專利名稱：：檢測分子相互作用的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于檢測分子相互作用的方法。具體地，本發(fā)明涉及一種用于檢測可以彼此相互作用的至少兩種物質(zhì)間的分子相互作用的方法。本發(fā)明特別地可應(yīng)用于科學(xué)研究領(lǐng)域，醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別是生物樣品的分析。在下面的描述中，括號中的參考文獻(xiàn)(references)(參考文獻(xiàn)(Ref.))指在文章末尾呈現(xiàn)的參考文獻(xiàn)的列表?，F(xiàn)有技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和分析領(lǐng)域，存在檢測如抗體、細(xì)胞、細(xì)菌、病毒和大分子的分子和/或?qū)ο箝g相互作用的事件是有用的，甚至是必須的很多情況。例如，為檢測細(xì)菌污染，通常使用抗原/抗體測試。為確定個(gè)體的血型，通常使用抗體和個(gè)體紅細(xì)胞間的親和力測試，因此使所述個(gè)體的血型得以確定。在現(xiàn)有技術(shù)中，存在待檢測的物質(zhì)大量存在時(shí)可以進(jìn)行檢測的“簡單的”方法。例如，這可以是包括待檢測物質(zhì)與親和物質(zhì)的混合物的方法，親和物質(zhì)即可以與待檢測物質(zhì)發(fā)生相互作用的物質(zhì)。該相互作用導(dǎo)致揭示結(jié)果的肉眼可見的沉淀或聚集體的形成。用這種方法，例如，通過添加抗體至一滴血中并觀察紅細(xì)胞聚集體是否形成來鑒定血型是可能的。還存在允許測量親和物質(zhì)在介質(zhì)中共同存在時(shí)所發(fā)生的該介質(zhì)粘度變化的方法。例如，文件US3，635，678(參考文獻(xiàn)I)描述了一種方法，其中浸沒在液體中的單個(gè)肉眼可見的(比微米大很多)鋼球靠一組磁鐵被懸浮，通過光學(xué)系統(tǒng)測量懸浮的球的移動。當(dāng)介質(zhì)的粘度增加時(shí)，球移動的幅度隨時(shí)間降低；目的是推斷血液凝固速度。在這個(gè)文件中所描述的技術(shù)的一個(gè)主要缺點(diǎn)是它執(zhí)行的復(fù)雜性，因?yàn)榍虮仨毐槐３謶腋?。而且，由于在所述專利中描述的球的大小和質(zhì)量，移動中的球可以打破導(dǎo)致粘度變化的弱相互作用并阻礙它們的檢測。所述方法不是非常的靈敏，并被限制于檢測相對大的粘度變化。而且，必須使用復(fù)雜的系統(tǒng)和試劑以讀出結(jié)果。在文件WO01/86255(參考文獻(xiàn)2)中描述了另一個(gè)系統(tǒng)，其包括一臺顯微鏡，使用該顯微鏡可以觀察懸浮在液體中的顆粒的移動。通過使用顯微鏡觀察液體中懸浮的顆粒得到的信號的二次諧波的相移來推斷液體的粘度。在文件EP1，544,596(參考文獻(xiàn)3)中描述了該方法的另一種變化形式，其包括在磁場中振蕩可磁化的顆粒來產(chǎn)生信號并因此獲得結(jié)果。這些方法的主要缺點(diǎn)之一是其實(shí)施的復(fù)雜性和監(jiān)控由以周期性的和受控制的方式施加的力激活的顆粒的振蕩的復(fù)雜性。復(fù)雜地、昂貴地且困難地配置儀器來一方面啟動并維持顆粒的振蕩，而另一方面來觀察顆粒的周期性移動。此外，這些方法僅允許測量必須發(fā)生在懸浮顆粒的振蕩區(qū)域內(nèi)的粘度變化。而且，粘度變化必須是明顯的以便被檢測到。因此，必須具有包含大量親和物質(zhì)的溶液。因此這些方法不是非常靈敏的并且不可能獲得關(guān)于使用如抗體或進(jìn)行檢測或測定的其他具體指定的親和物質(zhì)的方法的令人滿意的精確度。檢測親和反應(yīng)的另一種普遍使用的方法是ELISA技術(shù)及其很多變化形式。它由以下組成-附著到基材(substrate)上的第一抗體,其具有對物質(zhì)的親和力，-使待檢測的物質(zhì)與附著于其基材的第一抗體接觸給定的時(shí)間段，-沖洗掉沒有與抗體反應(yīng)的物質(zhì)，-使與附著于表面的抗體結(jié)合的物質(zhì)和具有對所述物質(zhì)的親和力的第二抗體接觸，-沖洗掉沒有與所述物質(zhì)反應(yīng)的抗體，和-檢測與結(jié)合于基材所結(jié)合的第一抗體的物質(zhì)結(jié)合的第二抗體的存在。