專利名稱：一種豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動(dòng)物疫病檢測(cè)，具體涉及一種豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒，同時(shí)還涉及一種豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒的用途，適用于檢測(cè)豬血清中的豬鏈球菌2型的莢膜多糖的抗體水平。
背景技術(shù)：
豬鏈球菌(streptococcus suis)是一種能引起人、豬和其他動(dòng)物感染、發(fā)病的重要致病菌。根據(jù)莢膜多糖分型，豬鏈球菌有35個(gè)血清型，即1/2型和1-34型(后來研究認(rèn)為32和34型屬于Streptococcus orisratti)。其中豬鏈球菌2型(SS2)是毒力最強(qiáng)、流行最廣的血清型。國外自1968年荷蘭首次報(bào)道人感染腦膜炎病例以來已有200多人因感 染豬鏈球菌死亡。在我國，自七十年代以來該病在全國二十多個(gè)省市已發(fā)生或流行，造成了不同程度的經(jīng)濟(jì)損失。2005年6 8月間，四川省資陽市、內(nèi)江市等地區(qū)暴發(fā)流行豬鏈球菌2型病，并導(dǎo)致204人感染，38人死亡。在其它省市也有零星發(fā)生。由此可見，該病在我國廣泛存在并嚴(yán)重流行，已成為當(dāng)前嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的一種主要疾病，不僅給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，而且給人類也造成了嚴(yán)重的危害。為了有效地預(yù)防和控制豬鏈球菌2型病，在加強(qiáng)免疫預(yù)防的同時(shí)，使用特異、敏感、快速、便于操作的診斷和檢測(cè)方法，為有效預(yù)防和控制豬鏈球菌2型的發(fā)生提供有力的手段和重要的工具。本發(fā)明應(yīng)用提取的豬鏈球菌2型的莢膜多糖及ELISA檢測(cè)技術(shù)，使試劑盒具有很好的敏感性和特異性，能大通量的檢測(cè)豬血清中的豬鏈球菌2型莢膜多糖的抗體。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在于提供了一種豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒，該試劑盒的優(yōu)點(diǎn)是使用了豬鏈球菌2型的莢膜多糖作為抗原，使試劑盒的檢測(cè)具有良好的靈敏性和特異性。本發(fā)明的另一個(gè)目的是在于提供了一種豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒在檢測(cè)豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫中的應(yīng)用，將提取的豬鏈球菌2型莢膜多糖作為抗原包被于聚苯乙烯微孔板上，然后加待檢血清孵育，再加入羊抗豬酶標(biāo)抗體(購自Southern biotechnology associates (SBA)),顯色時(shí)應(yīng)出現(xiàn)兩種情況,如果待檢血清是陽性，那么此時(shí)加入的羊抗豬酶標(biāo)抗體就會(huì)繼續(xù)與陽性血清中的抗體反應(yīng)，酶標(biāo)儀檢測(cè)數(shù)值就會(huì)越高。如果是待檢血清陰性，那么羊抗豬酶標(biāo)抗體就不會(huì)與ELISA板上豬鏈球菌2型莢膜多糖抗原反應(yīng)，得到的數(shù)值就會(huì)低。該試劑盒特異性好、敏感性高。目前國內(nèi)還無同類商業(yè)化的產(chǎn)品。有著良好的應(yīng)用前景。為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施一種豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫的試劑盒，包括豬鏈球菌2型莢膜多糖包被的抗原酶標(biāo)板。
所述的試劑盒還包括抗原酶標(biāo)板、稀釋液A、脫脂奶粉(市售伊利奶粉)、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、洗滌液、羊抗豬酶標(biāo)二抗、顯色液A、顯色液B、終止液。所述的抗原酶標(biāo)板是以豬鏈球菌2型莢膜多糖作為抗原，在包被聚苯乙烯微孔板時(shí)用O. lmol/L, pH9. 6的碳酸氫鈉溶液作為包被緩沖液。所述的豬鏈球菌莢膜多糖是從豬鏈球菌2-LT株(CCTCC NO M2011282)中提取所得，所述的豬鏈球菌2-LT株已于2011年8月9日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，CCTCC NO :M2011282。(專利申請(qǐng)?zhí)?201110234192. 9)所述的陽性對(duì)照為豬鏈球菌2型菌免疫過的豬陽性對(duì)照血清，所述的陰性對(duì)照為未感染過和未免疫過豬鏈球菌的健康豬陰性血清。所述的洗滌液為含有O. 05% (體積比)Tween-20的PBS緩沖液；所述的終止液為含O. 25%體積比氫氟酸溶液。
