專利名稱：穿破石配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)方法，具體的說，是穿破石配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，屬于化學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
穿破石配方顆粒是桑科植物小柘樹的根經(jīng)加工制成的顆粒，味淡，性涼，具有祛風(fēng)利濕，活血通經(jīng)之功效，主要用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)疼痛，黃疸，淋濁，蠱脹，閉經(jīng)，勞傷咳血，跌打損傷，疔瘡癰腫等。與傳統(tǒng)的中藥煎劑相比，其具有免煎易服，易儲(chǔ)存，攜帶方便等優(yōu)點(diǎn)?！吨袊幍洹?010年版一部并未收載穿破石藥材品種，而中藥配方顆粒經(jīng)過一系列工序的加工后已不具藥材的外形特征，性狀鑒別亦明顯不適用于中藥配方顆粒。薄層色譜法操作簡單，方便，適用于中藥材及各種中藥制劑的定性鑒別，高效液相色譜法則適用于各種制劑的含量測(cè)定。穿破石配方顆粒中含黃酮類化合物，其中有槲皮素和山奈素，本發(fā)明旨在建立一種穿破石配方顆粒的薄層色譜鑒別方法及同時(shí)測(cè)定槲皮素與山奈素含量的高效液相色譜 方法，該方法可用于穿破石配方顆粒的質(zhì)量控制，對(duì)保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性及臨床用藥的有效性與安全性具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種穿破石配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，先采用薄層色譜鑒別成分，再采用高效液相色譜測(cè)定含量，該方法準(zhǔn)確，靈敏度高，精密度、穩(wěn)定性好。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣的一種穿破石配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，依次包括下述步驟1)薄層色譜鑒別成分；2)高效液相色譜測(cè)定含量；其中，步驟I)所述的薄層色譜鑒別取本品粉末0. 5g,加乙醚30ml,加熱回流25 35分鐘；濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；另取穿破石對(duì)照藥材5g,加水50ml,煮沸30分鐘,濾過,濾液加乙醚30ml振搖提取，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2 u 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的藍(lán)色、綠色熒光斑點(diǎn)；步驟2)所述的高效液相含量測(cè)定首先制備對(duì)照品溶液，分別精密稱取槲皮素對(duì)照品、山奈素對(duì)照品適量，加甲醇制成每I ml含槲皮素16y g、山奈素38y g的混合溶液，即得；再制備供試品溶液，取本品粉末約0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液3 yl，供試品溶液10 yl，注入液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0. 4%磷酸為流動(dòng)相，DAD檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長367nm,柱溫30°C,流速lml/min ;測(cè)定。
上述的一種穿破石配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，其中，步驟I)所述的甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸的質(zhì)量比為14 : 4 : I : 2。上述的一種穿破石配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，其中，步驟2)所述的甲醇與0. 4%磷酸的質(zhì)量比為53 47。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于該方法簡單、準(zhǔn)確，靈敏度高，精密度、穩(wěn)定性好，采用HPLC法同時(shí)測(cè)定穿破石配方顆粒中槲皮素和山奈素的含量，峰形好，分離度高，可作為穿破石配方顆粒的質(zhì)量控制和考察工藝穩(wěn)定性的有效技術(shù)手段，對(duì)提高產(chǎn)品質(zhì)量具有重要意義。


圖I是本發(fā)明的穿破石配方顆粒薄層色譜圖； 圖2是本發(fā)明的穿破石配方顆粒高效液相色譜圖。其中對(duì)照藥材試驗(yàn)薄層色譜圖Al ;供試品第一次試驗(yàn)薄層色譜圖B2 ;供試品第二次試驗(yàn)薄層色譜圖C3 ;供試品第三次試驗(yàn)薄層色譜圖D4 ;供試品第四次試驗(yàn)薄層色譜圖E5 ;點(diǎn)樣點(diǎn)11 ;綠色點(diǎn)22 ;藍(lán)色點(diǎn)31 ;對(duì)照品HPLC色譜圖A ;供試品HPLC色譜圖B ;槲皮素峰I ;山奈素峰2。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制，任何人在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)所做出的非實(shí)質(zhì)性改變，仍在本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍內(nèi)。本發(fā)明的所提供的穿破石配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)，依次包括下述步驟1)薄層色譜鑒別成分；2)高效液相色譜測(cè)定含量；薄層鑒別方法本品粉末0. 5g，加乙醚30ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；另取穿破石對(duì)照藥材5g，加水50ml，煮沸30分鐘，濾過，濾液加乙醚30ml振搖提取，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2 yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(14:4:1:2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視，參閱圖1，在供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的藍(lán)色、綠色熒光斑點(diǎn)，其中，對(duì)照藥材檢測(cè)結(jié)果是對(duì)照藥材試驗(yàn)薄層色譜圖Al ;供試品第一次試驗(yàn)薄層色譜圖B2 ;供試品第二次試驗(yàn)薄層色譜圖C3 ;供試品第三次試驗(yàn)薄層色譜圖D4 ;供試品第四次試驗(yàn)薄層色譜圖E5 ;點(diǎn)樣點(diǎn)11 ;綠色點(diǎn)22 ;藍(lán)色點(diǎn)31。含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VID)測(cè)定。參閱圖2，其中，A對(duì)照品HPLC色譜圖；B供試品HPLC色譜圖；槲皮素峰I ;山奈素峰2 I、儀器與試藥(I)儀器Agilent 1100高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，四元梯度泵，G2170AA數(shù)據(jù)
