專利名稱：一種孔雀石綠的檢測方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及孔雀石綠檢測技術(shù)領(lǐng)域，確切地說是一種利用表面增強拉曼光譜技術(shù) 檢測孔雀石綠的方法和該方法的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
中國是世界上第一大水產(chǎn)品生產(chǎn)國和出口國，但近年來，頻頻爆發(fā)的水產(chǎn)品安全 事件不僅危及消費者的利益，更成為制約我國水產(chǎn)品正常出口的瓶頸。在眾多水產(chǎn)品安全 事件中，因不恰當使用、過量使用甚至非法使用漁藥，導(dǎo)致的漁藥殘留超標現(xiàn)象最為嚴重。 孔雀石綠，由于其殘留對人體具有“致癌，致畸，致突”的危害，已經(jīng)被包括中國在內(nèi)的許多 國家禁止在水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用，但因其價格低廉且藥效好的特點，仍被當作殺菌劑在水產(chǎn)養(yǎng) 殖過程中非法使用。目前檢測水產(chǎn)品中孔雀石綠的標準方法主要有HPLC、LC/MS和GC/MS 法。鑒于現(xiàn)行檢測手段耗時耗力、成本昂貴等特點，研究和開發(fā)操作簡便、快速準確的孔雀 石綠檢測新方法，對于加強水產(chǎn)品質(zhì)量安全的監(jiān)控及促進水產(chǎn)品貿(mào)易發(fā)展具有非常重要的 意義。中國專利公開號CN101566674A公開了一種水體及水產(chǎn)品中孔雀石綠和無色孔雀 石綠殘留的快速檢測方法，屬于水體及水產(chǎn)品中的殘留物檢測技術(shù)領(lǐng)域。該法是將待測樣 品和提取劑I振蕩混合均勻后，加入提取劑II振蕩混合后靜置，取上清液加入到富集柱中， 觀察富集柱中最下層的顯色劑顏色變化，若形成綠色環(huán)帶，則判斷待測樣品中含有孔雀石 綠或無色孔雀石綠；提取劑I為乙腈、二氯甲烷、正己烷和對甲苯磺酸的混合液；提取劑II 為二氧化鉛和酸性氧化鋁的混合物；待測樣品為待檢測水體樣品或待檢測水產(chǎn)品樣品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題之一在于針對現(xiàn)有孔雀石綠的檢測標準方法所存在 的不足而提供一種新的孔雀石綠的檢測方法。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題之二在于該檢測方法的應(yīng)用。作為本發(fā)明第一方面的一種孔雀石綠的檢測方法，其特征是將孔雀石綠標準溶 液滴加到納米金顆粒修飾的具有表面活性的拉曼基底上，待溶劑蒸干后，使用激光波長為 633nm的共聚焦顯微拉曼光譜儀采集孔雀石綠表面增強拉曼光譜，該孔雀石綠表面增強拉 曼光譜具有 1610, 1360，1170，798,913,432cm-1 處特征峰。所述孔雀石綠標準溶液的配制方法如下準確稱取10. OOmg孔雀石綠于100mL燒杯中，用一定體積乙腈(色譜純)完全溶解， 最后定容在100mL容量瓶里,配制成100mg/Kg的孔雀石綠母液，再用一定體積比的乙腈和 超純水作為溶劑將母液稀釋成系列濃度的標準溶液。作為本發(fā)明第二方面的該檢測方法的應(yīng)用，其特征在于，是用以檢測水體中的孔
雀石綠殘留量。作為本發(fā)明第二方面的該檢測方法的應(yīng)用，其特征在于，是用以檢測水產(chǎn)品中的孔雀石綠及隱性孔雀石綠殘留。在所述應(yīng)用中，所述用以檢測水產(chǎn)品中的孔雀石綠及隱性孔雀石綠殘留需要對水 產(chǎn)品進行前處理，所述前處理方法是剪取水產(chǎn)品樣品，采用乙腈和乙酸銨緩沖溶液進行振 蕩提取，隨后離心，重復(fù)兩次，合并上層提取液；用二氯甲烷對提取液進行萃取，重復(fù)兩次， 合并下層有機相旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，提取物呈油狀；加入乙腈重新溶解油狀提取物；接著加入 一定濃度二氯二氰基苯醌將隱性孔雀石綠氧化成孔雀石綠，待其氧化完全后得待檢溶液; 其中所述乙腈和乙酸銨緩沖溶液中，乙腈總體積和乙酸銨的體積比約為10:1;液液萃取中 二氯甲烷的總體積與提取液的體積比約為1:1;二氯二氰基苯醌體積與重新溶解后的提取 物體積比約為1:1。