專利名稱：量子點(diǎn)納米熒光探針及其在腫瘤靶向檢測(cè)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及腫瘤靶向的量子點(diǎn)熒光探針的制備方法及其在腫瘤檢測(cè)中的應(yīng)用。背景技術(shù)：
量子點(diǎn)(QDs)是一種新型納米熒光材料，具有良好的熒光發(fā)射性質(zhì)，尺寸與有機(jī)染料分子相近，通過調(diào)節(jié)量子點(diǎn)的尺寸可以實(shí)現(xiàn)在同一激發(fā)波長(zhǎng)下對(duì)不同顏色量子點(diǎn)的發(fā)射，且具有更優(yōu)良的抗光致漂白性質(zhì)，在生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域具有很大的應(yīng)用前景。目前量子點(diǎn)還處于研究階段，其較低的生物相容性和組織(細(xì)胞)靶向性問題大大限制了量子點(diǎn)的臨床應(yīng)用。因此，人們正在努力尋找改善量子點(diǎn)毒性和提高其在特定組織或細(xì)胞中豐度的有效方法。目前的方法包括量子點(diǎn)與小分子、蛋白質(zhì)、抗原/抗體的結(jié)合；或量子點(diǎn)包封于高分子 載體；或其與生物相容分子的物理混合等。其中，對(duì)量子點(diǎn)進(jìn)行合理表面修飾是制備高生物相容性、細(xì)胞祀向的量子點(diǎn)探針的熱點(diǎn)技術(shù)之一。量子點(diǎn)表面修飾主要通過共價(jià)連接、疏水作用、硅烷化、靜電作用、螯合配位等方式，將修飾劑分子連接到QDs表面。由于生命體系中的長(zhǎng)時(shí)間和動(dòng)態(tài)的示蹤和成像，要求探針在復(fù)雜的生理環(huán)境下能保持相當(dāng)好的穩(wěn)定性，因此，共價(jià)偶聯(lián)和螯合配位修飾連接方式成為首選的量子點(diǎn)探針制備方法。通常采用三辛基氧化膦(TOPO)作為配體，采用金屬有機(jī)合成法，也即在高溫下有機(jī)金屬分解成核生長(zhǎng)形成量子點(diǎn)納米粒子，再通過配體置換的方法將量子點(diǎn)表面的TOPO用含巰基的配體替代，得到表面具有各種功能團(tuán)的量子點(diǎn)。特殊修飾劑的連接可通過(1)1-乙基_3-[3-( 二甲氨基)丙基]碳二亞胺(EDC)將QDs上的羧基活化，接著與N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)反應(yīng)生成活潑的酯，活潑的酯容易與伯胺分子反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)伯胺與羧基的共價(jià)偶聯(lián)；或采用(2)丁二酰亞胺基-4-馬來酰亞胺基環(huán)己烷-I-羧化酷(SMCC),在氣基和疏基之間起橋連作用，使分別含有氣基和疏基的化合物有效偶聯(lián)。但是，上述量子點(diǎn)制備方法和表面修飾策略都存在不足。金屬有機(jī)合成法對(duì)制備條件要求較高，要求無水無氧的實(shí)驗(yàn)條件，合成溫度高(30(Γ400攝氏度)，制備需要的儀器也較為昂貴，從而導(dǎo)致生產(chǎn)成本較高。并且制備的量子點(diǎn)水溶性差，需要進(jìn)行過程復(fù)雜的配體交換。之后的偶聯(lián)反應(yīng)雖經(jīng)過催化劑活化，但偶聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)率難以準(zhǔn)確計(jì)算，且后處理復(fù)雜。然而，量子點(diǎn)的水相合成反應(yīng)避免了以上缺點(diǎn)，合成可在較低溫度條件下(低于110攝氏度)實(shí)現(xiàn)，可直接采用含巰基配體交換的方法，一步反應(yīng)能同時(shí)連接生物相容性分子和具有細(xì)胞靶向性的配體，方法簡(jiǎn)單并且后處理容易，容易批量制備。這種新合成技術(shù)解決了目前傳統(tǒng)制備方法操作復(fù)雜、后處理困難、成本高的缺點(diǎn)，為制備生物相容性和細(xì)胞靶向性好的量子點(diǎn)探針提供了極大的便利，為量子點(diǎn)納米熒光探針在腫瘤靶向檢測(cè)中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的問題是針對(duì)量子點(diǎn)的傳統(tǒng)制備方法操作復(fù)雜和成本高的缺點(diǎn)，希望提供一種方法簡(jiǎn)單的量子點(diǎn)水相合成技術(shù)，實(shí)現(xiàn)量子點(diǎn)表面生物相容性分子和靶向配體分子的一步修飾，并應(yīng)用于腫瘤靶向檢測(cè)中。
