專利名稱：雙抗體組織細(xì)胞蛋白定量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種組織細(xì)胞蛋白定量檢測方法，特別涉及一種采用雙抗體法對組織細(xì)胞蛋白進(jìn)行定量檢測的方法。
背景技術(shù)：
組織細(xì)胞蛋白表達(dá)水平是確定組織細(xì)胞是否發(fā)生病變以及如何進(jìn)行有效治療的一項(xiàng)重要參數(shù)。以腫瘤治療為例，由于藥物作用范圍廣泛，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也殺死了大量的正常細(xì)胞，導(dǎo)致了難以忍受的毒副作用。隨著醫(yī)學(xué)研究的快速進(jìn)展，科學(xué)家們逐漸開發(fā)出了針對性強(qiáng)、毒副作用小的腫瘤靶向治療藥物。目前，這種靶向治療由于治療作用好、毒副作用小越來越成為腫瘤治療的發(fā)展趨勢。然而，如何能夠在臨床中快速、準(zhǔn)確的判斷患者腫瘤的分子類型，進(jìn)而確定該患者是否適用于某種靶向治療方案仍是目前醫(yī)學(xué)界急需解決的一個(gè)難題。以乳腺癌為例，我國每年有20余萬婦女患乳腺癌。其中，大約20% -30%的乳腺癌患者為人類表皮生長因子受體-2 (HER2)陽性乳腺癌。乳腺腫瘤患者HER2陽性意味著乳腺腫瘤細(xì)胞表面的HER2蛋白數(shù)量增多，過度傳遞信號，刺激癌細(xì)胞瘋狂增殖。HER2陽性的患者同其他乳腺癌病人相比，腫瘤惡性程度更高，進(jìn)展更快，更容易復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，且此類病人通常對內(nèi)分泌治療不敏感，預(yù)后較差。故幾家國際制藥公司研發(fā)出針對HER2陽性乳腺癌的靶向治療藥物，如赫賽汀，收到了比較好的治療效果。然而，這類靶向藥只對HER2陽性的乳腺癌患者有效，對于70% -80% HER2陰性的患者卻沒有任何治療效果，如果在治療前不及時(shí)診斷明確，不僅耽誤了治療，還會(huì)給患者背負(fù)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)(治療費(fèi)用)。因此，如何在最短的時(shí)間里對乳腺癌患者腫瘤組織中HER2表達(dá)水平(陰性或陽性)作出準(zhǔn)確判斷對于其靶向治療意義重大。目前乳腺癌人類表皮生長因子受體_2(HER2)檢測一般采用免疫組織化學(xué)(IHC)檢測HER2蛋白表達(dá)水平。雖然免疫組化(IHC)已經(jīng)經(jīng)過了 FDA批準(zhǔn)，但不同的檢測方法、計(jì)算的準(zhǔn)確性和試劑的選擇都會(huì)影響HER2檢測的結(jié)果。美國的一項(xiàng)調(diào)查結(jié)果顯示，近1/4患者是因檢測結(jié)果不準(zhǔn)確而接受了不恰當(dāng)?shù)闹委?。IHC檢測HER2蛋白過度表達(dá)的錯(cuò)誤率平均為18%，F(xiàn)ISH檢測HER2基因擴(kuò)增的錯(cuò)誤率在13%。因此，我國病理學(xué)家根據(jù)國內(nèi)外最新的研究數(shù)據(jù)討論后達(dá)成共識，于2006年10月制訂發(fā)布了我國《乳腺癌HER2檢測指南》。美國臨床腫瘤學(xué)會(huì)(ASCO)和美國病理學(xué)醫(yī)學(xué)院(CAP)也于2006年12月11日聯(lián)合發(fā)布了《乳腺癌HER2檢測的ASC0/CAP指南共識》。