所述的顯色液A為含有50mg/mL過氧化氫脲的檸檬酸鹽緩沖液，顯色液B液為含有O. 2mg/mL TMB pH5. O的檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液。所述的稀釋液A為含有O. 05%體積比Tween-20的PBS緩沖液。一種豬鏈球菌2型莢膜多糖的制備方法，其制備過程是溶菌酶處理與冷酚提取相結(jié)合。具體分為兩步一、使用改良的溶菌酶處理法(林樹乾等，金黃色葡萄球菌莢膜多糖的制備及生物學(xué)特性，家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，第27卷第6期)，將滅活的豬鏈球菌2型菌液使用滅菌生理鹽水洗三遍，再用原菌液1/10體積的O. 01mol/L PBS將其重懸，加入終濃度O. lmol/L的甘氨酸，并加入終濃度3mg/L溶菌酶(購自北京普博欣生物科技有限公司)，置37°C下過夜(8 10小時(shí))，室溫14000r/min離心45分鐘，收集上清，再加入終濃度為25%的無水乙醇和終濃度為O. lg/L的CaCl2，置2 8°C下作用2小時(shí)，12000r/min離心10分鐘，收集上清，然后加入終濃度為80%的無水乙醇，置2 8°C下作用12小時(shí)，12000r/min離心10分鐘，得到的沉淀即為粗制莢膜多糖。二、用冷酚處理法(林樹乾等，金黃色葡萄球菌莢膜多糖的制備及生物學(xué)特性，家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，第27卷第6期)，將粗制多糖進(jìn)行純化。將得到的粗制多糖用IOml飽和醋酸鈉重懸，加入預(yù)冷的苯酚，快速振搖30分鐘，8°C 4000r/min離心，收集上清液，重復(fù)三次，再將所得的的上清液裝入透析袋用lmol/L的NaCl溶液透析48小時(shí)，收集透析內(nèi)液，然后加入終濃度為55%的無水乙醇，置2 8°C下作用24小時(shí)，12000r/min離心10分鐘，取沉淀干燥后用IOmlPBS溶解，即為精制莢膜多糖。一種豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫的試劑盒在檢測(cè)豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫中的應(yīng)用，其步驟是I)將脫脂奶粉溶于稀釋液A中，使其脫脂奶粉的終濃度為5%，作為待檢血清和對(duì)照血清的稀釋液。2)取抗原包被板(包被有豬鏈球菌2型莢膜多糖抗原的檢測(cè)板)，先用稀釋好的洗滌液洗板2次，再將稀釋好的待檢血清、陰性對(duì)照血清和陽性對(duì)照血清各取100 μ I加入到抗原包被板孔中。待檢血清設(shè)I孔，陰性對(duì)照和陽性對(duì)照各設(shè)2孔。輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)，置37°C下溫育30分鐘。3)棄去孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200 μ 1，靜置3分鐘后，棄去洗滌液，并在吸水紙上拍干，重復(fù)洗板5次，最后一次在吸水紙上拍干。4)每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100 μ 1，置37°C下溫育30分鐘后洗板5次(方法同步驟3)。5)每孔加顯色液A、顯色液B各一滴(約50 μ L)，混勻，室溫(18 25°C，以下相同)避光顯色10分鐘。每孔加終止液一滴(約50 μ L)，10分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)定每孔0D630nm讀值。本發(fā)明試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)為在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔0D630nm值，試驗(yàn)成立的條件是；陽性對(duì)照孔0D630nm值均應(yīng)彡O. 8，且< 2. O ;陰性對(duì)照孔0D630nm值均應(yīng)< O. 3。如果樣品0D630nm值彡O. 35，判為陽性；如果樣品00630_值< O. 35，則判為陰性。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果 I.目前國內(nèi)還無同類商業(yè)化的產(chǎn)品2.由于豬鏈球菌2型莢膜多糖的使用，特異性好，靈敏度高。3.操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間短，一般2個(gè)小時(shí)內(nèi)即可出結(jié)果；