本發(fā)明基于生物體內(nèi)具有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp，RGD)三肽序列的配體分子能夠與腫瘤細(xì)胞及新生血管內(nèi)皮細(xì)胞表面上調(diào)表達(dá)的整合素受體結(jié)合，在腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)，外源性的RGD三肽通過與腫瘤細(xì)胞及新生血管內(nèi)皮細(xì)胞表面整合素受體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，可以阻止腫瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移。而環(huán)狀RGD三肽(cRGD)比線性RGD三肽更能增加肽的穩(wěn)定性、親和力及與整合素受體結(jié)合的特異性，因此，本發(fā)明將cRGD三肽直接修飾于量子點(diǎn)表面，制備一種具有熒光特性的靶向整合素的量子點(diǎn)探針，應(yīng)用于抗腫瘤藥物系統(tǒng)的構(gòu)建和腫瘤新生血管靶向檢測(cè)研究。本發(fā)明的技術(shù)方案為
(l)CdTe/CdS量子點(diǎn)的合成
NaHTe溶液的制備在25 mL三頸瓶中加入5 mg締粉、38 mg硼氫化鈉,在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加10 mL去離子水，磁力攪拌，控溫80°C，反應(yīng)30分鐘，反應(yīng)最終溶液為紫紅色液體。
CdTe核的制備在250 mL三頸瓶中加入183 mg氯化鎘，160 mL去離子水，112 μ L巰基乙酸，攪拌，滴加I mol/L氫氧化鈉至溶液pH為10，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下趁熱加入4 mL上述NaHTe溶液，控溫100°C，攪拌若干小時(shí)，冷卻至室溫。CdTe/CdS的制備在制備好的CdTe核中加入224 μ L巰基乙酸，滴加I mol/L氫氧化鈉至溶液PH為10，氮?dú)獗Ｗo(hù)，100°C控溫反應(yīng)I小時(shí)。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至25 mL，加等體積冰凍異丙醇，攪拌，離心收集固體(5000 rpm, 5min)，即得CdTe/CdS量子點(diǎn)。(2)聚乙二醇單甲醚硫辛酸酯(mPEG-TA)的制備
將硫辛酸 TA (3. 09 g，15 mmol)、聚乙二醇單甲醚 mPEG35(l (3. 5 g，10 mmol), N, N —二環(huán)己基碳二亞胺DCC (3. 09 g，15 mmol)、對(duì)二甲氛基批P定DMAP (0.122 g, I. 00 mmol)溶于60 mL 二氯甲烷中，室溫?cái)嚢?4小時(shí)。抽濾，濾液濃縮，飽和碳酸鈉溶解，乙酸乙酯萃取3次，有機(jī)層合并，適量無水硫酸鈉干燥。抽濾后濃縮黃色液體，經(jīng)柱層析(二氯甲烷甲醇=30:1)得到黃色液體 mPEG35(l-TA 4.42 g。此法同樣適用于聚乙二醇單甲醚55(|硫辛酸酯OiiPEG55ci-TA)和聚乙二醇單甲醚75(|硫辛酸酯(mPEG75Q-TA)的合成。(3)聚乙二醇單甲醚硫辛酸酯和/或環(huán)狀RGD肽對(duì)量子點(diǎn)的表面修飾
