專利名稱：用于脂肪組織的抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)束縛脂肪組織的抗體，尤其是束縛動物(例如飼養(yǎng)動物)和/或人類的體內(nèi)脂肪組織內(nèi)質(zhì)膜的特征成分的多克隆抗體的方法。本發(fā)明還涉及根據(jù)本方法可獲得的抗體、抗體的使用、包含抗體的飼料添加劑、包含抗體的藥物和一種調(diào)節(jié)需要抗體的目標(biāo)動物體內(nèi)脂肪組織含量的方法。
背景技術(shù)：
在畜牧場里，一個主要的目的是提高飼養(yǎng)動物的生長速率，以至于在一般相同的管理?xiàng)l件下，動物將更快地成長，因而能夠提高畜牧場的生產(chǎn)率。在過去，在畜牧場里采用現(xiàn)代技術(shù)之前，通常畜牧者只是簡單地用更多食物喂養(yǎng)動物，從而希望更多的食物消耗促進(jìn)動物成長，并且使體重增加地更快。然而，這種能夠幫助動物增加體重的方法有局限性。而且，其缺點(diǎn)是這個方法會增加動物飼料的總消耗量和由此不被希望轉(zhuǎn)化的更高的操作費(fèi)用。
另一種促進(jìn)飼養(yǎng)動物成長的方法是給動物使用生長素。但是基于許多原因，這個方法是不被希望的。首先，來自不同動物的生長素很少是同質(zhì)的，并且不同的哺乳類動物，例如，只與某一種特定的生長素類型起反應(yīng)。因?yàn)楹线m的外源生長素通常是從腦下垂體提取出來的，所以準(zhǔn)備足夠用于大規(guī)模應(yīng)用的合適的外源生長素是相當(dāng)困難和不經(jīng)濟(jì)的。盡管現(xiàn)在，通過DNA重組技術(shù)能夠制備外源生長素，但是使用這樣的方法制作外源生長素仍然相當(dāng)昂貴。其次，將外源生長素用于飼養(yǎng)動物通常是通過直接注射進(jìn)行的，不可避免地，其相當(dāng)?shù)匕嘿F，而且對擁有成千上萬動物的大型畜牧場的應(yīng)用也是困難的。第三，相當(dāng)難以控制精確地產(chǎn)生所希望的效果的服用劑量，并且過量的外源生長素可能對動物有害。第四，外源生長素的剩余物可能進(jìn)入到肉產(chǎn)品中，并且隨著其消耗品進(jìn)入到人體中。即使一些科學(xué)家關(guān)注這些外源生長素對人類的負(fù)面影響，但關(guān)于這方面仍然需要進(jìn)一步地研究。
也曾計(jì)劃在動物飼料中加入各種飼料添加劑，以使得由這些飼料喂養(yǎng)的動物會成長地更快。不幸的是，不管使用上述哪種方法，通常的情況是增長的體重中相對比較大的比例來自脂肪含量的增長，而不是來自肌肉含量的增長。盡管在其他飼養(yǎng)動物身上有類似的問題，但是在豬身上尤為突出。由于人類變得越來越具有健康意識，所以幾乎沒有任何對高脂肪含量的肉制品的需求。因此，對盡可能少脂肪含量(即高肌肉含量)的肉制品的需求增長。
許多方法用來促使含高肌肉含量的飼養(yǎng)動物發(fā)展。一個非常古老的方法是在開放或半開放的農(nóng)場飼養(yǎng)動物，以使得動物能有更多的機(jī)會鍛煉，從而減少體內(nèi)的脂肪含量。但是，由于空地是非常珍貴的，這個方法在現(xiàn)代農(nóng)場的實(shí)踐中幾乎是不可能實(shí)現(xiàn)的。除此以外，這個方法相當(dāng)難預(yù)測。根據(jù)這個方法得到的動物體內(nèi)可能仍然有較高的脂肪含量。
因此，一種調(diào)節(jié)和減少飼養(yǎng)動物內(nèi)脂肪含量的物質(zhì)需求仍然存在。優(yōu)選地，這個物質(zhì)應(yīng)該易于使用和天然的，并且不應(yīng)該有類似于由人造的或外源的生長素引起的副作用。換句話說，這個物質(zhì)應(yīng)該能安全使用。應(yīng)用于飼養(yǎng)動物的物質(zhì)還應(yīng)該在修改后優(yōu)選應(yīng)用于人類。
因而，本發(fā)明的目的是提出上述論點(diǎn)，或者至少提供給公眾一種有用的選擇。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供一種生產(chǎn)抗體的非治療方法，該抗體束縛需要抗體的目標(biāo)動物內(nèi)的脂肪組織，以調(diào)節(jié)目標(biāo)動物的脂肪組織含量，方法包括以下步驟(1)用源動物的脂肪組織制備抗原；(2)對產(chǎn)蛋動物使用抗原促使抗體的生成；和(3)從產(chǎn)蛋動物的蛋中獲得抗體，其中源動物和產(chǎn)蛋動物屬于不同物種。
抗體是用來束縛目標(biāo)動物脂肪組織質(zhì)膜的特征成分。尤其是，抗體可以束縛目標(biāo)動物脂肪組織的粒狀粘質(zhì)蛋白和/或纖維粘質(zhì)蛋白?？贵w適合特定地束縛特征成分。特定束縛特征成分的意思是抗體具有低的、或是沒有明顯的可交叉反應(yīng)能力。
該方法包括促使來自產(chǎn)蛋動物體內(nèi)的抗體生成的步驟。有利地，該方法包括促使抗體在產(chǎn)蛋動物的蛋中沉積的步驟。尤其是，從蛋中獲得抗體的步驟可以包括從蛋的蛋黃中分離抗體的步驟?？乖m合包括源動物脂肪組織的質(zhì)膜、其脂肪組織質(zhì)膜表層蛋白、或其片段。
優(yōu)選地，抗體是多克隆抗體。