圖I為一種用苯酚硫酸法測(cè)定莢膜多糖時(shí)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線示意圖。圖中橫坐標(biāo)為糖濃度，縱坐標(biāo)為OD值。圖2為一種使用分光光度計(jì)對(duì)莢膜多糖進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)示意圖。圖中橫坐標(biāo)為波長(zhǎng)，縱坐標(biāo)為吸光值。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明更加容易理解，下面將進(jìn)一步闡述本發(fā)明的實(shí)施例。結(jié)合實(shí)施對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述和論證。但是本實(shí)施例不是對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例I :抗原的制備I抗原的提取I. I細(xì)菌培養(yǎng)采用TSA固體培養(yǎng)基傳代增菌，第3代菌種以一定的接種量接種于優(yōu)化的TSB優(yōu)化液體培養(yǎng)基中，37°C下培養(yǎng)12 14小時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌比濁管測(cè)菌濃度至I. 5 X 109/ml時(shí)終止培養(yǎng)，加入千分之五的甲醛，攪拌滅活。I. 2莢膜多糖的提取純化I. 2. I莢膜多糖的提取使用改良的溶菌酶處理法，將滅活的豬鏈球菌2型菌使用滅菌生理鹽水洗三遍，再用原菌液1/10體積的O. Olmol/LPBS將其重懸，加入終濃度O. lmol/L的甘氨酸，并加入終濃度3mg/L溶菌酶，置37°C下過夜(8 10小時(shí))，室溫14000r/min離心45分鐘，收集上清，再加入終濃度為25%的無水乙醇和終濃度為O. lg/L的CaC12，置2 8°C下作用2小時(shí)，12000r/min離心10分鐘，收集上清，然后加入終濃度為80%的無水乙醇，置2 8°C下作用12小時(shí)，12000r/min離心10分鐘，得到的沉淀即為粗制莢膜多糖。I. 2. 2莢膜多糖的純化用冷酚處理法，將粗制多糖進(jìn)行純化。將得到的粗制多糖用IOml飽和醋酸鈉重懸，加入預(yù)冷的苯酚，快速振搖30分鐘，8°C 4000r/min離心，收集上清液，重復(fù)三次，再將所得的的上清液裝入透析袋用lmol/L的NaCl溶液透析48小時(shí)，收集透析內(nèi)液，然后加入終濃度為55%的無水乙醇，置2 8°C下作用24小時(shí)，12000r/min離心10分鐘，取沉淀干燥后用IOmlPBS溶解，即為精制莢膜多糖。2.抗原的測(cè)定2. I采用苯酚-硫酸法測(cè)莢膜多糖濃度，精密稱取105°C干燥至恒重的葡萄糖lg，加入水溶解并定容至IOOml容量瓶中，即得到葡萄糖貯備液，精密吸取貯備液0，2，4，6，8，10，12，14，16ml分別置IOOml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即為葡萄糖應(yīng)用液，分別吸取上述應(yīng)用液Iml于試管中，加入8%苯酹溶液Iml,混勻后迅速加入濃硫酸5ml,搖勻，40°C 50°C水浴30min，以I號(hào)管為對(duì)照管在490nm處測(cè)定，繪制出標(biāo)準(zhǔn)回歸方程。2. 2利用分光光度計(jì)對(duì)提取并純化的莢膜多糖抗原進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，以測(cè)定抗原 里多糖的含量和純度。3.結(jié)果3. I用EXcel2003統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，根據(jù)結(jié)果得回歸方程，并要求相關(guān)系數(shù)R2 彡 O. 985。y=0. 4163x+0. 0024(R2=0. 9987)(見圖 I)。3. 2莢膜多糖抗原質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果見圖2所示，圖譜中260和280nm處沒有蛋白質(zhì)和核酸的吸收峰，200nm左右吸收值很高(莢膜多糖樣品稀釋100倍)，這是多糖的特征吸收波峰，證明獲得的CPS抗原中雜蛋白質(zhì)和殘留的核酸含量比較低，莢膜多糖抗原純度較高。實(shí)施例2 :抗原包被板的制備將莢膜多糖抗原用pH9. 6的碳酸鹽緩沖液稀釋為I. 25 μ g/ml，按100 μ L/孔加于聚苯乙烯微孔板中，置2 8°C下包被過夜(14 18小時(shí))，次日取出，棄去孔中的抗原包被液，每孔加入120 μ I封閉液(見附注I)封閉，置37°C下作用I小時(shí)，棄去孔中封閉液后，再每孔加入120 μ I保護(hù)劑(見附注1)37°C作用I小時(shí)，棄去孔中保護(hù)劑后，拍干，再置37°C干燥2小時(shí)，用錫箔封口膜將抗原包被板密封，置2 8°C下保存。實(shí)施例3 :對(duì)照血清的制備I.豬鏈球菌陽性對(duì)照血清的制備選用4周齡健康仔豬。