將0. 17 mmol mPEG-TA溶于2 mL甲醇中，在O °C攪拌條件下加入I. 5倍摩爾量的硼氫化鈉水溶液(I mg/mL)，繼續(xù)攪拌I h，采用I mol/mL鹽酸調(diào)節(jié)pH值約為6。在該溶液中加入預(yù)先用三(2 -羧乙基)膦鹽酸(TCEP)處理的cRGD肽，使mPEG和cRGD的摩爾比例分別為 3: 0,3: 1,3: 3,1 3 和 0: 3 (可分別表示為 QDs-mPEG, QDs-mPEG/cRGD0 25,QDs-mPEG/cRGD0 5, QDs-mPEG/cRGD。.75，and QDs-cRGD)。然后，在溶液中加入 10 mg量子點(diǎn)，室溫溫和攪拌I h。采用截留分子量為3 500 Da的透析袋在去離子水中透析24 h，凍干，獲得具有不同聚乙二醇和小肽摩爾比的棕色粘稠物質(zhì)(QDs-mPEGx/cRGDy)。(4)細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)
采用整合素受體表達(dá)高的人類乳腺癌MDA-MB-231作為模型細(xì)胞株，探討不同表面修飾量子點(diǎn)的細(xì)胞攝取情況。MDA-MB-231細(xì)胞在含10% (V/V)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)箱條件為37°C，含有5% CO2。當(dāng)MDA-MB-231細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%，將經(jīng)0. 22微米的無菌過濾器過濾的量子點(diǎn)及其表面修飾衍生物溶液加入細(xì)胞培養(yǎng)基中，最終濃度為40 ug/mL。采用激光共聚焦掃描顯微鏡對(duì)量子點(diǎn)的細(xì)胞攝取特性進(jìn)行分析。激發(fā)波長(zhǎng)為365 nm，檢測(cè)波長(zhǎng)為650 nm，放大倍率為1000。采用有機(jī)金屬熱解方法制備的量子點(diǎn)在應(yīng)用于細(xì)胞或生物體檢測(cè)之前，通常需要使用雙親性的膠束并通過膠束疏水相互作用將量子點(diǎn)疏水表面轉(zhuǎn)化成親水表面，再采用化學(xué)方法連接細(xì)胞靶向分子，這一方法增大了量子點(diǎn)的粒徑。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下的有益效果采用水相還原的方法在較低溫度下可獲得水溶性的量子點(diǎn)，采用一步反應(yīng)能同時(shí)賦予量子點(diǎn)體內(nèi)長(zhǎng)循環(huán)和特定細(xì)胞靶向的功能，使具有良好熒光特性的量子點(diǎn)能躲避網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞的清除，并準(zhǔn)確靶向至腫瘤細(xì)胞。同時(shí)，直接共價(jià)修飾法大大減小了量子點(diǎn)的粒徑，有助于粒子的清除，減 小毒副作用。本法制備原料易于獲取，簡(jiǎn)單便宜，制備過程全部為常規(guī)條件下共價(jià)修飾，不改變量子點(diǎn)和修飾劑的性質(zhì)，并能夠有效降低成本。四

圖I量子點(diǎn)納米突光探針結(jié)構(gòu)示意圖(以RGD祀向配體為例)。圖2量子點(diǎn)CdTe/CdS紅外光譜(A)、紫外光譜(B)、熒光光譜(C)和透射電鏡圖Φ)。圖3長(zhǎng)循環(huán)修飾劑聚乙二醇單甲醚硫辛酸酯(TA-mPEG)合成路線。圖4聚乙二醇單甲醚硫辛酸酯和/或環(huán)狀RGD肽修飾的量子點(diǎn)制備路線。圖5修飾過的量子點(diǎn)熒光性質(zhì)表征。圖6采用熒光共聚焦顯微鏡觀察人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231對(duì)量子點(diǎn)QD及修飾量子點(diǎn) QD-mPEG，QD-mPEG/cR⑶的攝取結(jié)果。(A) Control, (B) QDs, (C) QDs-mPEG, (D)QDs-mPEG/cRGD0 25, (E) QDs-mPEG/cRGD0 5, (F) QDs_mPEG/RGD0 75·
五具體實(shí)施例方式
本發(fā)明在具體實(shí)施過程中，主要涉及結(jié)構(gòu)如圖I所示的腫瘤靶向量子點(diǎn)納米探針的制備。該探針由三部分組成(I)量子點(diǎn)內(nèi)核為具有殼-核結(jié)構(gòu)的熒光納米粒子(CdTe/CdS);