優(yōu)選地，源動物和產(chǎn)蛋動物屬于明顯不同的物種。產(chǎn)蛋動物優(yōu)選是禽類動物，源動物可以是非禽類動物。尤其是，產(chǎn)蛋動物可以是母雞，源動物可以是哺乳動物，例如豬。
優(yōu)選地，目標(biāo)動物和產(chǎn)蛋動物屬于不同物種。更優(yōu)選地，目標(biāo)動物和產(chǎn)蛋動物屬于明顯不同的物種。明顯不同的物種的意思是他們在種系上是截然不同的。例如，豬是哺乳動物，母雞是禽類，他們是明顯不同的物種。
優(yōu)選地，目標(biāo)動物和源動物屬于相同物種。作為選擇，目標(biāo)動物和源動物屬于接近物種。接近物種的意思是他們在種系上是有關(guān)聯(lián)的。例如，豬和老鼠是接近物種，他們都是哺乳動物，而且相應(yīng)從豬脂肪組織制備的抗原產(chǎn)生的抗體能夠非常充分地對調(diào)節(jié)老鼠體內(nèi)脂肪組織含量起作用。
在一項(xiàng)實(shí)施方案中，目標(biāo)動物是飼養(yǎng)動物。尤其是，源動物和/或所述目標(biāo)動物可以是豬。豬的脂肪含量經(jīng)常高于其他的飼養(yǎng)動物，并且使用了抗體的豬體內(nèi)的脂肪組織明顯減少。但是，目標(biāo)動物可以是其他需要調(diào)節(jié)其脂肪組織的動物。例如，目標(biāo)動物可以是用以生產(chǎn)較瘦牛肉的牛。
在方法實(shí)施后，一個或者全部動物可能死掉。
在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，目標(biāo)動物是患者。
根據(jù)本發(fā)明的第二個方面，提供了根據(jù)上述限定的方法可獲得的抗體。根據(jù)本發(fā)明的第三個方面，提供了應(yīng)用于治療和診斷方法的抗體。
根據(jù)本發(fā)明的第四個方面，提供了上述限定的抗體在用于治療引起過度脂肪組織狀況的藥劑制備的使用。
根據(jù)本發(fā)明的第五個方面，提供了一個含有如上所限定的有效量抗體的飼料添加劑。尤其是，飼料添加劑可以適合于降低目標(biāo)動物內(nèi)脂肪組織的含量。
在一項(xiàng)實(shí)施方案中，飼料添加劑可能包括含有抗體的蛋的蛋黃。
根據(jù)本發(fā)明的第六個方面，提供了含有如上所限定的有效量抗體的藥劑。優(yōu)選地，藥劑適合通過食用的方式使用。作為選擇，藥劑也適合通過注射的方式使用。
根據(jù)本發(fā)明的第七個方面，提供了一種調(diào)節(jié)需要抗體的目標(biāo)動物體內(nèi)脂肪組織含量的方法，包括以下步驟(1)用源動物脂肪組織制備抗原，(2)對產(chǎn)蛋動物使用抗原，(3)由相應(yīng)抗原的產(chǎn)蛋動物產(chǎn)生抗體，(4)從產(chǎn)蛋動物的蛋中獲得抗體，和(5)向目標(biāo)動物使用藥學(xué)有效量的抗體，其中源動物和產(chǎn)蛋動物屬于不同物種。尤其是，可獲得的步驟包括從蛋的蛋黃中分離抗體。
優(yōu)選地，方法包括通過食用的方式使用抗體。作為選擇，方法包括通過注射的方式使用抗體。
調(diào)節(jié)的方法包括將抗體束縛目標(biāo)動物脂肪組織質(zhì)膜的特征成分的步驟。該方法可以包括抗體束縛目標(biāo)動物脂肪組織的粒狀粘質(zhì)蛋白的步驟。該方法還可以包括抗體束縛目標(biāo)動物脂肪組織的纖維粘質(zhì)蛋白的步驟。尤其是，抗體適合特定地束縛特征成分。特定束縛特征成分的意思是抗體有低的，或是沒有值得注意的交互反應(yīng)能力。
優(yōu)選地，抗原包括源動物脂肪組織的質(zhì)膜、其脂肪細(xì)胞質(zhì)膜表層蛋白、或其片段。
優(yōu)選地，抗體是多克隆抗體。
優(yōu)選地，源動物和產(chǎn)蛋動物屬于明顯不同的物種。產(chǎn)蛋動物優(yōu)選為禽類動物，源動物可以是非禽類動物。尤其是，產(chǎn)蛋動物可以是母雞，源動物可以是哺乳動物，例如豬。
優(yōu)選地，目標(biāo)動物和產(chǎn)蛋動物屬于不同物種。更優(yōu)選地，目標(biāo)動物和產(chǎn)蛋動物屬于明顯不同的物種。明顯不同的物種的意思是他們在種系上是截然不同的。例如，豬是哺乳動物，母雞是禽類，他們是明顯不同的物種。
優(yōu)選地，目標(biāo)動物和源動物屬于相同物種。作為選擇，目標(biāo)動物和源動物屬于接近物種。接近物種的意思是他們在種系上是有關(guān)聯(lián)的。例如，豬和老鼠是接近物種，他們都是哺乳動物，而且相應(yīng)從豬脂肪組織制備的抗原產(chǎn)生的抗體能夠非常充分地對調(diào)節(jié)老鼠體內(nèi)脂肪組織含量起作用。
調(diào)節(jié)方法可以是非治療方法。
在一項(xiàng)實(shí)施方案中，目標(biāo)動物是飼養(yǎng)動物。尤其是，源動物和/或目標(biāo)動物可以是豬。
優(yōu)選地，產(chǎn)蛋動物是禽類動物，源動物可以是非禽類動物。尤其是，產(chǎn)蛋動物可以是母雞，源動物可以是豬。
方法實(shí)施后，一個或多個的動物可能死亡。
在另一項(xiàng)實(shí)施方案，目標(biāo)動物是患者。
