專利名稱：低熒光背景的組裝型金磁復合納米顆粒的制備方法及其應用的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明屬于復合納米材料合成領域，涉及一種低熒光背景的組裝型金包覆磁性鐵氧化合物的復合納米材料，即 ^304(^ 02@Αιι金磁復合納米顆粒及其制備方法，特別涉及采用自組裝技術(shù)方案制備適于直接在其表面進行熒光信號檢測的金磁復合納米顆粒。
背景技術(shù)：
磁性材料是一種歷史悠久的傳統(tǒng)材料。研究表明當其尺寸進入納米尺度后，所得磁性納米材料將呈現(xiàn)出一些特殊的物理現(xiàn)象，如矯頑力的變化、超順磁性、居里溫度的下降等。因為這些特性，磁性納米顆粒作為納米材料的重要組成部分，目前已成為材料、信息、 生物、化學等領域的研究熱點。由于磁性納米顆粒具有分離速度快、效率高、操作簡單、易實現(xiàn)功能化、易實現(xiàn)自動化及不影響分離物質(zhì)的活性等優(yōu)越的物理化學性質(zhì)和生物相容性， 目前已被廣泛應用于細胞的分離分選，生物大分子的分離、純化、檢測，靶向診斷與治療等諸多領域。其中，以磁性納米顆粒進行生物大分子檢測主要是通過在其表面修飾上特異性的探針或抗體后即可利用它們對目標分子(核酸或蛋白質(zhì))進行特異性的檢測。但單純的鐵氧磁性納米顆粒在空氣中易被氧化、從而發(fā)生團聚，且具有強的熒光背景甚至能夠淬滅熒光，不利于在其表面直接進行以熒光為信號的生物分子檢測。納米金顆粒具有特殊的穩(wěn)定性、小尺寸效應、量子效應、表面效應和良好的生物相容性，在納米電子學、光電子器件、納米涂層材料、納米催化、分子識別和生物標記等領域有著巨大的潛在應用價值，因此一直是納米材料領域研究的熱點。關(guān)于納米金顆粒的制備方法、性能及應用研究在國內(nèi)外已經(jīng)有很多的文獻報道。而將磁性納米顆粒與納米金顆粒結(jié)合起來的金磁復合顆粒，由于兼具二者的優(yōu)點而具有更為廣闊的應用前景，關(guān)于其制備方法、性能及應用研究目前亦已有許多文獻報道。但很多方法制備得到的金磁復合顆粒在生物分子的分離、純化及檢測方面的應用常常局限于將納米金顆粒表面僅僅作為與生物分子結(jié)合的載體，對納米金顆粒的其他性能(如近紅外區(qū)的光熱轉(zhuǎn)換性質(zhì)、熒光增效作用)應用得并不夠全面。目前制備鐵氧磁性納米顆粒的方法主要有共沉淀法、水熱法、高溫分解法等若干種物理或化學方法，根據(jù)顆粒的需求不同可采取相應的方案。而目前制備金磁復合顆粒主要采用表面原位還原方案和自組裝方案。

發(fā)明內(nèi)容
解決的技術(shù)問題本發(fā)明的目的在于提供一種低熒光背景的、兼具有良好生物相容性與易于分離性的組裝型金-磁復合納米顆粒及其操作簡便的制備方法。本發(fā)明采用軟模板法制備粒徑500 nm左右!^e3O4磁性納米顆粒，之后經(jīng)種子聚合法及經(jīng)典的M^ber過程在其表面包覆一層硅殼，制備粒徑550 nm左右的!^3O4OSiO2顆粒，用硅烷偶聯(lián)劑對穩(wěn)定性和分散性較好的!^3O4OSiO2顆粒表面進行氨基修飾；以還原法制得粒徑3-5 nm左右的納米金顆粒；混合上述!