(2)長(zhǎng)循環(huán)修飾劑為聚乙二醇系列衍生物；(3)腫瘤靶向修飾劑為具有巰基的靶向分子RGD三肽。下面通過實(shí)施例具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明不受下述實(shí)施例的限定。(l)CdTe/CdS量子點(diǎn)的合成在25 mL三頸瓶中加入5 mg碲粉、38 mg硼氫化鈉，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加10 HiL去離子水，磁力攪拌，控溫80°C，反應(yīng)30分鐘，制備得到紫紅色的NaHTe溶液。另外，在250 mL三頸瓶中加入183 mg氯化鎘，160 mL去離子水，112 μ L巰基乙酸，攪拌，滴加I mol/L氫氧化鈉至溶液pH為10，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下趁熱加入4 mL合成好的NaHTe溶液，控溫100°C，攪拌若干小時(shí)，冷卻至室溫制備得到CdTe核。在制備好的CdTe核中加入224 UL巰基乙酸，滴加I mol/L氫氧化鈉至溶液pH為10，氮?dú)獗Ｗo(hù)，100°C控溫反應(yīng)I小時(shí)。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至25 mL,加等體積冰凍異丙醇,攪拌,離心收集固體(5000 rpm,5min)，即得CdTe/CdS量子點(diǎn)。(2) CdTe/CdS量子點(diǎn)的表征圖2A中1645，1574 cm-1的紅外吸收可歸屬為巰基乙酸保護(hù)層的化學(xué)結(jié)構(gòu)，說明巰基乙酸對(duì)量子點(diǎn)的修飾和保護(hù)作用。量子點(diǎn)溶液的紫外吸收光譜(圖2B)在550 nm處有一肩峰，且在紫外光激發(fā)下，在650 nm左右具有較對(duì)稱的熒光發(fā)射峰(圖2C)，說明其在紫外激發(fā)下可發(fā)出熒光，與圖2中365 nm紫外光照射下發(fā)射肉眼可見的熒光相符。CdTe/CdS量子點(diǎn)透射電鏡圖可見于圖2D中，觀察到均勻分布的量子點(diǎn)，平均粒徑在3-5 nm。(3)聚乙二醇單甲醚硫辛酸酯(TA-mPEG)的合成與表征為了提高量子點(diǎn)的穩(wěn)定性和體內(nèi)長(zhǎng)循環(huán)時(shí)間，合成了具有雙巰基功能團(tuán)的聚乙二醇分子作為量子點(diǎn)的修飾劑，其合成路線如圖3所示。采用不同分子量的一端甲氧基封端的聚乙二醇分子(mPEG，MW=350，550和750)，在催化劑作用下與硫辛酸(TA)形成酯鍵，獲得TA-mPEG。為了確保巰基與量子點(diǎn)相連，TA-mPEG在修飾前采用硼氫化鈉還原的方法打開二硫鍵，釋放出游離的雙巰基。合成的TA-mPEG進(jìn)一步通過FT-IR、IH-NMR和13C-NMR結(jié)構(gòu)確證，結(jié)果如下
mPEG350-TA: IH NMR (CDC13, 300 MHz) δ 1.48 (m, 2H)，1.66 (m, 4H)，1.92(m, 1H)，2.00 (s, 1H)，2. 36 (t, 2H)，2.46 (m, 1H)，3. 18 (m, 2H)，3. 37 (s,3H), 3. 50-3.80 (m, 33H)，4. 22 (t, 2H). 13C NMR δ 24.31，28.37，33.62，34.27，38. 16，39. 89，53. 26，55. 99，58. 67，63. 13，68. 85，70. 19，70. 27，71. 64，173. 02.IR (KBr) V max 3575，2865，1728，1454，1343，1301，1249，1104，941，848 cm-1.
mPEG550-TA: IH NMR (CDC13, 300 MHz) δ 1.48 (m, 2H)，1.66 (m, 4H)，1.92(m, 1H)，2.00 (s, 1H)，2. 36 (t, 2H)，2.46 (m, 1H)，3. 18 (m, 2H)，3. 37 (s,3H), 3. 50-3.80 (m, 41H), 4. 22 (t, 2H). 13C NMR δ 24.37，28.45，33.69，34.34， 38. 23，39. 96，53. 30，56. 06，58. 74，63. 20，68. 92，70. 27，70. 34，71. 71，173. 10.IR (KBr) V max 3524，2874，1728，1454，1352，1292，1249，1104，941，848 cm-1.
