專利名稱：藏藥唐古特烏頭及其制劑中生物堿的質量檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及ー種質量檢測方法，具體涉及ー種藏藥唐古特烏頭及其制劑中生物堿的質量檢測方法。該方法包括唐古特烏頭中生物堿及其制劑八味獐牙菜丸中生物堿、i^一味金色丸中生物堿、十三味榜嘎散、安兒寧顆粒中生物堿的質量檢測方法。
背景技術：
唐古特烏頭(Herba Aconiti Tangutici),為毛茛科植物甘青烏頭(唐古特烏頭)Aconitum tanguticum (Maxim. ノ Stapf 和船藍馬頭 Aconitum naviculare (BruhI.) Stapf 的干燥全草。夏末秋初開花期連根采挖，除去雜質，陰干。本品性涼，味苦，具有清熱解毒，生肌收ロ，燥濕之功效。功能主治清熱解毒，主要用于肝熱、膽熱、肺熱、肝炎、肺炎、胃腸炎、流行性感冒、傳染病引起的發(fā)燒、食物中毒、蛇蝎咬傷以及黃水病。烏頭屬藥用植物大多以塊根、根入藥，多具有祛風除濕、溫經止痛之功效，其中主要成分是雙酯型生物堿，約占總重的7% 10%,具有顯著的生理活性，一般需要進行炮制以降低藥性。唐古特烏頭以全草入藥，草本高10 30cm，塊根2，小形，其主要藥效成分生物堿主要為內酯型ニ萜生物堿，含有少量的雙酯型生物堿成分，不需進行炮制即可入藥，但服用過量有可能帶來健康隱患。唐古特烏頭收載于《藏藥部頒標準》，藏藥名榜嘎，為藏藥成方制劑中常用藥材，同時是具有藏藥特色的藥材代表，部頒標準僅使用顯微鑒別控制其藥材質量，很難保證藥材使用安全、有效，因此有必要建立ー種科學的質量檢測方法對唐古特烏頭及其制劑的質量進行評價。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是為克服上述現有技術的不足，提供一種藏藥唐古特烏頭及其制劑中生物堿的質量檢測方法。為實現上述目的，本發(fā)明采用下述技術方案一種藏藥唐古特烏頭的質量檢測方法，它包括鑒別、檢查和含量測定項目，所述鑒別是以唐古特烏頭對照藥材為對照、以體積份數比為5:4:1.5:0.2的正己烷-こ酸こ酷-甲醇-氨水為展開劑在硅膠G薄層板上展開、以碘化鉍鉀溶液為顯色劑的薄層色譜法；所述檢查是對藥材中所含雙酯型生物堿的檢查，其是以烏頭堿對照品、次烏頭堿對照品、新烏頭堿對照品的等量混合溶液為對照，以體積份數比為25:15的こ臆-四氫呋喃為流動相A，以每IOOOmlO. lmol/1醋酸銨水溶液加O. 5ml冰醋酸為流動相B進行梯度洗脫的高效液相色譜法；所述含量測定包括對藥材中所含大麥芽堿的含量測定和總生物堿的含量測定，所述大麥芽堿含量測定是以大麥芽堿對照品為對照，以體積份數比為10:90的こ腈-O. 025mol/l磷酸ニ氫鉀水溶液并用三こ胺調節(jié)PH至7. 2為流動相的高效液相色譜法；所述總生物堿含量測定是采用體積份數比100:1氯仿-氨水的混合溶液提取，合并洗液及濾液，低溫減壓(50°C以下)蒸干，加入活性炭脫色，振搖，脫色，加入硫酸滴定液，使用氫氧化鈉滴定液，以甲基紅為指示液的反滴定法。
所述檢查中梯度洗脫的過程如下
_時間(分鐘)_流動相A(%) _流動相B(%)_
O 25 18—22 82—78[_8] 25—55 22—25 78—7555-55.1 25—18 75—82_55.1 65 _18 _82_
權利要求
1.一種藏藥唐古特烏頭的質量檢測方法，其特征是，它包括鑒別、檢查和含量測定項目，所述鑒別是以唐古特烏頭對照藥材為對照、以體積份數比為5:4:1. 5:0. 2的正己烷-こ酸こ酷-甲醇-氨水為展開劑在硅膠G薄層板上展開、以碘化鉍鉀溶液為顯色劑的薄層色譜法；所述檢查是對藥材中所含雙酯型生物堿的檢查，其是以烏頭堿對照品、次烏頭堿對照品、新烏頭堿對照品的等量混合溶液為對照，以體積份數比為25:15的こ臆-四氫呋喃為流動相A，以每IOOOml 0. lmol/1醋酸銨水溶液加0. 5ml冰醋酸為流動相B進行梯度洗脫的高效液相色譜法；所述含量測定包括對藥材中所含大麥芽堿的含量測定和總生物堿的含量測定，所述大麥芽堿含量測定是以大麥芽堿對照品為對照，以體積份數比為10:90的こ腈-0. 025mol/l磷酸ニ氫鉀水溶液并用三こ胺調節(jié)PH至7. 2為流動相的高效液相色譜法；所述總生物堿含量測定是采用體積份數比100:1氯仿-氨水的混合溶液提取，合并洗液及濾液，50 0C以下低溫減壓蒸干，加入活性炭脫色，振搖，脫色，加入硫酸滴定液，使用氫氧化鈉滴定液，以甲基紅為指示液的反滴定法。
2.如權利要求I所述的質量檢測方法，其特征是，所述檢查中梯度洗脫的過程如下