將豬鏈球菌2型(LT-1株)菌液滅活后濃縮至30億/ml，第一次加入等量完全弗氏佐劑乳化后作為免疫原；第二次和第三次加入等量不完全弗氏佐劑乳化后作為免疫原；第四次免疫不加佐劑，直接用濃縮的滅活菌液作為免疫原，頸部肌肉注射三次，第一次2ml，第二次4ml，第三次6ml，第四次靜脈注射3ml，每次免疫間隔2周。第四次免疫后10日采血，用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)抗體效價(jià)，達(dá)到1:16以上，從頸動(dòng)脈采集血液，分離血清，在血清中加入O. 04%硫柳汞鈉防腐，O. 22 μ m濾膜過濾除菌，無菌分裝，每管lml，置-70°C下保存。2.豬鏈球菌陰性對(duì)照血清的制備選用4周齡健康仔豬，經(jīng)豬鏈球菌2型瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和豬鏈球菌2型PCR試驗(yàn)檢測(cè)均為陰性。頸動(dòng)脈采集血液,分離血清,在血清中加入O. 04% (體積比)硫柳汞鈉防腐，O. 22 μ m濾膜過濾除菌。無菌分裝，每管1ml，置-70°C下保存。實(shí)施例4 :試劑盒組裝
一種豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫的試劑盒，包括豬鏈球菌2型莢膜多糖抗原包被板。所述的試劑盒還包括酶標(biāo)板、稀釋液A、脫脂奶粉、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、洗滌液、羊抗豬酶標(biāo)二抗、顯色液A、顯色液B、終止液。所述的抗原包被板是以豬鏈球菌2型莢膜多糖作為抗原，在包被聚苯乙烯微孔板時(shí)用O. lmol/L, pH9. 6的碳酸氫鈉溶液作為包被緩沖液。所述的豬鏈球菌莢膜多糖是從豬鏈球菌2-LT株(CCTCC NO M2011282)中提取所得，所述的豬鏈球菌2-LT株已于2011年8月9日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，CCTCC NO :M2011282。所述的陽性對(duì)照為豬鏈球菌2型菌免疫過的豬陽性對(duì)照血清，所述的陰性對(duì)照為未感染過豬鏈球菌的健康豬陰性血清。所述的洗滌液為含有O. 05%體積比Tween-20的PBS緩沖液；所述的終止液為含O. 25%體積比氫氟酸溶液。 所述的顯色液A為含有50mg/mL過氧化氫脲的檸檬酸鹽緩沖液，顯色液B液為含有O. 2mg/mL TMB pH5. O的檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液。所述的稀釋液A為含有O. 05%體積比Tween-20的PBS緩沖液。試劑盒的組裝含(I)抗原包被板 2塊(96孔/塊)(2)陰性對(duì)照血清 I管(lml/管)(3)陽性對(duì)照血清 I管(lml/管)(4)羊抗豬酶標(biāo)二抗I瓶(20ml/瓶)(5)脫脂奶粉I管(2. 5g/管)(6)稀釋液 AI 瓶(50ml/瓶)(7)底物液 AI 瓶(IOml/ 瓶)(8)底物液 BI 瓶(IOml/ 瓶)(9)終止液I 瓶(IOml/ 瓶)(10) 20倍濃縮洗滌液I瓶(30ml/瓶)(11)血清稀釋板 2塊(12)說明書I份陽性、陰性對(duì)照的制備將篩選獲得的豬鏈球菌陽性血清加入O. 04% (體積比)柳硫汞防腐，O. 22 μ m濾膜過濾除菌，。無菌分裝，每管1ml，作為陽性對(duì)照；將篩選獲得的豬標(biāo)準(zhǔn)陰性血清，加入O. 04% (體積比)柳硫汞防腐，O. 22 μ m濾膜過濾除菌，。無菌分裝，每管1ml，作為陰性對(duì)照。實(shí)施例5 :試劑盒的應(yīng)用一種莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫的試劑盒在檢測(cè)豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫中的應(yīng)用，其步驟是I)將脫脂奶粉溶于稀釋液A中，使其脫脂奶粉的終濃度為5%，作為待檢血清和對(duì)照血清的稀釋液。2)取抗原包被板(包被有豬鏈球菌2型莢膜多糖抗原的檢測(cè)板)，先用稀釋好的洗滌液洗板2次，再將稀釋好的待檢血清、陰性對(duì)照血清和陽性對(duì)照血清各取100 μ I加入到抗原包被板孔中。待檢血清設(shè)I孔，陰性對(duì)照和陽性對(duì)照各設(shè)2孔。輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)，置37°C下溫育30分鐘。3)棄去孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200 μ 1，靜置3分鐘后，棄去洗滌液，并在吸水紙上拍干，重復(fù)洗板5次，最后一次在吸水紙上拍干。4)每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100 μ 1，置37°C下溫育30分鐘后洗板5次(方法同步驟3)。