處理系統(tǒng)。(2)試藥甲醇為色譜純?cè)噭?一級(jí))，水為雙蒸水，其它試劑均為分析純。槲皮素對(duì)照品(批號(hào)100081-200406)、山奈素對(duì)照品(批號(hào)110861-200808)購于中國藥品生物制品檢定所。2、實(shí)驗(yàn)條件色譜條件色譜柱AgilentZorbax Eclipse C18 (4. 6mmX 250mm, 5 U m)柱；流動(dòng)相甲醇-0. 4%磷酸(53 Al);檢測(cè)波長367nm ;柱溫:30°C，流速:lml/min。3、方法學(xué)考察(I)線性范圍的考察分別精密吸取混合對(duì)照品溶液(每I ml含槲皮素16. 06ii g、山奈素38. 74ii g)iia、2ia、3ia、4ia、5ia，注入液相色譜儀進(jìn)行色譜測(cè)定，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，并以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。槲皮素Y=3926. 00975X+1. 3622482, r=0. 99998 ； 山奈素 Y=3944. 48166X+1. 6999878, r=0. 99998 ；表明槲皮素在16. 06 80. 30ng、山奈素在38. 74 193. 70ng范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，結(jié)果見表1-2。表I槲皮素對(duì)照品測(cè)定結(jié)果
進(jìn)樣量(ng)~16. 06~~32. 12~~48. 18~~64. 24~~80. 30
峰面積64. 30 127. 37 190.43 254.48 316.00表2山奈素對(duì)照品測(cè)定結(jié)果
進(jìn)樣量(ng) ~38. 74~~TL 48~~116.22 ~154.96 ~193. 70 峰面積153.79 307.29 461. 58 612.98 764.99(2)精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液3 yl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積積分值RSD均〈2%，結(jié)果見表3。表3精密度試驗(yàn)結(jié)果
試驗(yàn)次數(shù)槲皮素峰面積積分值山奈素峰面積積分值~
~I190.32465.12
~2192.41468.13
3193. 11460.60
~189. 50460.80
5193.43469.90
6195.62475. 50
權(quán)利要求
1.一種穿破石配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，依次包括下述步驟1)薄層色譜鑒別成分；2)高效液相色譜測(cè)定含量； 其中，步驟I)所述的薄層色譜鑒別成分取本品粉末0. 5g，加乙醚30ml，加熱回流25 35分鐘；濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；另取穿破石對(duì)照藥材5g,加水50ml,煮沸30分鐘,濾過,濾液加乙醚30ml振搖提取，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2 u 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的藍(lán)色、綠色熒光斑點(diǎn)； 步驟2)所述的高效液相含量測(cè)定，首先制備對(duì)照品溶液，分別精密稱取槲皮素對(duì)照品、山奈素對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含槲皮素16 y g、山奈素38 y g的混合溶液，即得；再制備供試品溶液取本品粉末約0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液3 ill、供試品溶液10 iil，注入液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.4%磷酸為流動(dòng)相，DAD檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長367nm,柱溫30°C,流速lml/min ;測(cè)定。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的穿破石配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，步驟I)所述的甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸的質(zhì)量比為14:4:1 :2。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的穿破石配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，步驟2)所述的甲醇與0. 4%磷酸的質(zhì)量比為53 -Al.
全文摘要
本發(fā)明公開一種穿破石配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，旨在提供一種測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，精密度、穩(wěn)定性好的質(zhì)量檢測(cè)方法；其技術(shù)要點(diǎn)是該方法依次包括下述步驟1)薄層色譜鑒別成分；2)高效液相色譜測(cè)定含量；其中，步驟1)所述的薄層色譜鑒別成分分別制備供試品溶液和對(duì)照藥材溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，置紫外光燈下檢視；步驟2)所述的高效液相含量測(cè)定，分別制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液3μl、供試品溶液10μl，注入液相色譜儀檢測(cè)；屬于化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
文檔編號(hào)G01N30/90GK102707006SQ20121017518
公開日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月30日
發(fā)明者劉法錦, 孫冬梅, 畢曉黎, 涂瑤生, 程學(xué)仁 申請(qǐng)人:劉法錦, 孫冬梅, 畢曉黎, 涂瑤生, 程學(xué)仁