3.如權利要求I所述的質量檢測方法，其特征是，所述鑒別具體為 取待檢測藥材粉末lg，加氨水5ml，加ニ氯甲烷50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；取唐古特烏頭對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各lOul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數比為5:4:1. 5:0. 2的正己烷-こ酸こ酷-甲醇-氨水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的橙紅色斑點。
4.如權利要求2所述的質量檢測方法，其特征是，所述檢查具體為 取待檢測藥材粉末2g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積份數比為1:100鹽酸-甲醇的混合溶液50ml，稱定重量，超聲處理40分鐘，溫度不超過25°C，放冷，稱定重量，用體積份數比為1:100鹽酸-甲醇的混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，在40°C以下減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入0. 05mol/l硫酸溶液25ml，振搖使溶解，轉速為8000轉/分鐘離心20分鐘，精密量取上清液20ml，置分液漏斗中，用ニ氯甲烷洗滌4次，棄去ニ氯甲烷液，待上層澄清后，用氨試液調PH至8-9，再用こ醚振搖提取5次，毎次20ml，合并こ醚液，揮干，殘渣用0. 05mol/l硫酸溶解，轉移至5ml量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取烏頭堿對照品、次烏頭堿對照品、新烏頭堿對照品適量，精密稱定，加0. 05mol/l硫酸制成每Iml含烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿各50 y g的混合溶液，作對照品溶液，照高效液相色譜法試驗；以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數比為25:15的こ腈-四氫呋喃為流動相A，以0. lmol/1醋酸銨水溶液且每IOOOml加冰醋酸·0. 5ml為流動相B，進行梯度洗脫，檢測波長為235nm ;理論板數按新烏頭堿峰計算應不低于2000 ;分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 u 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
5.如權利要求I所述的質量檢測方法，其特征是，所述大麥芽堿含量測定具體為 照高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數比為10:90的こ腈-0. 025mol/l的磷酸ニ氫鉀水溶液并用三こ胺調節(jié)PH至7. 2為流動相；檢測波長225nm ;理論板數按大麥芽堿峰計算應不低于2000 ； 對照品溶液的制備精密稱取大麥芽堿對照品適量，加甲醇制成每Iml中含大麥芽堿20 Ug的溶液，即得； 供試品溶液的制備取待檢測藥材粉末lg，精密稱定，置錐形瓶中，加入體積份數比為 100:1氯仿-氨水的混合溶液50ml，稱定重量,超聲30分鐘,放置過夜,稱定重量,用體積份數比為100:1氯仿-氨水的混合溶液補足減失的重量，過濾，取續(xù)濾液25ml，減壓低溫蒸干，殘渣精密加入0. 05mol/l硫酸溶液25ml，使溶解，轉速為8000轉/分鐘離心20分鐘，取上清液，置分液漏斗中，用氨試液調PH至8-9，再用こ酸こ酯振搖提取5次，毎次20ml，合并萃取液，揮干，殘渣用甲醇溶解，轉移至5ml量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
6.如權利要求I所述的質量檢測方法，其特征是，所述總生物堿含量測定具體為 取待檢測藥材粉末5g，精密稱定，置錐形瓶中，加入體積份數比100:1氯仿-氨水的混合溶液50ml,稱定重量,超聲30min,放置過夜,濾過,殘洛加入體積份數比100:1氯仿-氨水的混合溶液50ml，振搖I小時,濾過,殘洛使用體積份數比100:1氯仿-氨水的混合溶液洗滌3次，毎次15m ;合并洗液及濾液，低溫減壓蒸干，殘渣加入こ醇IOml使溶解，加入活性炭lg，振搖，使脫色，再精密量取續(xù)濾液5ml，精密加入0. Olmol/1硫酸滴定液15ml、水15ml與甲基紅指示液3滴，使用0. 02mol/l氫氧化鈉滴定液滴定至黃色；每Iml硫酸滴定液相當于I. 65mg的大麥芽堿。