拉曼光譜是物質(zhì)的散射光譜。拉曼光譜分析法是基于拉曼散射效應(yīng)，對與入射光 頻率不同的散射光譜進行分析得到分子振動、轉(zhuǎn)動方面的信息，進而用于分析分子結(jié)構(gòu)的 一種方法。但是拉曼散射效應(yīng)非常弱，而表面增強拉曼技術(shù)(SERS)使用經(jīng)特殊處理的表 明粗糙的金屬(通常為金或銀)，通過把待測物質(zhì)有效吸附在金屬表面，可以使拉曼信號增 大至原來的103-106倍。隨著新型納米粒子體系的應(yīng)用推動SERS技術(shù)上到一個新臺階，甚 至可以使拉曼信號放大至1014-1015倍，達到單分子檢測水平。本發(fā)明結(jié)合納米金顆粒修飾的SERS活性基底和表面增強拉曼光譜技術(shù)，將其應(yīng) 用于檢測水產(chǎn)品的漁藥殘留孔雀石綠和隱性孔雀石綠中。此種新方法具有較高的檢測靈敏 度,且大大縮短了檢測時間,節(jié)約了檢測成本。


圖1為本發(fā)明系列濃度孔雀石綠標準溶液的表面增強拉曼光譜圖。圖2為本發(fā)明羅非魚中孔雀石綠提取物的表面增強拉曼光譜圖。圖3為本發(fā)明鰻魚中孔雀石綠提取物的表面增強拉曼光譜圖。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例來詳細說明本發(fā)明。實施例1準確稱取10. OOmg于100mL燒杯中，用一定體積乙腈(色譜純)完全溶解，最后定容 在100mL容量瓶里，配制成100mg/Kg的孔雀石綠母液，再用一定體積比的乙腈和超純水作 為溶劑將母液稀釋成0. 5，1，5，20ng g'用移液槍吸取0. 1-0. 5 y L標準溶液，滴在納米金 顆粒修飾的具有SERS活性的基片上，待溶液自然揮發(fā)干后，放入拉曼光譜儀進行檢測。由 圖1可以看出，表面增強拉曼光譜強度隨濃度的增加而增加。以其1610，1360，1170, 798, 913,432cm-1處特征峰依然可見為依據(jù)，該方法最低能檢測到0. 5-lng mL—1的孔雀石綠。實施例2在均質(zhì)的空白羅非魚魚樣中添加一系列濃度(0，0. 5，1，2，5，10，20ng *g_1)的隱性 孔雀石綠。簡化的國際標準提取方法如下剪取水產(chǎn)品樣品，采用乙腈和乙酸銨緩沖溶液 進行振蕩提取，隨后離心，重復(fù)兩次，合并上層提取液；用二氯甲烷對提取液進行萃取，重復(fù) 兩次，合并下層有機相旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，提取物呈油狀；加入乙腈重新溶解油狀提取物；接著 加入一定濃度二氯二氰基苯醌將隱性孔雀石綠氧化成孔雀石綠，待其氧化完全后得待檢溶液；其中所述乙腈和乙酸銨緩沖溶液中，乙腈總體積和乙酸銨的體積比約為10:1;液液萃 取中二氯甲烷的總體積與提取液的體積比約為1:1;二氯二氰基苯醌體積與重新溶解后的 提取物體積比約為1:1。滴0. 1-0.5^し待檢溶液于金納米修飾的表面增強拉曼底板上，待溶劑揮發(fā) 干后，采用共聚焦拉曼光譜儀進行表面增強拉曼光譜的采集。由圖2可以看出，以 其1610，1360，1170，798,913,432cm_1處特征峰依然可見為依據(jù)，此法最低能檢測到 5-101^*ビ的孔雀石綠殘留。實施例3在均質(zhì)的空白鰻魚魚樣中添加ー系列濃度(0，0. 5，1，2，5，10，20ng g_1)的隱性 孔雀石綠。