根據(jù)本發(fā)明的第八個方面，提供了生產(chǎn)抗體的方法，該抗體束縛需要抗體的目標(biāo)動物內(nèi)脂肪組織，以調(diào)節(jié)目標(biāo)動物內(nèi)脂肪組織的含量，方法包括以下步驟(1)從源動物脂肪組織制備抗原，(2)對產(chǎn)蛋動物使用抗原促使抗體的產(chǎn)生，和(3)從產(chǎn)蛋動物的蛋中獲得抗體，其中源動物和產(chǎn)蛋動物屬于不同物種。
根據(jù)本發(fā)明更進(jìn)一層方面，提供了特定束縛目標(biāo)實(shí)驗(yàn)者內(nèi)脂肪組織的抗體，該目標(biāo)實(shí)驗(yàn)者為需要抗體調(diào)節(jié)目標(biāo)動物內(nèi)脂肪組織含量的飼養(yǎng)動物或患者?？贵w束縛脂肪組織質(zhì)膜的特征成分。尤其是，抗體可以束縛脂肪組織的粒狀粘質(zhì)蛋白?？贵w也可以束縛脂肪組織的纖維粘質(zhì)蛋白。
抗體從和/或包含在產(chǎn)蛋動物的蛋中獲得的?？贵w沉積在產(chǎn)蛋動物的蛋上。從產(chǎn)蛋動物的體內(nèi)產(chǎn)生抗體。與施加給產(chǎn)蛋動物的抗原相對應(yīng)產(chǎn)生抗體。
從源動物的脂肪組織制備抗原?？乖ㄔ磩游镏窘M織質(zhì)膜和/或其脂肪細(xì)胞質(zhì)膜表層蛋白。
優(yōu)選地，目標(biāo)動物和源動物屬于相同物種。作為選擇，目標(biāo)動物和源動物屬于接近物種。
優(yōu)選地，源動物和產(chǎn)蛋動物屬于明顯不同的物種。
優(yōu)選地，抗體是多克隆抗體。
根據(jù)本發(fā)明更進(jìn)一層方面，提供包括含有上述限定的有效量抗體的飼料添加劑。該飼料添加劑適合降低目標(biāo)動物內(nèi)脂肪組織的含量。
根據(jù)本發(fā)明更進(jìn)一層方面，提供了含有上述限定的藥學(xué)有效量抗體的藥劑。該藥劑適合通過食用的方式使用。藥劑適合通過注射的方式使用。
根據(jù)本發(fā)明更進(jìn)一層方面，提供了一種調(diào)節(jié)需要抗體的目標(biāo)實(shí)驗(yàn)者體內(nèi)脂肪組織含量的方法，該目標(biāo)實(shí)驗(yàn)者是飼養(yǎng)動物或患者，該方法包括使用上述限定的藥學(xué)有效量的抗體的步驟，該抗體特定束縛目標(biāo)動物內(nèi)的脂肪組織。
所述方法包括抗體束縛脂肪組織質(zhì)膜的特征成分的步驟。尤其是，該方法可以包括抗體束縛脂肪組織的粒狀粘質(zhì)蛋白的步驟。該方法還可以包括抗體束縛脂肪組織內(nèi)的纖維粘質(zhì)蛋白的步驟。
方法包括通過食用以使用所述組合物的步驟。
抗體是多克隆抗體。
根據(jù)本發(fā)明更進(jìn)一層方面，提供了一種含有上述限定的藥學(xué)有效量抗體的組合物制作方法，該方法包括從產(chǎn)蛋動物的蛋中獲得抗體的步驟。優(yōu)選地，方法包括使抗體沉積在產(chǎn)蛋動物的蛋中的步驟。
優(yōu)選地，該方法包括促使來自產(chǎn)蛋動物體內(nèi)的抗體產(chǎn)生的步驟。尤其是，該方法包括在產(chǎn)蛋動物內(nèi)產(chǎn)生與用源動物脂肪組織制備的抗原相應(yīng)的抗體的步驟。該方法包括對產(chǎn)蛋動物使用抗原的步驟。
優(yōu)選地，抗原包括源動物脂肪組織質(zhì)膜和/或其脂肪細(xì)胞質(zhì)膜表層蛋白。
優(yōu)選地，目標(biāo)動物和源動物屬于相同物種。作為選擇，目標(biāo)動物和源動物屬于接近物種。
優(yōu)選地，源動物和產(chǎn)蛋動物屬于明顯不同的物種。
優(yōu)選地，抗體是多克隆抗體。
組合物可以包括含有所述抗體的蛋黃。
本發(fā)明具體實(shí)施方案可以從“生產(chǎn)”動物的腦下垂體中產(chǎn)生和提取生物物質(zhì)(例如，生長素)。生產(chǎn)動物的意思是作為機(jī)器的動物用來生產(chǎn)所希望得到的生物物質(zhì)。根據(jù)生物物質(zhì)的種類或性質(zhì)，事實(shí)上，可以使用不同的方法獲得或分離它們。例如，如果生物物質(zhì)是一種在生產(chǎn)動物中以牛奶初乳存在的生長素，那么將進(jìn)行其生長素的適當(dāng)分離方法。作為選擇，如果生長素是在生產(chǎn)動物中以血清存在的，那么將進(jìn)行其生長素的另一種合適的分離方法。但是，無論使用哪種分離方法，都已發(fā)現(xiàn)足夠數(shù)量的來自動物源以作為商業(yè)用途的生物物質(zhì)的分離是非常困難的。首先，困難是由通常生產(chǎn)的生物物質(zhì)的數(shù)量非常少產(chǎn)生的，其次，來自動物的生物物質(zhì)的分離是非常昂貴的。同樣的困難類似地存在于來自生產(chǎn)動物的特定抗體的提取或分離。
在本發(fā)明中，論證了當(dāng)用于可以是飼料動物的目標(biāo)動物時，根據(jù)本發(fā)明制備的抗體減少或至少調(diào)節(jié)其體內(nèi)的整個脂肪含量至一個更被希望的標(biāo)準(zhǔn)，從而生產(chǎn)瘦肉。當(dāng)本發(fā)明用于人類的使用時，目標(biāo)動物的意思是需要抗體的患者。
通常，首先從源動物中移出脂肪組織。然后，從脂肪組織中分離脂肪組織的質(zhì)膜。分離后的質(zhì)膜包括所有的脂肪細(xì)胞質(zhì)膜蛋白和如粒狀和纖維粘質(zhì)蛋白的識別部位。分離后的質(zhì)膜用于制備作為抗原使用的物質(zhì)。優(yōu)選地，物質(zhì)形成適合于注射的形式，并且設(shè)計(jì)為有免疫有效濃度的抗原，該抗原適合于引出生產(chǎn)動物內(nèi)所需的免疫響應(yīng)。
