專利名稱：亞精胺在作為缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)記物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及亞精胺在作為缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)記物中的應(yīng)用，特別涉及檢測亞精胺含量的儀器或/和物質(zhì)在制備鑒定動物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
缺氧作為生命的ー種基本病理生理過程，不同程度地存在于多種疾病中，如短暫性腦缺血、冠心病與心絞痛等心腦血管疾病，哮喘、肺氣腫和慢性肺阻塞等肺疾患，癲癇、帕金森病和Alzheimer病等腦退 行性疾患或精神障礙、癌癥等，在航天航空、高原或深海作業(yè)等過程中也都伴有不同程度的缺氧發(fā)作和相應(yīng)的組織細(xì)胞損傷，嚴(yán)重時可導(dǎo)致器官損傷或功能障礙。缺氧預(yù)適應(yīng)則是不同種類需氧生物的ー種生物進(jìn)化上的內(nèi)源性細(xì)胞保護(hù)機(jī)制，動物或細(xì)胞經(jīng)過非致死量缺氧后，可對隨后出現(xiàn)的嚴(yán)重缺氧產(chǎn)生耐受，從而減輕對動物或細(xì)胞的損傷，即產(chǎn)生缺氧預(yù)適應(yīng)的保護(hù)作用。其機(jī)制可能與內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制的激活、抗缺氧活性物質(zhì)的產(chǎn)生等因素有夫。生物標(biāo)志物是指可供客觀測定和評價的ー個普通生理或病理生理或治療過程中的某種特征性的細(xì)胞學(xué)、生物化學(xué)或分子指標(biāo)，通過對它的測定可以獲知機(jī)體當(dāng)前所處的生物學(xué)過程中的進(jìn)程。檢查ー種疾病特異性的生物標(biāo)志物，對于疾病的鑒定、早期診斷及預(yù)防、治療過程中的監(jiān)控可能起到幫助作用。尋找和發(fā)現(xiàn)有價值的生物標(biāo)志物已經(jīng)成為目前研究的ー個重要熱點。生物標(biāo)志物是生物體受到嚴(yán)重?fù)p害時，在不同化學(xué)和生物學(xué)水平(分子、細(xì)胞和個體等)上因受內(nèi)外環(huán)境影響而產(chǎn)生的特異性信號指標(biāo)。它可以對嚴(yán)重毒性傷害和疾病提供早期警報。這種信號指標(biāo)可以是細(xì)胞分子結(jié)構(gòu)和功能的變化，可以是某一生化代謝過程的變化或生成異常的代謝產(chǎn)物或其含量，可以是某一生理活動或某一生理活性物質(zhì)的異常表現(xiàn)，也可以是個體表現(xiàn)出的異?，F(xiàn)象。如果能夠掲示出缺氧預(yù)適應(yīng)的生物標(biāo)志物，將對更加深入的了解缺氧預(yù)適應(yīng)的機(jī)制以及在臨床上對相關(guān)疾病做出提前診斷和治療具有很大的幫助。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種檢測亞精胺含量的儀器或/和物質(zhì)的新用途。本發(fā)明所提供的檢測亞精胺含量的儀器或/和物質(zhì)的新用途具體為用于檢測如下I)-4)中任一所述的儀器或/和物質(zhì)在制備鑒定或輔助鑒定動物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品中的應(yīng)用I)亞精胺、肌酸和纈氨酸的含量；2)亞精胺和肌酸的含量；3)亞精胺和纈氨酸的含量；4)亞精胺的含量。在本發(fā)明中，所述缺氧預(yù)適應(yīng)是指動物或細(xì)胞經(jīng)過非致死性缺氧后，對再次遭遇的缺氧產(chǎn)生耐受，從而減輕缺氧對動物或細(xì)胞的損傷；所述耐受具體可體現(xiàn)為對相同的缺氧狀態(tài)的耐受時間延長。本發(fā)明中，所述儀器為色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀)；所述物質(zhì)可為任何可用于檢測亞精胺、肌酸和纈氨酸這三種物質(zhì)中任一種的物質(zhì)或同時檢測這三種物質(zhì)。所述色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中的色譜儀可為高效液相色譜儀；在本發(fā)明的一個實施例中，具體為Agilent HPllOO型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；所述質(zhì)譜儀具體為LCQDeca XP離子講質(zhì)譜儀(美國Thermo Finnigan公司)。