mPEG750-TA: IH NMR (CDC13, 300 MHz) δ 1.48 (m, 2H)，1.66 (m, 4H)，1.92(m, 1H)，2. 36 (m, 4H)，2.47 (m, 1H)，2. 77 (s, 1H)，3. 18 (m, 2H)，3. 37 (s,3H), 3. 50-3.80 (m, 43H)，4. 23 (t, 2H). 13C NMR δ 24.51，28.59，33.83，34.48，38.36，40.10，53.34，56.21，58.89，63.35，69.07，70.48，71.85，173. 28. IR(KBr) V max 3517，2874，1728，1454，1352，1292，1249，1104，941，848 cm-1.
(4)聚乙二醇單甲醚硫辛酸酯和/或環(huán)狀RGD肽修飾的量子點(diǎn)制備與表征我們將合成的DHLA-mPEG和帶有巰基功能團(tuán)的靶向小肽RGD同時(shí)連接于量子點(diǎn)表面，合成路線如圖4所示。具體的操作如下將O. 17 mmol mPEG-TA溶于2 mL甲醇中，在O °(攪拌條件下加入
I.5倍摩爾量的硼氫化鈉水溶液(I mg/mL),繼續(xù)攪拌I h,采用I mol/mL鹽酸調(diào)節(jié)pH值約為6。在該溶液中加入預(yù)先用三(2 -羧乙基)膦鹽酸(TCEP)處理的CR⑶肽，使mPEG和CR⑶的摩爾比例分別為3: 0,3: 1,3: 3,1 3和O: 3。然后，在溶液中加入10 mg量子點(diǎn)，室溫溫和攪拌I h。采用截留分子量為3 500 Da的透析袋在去離子水中透析24 h，凍干，獲得具有不同聚乙二醇和小肽摩爾比的棕色粘稠物質(zhì)。此外，還對(duì)修飾過的量子點(diǎn)進(jìn)行熒光性質(zhì)表征，結(jié)果如圖5所示。量子點(diǎn)經(jīng)DHLA-mPEG修飾后，粒子之間距離增加，熒光發(fā)射光譜強(qiáng)度大大增加。同時(shí)修飾mPEG和cRGD分子的量子點(diǎn)由于其表面部分位點(diǎn)(面積)被cRGD分子占據(jù)，熒光較QD有所增強(qiáng)，但弱于QDs-mPEG。修飾后的量子點(diǎn)仍然保持單分散性質(zhì)，粒徑有所增加，在5 nm左右。(5)量子點(diǎn)在腫瘤細(xì)胞檢測(cè)中應(yīng)用采用整合素受體表達(dá)高的人乳腺癌MDA-MB-231作為模型細(xì)胞株，應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡對(duì)細(xì)胞狀態(tài)和攝取情況進(jìn)行觀察，探討不同表面修飾量子點(diǎn)對(duì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況。結(jié)果如圖6所示，隨著量子點(diǎn)表面cRGD比例的提高，量子點(diǎn)在細(xì)胞內(nèi)的攝取也相應(yīng)提高，通過調(diào)節(jié)量子點(diǎn)表面mPEG和cRGD的摩爾比可有效調(diào)控量子點(diǎn)對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，可應(yīng)用于腫瘤靶向的細(xì)胞熒光成像檢測(cè)。此夕卜，從細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)還可獲得以下結(jié)果(I)鏈長(zhǎng)短于750 Da的聚乙二醇單甲醚表面修飾劑的疏水性強(qiáng)，難溶于水，不可直接用于生物實(shí)驗(yàn)，(2)鏈長(zhǎng)大于750 Da聚乙二醇單甲醚表面修飾的量子點(diǎn)較難進(jìn)入細(xì)胞。(3)不同mPEG75(l/cR⑶摩爾比例修飾的量子點(diǎn)對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染 效率與表面特異靶向分子cRGD比例密切相關(guān)。
權(quán)利要求