在本發(fā)明中，將所述物質(zhì)用于如母雞的產(chǎn)蛋動物的生產(chǎn)動物。尤其優(yōu)選的是母雞作為生產(chǎn)動物的使用，因?yàn)橥ǔＤ鸽u產(chǎn)的蛋多于其他產(chǎn)蛋家禽。例如，經(jīng)濟(jì)農(nóng)場中平均一只母雞通常每年能夠產(chǎn)的蛋是200到300個。從而生產(chǎn)的蛋黃的數(shù)量是非?？捎^的。但是，其他產(chǎn)蛋動物，如鴨也可以使用。
一旦將含有抗原的物質(zhì)用于生產(chǎn)動物，例如通過注射，生產(chǎn)動物體將要和抗原發(fā)生反應(yīng)，并且引起免疫響應(yīng)來產(chǎn)生抗體。如上所述，應(yīng)用物質(zhì)中的抗原實(shí)際上包括來自源動物的脂肪組織的質(zhì)膜，或其片段。因而，由產(chǎn)蛋動物生產(chǎn)的抗體是多克隆的，并且適于束縛各種不同的特征成分，即質(zhì)膜的脂肪細(xì)胞質(zhì)膜蛋白。在本發(fā)明的研究和發(fā)展中，確定的是生產(chǎn)動物體內(nèi)產(chǎn)生的相當(dāng)數(shù)量的抗體沉積在隨后由生產(chǎn)動物產(chǎn)下的蛋中。進(jìn)一步確定蛋的蛋黃中的抗體濃度要比蛋清中的高得多，以顯示出抗體優(yōu)選沉積在蛋黃中。換句話說，在本發(fā)明內(nèi)容中提出了從動物源中產(chǎn)生和分離生物有效物質(zhì)的問題。尤其是，能夠?qū)⒌翱醋骺蓮闹邢喈?dāng)容易回收抗體的倉庫。也是由于這個原因，因母雞能夠產(chǎn)相當(dāng)數(shù)量的蛋，從而母雞優(yōu)選作為生產(chǎn)動物使用。
然后，能夠從蛋黃中分離產(chǎn)生的抗體。換句話說，可以直接或處理后使用包含抗體的原始蛋黃，如使其干燥形成蛋黃粉。然后，將有效量的分離后抗體，也就是原始或處理后的包含抗體的蛋黃應(yīng)用于目標(biāo)動物。本發(fā)明的一個主要應(yīng)用是打算用于動物農(nóng)場，并且其中目標(biāo)動物可以是飼養(yǎng)動物。然而，如上所述，本發(fā)明可以用于人類的使用，那么目標(biāo)動物可以是需要抗體的患者。
當(dāng)用于目標(biāo)動物時，抗體將束縛與源動物脂肪組織的脂肪細(xì)胞質(zhì)膜蛋白相似的特征結(jié)構(gòu)或范圍(例如，目標(biāo)動物內(nèi)細(xì)胞的表層蛋白)。例如，如果源動物是豬，目標(biāo)動物屬于豬的相同物種，使用的抗體將束縛目標(biāo)動物體內(nèi)脂肪組織的脂肪細(xì)胞質(zhì)膜，并且干擾其脂肪組織的生理發(fā)展。已經(jīng)確定的是，在本發(fā)明的研究和開發(fā)中，依據(jù)其重量百分比和絕對重量，這樣的束縛和/或干擾明顯降低目標(biāo)動物內(nèi)脂肪組織的含量。
如上所述，源動物和目標(biāo)動物可以屬于動物的相同物種。源動物和目標(biāo)動物越是緊密關(guān)連，以目標(biāo)動物脂肪組織為目標(biāo)，并且最終降低或至少調(diào)節(jié)目標(biāo)動物體內(nèi)的脂肪含量的產(chǎn)生的抗體就越有效。然而，源動物和目標(biāo)動物不需要屬于相同物種。例如，源動物可以是牛，但目標(biāo)動物可以是豬。由于牛和豬都是哺乳動物，它們的脂肪組織，尤其是它們的質(zhì)膜要比如禽類與哺乳動物之間的質(zhì)膜有更多的相似之處?？偠灾?，源動物和目標(biāo)動物越是緊密關(guān)連，抗體束縛、干擾、調(diào)節(jié)和/或減少目標(biāo)動物體內(nèi)的脂肪含量越有效。
但是值得注意的是，源動物和生產(chǎn)動物應(yīng)該優(yōu)選為完全不同的。否則，用于生產(chǎn)動物的含有抗原的物質(zhì)不能引起有效的免疫響應(yīng)來產(chǎn)生足夠量的抗體。例如，如果源動物是鴨子，從其脂肪組織中制備出來的抗原在母雞中會引起相對低的免疫響應(yīng)，因?yàn)轼喿雍湍鸽u兩者均是禽類動物，并且它們的脂肪組織是相對相似的。源動物和生產(chǎn)動物應(yīng)該是不同的，因?yàn)閯游锊荒墚a(chǎn)生被認(rèn)為是“自身”抗原的抗體。
通過以下試驗(yàn)進(jìn)一步描述本發(fā)明。
試驗(yàn)試驗(yàn)1在母雞內(nèi)產(chǎn)生用于豬脂肪組織的抗體的方法
A.從源動物的脂肪組織中分離質(zhì)膜從源動物的背部移出脂肪組織。試驗(yàn)中使用的源動物是二花臉豬。用韋林氏攪切機(jī)在2000rmp下在37℃左右的萃取介質(zhì)中處理并攪勻脂肪組織5分鐘，然后用超聲處理10分鐘。萃取介質(zhì)是由0.25M的蔗糖、0.01M的Na2HPO4、0.002M的EDTA和0.2mM的PMSF組成，并且在40℃調(diào)節(jié)pH值為7.4。然后，將均勻混合物在37℃下以5000rmp用離心分離30分鐘，以使甘油三酸脂從其他組分中分離出來。