本發(fā)明的再ー個目的是提供鑒定或輔助鑒定動物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的廣品。本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定動物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品具體為用于檢測如下1)-4)中任一所述的儀器或/和物質(zhì)I)亞精胺、肌酸和纈氨酸的含量；2)亞精胺和肌酸的含量；3)亞精胺和纈氨酸的含量；4)亞精胺的含量。本發(fā)明中，所述儀器為色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀)；所述物質(zhì)可為任何可用于檢測亞精胺、肌酸和纈氨酸這三種物質(zhì)中任一種的物質(zhì)或同時檢測這三種物質(zhì)。所述色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中的色譜儀可為高效液相色譜儀；在本發(fā)明的一個實施例中，具體為Agilent HPllOO型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；所述質(zhì)譜儀具體為LCQDeca XP離子講質(zhì)譜儀(美國Thermo Finnigan公司)。在實際應(yīng)用中，為了提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確率，也可以將本發(fā)明的方法配合其他檢測手段一同使用。本發(fā)明的實施例具體選擇小鼠(如ICR小鼠)作為所述動物，用于檢測亞精胺、肌酸和纈氨酸的含量，檢測部位具體為所述動物(如小鼠)的腦組織。本發(fā)明利用高效液相色譜的高分離能力和質(zhì)譜的高靈敏度檢測能力對提取液進(jìn)行全面分析，最終發(fā)現(xiàn)亞精胺、肌酸和纈氨酸這三種物質(zhì)可作為缺氧預(yù)適應(yīng)的標(biāo)記物。具體表現(xiàn)為，缺氧預(yù)適應(yīng)后(I)亞精胺在腦組織中含量明顯增加。(2)肌酸在腦組織中含量明顯增加。(3)纈氨酸在腦和心臟中含量升高，纈氨酸作為重要的分解供能氨基酸，這將有利于動物能量的供給和免疫力的增強(qiáng)。缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)志物的掲示將對更加深入的了解缺氧預(yù)適應(yīng)的機(jī)制在臨床上對缺氧相關(guān)疾病做出早期診斷和干預(yù)治療有很大幫助。


圖I為小鼠的缺氧耐受時間與缺氧處理次數(shù)之間的關(guān)系。圖2為在正離子檢測模式的ESI電離條件下，腦組織樣品的總離子流色譜圖。其中，A為空白對照樣品(對照組小鼠水提液樣品)出為小鼠缺氧耐受的腦組織樣品(缺氧6次組小鼠的水提液樣品)。圖3為對照組小鼠和缺氧6次組小鼠腦組織樣品(水提液樣品)的得分圖。圖4為缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)志物與標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖和多級質(zhì)譜碎片圖譜。其中，Al為繳氨酸色譜圖；A2為繳氨酸質(zhì)譜圖；B1為肌酸色譜圖；B2為肌酸質(zhì)譜圖；C1為亞精胺色譜圖；C2為亞精胺質(zhì)譜圖。圖5為對照組、缺氧3次和缺氧6次組中缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)志物在腦中的含量變化。其中，A為繳氨酸；B為肌酸；C為亞精胺。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明 ，均可從商業(yè)途徑得到。I、儀器和材料LCQ Deca XP離子講質(zhì)譜儀(美國Thermo Finnigan公司)，配置有ESI源,離子阱質(zhì)量分離器，Tune Plus工作軟件。Agilent HPllOO型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，包括G1379A在線脫氣機(jī)；G1312A雙元泵；G1313A自動進(jìn)樣器及Agilent色譜數(shù)據(jù)化學(xué)工作站。色譜柱Waters Symmetry C18 3· 5 μ m(2. ImmX 100mm, i. d. 3· 5 μ m,美國 Waters公司)。