^3O4OSiA和納米金混懸液并攪拌，通過金與氨基的配位結(jié)合從而得到組裝型i^304@Si02@AU金磁復合納米顆粒。經(jīng)測試，該金磁復合納米顆粒與表面經(jīng)功能化基團修飾的金磁復合納米顆粒均既具備金良好的生物分子固定化容量，又具備磁性材料易于分離的性質(zhì)，尤其是具備熒光背景低的優(yōu)點，在生物檢測尤其是直接于顆粒表面進行以熒光為信號的生物分子檢測及自動化檢測方面將具有廣闊的應用前景。技術(shù)方案低熒光背景的組裝型金磁復合納米顆粒的制備方法，制備步驟為a. 制備磁性納米狗304顆粒軟模板法制備Fi53O4磁性納米顆粒，室溫下將FeCl3 · 6H20、NH4Ac 和葡聚糖以質(zhì)量比1:2:1. 5稱量，溶解于乙二醇中，并磁力攪拌，混勻后倒入聚四氟乙烯內(nèi)襯反應釜中，然后放入恒溫烘箱中，保持在200°C反應8小時，之后冷卻至室溫，最后黑色沉淀形成，用水與乙醇交替清洗干凈，得到粒徑約為500 nm的!^e3O4顆粒；b.制備狗304@ SiO2顆粒并于其表面修飾氨基基團按體積比4:1將乙醇和水混合并與上述!^e3O4顆?；旌暇鶆?，超聲后倒入三頸燒瓶，之后在通氮氣保護的條件下進行攪拌，并保持水浴35 °C，接下來加入體積比為2:1的正硅酸四乙酯和氨水混合溶液，混合溶液與!^3O4OSiO2顆粒混懸液的體積比例為1:25，反應6小時，之后以乙醇與水交替洗滌，從而得到!^3O4OSiO2顆粒； 取上述!^3O4OSiA顆粒進行磁分離后加入體積比為9:1的乙醇和水混合液，用95 %乙醇定容；再加入體積比為1 1. 5的3-氨丙基三乙氧基硅烷和氨水混合溶液至上述!^e3O4OSiA顆?；鞈乙褐?，混合溶液與!^3O4OSiA顆?；鞈乙旱捏w積比例為1 50，振蕩2小時，之后用無水乙醇清洗3次，將上述顆粒磁分離后，加入0. 1 M的鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至5-6，以水清洗干凈，保存待用；c.以硼氫化鈉還原氯金酸得到小粒徑的納米金顆粒將濃度為0. IM的十六烷基三甲基溴化銨溶液和濃度為0. OlM的四氯化金酸三水合物溶液以14:1的體積比例混合加入到塑膠管中，上下顛倒混勻，溶液變?yōu)榱咙S，立即加入濃度為0. OlM的硼氫化鈉水溶液，其中硼氫化鈉與四氯化金酸三水合物溶液的體積比例為2:1，顛倒混勻2分鐘，靜置得到淡黃色的膠體金溶液；d.以1:3的體積比例混合上述!^3O4OSiO2顆粒混懸液和納米金混懸液并超聲攪拌，納米金顆粒通過與!^e3O4OSiA顆粒表面的氨基基團配位結(jié)合而得到組裝型!^3O4OSiO2IgAu金磁復合納米顆粒。組裝型i^304@Si02@AU金磁復合納米顆粒在以熒光信號為檢測手段的生物大分子檢測與分析中的應用。有益效果本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點和有益效果
