方法。
[0188]6、丁香的鑒別
[0189](I)供試品溶液制備方法研究:
[0190]甲醇超聲提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加甲醇30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。
[0191]醋酸乙酯提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2mL溶解，作為供試品溶液。
[0192]石油醚提取:取風濕塞隆膠囊內容物5g,加石油醚30mL,超聲處理30min,濾過,濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。
[0193]提取揮發(fā)油:取風濕塞隆膠囊內容物10g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；[0194](2)薄層條件的研究:
[0195]采用硅膠G板，展開劑用石油醚(60?90°C)-乙酸乙酯系統(tǒng)，比較了不同體積比例(7:1.5)、(8.5:1.5),(9:1)的展開效果，顯色劑選用質量體積比為1%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0196]采用硅膠G板，展開劑用二氯甲烷-甲醇-甲酸系統(tǒng)，比較了不同體積比例(7:0.7:0.2),(8:1:0.2)、(8:0.5:0.2)的展開效果，顯色劑選用體積比為10%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0197]采用硅膠G板，展開劑用醋酸乙酯-冰醋酸-甲醇系統(tǒng)，比較了不同體積比例(7:3:1),(8:2:1),(7:1:1)的展開效果，顯色劑選用體積比分數(shù)10%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0198]本實驗還選用了體積比5:5的二甲苯-甲酸乙酯、體積比9:1:1的醋酸乙酯-甲酸-水等展開系統(tǒng)；質量體積比為1%三氯化鋁乙醇溶液、質量體積比為1%的香草醛硫酸溶液等顯色劑。
[0199]通過上述系統(tǒng)實驗，選出試驗條件為:
[0200]供試品溶液制備方法:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加石油醚(60_90°C) 50mL超聲，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至ImL作為供試品溶液。展開系統(tǒng):三氯甲烷-甲醇-水-甲酸的下層溶液
[0201 ] 顯色劑:體積分數(shù)10%硫酸乙醇溶液。
[0202]檢視方法:105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0203]具體試驗方案為:
[0204]取風濕塞隆膠囊內容物5?10g，加石油醚(60_90°C) 10?50mL，超聲處理20?40分鐘，濾過，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液。另取丁香對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。另取按處方比例配制的缺丁香的陰性對照樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述3種溶液各2?8 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為9?1:1?2的沸程為60?90°C的石油醚-乙酸乙酯的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。
[0205]結果分析:丁香TLC結果顯示，以體積比為9?1:1?2的石油醚(60?90°C )_乙酸乙酯的下層溶液為展開劑，有較好的展開效果，在體積比為8.5:1.5的石油醚(60?900C)-乙酸乙酯的下層溶液條件下展開效果最好。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾，結果見圖6。此方法可以作為風濕塞隆膠囊中丁香藥材的鑒別方法。
[0206]7、豆蘧的鑒別
[0207]( I)供試品溶液制備方法研究:
[0208]體積分數(shù)95%乙醇提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加體積分數(shù)95%乙醇30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加體積分數(shù)為95%醇2mL溶解，作為供試品溶液。
[0209]醋酸乙酯提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2mL溶解，作為供試品溶液。[0210]石油醚(60~90°C)提取:取風濕塞隆膠囊內容物10g，加石油醚(60~90°C )30mL,超聲處理30min,濾過,濾液濃縮至ImL,作為供試品溶液。
[0211]提取揮發(fā)油:取風濕塞隆膠囊內容物10g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；
[0212](2)薄層條件的研究:
[0213]采用硅膠G板，展開劑用三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸系統(tǒng)，比較了不同體積比例(6:4:1),(6:6:1),(6:8:1)的展開效果，顯色劑選用質量體積比為1%三氯化鐵乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0214]采用硅膠G板，展開劑用二甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水的上層溶液系統(tǒng)，比較了不同體積比例(7:10:3:4)、(10:10:3:4)、(4:10:3:4)的展開效果，顯色劑選用質量體積比為1%三氯化鐵乙醇溶液，日光下檢視。
[0215]采用硅膠GF254板，展開劑用二甲苯-丙酮系統(tǒng)，比較了不同體積比例(4:1)、(6:1)、(2:1)的展開效果，檢視方法為紫外光燈(25411111)下檢視，然后再噴以5%香草醛硫酸溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0216]采用硅膠G板，展開劑用石油醚-醋酸乙酯系統(tǒng)，比較了不同體積比例(8:2)、(9:1),(8.5:1.5)的展開效果，顯色劑選用體積分數(shù)為10%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0217]本實驗還選用了體積比7:3:1的二甲苯-醋酸乙酯-甲酸、體積比4:1的環(huán)己烷-醋酸乙酯、體積比1:1的二甲苯-醋酸乙酯等展開系統(tǒng)；質量體積比為1%三氯化鋁乙醇溶液、質量體積比為5%磷鑰酸乙醇溶液等顯色劑。
`[0218]通過上述系統(tǒng)實驗，選出試驗條件為:
[0219]供試品溶液制備方法:取風濕塞隆膠囊內容物5g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及ImL醋酸乙酷)，?Η煮完成后，收集醋Ife乙酷部分，作為供試品溶液；
[0220]展開劑:石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)。
[0221]展開劑:體積比為8.5:1.5。
[0222]檢視方法:噴以體積比I %硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。
[0223]具體試驗方案為:
[0224]取風濕塞隆膠囊內容物10~20g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；取豆蘧對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。另取按處方比例配制的豆蘧的陰性對照樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比8~9:2~I的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，105°C烘至斑點顯色清晰。。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。