千分之ー電子天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；SIGMA 3K15型低溫高速離心機(jī)(德國SIGMA公司)；KQ-100E醫(yī)用超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；T18高速勻漿機(jī)(廣州儀科實驗室技術(shù)有限公司);Vortex. Genie2旋渦混合器(美國scientificindustries公司)；lml注射器(上海米沙瓦醫(yī)科エ業(yè)有限公司)；125ml廣ロ瓶。2、藥品和試劑甲醇為色譜純(美國Fisher科技公司)，甲酸為色譜純(北京迪馬試劑公司)；流動相用水為娃哈哈飲用純凈水(杭州娃哈哈集団有限公司)，三氯こ酸(北京化學(xué)試劑公司)。標(biāo)準(zhǔn)品纈氨酸(批號=140681-200401);肌酸(貨號C0780，美國sigma公司)；亞精胺(貨號85561,美國sigma公司)。3、實驗動物健康雄性ICR小鼠，體重18_22g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供(動物號SCXX (京)2006-0009)。實施例I、小鼠缺氧預(yù)適應(yīng)動物模型的獲得將ICR小鼠飼養(yǎng)于清潔室內(nèi)，實驗前禁食12小時不禁水。將30只小鼠隨機(jī)分成3組，分別為對照組、缺氧3次組和缺氧6次組，每組10只。稱重后將缺氧3次組和缺氧6次組的小鼠置于125ml的廣ロ瓶中，將瓶ロ用涂有凡士林的橡膠塞塞緊密封，開始計時(缺氧耐受時間的起點)并觀察小鼠的反應(yīng)。當(dāng)小鼠出現(xiàn)喘呼吸現(xiàn)象時，記錄時間(缺氧耐受時間的終點)。立即將小鼠取出放入另ー個充滿新鮮空氣的125ml廣ロ瓶中后，立即將瓶ロ用涂有凡士林的橡膠塞塞緊密封，重新開始下一輪計時，記錄該次缺氧處理的缺氧耐受時間。共重復(fù)缺氧處理3次或6次。小鼠在缺氧3次或6次后立即斷頭處死，然后在冰上迅速取出小鼠的腦組織和心臟組織，用濾紙將血跡吸干，放到液氮中保存待用。而對照組小鼠不進(jìn)行缺氧處理，直接斷頭處死，在冰上迅速取出小鼠的腦組織和心臟組織，用濾紙將血跡吸干，放到液氮中保存待用。
對缺氧6次組小鼠的缺氧耐受時間與缺氧處理次數(shù)之間的關(guān)系進(jìn)行分析，得到如圖I所示的小鼠缺氧耐受時間曲線，從中可以看出小鼠缺氧耐受時間隨著缺氧預(yù)適應(yīng)次數(shù)的增多而大幅延長，從缺氧第I次的大約15min到缺氧第6次能夠延長到約80-90分鐘，可見，小鼠對缺氧產(chǎn)生了一定的適應(yīng)性，即處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)。實施例2、缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)一、腦組織和心臟樣品的處理及質(zhì)控樣品的設(shè)置
1、腦組織和心臟組織樣品的處理代謝組學(xué)樣品處理，遵循盡可能保留所有代謝物信息的原則，本實施例中為了使得到的代謝物信息更加全面，采取了兩步提取法。先用水提取，再用80%甲醇提取，提取液供之后分別進(jìn)行檢測和數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析用。具體操作如下將實施例I獲得的腦組織和心臟組織從液氮中取出置于冰上，稱重，按照每克組織5ml的用量，分別加入冰冷的O. lmol/L的三氯こ酸溶液，在冰浴環(huán)境下勻漿(18000rpm，30s)。之后在4°C離心20min，轉(zhuǎn)速為13000rpm。取上清液，用O. 22 μ m的濾膜過濾，得到腦組織和心臟組織的水提液樣品。兩個樣品均保存在4°C冰箱中待測。將經(jīng)上述水提后殘余的腦組織和心臟組織分別稱重，按照每克組織5ml的用量，用80% (v/v)甲醇充分混勻，fC, 13000rpm離心20min。取上清液,用O. 22 μ m的濾膜過濾，得到腦組織和心臟組織的醇提液樣品。兩個樣品保存在4°C冰箱中待測。2、質(zhì)控樣品的設(shè)置上述步驟I中四個樣品的質(zhì)控(QC)樣品均為對應(yīng)的對照組小鼠樣品和對應(yīng)的缺氧6次組小鼠樣品共20份，從每個樣品中取100 μ I混合作為QC樣品。