最通常的，為了檢測從適當(dāng)?shù)孜锝?jīng)酶催化的反應(yīng)產(chǎn)物，第二抗體與通過物理方法可直接檢測的標(biāo)記物結(jié)合，該標(biāo)記物例如熒光標(biāo)記物或磁性標(biāo)記物，或第二抗體與結(jié)合于酶的標(biāo)記物結(jié)合，該標(biāo)記物例如堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。這個(gè)方法有若干缺點(diǎn)，例如它要求很多受控制的洗滌，降低了其靈敏度。它還包括由本領(lǐng)域技術(shù)人員操作的很多步驟執(zhí)行至少兩個(gè)親和反應(yīng)，其要求用至少一個(gè)靈敏的和精密的標(biāo)記物標(biāo)記第二抗體，且使用難以配置的復(fù)雜儀器來檢測并量化由標(biāo)記物發(fā)射的信號。因此這個(gè)方法是耗時(shí)且昂貴的，并要求復(fù)雜的儀器來實(shí)施該方法。已開發(fā)出僅需要單一抗體的其他方法來檢測親和反應(yīng)的技術(shù)，例如基于表面等離子體共振、壓電平衡、或?qū)σ恍┰试S觀察的物質(zhì)來說甚至僅通過顯微鏡觀察。為了實(shí)施這樣的方法，所述抗體被附著于適于檢測方法的基材，使物質(zhì)與附著于基材的抗體接觸給定的時(shí)間，然后直接讀數(shù)或在沖洗以除去與抗體沒有親和反應(yīng)的物質(zhì)之后讀數(shù)。這些方法有很多缺點(diǎn)；例如，完成讀數(shù)所需要的儀器是精密的且昂貴的。而且，為了附著所述抗體，它們要求特殊的基材。而且，它們要求大量的步驟并依賴于附著的抗體的數(shù)量和質(zhì)量。在上文提到的方法中，因此必須將抗體或任何其他親和物質(zhì)附著于基材。親和表面在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的?？梢岳缤ㄟ^“分子建模”獲得這樣的表面。還已知可以通過以非特異性的方式將希望檢測的物質(zhì)附著到基材上來實(shí)施上文提到的方法。這樣附著的物質(zhì)將與抗體或任何其他合適的親和物質(zhì)(根據(jù)檢測方法，可能被標(biāo)記)接觸，然后在被讀數(shù)之前可能被沖洗掉。然而，這些變化形式有很多缺點(diǎn)。具體地，必須要將待檢測的物質(zhì)結(jié)合于基材，以普遍的或特殊的方式這都是不可能的。而且，此附著可能會改變所附著物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。此結(jié)構(gòu)變化可以改變檢測靈敏度和/或特異性，特別是當(dāng)使用抗體時(shí)。而且附著可以導(dǎo)致獲得假陰性和/或假陽性結(jié)果。而且，所述附著從一次實(shí)施到另一次實(shí)施可能是不同的，所以因此而獲得的結(jié)果可能不是可重復(fù)的。而且，需要復(fù)雜的且昂貴的設(shè)備用于檢測。因此存在找到一種減輕現(xiàn)有技術(shù)中的這些缺陷、缺點(diǎn)和障礙的檢測分子相互作用的方法的實(shí)際需求，特別是一種改進(jìn)分子相互作用檢測的靈敏度并降低實(shí)施成本的方法，一種實(shí)施簡單并且提供快速的、可靠的和可重復(fù)的結(jié)果的方法。發(fā)明描述本發(fā)明的目的是通過提供檢測分子相互作用的方法來響應(yīng)于上文提到的許多需求和現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)。特別地，本發(fā)明涉及在溶液中檢測相互作用的方法，其包括以下步驟a.將至少一種第一物質(zhì)和優(yōu)選地至少一種可以與所述第一物質(zhì)相互作用的第二物質(zhì)引入溶液中，b.將至少兩種磁性顆粒或可磁化的顆粒引入步驟a)中獲得的溶液中，所述顆粒停留(resting)在浸沒于所述溶液內(nèi)的表面上，c.通過施加設(shè)計(jì)成使所述顆粒處于運(yùn)動中的電場、磁場或電磁場來確定所述物質(zhì)的相互作用，當(dāng)所述顆粒在所述表面上的移動性(mobility)發(fā)生改變時(shí)，檢測到所述物質(zhì)間的所述相互作用。根據(jù)本發(fā)明，移動性指通過施加電場、磁場或電磁場和/或在電場、磁場或電磁場的作用下顆粒的移動。此移動性可以如由空間中的給定點(diǎn)處的顆粒速度與空間中的此給定點(diǎn)處的磁場平方的梯度的強(qiáng)度的比定義，如由空間中的給定點(diǎn)處的顆粒速度與空間中的此給定點(diǎn)處的電勢梯度的強(qiáng)度的比定義。根據(jù)本發(fā)明，移動性改變可以選自所述顆粒的制動、減慢、軌跡的改變、加速或停止。因此，根據(jù)本發(fā)明，施加電場、磁場或電磁場可以引起所述顆粒群集(cluster)、不群集或分散。