5)每孔加顯色液A、顯色液B各一滴(約50 μ L)，混勻，室溫(18 25°C，以下相同)避光顯色10分鐘。每孔加終止液一滴(約50 μ L)，10分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)定每孔0D630nm讀值。應(yīng)用中所使用效果實(shí)驗(yàn)的情況如下 I特異性試驗(yàn)將我國豬主要病毒病(PRV、PPV、HCV、PRRSV、FMDV)陽性血清用豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果全部為陰性(表I)。表I我國豬主要病毒病抗血清的檢測(cè)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括豬鏈球菌2型莢膜多糖包被的抗原酶標(biāo)板，其特征在于所述的試劑盒還包括抗原酶標(biāo)板、稀釋液A、脫脂奶粉、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、洗滌液、羊抗豬酶標(biāo)二抗、顯色液A、顯色液B、終止液； 所述的抗原酶標(biāo)板是以豬鏈球菌2型莢膜多糖作為抗原，在包被聚苯乙烯微孔板時(shí)用0.lmol/L, pH9. 6的碳酸氫鈉溶液作為包被緩沖液； 所述的陽性對(duì)照為豬鏈球菌2型菌免疫過的豬陽性對(duì)照血清； 所述的陰性對(duì)照為未感染過和未免疫過豬鏈球菌的健康豬陰性血清； 所述的洗滌液為含有0. 05%體積比Tween-20的PBS緩沖液； 所述的終止液為含0. 25%體積比氫氟酸溶液； 所述的顯色液A為含有50mg/mL過氧化氫脲的檸檬酸鹽緩沖液，顯色液B液為含有0. 2mg/mL TMB pH5. 0的檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液； 所述的稀釋液A為含有0. 05%體積比Tween-20的PBS緩沖液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的豬鏈球菌2型莢膜多糖的制備方法，其步驟是 A、使用改良的溶菌酶處理法，將滅活的豬鏈球菌2型菌使用滅菌生理鹽水洗三遍，再用原菌液1/10體積的0. 01mol/L PBS將其重懸，加入終濃度0. lmol/L的甘氨酸，并加入終濃度3mg/L溶菌酶，置37°C下過夜8 10小時(shí)，室溫14000r/min離心45分鐘，收集上清，再加入終濃度為25%的無水乙醇和終濃度為0. lg/L的CaCl2，置2 8°C下作用2小時(shí)，12000r/min離心10分鐘,收集上清,然后加入終濃度為80%的無水乙醇,置2 8°C下作用12小時(shí)，12000r/min離心10分鐘，得到的沉淀即為粗制莢膜多糖； B、用冷酚處理法，將粗制多糖進(jìn)行純化，將得到的粗制多糖用IOml飽和醋酸鈉重懸，加入預(yù)冷的苯酚，振搖30分鐘，8°C 4000r/min離心，收集上清液，重復(fù)三次，再將所得的的上清液裝入透析袋用lmol/L的NaCl溶液透析48小時(shí)，收集透析內(nèi)液，然后加入終濃度為55%的無水乙醇,置2 8°C下作用24小時(shí)，12000r/min離心10分鐘,取沉淀干燥后用IOmlPBS溶解，為莢膜多糖。
3.權(quán)利要求I所述的一種豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫的試劑盒在檢測(cè)豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒及應(yīng)用，所述的試劑盒還包括抗原酶標(biāo)板、稀釋液A、脫脂奶粉、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、洗滌液、羊抗豬酶標(biāo)二抗、顯色液A、顯色液B、終止液；抗原酶標(biāo)板是以豬鏈球菌2型莢膜多糖作為抗原；陽性對(duì)照為豬鏈球菌2型菌免疫過的豬陽性對(duì)照血清；洗滌液含有Tween-20的PBS緩沖液；終止液含有氫氟酸溶液；顯色液A含有過氧化氫脲的檸檬酸鹽緩沖液，顯色液B液含TMBpH5.0的檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液；稀釋液A含有Tween-20的PBS緩沖液。試劑盒在檢測(cè)豬鏈球菌2型莢膜多糖抗體的酶聯(lián)免疫中的應(yīng)用。豬鏈球菌2型莢膜多糖的使用，特異性好，靈敏度高。檢測(cè)時(shí)間短，一般2個(gè)小時(shí)內(nèi)即可出結(jié)果。
文檔編號(hào)G01N33/545GK102759619SQ201210245250
公開日2012年10月31日 申請(qǐng)日期2012年7月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月16日
發(fā)明者康超, 徐高原, 肖圣建, 董曉暉, 郭學(xué)波, 金梅林 申請(qǐng)人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司