ニ、對步驟一的樣品進(jìn)行LC-MS分析對步驟一獲得的三個樣品進(jìn)行LC-MS分析及相關(guān)數(shù)據(jù)處理I、色譜條件和質(zhì)譜條件色譜條件Agilent HP1100型高效液相色譜儀(美國Agilent公司),Waters Symmetry C18 色譜柱(2. ImmX 100mm, i. d. 3· 5 μ m,美國 Waters 公司)，柱溫為室溫,流動相為含O. 05% (v/v)甲酸的甲醇-水，采用線性梯度洗脫(甲醇和水的體積比從5 95至95 5)，流速為O. 2ml/min,時間為20min，進(jìn)樣量為10 μ I。每次進(jìn)樣前用初始流動相(甲醇和水的體積比為5 95，且含有體積百分含量為O. 05%的甲酸)，平衡15min。在進(jìn)樣前將相應(yīng)的QC樣品連續(xù)進(jìn)樣3次，之后每5個樣品進(jìn)一次QC樣品。質(zhì)譜條件LCQ Deca XP離子講質(zhì)譜儀(美國Thermo Finnigan公司),電噴霧離子化(ESI)源；正離子掃描方式。鞘氣和輔助氣均為氮?dú)?，分別設(shè)為60psi和5psi ;噴霧電壓5kV;毛細(xì)管電壓28V;離子傳輸管溫度350°C。其他參數(shù)由儀器自動優(yōu)化進(jìn)行設(shè)置。質(zhì)量掃描范圍為O-lOOOm/ζ，采用全掃描ー級質(zhì)譜方式進(jìn)行測定。在正離子檢測模式的ESI電離條件下，缺氧6次組小鼠和對照組小鼠的腦組織水提液樣品的總離子流色譜圖(total ion mass chromatograms, TICs)如圖2所示。2、數(shù)據(jù)處理(I)數(shù)據(jù)的預(yù)處理通過上述步驟I的LC-MS分析后,用Xalibur軟件將原始數(shù)據(jù)文件(· raw格式)轉(zhuǎn)換為netCDF格式。將其導(dǎo)入至開源數(shù)據(jù)處理軟件XCMS中進(jìn)行峰識別、保留時間的非線性擬合、峰濾過與峰對齊等預(yù)處理。最終獲得3個參數(shù)指標(biāo)(包括質(zhì)荷比(m/z)、保留時間(Retention time)和峰面積)的ニ維數(shù)據(jù)陣。結(jié)果顯示，以對照組小鼠和缺氧6次組小鼠為研究對象，用XCMS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理后，從腦組織水提液樣品和腦組織醇提液樣品數(shù)據(jù)中分別獲得393和423個變量，其中腦組織水提液樣品和腦組織醇提液樣品P < O. 05的變量分別有106和81個。(2)多變量統(tǒng)計分析對上述步驟⑴獲得的腦組織水提液樣品和腦組織醇提液樣品P < O. 05的變量進(jìn)行多變量統(tǒng)計分析，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA-P (Versionl2. O, Umetrics AB,Umea, Sweden)軟件。
由于獲得原始數(shù)據(jù)陣后要對獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行中心化(centering)，而每種數(shù)據(jù)標(biāo)度化方法均具有各自的優(yōu)缺點，因此在選擇標(biāo)度化(scaling)方法時，應(yīng)綜合考慮以下三個因素需要解決的生物學(xué)問題、數(shù)據(jù)矩陣的特性以及采用的數(shù)據(jù)分析方法。本研究選擇了帕累托標(biāo)度化(pareto scaling)方法，該方法既可避免將噪音選為差異變量，又可避免丟失重要且豐度較小的差異變量。首先將QC樣品數(shù)據(jù)和待測樣品數(shù)據(jù)放在一起，采用主成分分析(Principalcomponent analysis, PCA)方法,進(jìn)行無監(jiān)瞀的數(shù)據(jù)分析,觀察各組數(shù)據(jù)的聚類情況并且去除異常點。然后選用偏最小ニ乘判別分析(Partial least squares discriminateanalysis, PLS-DA)，對待測樣品進(jìn)行有監(jiān)瞀的數(shù)據(jù)分析。經(jīng)PCA分析和PLS-DA分析得到對照組小鼠和缺氧6次組小鼠腦組織水提液樣品的得分圖，如圖3所示。從得分圖中可以看到，QC樣品分布集中，表明檢測體系穩(wěn)定、數(shù)據(jù)可靠。所有樣品的得分圖中對照組和缺氧6次組均明顯分為兩簇，說明對照組和缺氧6次組之間的物質(zhì)含量存在明顯的差別。經(jīng)PLS-DA分析之后，SIMCA-P 返回各變量的 VIP (Variable Importance Plot)值，通常認(rèn)為，其變量的VIP值大于I. O被認(rèn)為該變量對該模型有較大影響，即對各組間的差異貢獻(xiàn)較大。