[0225]結果分析:豆蘧TLC結果顯示，以體積比為8~9:2~I的石油醚-乙酸乙酯為展開劑條件下有較好的展開效果，在體積比為8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯條件下效果最好，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾，結果見圖7。此方法可以作為風濕塞隆膠囊中豆蘧的鑒別方法。
[0226]實驗例2:馬兜鈴酸A的檢查實驗
[0227]1.儀器、試藥和供試樣品
[0228]儀器:安捷倫1200型高效液相色譜儀；島津AUW220D電子天平。
[0229]對照品:馬兜鈴酸A對照品(中國藥品生物制品檢定所)，批號:110746-200806。
[0230]樣品:風濕塞隆膠囊，0.3g/粒(青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司)，批號:20110601,20110602,20110603ο
[0231]2.檢測波長的選擇
[0232]取馬兜鈴酸A對照品溶液，于19(T400nm波長范圍內進行掃描，馬兜鈴酸A在315nm波長處有最大吸收，故根據(jù)紫外吸收圖譜選定315nm為檢測波長。
[0233]3.流動相的選擇
[0234]分別研究了甲醇-水體系、甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液體系流動相條件下，馬兜鈴酸A色譜峰的分離效果，結果發(fā)現(xiàn)以甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液體系為流動相，馬兜鈴酸A色譜峰的峰形較好，甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液在體積份數(shù)比為40:60時，馬兜鈴酸A能夠達到較好的色譜分離效果。
[0235]4.對照品溶液的制備
[0236]取馬兜鈴酸A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得。
[0237]5.供試品溶液的制備
[0238]按含量測定項下方法對供試品溶液進行檢測。按供試品溶液的制備項下的方法，分別考察了不同提取方法、不同提取溶劑、不同提取時間條件下，馬兜鈴酸A的提取效果。以每克藥品中馬兜鈴酸A的含量為指標確定提取方法、提取溶劑、提取時間。結果見表1、表2和表3。
[0239]表1提取方法考察試驗結果
【權利要求】
1.一種原料藥組成為塞隆骨3.2重量份、訶子36.3重量份、紅花`21.1重量份、豆蘧`28.5重量份、巖精膏10.6重量份、印度猜牙菜10.6重量份、刀豆10.6重量份、山帆葉10.6重量份、藏茜草10.6重量份、紫草茸10.6重量份、刺柏10.6重量份、冰片3.2重量份、天竺黃10.6重量份、丁香4.2重量份、肉豆蘧6.3重量份、草果9.0重量份、沉香5.3重量份、白檀香9.5重量份、紫檀香6.1重量份、綠絨蒿6.1重量份、木棉花11.3重量份、木香9.5重量份、香旱芹9.5重量份、木香馬兜鈴5.3重量份、肉桂9.5重量份、螺厴`6.1重量份、石斛`6.1重量份、甘松8.2重量、石花14.7重量份、花苜蓿5.3重量份、毛訶子`5.3重量份、余甘子6.3重量份的風濕塞隆制劑的質量檢測方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測定中的一種或幾種: 鑒別: (1)紫草茸的鑒別 取風濕塞隆固體制劑5~15g,加醋酸乙酯10~20mL,超聲處理20~40分鐘,濾過，濾液濃縮至I~2mL，作為供試品溶液；另取紫草茸對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜 法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5~`10 μ L,分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比4~6:4~6:0.5:1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，分別置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點； (2)木香的鑒別 取風濕塞隆固體制劑2~5g，加二氯甲烷10~20mL，超聲處理20~40分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；取木香對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5~10 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比5~8:1~2的二氯甲烷-環(huán)己烷為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1%香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位 置上，顯相同顏色的斑點； (3)刺柏的鑒別 取風濕塞隆固體制劑5~15g,加水50~150mL,按水蒸氣蒸懼法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取刺柏對照藥材0.5~lg，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各2~5 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比7~9:3~I的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (4)藏茜草的鑒別 取風濕塞隆固體制劑5~IOg,加甲醇10~20mL,超聲處理20~40分鐘,濾過,濾液濃縮至約I~2mL，作為供試品溶液；另取藏茜草藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各2~5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比2~6:1~2的沸程為60~90°C石油醚-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； (5)綠絨蒿的鑒別取風濕塞隆固體制劑5~10g，加體積比1%鹽酸溶液20~30mL，超聲處理30~40分鐘，濾過，濾液用1%氫氧化鈉調堿至PH為10，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解約2mL，作為供試品溶液；另取綠絨蒿藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比10~8:4~5:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加兩滴氨水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑占.(6)丁香的鑒別 取風濕塞隆固體制劑5~10g，加沸程為60-90°C石油醚50~80mL超聲，超聲處理30~40分鐘，濾過，濾液濃縮至I~2mL作為供試品溶液；另取丁香藥材Ig,同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8~9:2~I的石油醚(60~90°C)_乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (7)豆蘧的鑒別 取風濕塞隆固體制劑10~20g，加水80~IOOmL,按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取豆蘧對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各2~3 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比8~9:2~I的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； 含量測定· (I)總黃酮的含量測定 對照品溶液的制備:精密稱取蘆丁對照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得； 標準曲線的制備:精密量取上述對照品液0.0mLU.0mL,2.