根據(jù)本發(fā)明，物質(zhì)的相互作用指如分子相互作用，諸如氫鍵、離子鍵或范德華鍵相互作用的，生物相互作用，如特異性三維激素受體模式識別或抗體抗原相互作用，靜電相互作用，磁性相互作用，離子濃度梯度或分子濃度梯度，即開始于物質(zhì)并傾向于使它們例如通過氫鍵、范德華相互作用、疏水鍵、共價(jià)鍵、離子鍵，例如通過趨化移動移動匯聚或移動分開的任何勢梯度、分子濃度梯度或離子濃度梯度。例如，它可以是抗原-抗體、酶-底物、受體-配體、分子-細(xì)胞、細(xì)胞-載體、細(xì)胞-病毒、真核細(xì)胞-原核細(xì)胞、真核細(xì)胞-真核細(xì)胞或原核細(xì)胞-原核細(xì)胞相互作用?？梢杂糜诒景l(fā)明的溶液可以是液體或氣態(tài)溶液。溶液可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何溶液。它可以是，例如，培養(yǎng)基，如真核細(xì)胞和/或原核細(xì)胞培養(yǎng)基，緩沖液介質(zhì)，例如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何緩沖液介質(zhì)，例如市售的緩沖液介質(zhì)如磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)，生物樣品，例如血、血漿、尿、腦脊髓液的樣品，鹽水溶液，例如生理溶液，培養(yǎng)基，例如市售的腦心浸液，溶劑，例如丙酮、二甲亞砜、乙醇、甲醇、丙醇、乙腈、乙酸乙酯、醚、苯酚、氯仿、四氫呋喃、二氟乙烯和/或烴，例如己烷、環(huán)己烷、苯、辛烷、癸烷、油、汽油或柴油燃料。根據(jù)本發(fā)明，氣體可以是，例如，空氣、氧氣、氮?dú)?、氖氣、氬氣、CO2、甲烷或臭氧。根據(jù)本發(fā)明，液體溶液可以具有O.1到4kg/l或O.3到3kg/l的密度；氣體溶液可以具有l(wèi)(T15kg/m3到1000kg/m3、10-1Q到30kg/m3或1(Γ5到3kg/m3的密度。本領(lǐng)域技術(shù)人員從此常規(guī)知識將容易確定溶液的密度。例如，可以測量溶液的密度,例如,通過測量質(zhì)量和體積的比,例如通過稱重已知體積的溶液。根據(jù)本發(fā)明，可以預(yù)先處理溶液，例如，可以純化、稀釋或濃縮樣品。根據(jù)本發(fā)明，可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法純化溶液,例如透析、過濾、超過濾、澄清和離心。例如，過濾方法可以包括使溶液通過具有O.2到100μm孔的篩子，超過濾方法可以包括，如在I到3000rpm速率下離心O.1到30分鐘時(shí)間，透析方法可以是，如包括放置溶液于如截留閾值為500Da的透析膜上的步驟的方法，所述透析膜漂浮在容器中包含的蒸餾水上。澄清方法可以是，例如包括添加O.1%(重量/重量)的牛血清白蛋白于溶液中的方法。根據(jù)本發(fā)明，純化溶液可以有益地消除來自于溶液的可能影響分子相互作用的檢測的任何污染物和/或分子，例如純化可以獨(dú)立地消除細(xì)菌、病毒、蛋白質(zhì)、化學(xué)分子、鹽、顆粒狀物(particulate)或分子聚集體。當(dāng)然，本領(lǐng)域技術(shù)人員，從此常規(guī)知識，可以知道如何根據(jù)溶液調(diào)整純化方法。根據(jù)本發(fā)明，溶液還可以被稀釋，例如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法，例如通過連續(xù)稀釋?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何稀釋劑稀釋溶液。這可以是，例如，緩沖液溶液,例如磷酸鹽緩沖鹽水,鹽水溶液,例如生理鹽水，乙醇，DMS0，丙酮，己烷和/或任何烴溶劑或之前描述的溶液。溶液可以被稀釋，例如2到20000、5到500或5到50倍。稀釋溶液可以有益地使存在于溶液中的組分的濃度得以改變，例如，通過減少濃度，例如稀釋可以減少蛋白質(zhì)濃度。稀釋還可以減少任何干擾化合物的濃度并因此有益地改進(jìn)本發(fā)明的方法的特異性和/或靈敏性。`根據(jù)本發(fā)明，溶液還可以被濃縮，例如通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法，例如通過超速離心、超過濾、蒸發(fā)或凍干法。根據(jù)本發(fā)明，所述溶液的純化、稀釋和/或濃縮可以有益地使所述溶液的密度得以調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)所述溶液的密度有益地使本發(fā)明的方法的特異性和/或靈敏性得以改進(jìn)，特別地通過增強(qiáng)、減弱或消除將顆粒推向表面的重力的影響。