1、一般采用磁性納米顆粒為載體、以熒光信號檢測為手段進行生物大分子檢測時，由于受到磁性納米顆粒本身本底熒光背景影響，需要將熒光探針變性下來點樣于載玻片上或者轉(zhuǎn)移到新的容器中，再進行熒光信號的檢測與讀值。本發(fā)明制備的金-磁復合納米顆粒表面經(jīng)功能化修飾后，不但具有良好的生物相容性，而且熒光背景低，適于直接應用于熒光檢測系統(tǒng)的生物信號檢測，可作為構(gòu)建磁性顆粒微陣列的載體，能夠與生物芯片技術(shù)結(jié)合而實現(xiàn)操作簡單、高通量、高靈敏度和自動化的熒光檢測。2、本發(fā)明采用自組裝技術(shù)制備i^304@Si02@Au金磁復合顆粒，制備過程簡單，反應條件溫和，制備的顆粒尺寸可控、分布均勻、具有良好的分散性、穩(wěn)定性與生物相容性，只使用了少量廉價的化學試劑(除必須的金前驅(qū)體外)，制備成本較低。具有成本低和操作簡便的優(yōu)點。


圖1為本發(fā)明中低熒光背景的組裝型金磁復合納米顆粒i^304@Si02@Au的制備流程圖。圖2為組裝型金磁復合納米顆粒i^304@Si02@Au及其中間體的透射電鏡圖。圖2A 為狗304磁性納米顆粒的透射電鏡圖；圖2B為!^3O4OSiO2磁性納米顆粒的透射電鏡圖；圖 2C為納米金顆粒的透射電鏡圖；圖2D為i^304@Si02@Au復合納米顆粒的透射電鏡圖。圖3為組裝型金磁復合納米顆粒!^3O4OSiO2IgAu的熒光背景檢測。圖3A為各次洗滌液的熒光掃描紀錄；圖3B為連接有熒光標記寡核苷酸片段的金磁顆粒與空白金磁顆粒的熒光強度對照圖。
具體實施例方式磁性納米顆粒是指顆粒尺度至少有一維在1-1000 nm之間的材料，當它們達到一定的臨界尺度時，會呈單磁疇并表現(xiàn)出超順磁性，是20世紀70年代以來逐步產(chǎn)生和發(fā)展起來的新型生物醫(yī)學功能材料。在通常情況下，處于膠態(tài)的磁性微粒呈雜亂無序的運動狀態(tài)， 可穩(wěn)定懸浮于液相介質(zhì)中，方便地進行各種生物學反應；而在外磁場作用下磁性微粒便表現(xiàn)出良好的磁響應性，可方便地將微粒與介質(zhì)分離開來；當撤去外加磁場后，磁性微粒又可重新懸浮于液相介質(zhì)中而不聚集。一般的磁性納米顆粒存在一定的熒光背景，若在其表面以熒光為信號進行生物分子檢測，不利于直接采集檢測信號，因此需要在磁性納米顆粒表面修飾金殼，有效消除磁性納米顆粒的熒光背景才適合在其表面直接讀取熒光信號進行生物分子檢測。本發(fā)明提供的技術(shù)方案為①制備粒徑在500 nm左右!^e3O4磁性納米顆粒，之后經(jīng)種子聚合法及經(jīng)典的MGber過程在其表面包覆一層硅殼，制備粒徑在550 nm左右的 Fe304iSi02顆粒，用硅烷偶聯(lián)劑對上述穩(wěn)定性和分散性較好的!^e3O4OSiA顆粒表面進行氨基修飾；②制備小粒徑的納米金顆粒；③混合步驟①的!^3O4OSiO2混懸液和步驟②的納米金混懸液并于一定條件下攪拌，納米金顆粒通過與!^e3O4OSiA顆粒表面的氨基基團配位結(jié)合而得到組裝型Fe53O4OSiO2IgAu金磁復合納米顆粒。④于該組裝型Fe53O4OSiO2IgAu金磁復合納米顆粒表面進行功能化修飾進而進行熒光信號檢測。本發(fā)明的具體實現(xiàn)過程如下