然后，將含有甘油三酸脂的上清液從離心機(jī)中移出，并且使剩余物，即下層液，在4℃以10000rpm離心分離30分鐘。然后將其上清液在4℃以10000rpm離心分離30分鐘且保留上清液。然后將其上清液在4℃以38000rpm分離1小時。從脂肪組織得到含有其的脂肪細(xì)胞膜蛋白的質(zhì)膜。其后，在-20℃保存膜蛋白直至使用。
B.豬脂肪細(xì)胞質(zhì)膜及其蛋白的抗體的產(chǎn)生從上述方法中得到的質(zhì)膜用于制備引起來自生產(chǎn)動物的免疫響應(yīng)的抗原。本試驗(yàn)中，產(chǎn)蛋的母雞用來作為生產(chǎn)動物。試驗(yàn)中，制備出來的包括抗原的初始注射劑含有最初懸浮在0.5ml完全的弗氏佐劑中的大約80μg質(zhì)膜以及其蛋白。懸浮在不完全的弗氏佐劑以促進(jìn)免疫響應(yīng)的包括同樣抗原的第二個注射劑隨后也可以通過直接注射使用。間隔每四周一次，在母雞的20個不同的皮膚粘膜間的位置進(jìn)行每一輪的使用。在第三和第四次激發(fā)注射之后，從母雞隨后下的蛋中獲得蛋黃。然后估算出蛋黃的抗體響應(yīng)。
C.用于豬脂肪組織質(zhì)膜的蛋黃抗體的酶免疫測定制備和篩選出用于對適合的脂肪組織質(zhì)膜的抗體滴度的蛋黃抗體，并且用于通過免疫檢測法測定肝、腎、紅血球和骨骼肌的交叉反應(yīng)度。將碳酸鹽緩沖溶液中的含有0.25μg脂肪組織質(zhì)膜蛋白的100μl質(zhì)膜涂抹到96孔聚苯乙烯板的每一個孔上。在4℃的增濕器中將板放置一個晚上。然后傾空孔，并且用含有0.05％吐溫20的PBS來回堵孔三次。將用PBST稀釋的100μl蛋黃加入到每個孔中。在37℃，將板放置1小時，然后用PBST沖洗三次。將在PBST中以1∶5000稀釋的100μl兔抗雞1gGHRP共軛抗體加入每個孔中。在37℃，將板溫育1小時。用PBST沖洗板三次。然后將100μl的鄰苯二胺酶解物(OPD)(1.5mg/ml)加入到每個孔中。之后在37℃，將板溫育5-10分鐘，并且加入50μl的2MH2SO4使每個孔中的反應(yīng)停止。使用酶免疫分析儀測定的吸光率為490nm。每一個試驗(yàn)要進(jìn)行兩回并且重復(fù)三次?？梢园l(fā)現(xiàn)蛋黃中抗體的滴度要高于1∶12800，該值在本發(fā)明的情況中認(rèn)為是相當(dāng)高的濃度值。
試驗(yàn)2目標(biāo)動物體重中脂肪組織抗體的作用A.背景本試驗(yàn)中使用的目標(biāo)動物是實(shí)驗(yàn)室老鼠。試驗(yàn)中使用的是平均體重為140g的96只正在發(fā)育的母鼠。將老鼠隨機(jī)地等分為4組。將老鼠以三個為一個子群關(guān)在籠子里。用普通的老鼠飼料喂食。試驗(yàn)于2001年9月30日開始，于2001年12月14日結(jié)束。
B.方法四個組中包括兩個試驗(yàn)組和兩個分別控制組。兩個試驗(yàn)組中包括第一試驗(yàn)組，該組中在每個老鼠背部的不同位置注射包含了脂肪組織抗體的原蛋黃。根據(jù)上述試驗(yàn)1的步驟產(chǎn)生抗體。特別地，抗體是通過響應(yīng)從豬脂肪組織中制備的抗原產(chǎn)生的。根據(jù)上述試驗(yàn)1描述的類似過程獲得蛋黃脂肪組織抗體。每個注射劑的劑量為每只老鼠每天1ml。每一輪實(shí)施包括連續(xù)四天每天一次注射。試驗(yàn)中一個月使用一次蛋黃。原蛋黃中抗體的濃度要高于1∶12800。
對第二試驗(yàn)組使用相同劑量、濃度和頻率的蛋黃脂肪組織抗體，但是不是通過注射，而是通過口服。
對于這兩個老鼠試驗(yàn)組都有相應(yīng)的對比組。將普通的原蛋黃使用給老鼠控制組。
C.結(jié)果下列表格顯示試驗(yàn)結(jié)果。
表1體重和飼料轉(zhuǎn)換率中蛋黃脂肪組織抗體的影響(X±SE)


表2在老鼠體內(nèi)不同部位中蛋黃脂肪組織抗體對脂肪含量的影響(X±SE)

注具有不同上角標(biāo)的值具有不同意義；A、B意味著P＜0.01；a、b意味著P＜0.05表3在老鼠體內(nèi)血液中蛋黃脂肪組織抗體對甘油三酸酯、膽固醇和脂肪酸層上的的影響(X±SE)


注具有不同上角標(biāo)的值具有不同意義；A、B意味著P＜0.01；a、b意味著P＜0.05D.結(jié)果與討論表1顯示出與老鼠相應(yīng)的對比組比較，通過注射使用抗體使得第一試驗(yàn)組的體重和食物消耗量分別增長5.8％和1.7％。然而，飼料轉(zhuǎn)換率降低0.32％。還顯示出與老鼠相應(yīng)的對比組比較，通過口服使用抗體使得第一試驗(yàn)組的體重減少3.9％，食物消耗量增加了0.14％。飼料轉(zhuǎn)換率減少約10％。關(guān)于第一試驗(yàn)組和對比組的試驗(yàn)數(shù)據(jù)說明通過注射使用抗體，盡管飼料轉(zhuǎn)換率降低地非常小，但體重還是輕微增長。低飼料轉(zhuǎn)換率表示需要較少量的飼料來產(chǎn)生一個重量單位的體重。關(guān)于第二試驗(yàn)組和對比組的試驗(yàn)數(shù)據(jù)說明通過服用使用抗體，體重輕微地增加，并且飼料轉(zhuǎn)換率明顯減少10％。這點(diǎn)是重要的且論證了通過服用使用抗體在減少整個體重上更有效一點(diǎn)，在降低飼料轉(zhuǎn)換率上更明顯。