7.一種藥物制劑中唐古特烏頭生物堿的質量檢測方法，其特征是，采用權利要求I或2所述的方法對制劑中唐古特烏頭生物堿進行質量檢測。
8.如權利要求7所述的質量檢測方法，其特征是，所述質量檢測方法具體為 薄層色譜鑒別 取待檢測制劑粉末5-8g，加氨水5ml，加ニ氯甲烷50ml，功率250W、頻率40kHz超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；取唐古特烏頭對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數比為5:4:1. 5:0. 2的正己烷-こ酸こ酯-甲醇-氨水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的橙紅色斑點； 雙酯型生物堿檢查 取待檢測制劑粉末8-15g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積份數比為I 100鹽酸-甲醇的混合溶液50ml，稱定重量，超聲處理40分鐘，溫度不超過25°C，放冷，稱定重量，用體積份數比為1:100鹽酸-甲醇的混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，在40°C以下減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入0. 05mol/l硫酸溶液25ml，振搖使溶解，轉速為8000轉/分鐘離心20分鐘，精密量取上清液20ml，置分液漏斗中，用ニ氯甲烷洗滌4次，棄去ニ氯甲烷液，待上層澄清后，用氨試液調PH至8-9，再用こ醚振搖提取5次，毎次20ml，合并こ醚液，揮干，殘渣用0. 05mol/l硫酸溶解，轉移至5ml量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取烏頭堿對照品、次烏頭堿對照品、新烏頭堿對照品適量，精密稱定，加0. 05mol/l硫酸制成每Iml含烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿各50 y g的混合溶液，作對照品溶液；照高效液相色譜法試驗； 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數比為25:15的こ臆-四氫呋喃為流動相A，以0. lmol/1醋酸銨水溶液且每IOOOml加冰醋酸0.5ml為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫，檢測波長為235nm ;理論板數按新烏頭堿峰計算應不低于2000 ;分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 yl，注入液相色譜儀，測定，即得；
9.如權利要求7或8所述的質量檢測方法，其特征是，所述制劑為八味獐牙菜丸、十一味金色丸、十三味榜 嘎散或安兒寧顆粒。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種藏藥唐古特烏頭及其制劑中生物堿的質量檢測方法，包括鑒別、檢查和含量測定項目，鑒別是以唐古特烏頭對照藥材為對照、以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水為展開劑的薄層色譜法；檢查是以烏頭堿對照品、次烏頭堿對照品、新烏頭堿對照品的混合溶液為對照，以乙腈-四氫呋喃為流動相A，以醋酸銨水溶液加冰醋酸為流動相B進行梯度洗脫的高效液相色譜法；大麥芽堿含量測定是以大麥芽堿對照品為對照，以乙腈-磷酸二氫鉀水溶液為流動相的高效液相色譜法；總生物堿含量測定采用反滴定法。本發(fā)明穩(wěn)定可靠，專一性強，能夠確保藏藥唐古特烏頭及其制劑中生物堿的安全、有效、質量可控，有較大的科學性和應用價值。
文檔編號G01N30/90GK102735789SQ20121024174
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月12日 優(yōu)先權日2012年7月12日
發(fā)明者任松鵬, 劉玉芹, 單玉剛, 李麗, 王海蘋, 邵成雷, 鄭亭亭 申請人:山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司