1) 采用軟模板法制備粒徑約為500 nm的磁性!^e3O4納米顆粒。之后經(jīng)種子聚合法及經(jīng)典的MGber過程在其表面包覆一層硅殼，制備粒徑約為500 nm的!^3O4OSiO2顆粒， 用硅烷偶聯(lián)劑對此穩(wěn)定性和分散性較好的!^3O4OSiA顆粒表面進行氨基修飾，保存于有機溶劑中。所述硅烷偶聯(lián)劑為3-氨丙基三乙氧基硅烷(3-Aminopropyltriethoxysilane，APTES)。所述保存氨基化!^e3O4OSiO2顆粒的有機溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇、乙二醇、丙三醇、丙酮、正丁醇、四氫呋喃、或N，N-二甲基甲酰胺等有機溶劑。這對于本領域的普通技術(shù)人員是顯然的。所列舉的有機溶劑只是舉例說明本發(fā)明，不能以任何方式限制本發(fā)明的范圍。2)以還原金前驅(qū)體溶液的方法得到小粒徑的納米金顆粒。所述還原前驅(qū)體溶液的方法包括添加還原劑的方法、照射紫外線的方法、添加醇的方法、照射超聲波的方法、微生物還原的方法、植物還原法等等。本發(fā)明優(yōu)選添加還原劑的方法。所述添加的還原劑包括檸檬酸或檸檬酸鹽、羥胺類化合物、硼氫化合物等。本發(fā)明優(yōu)選硼氫化鈉為還原劑。所述金前驅(qū)體可以是無機含金化合物或有機含金化合物，如氯金酸或氯金酸鹽 (氯金酸鈉、氯金酸鉀)、乙酸金等。所述小粒徑的納米金顆粒，其粒徑控制為1-30 nm。本發(fā)明優(yōu)選粒徑控制于3-5 nm 的納米金顆粒。3)混合!^3O4OSiO2混懸液和納米金混懸液并于一定條件下攪拌，得到組裝型 Fe304iSi02iAu金磁復合納米顆粒。所述攪拌條件優(yōu)選為超聲攪拌；攪拌速度優(yōu)選為200轉(zhuǎn)/分。4)于該組裝型i^304@Si02@Au金磁復合納米顆粒表面進行功能化修飾從而進行熒光信號檢測。所述功能化修飾包括羧基修飾、氨基修飾、鏈親和素修飾等。這些對于本領域的普通技術(shù)人員是顯然的。所列舉的修飾方法只是舉例說明本發(fā)明，不能以任何方式限制本發(fā)明的范圍。所述熒光物質(zhì)包括Cy3、Cy5、FAM、Rox、TET、HEX、J0E、羅丹明等。這些對于本領域的普通技術(shù)人員是顯然的。所列舉的熒光物質(zhì)只是舉例說明本發(fā)明，不能以任何方式限制本發(fā)明的范圍。以下特定的實施例旨在更詳細地描述本發(fā)明。這些實施例的目的在于解釋本發(fā)明，而不應理解為限定本發(fā)明的范圍。
實施例1組裝型金磁復合納米顆粒的制備
圖1給出了組裝型 ^304(^ 02@Αιι金磁復合納米顆粒的合成過程，包括四個步驟①制備磁性納米!^e3O4顆粒；②制備狗304略102顆粒并于其表面修飾氨基基團；③以硼氫化鈉還原氯金酸得到小粒徑的納米金顆粒；④混合上述!^3O4OSiO2混懸液和納米金混懸液并超聲攪拌，從而得到組裝型i^304(gSi02(gAU金磁復合納米顆粒。具體實驗過程如下所述。(1)軟模板法制備!^e3O4磁性納米顆粒。室溫下稱量1. 3 g氯化鐵(FeCl3 ·6Η20)、 2.6 g醋酸銨(NH4Ac)和1.95 g葡聚糖(質(zhì)量比例為1 2 1. 5)，溶解于50 mL乙二醇中，磁力攪拌，之后混勻后倒入聚四氟乙烯內(nèi)襯反應釜中。然后放入恒溫烘箱中，保持在200。C 反應8小時，再冷卻至室溫，最后黑色沉淀形成。用水與乙醇交替清洗干凈，得到粒徑約為500 nm的!^e3O4顆粒。