關(guān)于表2，顯示出相對于相應(yīng)的對比組，由于通過注射使用抗體導(dǎo)致其網(wǎng)膜和腸系膜、子宮旁結(jié)締組織和腎周的脂肪含量分別減少了3.7％、4.2％和6.4％。然而，腓腸肌脂肪含量增加了5.2％。還顯示出對于相應(yīng)的對比組，由于通過服用使用抗體使得它們的網(wǎng)膜和腸系膜、子宮旁結(jié)締組織和腎周的脂肪含量分別減少了17.1％、24.2％和2.16％。
在本試驗(yàn)中清晰顯示出，無論哪種方式用于抗體的使用，注射或服用，通常在減少動物體內(nèi)不同部位的脂肪含量都是有效的。尤其顯示出，在減少動物的普通脂肪含量中通過服用的方式使用更明顯有效。
關(guān)于表3，顯示出通過注射使用抗體促使甘油三酸酯層明顯減少25.5％。使得膽固醇和游離脂肪酸層分別少量地增長3.6％和4.0％。關(guān)于通過服用使用抗體，甘油三酸酯層明顯減少22.3％。使得膽固醇和游離脂肪酸分別增加12.3％或32.4％。
當(dāng)將所有三組數(shù)據(jù)綜合考慮時，清楚顯示出在動物體內(nèi)抗體的使用能夠減少其體內(nèi)的總脂肪含量，并且這一點(diǎn)由表2中顯示的試驗(yàn)組老鼠的整體脂肪含量和表3中顯示的甘油三酸酯的降低所支持。尤其是，顯示出相對于直接注射，服用方式的使用使抗體更有效。
上述結(jié)果在兩方面是顯著的。第一，意外的是，當(dāng)通過口服使用根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的抗體是更有效的。這是重要的，因?yàn)閺睦碚撋峡贵w能夠與農(nóng)場中的標(biāo)準(zhǔn)飼料混合，并且由此其使用變得非常簡單有效，甚至能夠達(dá)到減少脂肪含量的計(jì)劃中功能。第二，對動物沒有明顯的副作用。例如，整個體重沒有受到任何明顯的影響，然而脂肪含量減少。飼料轉(zhuǎn)換率也有輕微地改善。換句話說，目標(biāo)動物體內(nèi)有更少的脂肪含量和更高的瘦肉含量。
表3中顯示游離脂肪酸層明顯增加。其能夠通過如下解釋甘油三酸酯是由脂肪酸和甘油組成的。當(dāng)引起甘油三酸酯層(即脂肪含量)降低時，下列顯示的平衡向右移動。
甘油三酸酯脂肪酸+甘油→由于這個原因，引起游離脂肪酸層增加。
試驗(yàn)3脂肪組織抗體對老鼠體重的影響A.背景和方法本試驗(yàn)中使用的目標(biāo)動物是實(shí)驗(yàn)室老鼠。試驗(yàn)中使用的是平均體重為110g的150只正在發(fā)育的母鼠。將老鼠隨機(jī)地分為5組(即組I到V)關(guān)入籠子中，每個籠子中3只老鼠。組I是對比組，組II到V是試驗(yàn)組。用普通的老鼠飼料喂食。普通飼料的組合物如下所示。
表4普通飼料組合物


試驗(yàn)中，組I的老鼠用普通食品喂養(yǎng)。組II到V用加入了根據(jù)上述試驗(yàn)1描述的方法制備的不同數(shù)量的脂肪組織抗體的普通食品喂養(yǎng)。根據(jù)上述試驗(yàn)1的制備方法產(chǎn)生抗體。尤其是，根據(jù)從豬脂肪組織中制備的抗原注射劑中產(chǎn)生抗體。
試驗(yàn)開始于2002年11月28日，結(jié)束于2003年2月18日。
B.結(jié)果表5抗體對脂肪組織的影響(X±SE)


C.討論和結(jié)論上述結(jié)果說明相對于對比組老鼠，喂養(yǎng)加入了75ppm抗體的食物的老鼠的子宮旁結(jié)締組織脂肪減少了16.89％、腸系膜脂肪減少了7.76％、腎周脂肪減少了11.88％和腹部減少了12.60g。相對于對比組老鼠，喂養(yǎng)加入了75ppm抗體的食物的老鼠的腓腸肌肌肉重量沒有明顯不同。
上述結(jié)果說明相對于對比組老鼠，喂養(yǎng)加入了6000ppm抗體的食物的老鼠的子宮旁結(jié)締組織脂肪減少了14.90％、腸系膜脂肪減少了10.56％、腎周脂肪減少了20.21％和腹部減少了13.05g。相對于對比組老鼠，喂養(yǎng)加入了6000ppm抗體的食物的老鼠的腓腸肌肌肉重量增加了1.08％。不過，這個增加是明顯的。
試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示不同老鼠組的食物食用量在統(tǒng)計(jì)上大致相同。
試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示根據(jù)本發(fā)明制備和使用的抗體對調(diào)節(jié)，尤其是減少目標(biāo)動物的脂肪組織是有效的。
根據(jù)上述試驗(yàn)的結(jié)果，當(dāng)將抗體使用于畜牧場(例如，通過動物飼料)時，其能夠生產(chǎn)出具有更多瘦肉的動物。在大多數(shù)供給人類消耗品的作為產(chǎn)肉的飼養(yǎng)動物中，豬傾向于具有相當(dāng)多的脂肪含量。因此，本發(fā)明尤其適合應(yīng)用于養(yǎng)豬。
當(dāng)應(yīng)用于在人類的使用中時，抗體能應(yīng)用于治療或預(yù)防肥胖癥和/或相關(guān)情況的藥物或組合物的制備。換句話說，抗體能夠加入到適合人類消耗品的食品增補(bǔ)劑中。也可以生產(chǎn)包括這個抗體的藥物。