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL,分別置25mL量瓶中，編號為I至6號；各加水至5.0mL,加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液ImL,混勻，放置6分鐘，加重量體積份數(shù)比8-10%硝酸鋁溶液lmL，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15-20分鐘，以I號為空白；照《中國藥典》2010年版一部附錄V A紫外-可見分光光度法進行試驗，在500nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線； 測定法:取藏藥組合物風濕塞隆制劑細粉lg，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL置IOOmL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液4.0mL,置25mL量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加水至5.0mL"起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量(μ g/mL)，計算，即得； 本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆制劑中總黃酮的含量按蘆丁(C27H3tlO16)計，不得少于25mg/g; (2)印度獐牙菜的含量測定 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進行測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25:70-75的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長243nm ;理論板數(shù)按獐牙菜苦苷峰計算應不低于2500 ； 對照品溶液的制備:取獐牙菜苦苷對照品適量，加乙醇制成每ImL含45 μ g的溶液，即得; 供試品溶液的制備:取藏藥組合物風濕塞隆制劑細粉約lg，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱定重量，回流提取I小時，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL，減壓濃縮至干，殘渣加水約20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，減壓濃縮至干，殘渣加乙醇溶解并定容至5mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法:分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆制劑中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)計，不得少于0.35mg/g ； (3)馬兜鈴酸A的檢查 照《中國藥典》201·0年版一部附錄VI D高效液相色譜法進行測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比40-45:55-60的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計算應不低于3000 ； 對照品溶液的制備:取馬兜鈴酸A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取藏藥組合物風濕塞隆制劑細粉約10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL，低溫濃縮至干，殘渣加質量體積份數(shù)比0.5%氫氧化鈉溶液20mL使其完全溶解并轉移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20mL,萃取后堿液使用體積份數(shù)比5%鹽酸調節(jié)pH 2~3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉移至ImL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法:分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得； 本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆制劑中馬兜鈴酸A (C17HnNO7)的含量不得高于10μ g/g。
2.如權利要求1所述的風濕塞隆制劑的質量檢測方法，其中的制劑是指取上述權利要求I的原料藥，按常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料制備成臨床可接受的任何一種劑型。
3.如權利要求1或2所述的風濕塞隆制劑的質量檢測方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測定方法中的一種或幾種: 鑒別: (I)紫草茸的鑒別 取風濕塞隆膠囊內容物10g，加醋酸乙酯20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液；另取紫草茸對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各10 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5: 5: 0.5: 0.1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，分別置日光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點； (2)木香的鑒別 取風濕塞隆膠囊內容物3g，加二氯甲烷15mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；取木香對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各1Oy L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8: 1的二氯甲烷-環(huán)己烷為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (3)刺柏的鑒別 取風濕塞隆膠囊內容物10g，加水100mL,按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取刺柏對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比.8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以I %硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (4)藏茜草的鑒別 取風濕塞隆膠囊內容物5g，加甲醇10mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約lmL，作為供試品溶液；另取藏茜草藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比為4:1的沸程為60~90°C石油醚-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； (5)綠絨蒿的鑒別 取風濕塞隆膠囊內容物10g，加體積比1%鹽酸溶液30mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液用1%氫氧化鈉調堿至PH10，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解至2mL，作為供試品溶液；另取綠絨蒿藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》.2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比為10:4:1正己烷-乙酸乙酯-甲醇，再滴加兩滴氨水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； (6)丁香的鑒別 