圖2A給出了 ！^e3O4磁性納米顆粒的透射電鏡圖，可以看出顆粒呈球形、大小均勻，并有較好的分散性，粒徑約為500 nm。(2)制備!^e3O4OSiA顆粒。將乙醇濃度為80%vt的水溶液150 mL與上述!^e3O4顆?；旌暇鶆?，超聲后倒入三頸燒瓶，之后在通氮氣(N2)保護的條件下進行攪拌，并保持水浴 35 °C，接下來加入4 mL正硅酸四乙酯(Tetraethyl orthosilicate, TE0S)和2 mL氨水 (正硅酸四乙酯和氨水的體積比為2:1)，反應6小時，之后以乙醇與水交替洗滌，從而得到 Fe304iSi02顆粒。圖2B給出了 ！^3O4OSiO2磁性納米顆粒的透射電鏡圖，可以看出顆粒呈球形、大小均勻，內(nèi)層黑色區(qū)域為!^e3O4核而外層灰色區(qū)域為S^2殼，該顆粒具有較好的分散性，粒徑約為550 nm。(3)于!^e3O4OSiO2顆粒表面修飾氨基。取上述1 mL !^e3O4IgSiO2顆粒，磁分離后加入乙醇濃度為90%vt的水溶液1 mL，用95 %vt乙醇定容至5 mL，然后加入40 μ L 3-氨丙基三乙氧基硅烷(3-Aminopropyltriethoxysilane, APTES)和60 μ L氨水(二者的體積比為1:1. 5)，混合振蕩2小時，再用無水乙醇清洗3次。將上述顆粒磁分離后，加入0.1 M的鹽酸3 mL處理1小時，目的在于調(diào)節(jié)ρΗ值至5-6以提高APTES質(zhì)子化處理顆粒的效率，從而提高膠體金的吸附率。以水清洗干凈，保存待用。(4)還原法制備納米金顆粒。硼氫化鈉還原制備膠體金在塑膠管中，先加入17. 5 HiL濃度為0. IM的十六烷基三甲基溴化銨(cetyltrimethylammonium bromide, CTAB)溶液，再取1. 25 mL濃度為0. OlM的四氯化金酸三水合物(HAuCl4 · 3H20)溶液加入到上述溶液中(二者體積比為14:1)，上下顛倒混勻，溶液變?yōu)榱咙S，接著，立即加入2. 5 mL濃度為 0. OlM的硼氫化鈉水溶液(硼氫化鈉與四氯化金酸三水合物溶液的體積比為2:1)，之后快速顛倒混勻2分鐘，之后放置2小時以上即得到淡黃色的膠體金溶液。圖2C給出了納米金顆粒的透射電鏡圖，可以看出顆粒呈球形、大小均勻，并有較好的分散性，粒徑約為3-5 nm。(5)組裝!^3O4OSiA顆粒與納米金顆粒得到!^3O4OSiO2OAu金磁復合納米顆粒。將上述1 mL由APTES修飾的!^e3O4OSiO2顆粒磁分離后加入3 mL膠體金溶液(Fe3O4OSiO2顆?；鞈乙汉湍z體金混懸液的比例是1:3)，超聲攪拌吸附4小時，納米金顆粒通過與!^e3O4O SiO2顆粒表面的氨基基團配位結(jié)合而得到組裝型i^304@Si02@AU金磁復合納米顆粒，之后以水清洗干凈。圖2D給出了 i^304@Si02@AU復合納米顆粒的透射電鏡圖，可以看出黑色的膠體金顆粒吸附于灰色的S^2殼層表面，形成了一層均勻的膠體金表層，且復合顆粒的分散性良好，便于在其表面進行熒光信號為檢測手段的生物大分子檢測與分析。
實施例2鏈親和素修飾組裝型金磁復合納米顆粒