這些指南強(qiáng)調(diào)了檢測中易出現(xiàn)誤差的環(huán)節(jié)、內(nèi)部及外部質(zhì)量控制和保證程序，旨在使HER2檢測的操作程序和對結(jié)果判讀的標(biāo)準(zhǔn)化，提高HER2檢測的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性，更準(zhǔn)確地篩選出適用于曲妥珠單抗(赫賽汀)等藥物治療的乳腺癌患者，避免無效治療，使患者承受不必要的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。所以，開發(fā)出一種能夠?qū)M織細(xì)胞蛋白平進(jìn)行快速、準(zhǔn)確檢測的技術(shù)，不僅在膠體免疫檢測技術(shù)中屬于一種突破性進(jìn)展，具有重要意義，而且也具有廣泛的市場應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種采用雙抗體法，可快速對組織細(xì)胞蛋白進(jìn)行定量檢測的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供一種雙抗體組織細(xì)胞蛋白定量檢測方法，其包括如下步驟I)設(shè)置一試紙條，所述試紙條上設(shè)有樣品墊、金標(biāo)墊、檢測區(qū)和吸附墊；2)利用膠體金或膠體銀與檢測蛋白的單抗或多抗偶聯(lián)，并將偶聯(lián)后形成的膠體金或膠體銀抗體復(fù)合物滴加于金標(biāo)墊上，烘干后陰涼保存；3)將另外一種抗被檢測蛋白的單抗或多抗固定在檢測區(qū)上；4)待檢測區(qū)顯色后，根據(jù)顯色區(qū)域判斷該被檢測蛋白的表達(dá)是陽性還是陰性。優(yōu)選地，所述檢測區(qū)上設(shè)有數(shù)個(gè)檢測圓點(diǎn)。優(yōu)選地，所述檢測圓點(diǎn)呈陣列狀分布如上所述，本發(fā)明的雙抗體組織細(xì)胞蛋白定量檢測方法具有以下有益效果該檢測方法分別在金標(biāo)墊(或銀標(biāo)墊)及檢測區(qū)上分別使用被檢測蛋白的兩種不同特異性單克隆或多克隆抗體，并通過讀取顯色的檢測圓點(diǎn)的數(shù)量就可快速判讀組織細(xì)胞中檢測蛋白含量的高低來確定該檢測蛋白的表達(dá)水平。


圖1為本發(fā)明試紙條的主視圖。圖2為本發(fā)明試紙條的俯視圖。元件標(biāo)號說明I 底板2聚脂膜3樣品墊4金標(biāo)墊5硝酸纖維膜6檢測區(qū)61檢測圓點(diǎn)7吸附墊
具體實(shí)施例方式以下通過特定的具體實(shí)例說明本發(fā)明的實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說明書所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)與功效。本發(fā)明還可以通過另外不同的具體實(shí)施方式
加以實(shí)施或應(yīng)用，本說明書中的各項(xiàng)細(xì)節(jié)也可以基于不同觀點(diǎn)與應(yīng)用，在沒有背離本發(fā)明的精神下進(jìn)行各種修飾或改變。請參閱圖1、2。需要說明的是，本實(shí)施例中所提供的圖示僅以示意方式說明本發(fā)明的基本構(gòu)想，所以圖式中僅顯示與本發(fā)明中有關(guān)的組件而非按照實(shí)際實(shí)施時(shí)的組件數(shù)目、形狀及尺寸繪制，其實(shí)際實(shí)施時(shí)各組件的型態(tài)、數(shù)量及比例可為一種隨意的改變，且其組件布局型態(tài)也可能更為復(fù)雜。下面以乳腺癌為例，對雙抗體組織細(xì)胞蛋白定量檢測方法做進(jìn)一步描述該方法包括如下步驟首先如圖1、2所示,設(shè)置一試紙條,該試紙條包括底板I,底板I上設(shè)有聚脂膜2，聚酯膜2上設(shè)有硝酸纖維膜5、樣品墊3、金標(biāo)墊4，硝酸纖維膜5上設(shè)有檢測區(qū)6、吸附墊7，在吸附墊7虹吸作用下，樣品墊3上的液體可從左向右的移動(dòng)。