在這里，上述提及的每一個參考文獻(xiàn)的內(nèi)容和英國專利No.0212876.7合并為其整個參考文獻(xiàn)。值得注意的是數(shù)量的變化、修正和進(jìn)一步的實(shí)施方案是有可能和有根據(jù)的，所有這些變化，修改和實(shí)施方案都能被認(rèn)為是在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，而且能被本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解。
權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)抗體的非治療方法，該抗體束縛需要所述抗體的目標(biāo)動物內(nèi)的脂肪組織，以調(diào)節(jié)所述目標(biāo)動物內(nèi)脂肪組織的含量，該方法包括以下步驟(1)從源動物脂肪組織制備抗原；(2)對產(chǎn)蛋動物使用抗原，促使所述抗體的產(chǎn)生；和(3)從所述產(chǎn)蛋動物的蛋中獲得所述抗體，其中所述源動物和所述產(chǎn)蛋動物屬于不同物種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，包括促使來自所述產(chǎn)蛋動物體內(nèi)的所述抗體產(chǎn)生的步驟。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，包括促使所述抗體在所述產(chǎn)蛋動物的所述蛋中沉積的步驟。
4.根據(jù)上述任何權(quán)利要求的方法，其中所述可獲得的步驟包括從所述蛋的蛋黃中分離所述抗體的步驟。
5.根據(jù)上述任何權(quán)利要求的方法，其中所述抗原包括所述源動物的所述脂肪組織的質(zhì)膜、其脂肪細(xì)胞質(zhì)膜表層蛋白、或其片段。
6.根據(jù)上述任何權(quán)利要求的方法，其中所述抗體是多克隆抗體。
7.根據(jù)上述任何權(quán)利要求的方法，其中所述源動物和所述產(chǎn)蛋動物屬于明顯不同的物種。
8.根據(jù)上述任何權(quán)利要求的方法，其中所述目標(biāo)動物和所述產(chǎn)蛋動物屬于不同物種。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述目標(biāo)動物和產(chǎn)蛋動物屬于明顯不同的物種。
10.根據(jù)上述任何權(quán)利要求的方法，其中所述目標(biāo)動物和源動物屬于相同物種。
11.根據(jù)上述權(quán)利要求1到9中任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述目標(biāo)動物和所述源動物屬于接近物種。
12.根據(jù)上述任何權(quán)利要求的方法，其中所述目標(biāo)動物是飼養(yǎng)動物。
13.根據(jù)上述任何權(quán)利要求的方法，其中所述源動物和/或目標(biāo)動物是豬。
14.根據(jù)上述權(quán)利要求1到11中任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述目標(biāo)動物是患者。
15.根據(jù)上述任何權(quán)利要求的方法，其中所述產(chǎn)蛋動物是禽類動物，所述源動物是非禽類動物。
16.根據(jù)上述任何權(quán)利要求的方法，其中所述源動物是哺乳動物。
17.根據(jù)上述任何權(quán)利要求的方法，其中一個或多個所述動物在所述方法實(shí)施后死亡。
18.根據(jù)權(quán)利要求1到17中任何一個權(quán)利要求所限定的方法獲得的抗體。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的所述抗體，其用于治療或診斷的方法。
20.根據(jù)權(quán)利要求18所限定抗體的使用，其應(yīng)用于制備由過度的脂肪細(xì)胞引起的狀況的治療的藥物。
21.一種含有有效量的根據(jù)權(quán)利要求18所限定的抗體的飼料添加劑。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的飼料添加劑，其適合降低所述目標(biāo)動物內(nèi)所述脂肪組織的含量。
23.根據(jù)權(quán)利要求21或22的飼料添加劑，其中所述組合物包括含有所述抗體的所述蛋的蛋黃。
24.一種含有藥學(xué)有效量的根據(jù)權(quán)利要求18所限定的抗體的藥物。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的藥物，其適合通過食用應(yīng)用。
26.根據(jù)權(quán)利要求24的藥物，其適合通過注射應(yīng)用。
27.一種調(diào)節(jié)需要抗體的目標(biāo)動物體內(nèi)脂肪組織含量的方法，包括以下步驟(1)從源動物的脂肪組織制備抗原；(2)對產(chǎn)蛋動物使用所述抗原；(3)使得所述產(chǎn)蛋動物響應(yīng)所述抗原產(chǎn)生所述抗體；(4)從所述產(chǎn)蛋動物的蛋中獲得所述抗體；(5)對所述目標(biāo)動物使用所述藥學(xué)有效量的所述抗體，其中所述源動物和所述產(chǎn)蛋動物屬于不同物種。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的方法，其中所述可獲得的步驟包括從所述蛋的蛋黃中分離所述抗體的步驟。