將濃度為 20 mM 的 11-巰基i^一烷酸(11-Mercaptoundecanoic acid, MUDA)和上述實施例1制備得到的金磁復合納米顆粒(金磁復合納米顆粒和MUDA的質(zhì)量體積比例是5 1)混合振蕩M小時。待反應完全后，以95%乙醇與滅菌水交叉洗滌各兩次，最終以4 mg/mL的濃度分散于滅菌水中。之后，取濃度為0. 01 M的NaOH水溶液(金磁復合納米顆?；鞈乙汉?NaOH溶液的體積比例是5:1)加入到上述修飾的金磁復合納米顆粒中反應15分鐘，反應完全后，用滅菌水洗滌三次。接著加入濃度為20 mg/mL的1- (3- 二甲基氨基丙基)_3_乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(l-Ethyl-3-(3-dimethylIaminopropy 1) carbodiimide hydrochloride, EDC · HCl)溶液(金磁復合納米顆?；鞈乙汉虴DC · HCl溶液的體積比例是2. 5:1)，渦旋混勻，于4°C條件下反應30分鐘。反應完全后，磁分離、棄上清，用去離子水和濃度為25 mM的 2-(N-嗎啉代)乙磺酸(2-N-morpholino ethanesulfonic acid, MES)溶液快速沖洗 1 次。 爾后將一定量的濃度為2. 5 mg/mL的鏈親和素/MES溶液加入到上述金磁納米顆粒中(金磁復合納米顆?；鞈乙汉玩溣H和素/MES溶液的體積比例是5:1)，室溫下反應4小時，從而將鏈親和素共價結(jié)合到金磁納米顆粒的表面，得到鏈親和素-金磁顆粒。
實施例3組裝型金磁復合納米顆粒的熒光背景檢測
將濃度為ι μ M的生物素與Cy3雙標記的寡核苷酸片段(5’ -biotin-TGAAGGAGAAGGTG TCTGCGGGA-Cy3-3’)與上述實施例2制備得到的鏈親和素-金磁顆粒以質(zhì)量比例1 2混合， 室溫振蕩反應15分鐘，反應結(jié)束后，磁分離，用磷酸緩沖液(phosphate buffer, PB)充分洗滌，收集每次洗滌液，點樣于載玻片上，經(jīng)配有Cy3濾色片的掃描儀掃描后記錄洗滌液熒光值，至熒光數(shù)值不再變化。圖3A示各次洗滌液的熒光掃描紀錄，行a為未經(jīng)PB緩沖液清洗的鏈親和素-金磁顆粒上清溶液，行b-f依次為經(jīng)PB緩沖液清洗1-6次的鏈親和素-金磁顆粒上清溶液。從圖中可以看出，經(jīng)過六次洗滌，熒光讀值基本穩(wěn)定地趨近于無，說明已將游離或吸附于金磁顆粒表面的熒光標記的寡核苷酸片段洗掉，顆粒表面剩下的熒光信號為通過鏈親和素-生物素反應后穩(wěn)定連接的熒光標記的寡核苷酸片段。圖3B示空白金磁顆粒與連接有熒光標記的寡核苷酸片段之金磁顆粒的熒光強度對照，行a為PB緩沖液熒光強度對照，行b為空白金磁顆粒的熒光強度，行c為連接有熒光標記的寡核苷酸片段之金磁顆粒的熒光強度，行d為連接有熒光標記的寡核苷酸片段之金磁顆粒的上清溶液的熒光強度。從圖中可以看出，空白金磁顆粒的熒光強度很弱、接近于無，而連接有熒光標記的寡核苷酸片段的金磁顆粒的熒光強度很強，說明組裝型金磁復合納米顆粒的低熒光背景適于在其表面直接進行檢測熒光信號的生物分析方法。
權(quán)利要求