簡化的國際標準提取方法如下剪取水產(chǎn)品樣品，采用乙腈和乙酸銨緩沖溶液 進行振蕩提取，隨后離心，重復(fù)兩次，合并上層提取液；用二氯甲烷對提取液進行萃取，重復(fù) 兩次，合并下層有機相旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，提取物呈油狀；加入乙腈重新溶解油狀提取物；接著 加入一定濃度二氯二氰基苯醌將隱性孔雀石綠氧化成孔雀石綠，待其氧化完全后得待檢溶 液；其中所述乙腈和乙酸銨緩沖溶液中，乙腈總體積和乙酸銨的體積比約為10:1;液液萃 取中二氯甲烷的總體積與提取液的體積比約為1:1;二氯二氰基苯醌體積與重新溶解后的 提取物體積比約為1:1。滴0. 1-0.5^し待檢溶液于金納米修飾的表面增強拉曼底板上，待溶劑揮發(fā) 干后，采用共聚焦拉曼光譜儀進行表面增強拉曼光譜的采集。由圖2可以看出，以 其1610，1360，1170，798,913,432cm_1處特征峰依然可見為依據(jù)，此法最低能檢測到 5-101^*ビ的孔雀石綠殘留。
權(quán)利要求
1.ー種孔雀石綠的檢測方法，其特征是將孔雀石綠標準溶液滴加到納米金顆粒修飾的具有表面活性的拉曼基底上，待溶劑蒸干后，使用激光波長為633nm的共聚焦顯微拉曼光譜儀采集孔雀石綠表面增強拉曼光譜，該孔雀石綠表面增強拉曼光譜具有1610，1360，1170，798,913,432cm—1 處特征峰。
2.如權(quán)利要求I所述的孔雀石綠的檢測方法，其特征在于，所述孔雀石綠標準溶液的配制方法如下 準確稱取10. OOmg孔雀石綠于IOOmL燒杯中，用一定體積こ腈(色譜純)完全溶解,最后定容在IOOmL容量瓶里,配制成100mg/Kg的孔雀石綠母液,再用一定體積比的こ腈和超純水作為溶劑將母液稀釋成系列濃度的標準溶液。
3.—種權(quán)利要求I所述的檢測方法的應(yīng)用，其特征在于，是用以檢測水體中的孔雀石綠殘留量。
4.一種權(quán)利要求I所述的檢測方法的應(yīng)用，其特征在于，是用以檢測水產(chǎn)品中的孔雀石綠和隱性孔雀石綠殘留量。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，在所述中，所述用以檢測水產(chǎn)品中的孔雀石綠和隱性孔雀石綠殘留量的應(yīng)用首先需要對水產(chǎn)品進行前處理，所述前處理方法是剪取水產(chǎn)品樣品，采用こ腈和こ酸銨緩沖溶液進行振蕩提取，隨后離心，重復(fù)兩次，合井上層提取液；用ニ氯甲烷對提取液進行萃取，重復(fù)兩次，合并下層有機相旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，提取物呈油狀；加入こ腈重新溶解油狀提取物；接著加入一定濃度ニ氯ニ氰基苯醌將隱性孔雀石綠氧化成孔雀石綠，待其氧化完全后得待檢溶液；其中所述こ腈和こ酸銨緩沖溶液中，こ腈總體積和こ酸銨的體積比約為10:1 ;液液萃取中二氯甲烷的總體積與提取液的體積比約為1:1 ;ニ氯ニ氰基苯醌體積與重新溶解后的提取物體積比約為1:1。
全文摘要
本發(fā)明公開的一種孔雀石綠的檢測方法，其特征是將孔雀石綠標準溶液滴加到納米金顆粒修飾的具有表面活性的拉曼基底上，待溶劑蒸干后，使用激光波長為633nm的共聚焦顯微拉曼光譜儀采集孔雀石綠表面增強拉曼光譜，該孔雀石綠表面增強拉曼光譜具有1610,1360,1170,798，913，432cm-1處特征峰。該檢測方法的應(yīng)用，是用以檢測水體中的孔雀石綠或隱性孔雀石綠殘留量。本發(fā)明結(jié)合納米金顆粒修飾的SERS活性基底和表面增強拉曼光譜技術(shù)，將其應(yīng)用于檢測水產(chǎn)品的漁藥殘留孔雀石綠和隱性孔雀石綠中。此種新方法具有較高的檢測靈敏度，且大大縮短了檢測時間，節(jié)約了檢測成本。
文檔編號G01N1/28GK102661945SQ20121017971
公開日2012年9月12日 申請日期2012年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月1日
發(fā)明者張源園, 張衍亮, 賴克強, 黃軼群 申請人:上海海洋大學(xué)