1.一種腫瘤靶向量子點(diǎn)熒光探針，其特征是由三部分組成(1)量子點(diǎn)內(nèi)核為具有殼-核結(jié)構(gòu)的熒光納米粒子如CdSe/CdS或CdTe/CdS或CdTe/ZnS ；(2)長(zhǎng)循環(huán)修飾劑為聚乙二醇系列衍生物；(3)靶向修飾劑為具有巰基的腫瘤靶向系列配體如RGD肽、葉酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤靶向量子點(diǎn)熒光探針，其特征是量子點(diǎn)制備方法為在絕氧條件下制備NaHTe或NaHSe溶液，在巰基化合物保護(hù)劑存在下6(Tl00° C與氯化鎘反應(yīng)，形成CdTe量子點(diǎn)內(nèi)核，過量的巰基保護(hù)劑8(Tl20° C熱解與量子點(diǎn)表面Cd元素生成CdS外殼，或同時(shí)加入Zn2+和S2-離子形成ZnS外殼。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤靶向量子點(diǎn)熒光探針，其特征在于巰基保護(hù)劑為ω -巰基化合物，分子式為 HS- (CH2CH2)m_R，其中 m = f 5，R = CH3, -COOH, -NH2, -CH =CH2, -N(CH3)3O
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤靶向量子點(diǎn)熒光探針，其特征在于內(nèi)核Cd=Te或Se =O.8 2. 6，反應(yīng)時(shí)間為O. 5 24h。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤靶向量子點(diǎn)熒光探針，其特征在于長(zhǎng)循環(huán)修飾劑制備方法為采用不同分子量的單甲基聚乙二醇為原料，對(duì)其末端基團(tuán)進(jìn)行巰基修飾，在催化劑作用下與硫辛酸，簡(jiǎn)稱TA，形成酯鍵，獲得TA-mPEG，為了確保巰基與量子點(diǎn)相連，TA-mPEG在修飾量子點(diǎn)之前采用硼氫化鈉還原的方法打開二硫鍵，釋放出游離的雙巰基。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤靶向量子點(diǎn)熒光探針，其特征在于靶向修飾劑為具有巰基的腫瘤細(xì)胞靶向配體。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤靶向量子點(diǎn)探針，其特征為具有巰基的長(zhǎng)循環(huán)修飾劑和腫瘤靶向修飾劑在溶液中置換量子點(diǎn)表面的巰基保護(hù)劑，長(zhǎng)循環(huán)修飾劑/靶向修飾劑的比例通過兩者加入量的多少進(jìn)行調(diào)控，其比例為20(T3000mg/mg。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤靶向量子點(diǎn)熒光探針在腫瘤細(xì)胞熒光成像檢測(cè)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及腫瘤靶向的量子點(diǎn)熒光探針的制備方法及其在腫瘤檢測(cè)中的應(yīng)用。該方法針對(duì)量子點(diǎn)的傳統(tǒng)制備方法操作復(fù)雜和成本高的缺點(diǎn)，提供一種簡(jiǎn)單便宜的量子點(diǎn)水相合成技術(shù)。具體合成過程包括水溶性量子點(diǎn)的合成，帶有巰基功能團(tuán)的生物相容性修飾劑mPEG和腫瘤細(xì)胞靶向修飾劑cRGD的合成以及量子點(diǎn)與帶有巰基的兩種修飾劑的直接反應(yīng)。該方法制備原料易于獲取，制備過程全部為常規(guī)條件下共價(jià)修飾并且不會(huì)改變量子點(diǎn)和修飾劑性質(zhì)，采用一步反應(yīng)能同時(shí)賦予量子點(diǎn)體內(nèi)長(zhǎng)循環(huán)和特定細(xì)胞靶向的功能，能夠有效降低成本。該方法制備的修飾后量子點(diǎn)粒徑為5nm左右，熒光明亮，抗光致漂白性質(zhì)強(qiáng)，具有很好的生物相容性。通過進(jìn)一步調(diào)節(jié)量子點(diǎn)表面mPEG和cRGD的摩爾比可有效調(diào)控量子點(diǎn)對(duì)人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，可應(yīng)用于腫瘤靶向的細(xì)胞熒光成像檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N21/64GK102879364SQ201210349788
公開日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月19日
發(fā)明者陳江寧, 丁婭, 張峻峰, 陳夢(mèng)婕, 尤宸超 申請(qǐng)人:南京大學(xué)