1.低熒光背景的組裝型金磁復合納米顆粒的制備方法，其特征在于制備步驟為a.制備磁性納米!^e3O4顆粒軟模板法制備!^e3O4磁性納米顆粒，室溫下將!^Cl3·6Η20、 NH4Ac和葡聚糖以質(zhì)量比1:2:1.5稱量，溶解于乙二醇中，并磁力攪拌，混勻后倒入聚四氟乙烯內(nèi)襯反應釜中，然后放入恒溫烘箱中，保持在200°C反應8小時，之后冷卻至室溫，最后黑色沉淀形成，用水與乙醇交替清洗干凈，得到粒徑約為500 nm的!^e3O4顆粒；b.制備!^3O4IgSiO2顆粒并于其表面修飾氨基基團按體積比4:1將乙醇和水混合并與上述!^e3O4顆?；旌暇鶆颍暫蟮谷肴i燒瓶，之后在通氮氣保護的條件下進行攪拌， 并保持水浴35 °C，接下來加入體積比為2:1的正硅酸四乙酯和氨水混合溶液，混合溶液與 Fe304iSi02顆?；鞈乙旱捏w積比例為1 25，反應6小時，之后以乙醇與水交替洗滌，從而得到!^3O4OSiO2顆粒；取上述!^3O4OSiO2顆粒進行磁分離后加入體積比為9:1的乙醇和水混合液，用95 %乙醇定容；再加入體積比為1:1. 5的3-氨丙基三乙氧基硅烷和氨水混合溶液至上述!^e3O4OSiA顆?；鞈乙褐?，混合溶液與!^e3O4OSiA顆?；鞈乙旱捏w積比例為1 50，振蕩2小時，之后用無水乙醇清洗3次，將上述顆粒磁分離后，加入0.1 M的鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至5-6，以水清洗干凈，保存待用；c.以硼氫化鈉還原氯金酸得到小粒徑的納米金顆粒將濃度為0.IM的十六烷基三甲基溴化銨溶液和濃度為0. OlM的四氯化金酸三水合物溶液以14:1的體積比例混合加入到塑膠管中，上下顛倒混勻，溶液變?yōu)榱咙S，立即加入濃度為0. OlM的硼氫化鈉水溶液，其中硼氫化鈉與四氯化金酸三水合物溶液的體積比例為2:1，顛倒混勻2分鐘，靜置得到淡黃色的膠體金溶液；d.以1:3的體積比例混合上述!^3O4OSiO2顆?；鞈乙汉图{米金混懸液并超聲攪拌，納米金顆粒通過與!^e3O4IgSiA顆粒表面的氨基基團配位結(jié)合而得到組裝型J7e3O4OSiO2IgAu金磁復合納米顆粒。
2.權(quán)利要求1所述的組裝型i^304@Si02@AU金磁復合納米顆粒在以熒光信號為檢測手段的生物大分子檢測與分析中的應用。
全文摘要
低熒光背景的組裝型金磁復合納米顆粒的制備方法及其應用，制備步驟為制備磁性納米Fe3O4顆粒；制備Fe3O4@SiO2顆粒并于其表面修飾氨基基團；以硼氫化鈉還原氯金酸得到小粒徑的納米金顆粒；以1:3的體積比例混合上述Fe3O4@SiO2顆粒混懸液和納米金混懸液并超聲攪拌，納米金顆粒通過與Fe3O4@SiO2顆粒表面的氨基基團配位結(jié)合而得到組裝型Fe3O4@SiO2@Au金磁復合納米顆粒。本發(fā)明采用自組裝技術(shù)制備Fe3O4@SiO2@Au金磁復合顆粒，制備過程簡單，反應條件溫和，制備的顆粒尺寸可控、分布均勻、具有良好的分散性、穩(wěn)定性與生物相容性，制備成本較低。具有成本低和操作簡便的優(yōu)點。
文檔編號G01N21/64GK102568728SQ20121002645
公開日2012年7月11日 申請日期2012年2月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月7日
發(fā)明者何農(nóng)躍, 曾新, 李傳燕, 江紅榮 申請人:東南大學