取風濕塞隆膠囊內容物10g，加沸程為60-90°C的石油醚50mL超聲，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至ImL作為供試品溶液；另取丁香藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8:2的沸程60-90°C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比I %硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (7)豆蘧的鑒別 取風濕塞隆膠囊內容物10g，加水IOOmL,按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取豆蘧對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比·8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比I %硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑占.含量測定 (1)總黃酮的含量測定 對照品溶液的制備:精密稱取蘆丁對照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得； 標準曲線的制備:精密量取上述對照品液0.0mLU.0mL,2.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL,分別置25mL量瓶中，編號為I至6號；各加水至5.0mL,加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液ImL,混勻，放置6分鐘,加重量體積份數(shù)比10%硝酸招溶液ImL,搖勻，放置6分鐘,加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以I號為空白；照《中國藥典》2010年版一部附錄V A紫外-可見分光光度法進行試驗，在500nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線； 測定法:取藏藥組合物風濕塞隆膠囊內容物lg，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL置IOOmL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液4.0mL，·置25mL量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加水至5.0mL”起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量(μ g/mL)，計算，即得；本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆膠囊中總黃酮的含量按蘆丁(C27H3tlO16)計，不得少于25mg/g ; (2)印度獐牙菜的含量測定 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進行測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25:75的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長243nm ;理論板數(shù)按獐牙菜苦苷峰計算應不低于2500 ； 對照品溶液的制備:取獐牙菜苦苷對照品適量，加乙醇制成每ImL含45 μ g的溶液，即得; 供試品溶液的制備:取藏藥組合物風濕塞隆膠囊內容物約lg，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱定重量，回流提取I小時，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL，減壓濃縮至干，殘渣加水約20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，減壓濃縮至干，殘渣加乙醇溶解并定容至5mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法:分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得； 本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆膠囊中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)計，不得少于0.35mg/g ； (3)馬兜鈴酸A的檢查 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進行測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比40:60的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計算應不低于3000 ； 對照品溶液的制備:取馬兜鈴酸A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取藏藥組合物風濕塞隆膠囊內容物約10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL，低溫濃縮至干，殘渣加質量體積份數(shù)比0.5%氫氧化鈉溶液20mL使其完全溶解并轉移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20mL,萃取后堿液使用體積份數(shù)比5%鹽酸調節(jié)pH 2~3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉移至ImL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法:分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得； 本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆膠囊中馬兜鈴酸A (C17H11N07)的含量不得高于10 μ g/g。
4.如權利要求1或2所述的風濕塞隆制劑的質量檢測方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測 定方法中的一種或幾種: 鑒別: (1)紫草茸的鑒別 取風濕塞隆顆粒10g，加醋酸乙酯20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取紫草茸對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各10 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5: 5: 0.5: 0.1 二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，分別置日光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點； (2)木香的鑒別 取風濕塞隆顆粒3g，加二氯甲烷15ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；取木香對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各IOy L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以8: I 二氯甲烷-環(huán)己烷為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (3)刺柏的鑒別 取風濕塞隆顆粒10g，加水100ml，按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取刺柏對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以8.5:1.5石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (4)藏茜草的鑒別 