29.根據(jù)權(quán)利要求27或28的方法，包括通過食用使用所述抗體的步驟。
30.根據(jù)權(quán)利要求27或28的方法，包括通過注射使用所述抗體的步驟。
31.根據(jù)權(quán)利要求27到30中的任何一個權(quán)利要求的方法，包括所述抗體束縛所述目標(biāo)動物的所述脂肪組織質(zhì)膜的特征成分的步驟。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，包括所述抗體束縛所述目標(biāo)動物的所述脂肪組織的粒狀粘質(zhì)蛋白的步驟。
33.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，包括所述抗體束縛所述目標(biāo)動物的所述脂肪組織的纖維粘質(zhì)蛋白的步驟。
34.根據(jù)權(quán)利要求27到33中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述抗原包括所述源動物脂肪組織的質(zhì)膜、其脂肪細(xì)胞質(zhì)膜表層蛋白、或其片段。
35.根據(jù)權(quán)利要求27到34中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述抗體是多克隆抗體。
36.根據(jù)權(quán)利要求27到35中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述源動物和所述產(chǎn)蛋動物屬于明顯不同的物種。
37.根據(jù)權(quán)利要求27到36中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述目標(biāo)動物和所述產(chǎn)蛋動物屬于不同物種。
38.根據(jù)權(quán)利要求37的方法，其中所述目標(biāo)動物和所述產(chǎn)蛋動物屬于明顯不同的物種。
39.根據(jù)權(quán)利要求27到38中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述目標(biāo)動物和所述源動物屬于相同物種。
40.根據(jù)權(quán)利要求27到38中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述目標(biāo)動物和所述源動物屬于接近物種。
41.根據(jù)權(quán)利要求27到40中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述方法是非治療性方法。
42.根據(jù)權(quán)利要求27到41中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述目標(biāo)動物是飼養(yǎng)動物。
43.根據(jù)權(quán)利要求27到42中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述源動物和/或所述目標(biāo)動物是豬。
44.根據(jù)權(quán)利要求27到41中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述目標(biāo)動物是患者。
45.根據(jù)權(quán)利要求27到44中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述產(chǎn)蛋動物是禽類動物，所述源動物是非禽類動物。
46.根據(jù)權(quán)利要求27到45中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中所述源動物是哺乳動物。
47.根據(jù)權(quán)利要求27到46中的任何一個權(quán)利要求的方法，其中一個或多個所述動物在所述方法實(shí)施后死亡。
48.一種生產(chǎn)抗體的方法，該抗體束縛需要所述抗體的目標(biāo)動物內(nèi)脂肪組織，以調(diào)節(jié)所述目標(biāo)動物內(nèi)脂肪組織的含量，包括以下步驟(4)從源動物的脂肪組織制備抗原；(5)對產(chǎn)蛋動物使用所述抗原，促使所述抗體的產(chǎn)生；和(6)從所述產(chǎn)蛋動物的蛋中獲得所述抗體，其中所述源動物和所述產(chǎn)蛋動物屬于不同物種。
全文摘要
一種生產(chǎn)抗體的非治療方法，該抗體束縛需要抗體的目標(biāo)動物內(nèi)脂肪組織，以調(diào)節(jié)目標(biāo)動物內(nèi)脂肪組織的含量，該方法包括以下步驟(a)用源動物脂肪組織制備抗原；(b)對產(chǎn)蛋動物使用抗原，促使抗體的產(chǎn)生；和(c)從產(chǎn)蛋動物的蛋中獲得抗體，其中源動物和產(chǎn)蛋動物屬于不同物種。
文檔編號A23K1/18GK1659186SQ03813074
公開日2005年8月24日 申請日期2003年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月5日
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