檢測區(qū)6上設(shè)有多個(gè)按陣列形狀分布的檢測圓點(diǎn)61。然后將細(xì)胞裂解液中被檢測蛋白Her2的單抗或多抗與膠體金或膠體銀偶聯(lián)，并將偶聯(lián)后形成的膠體金或膠體銀抗體復(fù)合物滴加于金標(biāo)墊上，在37° C環(huán)境下烘干后陰涼保存。將另外一種被檢測蛋白Her2的單抗或多抗以陳列方式固定在檢測區(qū)上；5分鐘檢測區(qū)顯色后，通過放大鏡觀測檢測區(qū)上被檢測蛋白顯色圓點(diǎn)的個(gè)數(shù)，就可判斷該腫瘤細(xì)胞是采用陽性還是陰性，進(jìn)而確定是否采用以Her2為靶點(diǎn)的祀向治療藥物(如赫賽汀)進(jìn)行治療。該檢測方法分別在金標(biāo)墊(或銀標(biāo)墊)及檢測區(qū)上分別使用被檢測蛋白的兩種不同特異性單克隆或多克隆抗體，并通過讀取顯色的檢測圓點(diǎn)的數(shù)量就可快速判讀組織細(xì)胞中檢測蛋白含量的高低來確定該檢測蛋白的表達(dá)水平。綜上所述，本發(fā)明有效克服了現(xiàn)有技術(shù)中的種種缺點(diǎn)而具高度產(chǎn)業(yè)利用價(jià)值。上述實(shí)施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對上述實(shí)施例進(jìn)行修飾或改變。因此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
權(quán)利要求
1.一種雙抗體組織細(xì)胞蛋白定量檢測方法，其特征在于，其包括如下步驟 1)設(shè)置一試紙條，所述試紙條上設(shè)有樣品墊、金標(biāo)墊、檢測區(qū)和吸附墊； 2)利用膠體金或膠體銀與檢測蛋白的單抗或多抗偶聯(lián)，并將偶聯(lián)后形成的膠體金或膠體銀抗體復(fù)合物滴加于金標(biāo)墊上，烘干后陰涼保存； 3)將另外一種抗被檢測蛋白的單抗或多抗固定在檢測區(qū)上； 4)待檢測區(qū)顯色后，根據(jù)顯色區(qū)域判斷該被檢測蛋白的表達(dá)是陽性還是陰性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙抗體組織細(xì)胞蛋白定量檢測方法，其特征在于所述檢測區(qū)上設(shè)有數(shù)個(gè)檢測圓點(diǎn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙抗體組織細(xì)胞蛋白定量檢測方法，其特征在于所述檢測圓點(diǎn)呈陣列狀分布。
全文摘要
本發(fā)明提供雙抗體組織細(xì)胞蛋白定量檢測方法，該方法利用膠體金或膠體銀與檢測蛋白的單抗或多抗偶聯(lián)，并將偶聯(lián)后形成的膠體金或膠體銀抗體復(fù)合物滴加于金標(biāo)墊上，烘干后陰涼保存；將另外一種抗被檢測蛋白的單抗或多抗固定在檢測區(qū)上；待檢測區(qū)顯色后，根據(jù)顯色區(qū)域判斷該被檢測蛋白的表達(dá)是陽性還是陰性。該檢測方法分別在金標(biāo)墊(或銀標(biāo)墊)及檢測區(qū)上分別使用被檢測蛋白的兩種不同特異性單克隆或多克隆抗體，并通過讀取顯色的檢測圓點(diǎn)的數(shù)量就可快速判讀組織細(xì)胞中檢測蛋白含量的高低來確定該檢測蛋白的表達(dá)水平。
文檔編號G01N33/68GK103048469SQ201210520150
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月6日
發(fā)明者糜軍 申請人:蘇州海吉亞生物科技有限公司