本研究中將VIP大于I的變量作為可能的缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)志物。結(jié)果顯示，以對照組小鼠和缺氧6次組小鼠腦樣品為研究對象，通過分析得到VIP大于I的變量分別有46個和33個。3、生物標(biāo)記物的結(jié)構(gòu)鑒定與表征對上述步驟2獲得的VIP大于I的變量(潛在的缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)志物)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。具體如下首先，通過LC-MS對潛在缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)志物進(jìn)行不同轟擊能量下的多級MS檢測，獲得相關(guān)的MS/MS圖譜。其色譜條件和質(zhì)譜條件如下色譜條件Agilent HP1100型高效液相色譜儀(美國Agilent公司),Waters Symmetry C18 色譜柱(2. ImmX 100mm, i. d. 3· 5 μ m,美國 Waters 公司)，柱溫為室溫,流動相為含0.05% (v/v)甲酸的甲醇-水，采用線性梯度洗脫(甲醇和水的體積比從5 95至95 5)，流速為0. 2ml/min,時間為20min，進(jìn)樣量為10 μ I。每次進(jìn)樣前用初始流動相(甲醇和水的體積比為5 95，且含有體積百分含量為0.05%的甲酸)，平衡15min。在進(jìn)樣前將相應(yīng)的QC樣品連續(xù)進(jìn)樣3次，之后每5個樣品進(jìn)一次QC樣品。質(zhì)譜條件LCQ Deca XP離子講質(zhì)譜儀(美國Thermo Finnigan公司),電噴霧離子化(ESI)源；正離子掃描方式。鞘氣和輔助氣均為氮?dú)?，分別設(shè)為60psi和5psi ;噴霧電壓5kV;毛細(xì)管電壓28V;離子傳輸管溫度350°C。其他參數(shù)由儀器自動優(yōu)化進(jìn)行設(shè)置。質(zhì)量掃描范圍為O-lOOOm/ζ，采用全掃描ー級質(zhì)譜方式進(jìn)行測定。然后通過HMDB(Human Metabolome Database,http://www. hmdb. ca)和 METLIN數(shù)據(jù)庫(http://metlin. scripps. edu)進(jìn)行物質(zhì)結(jié)構(gòu)的檢索,利用數(shù)據(jù)庫中提供的精確分子量和上述所得的MS/MS圖譜縮小來自內(nèi)源性的潛在缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)志物與數(shù)據(jù)庫結(jié)構(gòu)物質(zhì)的可能范圍，提高兩者的匹配程度。最終通過購買標(biāo)準(zhǔn)品，用標(biāo)準(zhǔn)品的分子量、色譜保留時間和相應(yīng)的多級MS裂解譜比對，進(jìn)行潛在缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)志物的結(jié)構(gòu)表征和確認(rèn)。結(jié)果如圖4所示，其中鑒定表征的3個化合物，即亞精胺、肌酸和纈氨酸的色譜保留時間與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間一致，并且其多級質(zhì)譜碎片信息與標(biāo)準(zhǔn)品的結(jié)構(gòu)特征相吻合。 將亞精胺、肌酸和纈氨酸這三個物質(zhì)作為缺氧預(yù)適應(yīng)的生物標(biāo)志物。實施例3、亞精胺、肌酸和纈氨酸在腦組織中含量變化的檢測本實施例以實施例2步驟ー I中獲得的對照組、缺氧3次組和缺氧6次組的小鼠腦為實驗材料，檢測隨著缺氧處理次數(shù)的増加，亞精胺、肌酸和纈氨酸這三個物質(zhì)的含量所發(fā)生的變化。具體操作如下將對照組、缺氧3次組和缺氧6次組的小鼠的腦組織進(jìn)行稱重，然后按照實施例2-1中的方法，制備得到三組小鼠的腦組織水提液樣品作為待測樣品(亞精胺、肌酸和纈氨酸存在于腦組織水提液中)。將亞精胺、肌酸和纈氨酸標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成系列濃度，進(jìn)行LC-MS分析，同時將上述獲得的3份水提液樣品也進(jìn)行LC-MS分析，色譜條件和質(zhì)譜均如下色譜條件Agilent HPllOO型高效液相色譜儀(美國Agilent公司),Waters Symmetry C18 色譜柱(2. ImmX 100mm, i. d. 3· 5 μ m,美國 Waters 公司)，柱溫為室溫,流動相為含O. 