取風濕塞隆顆粒5g，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至約1ml，作為供試品溶液；另取藏茜草藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以4:160~90°C石油醚-丙酮為展開劑,展開,取出，晾干,置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； (5)綠絨蒿的鑒別 取風濕塞隆顆粒10g，加體積比1%鹽酸溶液30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液用1%氫氧化鈉調堿至PH為10，再用二氯甲烷等體積萃取3次，合并二氯甲烷液，蒸干，加甲醇至2ml溶解，作為供試品溶液；另取綠絨蒿藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比10:4:1正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加兩滴氨水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下見識；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； (6)丁香的鑒別 取風濕塞隆顆粒10g，W 60-90°C石油醚50ml超聲，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至Iml作為供試品溶液；另取丁香藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上兩種溶液各5 μ L，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8:2的60~90°C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相 應的位置上，顯相同顏色的斑點； (7)豆蘧的鑒別 取風濕塞隆顆粒10g，加水100ml，按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取豆蘧對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比8.5:1.5石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比I %硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； 含量測定: (I)總黃酮的含量測定 對照品溶液的制備:精密稱取蘆丁對照品10mg，置50ml量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得； 標準曲線的制備:精密量取上述對照品液0.0ml、1.0ml,2.0ml,3.0ml,4.0ml,5.0ml,分別置25ml量瓶中，編號為I至6號；各加水至5.0ml，加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液Iml,混勻,放置6分鐘,加重量體積份數(shù)比10%硝酸招溶液Iml,搖勻，放置6分鐘,加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以I號為空白；照《中國藥典》2010年版一部附錄V A紫外-可見分光光度法進行試驗，在500nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法:取藏藥組合物風濕塞隆顆粒lg，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25ml置100ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液4.0ml，置25ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加水至5.0ml”起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量(μ g/ml)，計算，即得； 本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆顆粒中總黃酮的含量按蘆丁(C27H3tlO16)計，不得少于25mg/g ; (2)印度獐牙菜的含量測定 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進行測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25:75的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長243nm ;理論板數(shù)按獐牙菜苦苷峰計算應不低于2500 ； 對照品溶液的制備:取獐牙菜苦苷對照品適量，加乙醇制成每Iml含45μ g的溶液，即得; 供試品溶液的制備:取藏藥組合物風濕塞隆顆粒lg，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，稱定重量，回流提取I小時，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25ml，減壓濃縮至干，殘渣加水約20ml使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，減壓濃縮至干，殘渣加乙醇溶解并定容至5ml容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法:分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆顆粒中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)計，不得少于0.35mg/g ； (3)馬兜鈴酸A的檢查 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進行測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比40:60的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計算應不低于3000 ； 對照品溶液的制備:取馬兜鈴酸A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含500ng的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取藏藥組合物風濕塞隆顆粒10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25ml，低溫濃縮至干，殘渣加質量體積份數(shù)比0.5%氫氧化鈉溶液20ml使其完全溶解并轉移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20ml,萃取后堿液使用體積份數(shù)比5%鹽酸調節(jié)pH 2~3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20ml，合并乙酸乙酯萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉移至Iml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法:分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得； 本發(fā)明藏藥組合物風濕塞隆顆粒中馬兜鈴酸A (C17HnNO7)的含量不得高于10 μ g/g。
【文檔編號】G01N30/02GK103852555SQ201210523974
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2012年12月7日 優(yōu)先權日:2012年12月7日
【發(fā)明者】鄭亭亭, 江玉娟, 任松鵬, 宋洋, 單玉剛 申請人:山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司