05% (v/v)甲酸的甲醇-水，采用線性梯度洗脫(甲醇和水的體積比從5 95至95 5)，流速為O. 2ml/min,時間為20min，進(jìn)樣量為10 μ I。每次進(jìn)樣前用初始流動相(甲醇和水的體積比為5 95，且含有體積百分含量為O. 05%的甲酸)，平衡15min。在進(jìn)樣前將相應(yīng)的QC樣品連續(xù)進(jìn)樣3次，之后每5個樣品進(jìn)一次QC樣品。質(zhì)譜條件LCQ Deca XP離子講質(zhì)譜儀(美國Thermo Finnigan公司),電噴霧離子化(ESI)源；正離子掃描方式。鞘氣和輔助氣均為氮?dú)?，分別設(shè)為60psi和5psi ;噴霧電壓5kV;毛細(xì)管電壓28V;離子傳輸管溫度350°C。其他參數(shù)由儀器自動優(yōu)化進(jìn)行設(shè)置。質(zhì)量掃描范圍為O-lOOOm/ζ，采用全掃描ー級質(zhì)譜方式進(jìn)行測定。然后以得到的亞精胺、肌酸或纈氨酸標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積(y)為縱坐標(biāo)，濃度(X)為橫坐標(biāo)，用加權(quán)最小二乗法進(jìn)行回歸運(yùn)算，即得各待測物質(zhì)的線性回歸方程。結(jié)果如表I所示，在測定濃度范圍內(nèi)各被測物質(zhì)線性良好。表I缺氧生物標(biāo)志物的LC-MS數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.用于檢測如下I)-4)中任一所述的儀器或/和物質(zhì)在制備鑒定或輔助鑒定動物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品中的應(yīng)用 1)亞精胺、肌酸和纈氨酸的含量； 2)亞精胺和肌酸的含量； 3)亞精胺和纈氨酸的含量； 4)亞精胺的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述儀器為色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。
3.鑒定或輔助鑒定動物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品，為用于檢測如下I)-4)中任一所述的儀器或/和物質(zhì) 1)亞精胺、肌酸和纈氨酸的含量； 2)亞精胺和肌酸的含量； 3)亞精胺和纈氨酸的含量； 4)亞精胺的含量。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的產(chǎn)品，其特征在于所述儀器為色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。
全文摘要
本發(fā)明公開了亞精胺在作為缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)記物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述應(yīng)用具體為用于檢測如下1)-4)中任一所述的儀器或/和物質(zhì)在制備鑒定或輔助鑒定動物或動物是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品中的應(yīng)用1)亞精胺、肌酸和纈氨酸的含量；2)亞精胺和肌酸的含量；3)亞精胺和纈氨酸的含量；4)亞精胺的含量。實驗證明，缺氧預(yù)適應(yīng)后，腦組織中亞精胺、肌酸和纈氨酸的含量明顯升高；可見，亞精胺、肌酸和纈氨酸這三種物質(zhì)可作為缺氧預(yù)適應(yīng)的標(biāo)記物，缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)志物的揭示將對更加深入的了解缺氧預(yù)適應(yīng)的機(jī)制以及在臨床上對缺氧相關(guān)疾病做出早期診斷和干預(yù)治療有很大幫助。
文檔編號G01N30/72GK102662011SQ20121013512
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月2日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月2日
發(fā)明者崔燦, 汪明明, 程海婷, 蘇甦, 薛明 申請人:首都醫(yī)科大學(xué)