根據(jù)本發(fā)明，所述方法中使用的溶液的體積可以是例如O.3μI到100πι1、3μI到10ml、或30μI到Imlo根據(jù)本發(fā)明，溶液可以能夠調(diào)節(jié)所述第一物質(zhì)和所述第二物質(zhì)間的相互作用。例如溶液可能增強(qiáng)或減弱所述物質(zhì)間的相互作用。根據(jù)本發(fā)明，溶液可有益地包括增強(qiáng)或減弱所述第一物質(zhì)和第二物質(zhì)間的相互作用的化合物?？梢詫⒒衔锾砑尤肴芤海缭趯?shí)施本發(fā)明的方法之前。所述化合物可以是，例如，化學(xué)分子、鹽、離子、大分子聚合物、膠體、微粒(microparticle),例如改變?nèi)芤篜H的酸和堿，例如NaCl，其改變?nèi)芤旱碾x子強(qiáng)度，例如聚乙二醇，其可以例如，增強(qiáng)所述物質(zhì)的親和力。本發(fā)明有益地允許，通過對本發(fā)明的方法獲得的結(jié)果的比較確定所述溶液是否有效地調(diào)節(jié)相互作用，其中物質(zhì)是相同的而溶液是不同的。根據(jù)本發(fā)明，第一物質(zhì)可以選自包括下述的組真核細(xì)胞、原核細(xì)胞、膜、病毒、朊病毒、線粒體、葉綠體、小囊泡、脂質(zhì)體、細(xì)胞成分、鞭毛、蛋白質(zhì)、脂蛋白、糖蛋白、抗體、核酸、脂質(zhì)復(fù)合物、膠體、大分子、微粒、納米顆粒(nanoparticle)、抗原、激素、蛋白質(zhì)配體和化學(xué)分子。根據(jù)本發(fā)明，可以用于本發(fā)明的真核細(xì)胞可以是，例如，動物真核細(xì)胞，例如血細(xì)胞，例如白細(xì)胞，例如粒細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞，紅細(xì)胞或血小板。它們還可以是植物真核細(xì)胞，例如植物表皮細(xì)胞，木質(zhì)部、韌皮部、薄壁組織、厚角組織或厚壁組織。它們還可以是真菌或酵母。例如，它們可以是假絲酵母(Candida)、隱球酵母(Cryptococcus)、馬拉色菌(Malassezia)、糠疫癬菌(Pityrosporum)、肺囊蟲(Pneumocystis)、表皮癬菌(Epidermophyton)、小抱子菌(Microsporum)或毛癬菌(Trichophyton)。它們還可以是原生動物，例如溶組織內(nèi)阿米巴(Entamoebahistolytica)、卡氏棘阿米巴(Acanthamoebacastellanii)、或福氏耐格里阿米巴(Naegleriafowleri)。根據(jù)本發(fā)明，原核細(xì)胞可以是，例如，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何細(xì)菌?？梢杂糜诒景l(fā)明的細(xì)菌是，例如，包括在但不限于由以下組成的組的細(xì)菌橙黃醋桿菌(Acetobacteraurantius)、伴放線放線桿菌(Actinobacillusacunomycetemcomitans)、根癌土壤桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)、莖瘤固氮根瘤菌(Azorhizobiumcaulinodans)、掠色固氮菌(Azotobactervinelandii)、炭疽芽抱桿菌(Bacillusanthracis)、短芽抱桿菌(Bacillusbrevis)、錯(cuò)樣芽抱桿菌(Bacilluscereus)、紡錘芽抱桿菌(Bacillusfusiformis)、地衣芽抱桿菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽抱桿菌(Bacillusmegaterium)、嗜熱脂肪芽抱桿菌(Bacillusstearothermophilus)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、銀擬桿菌(Bacteroidesgingivalis)、產(chǎn)黑素?cái)M桿菌(Bacteroidesmelaninogenicus)、橫塞氏巴爾通氏體(Bartonellahenselae)、五日熱巴爾通氏體(Bartonellaquintana)、支氣管炎博德特氏菌(Bordetellabronchiseptica)、百日咳博德特氏菌(Bordetellapertussis)、布氏疏螺旋體(Borreliaburgdorferi)、粘膜炎布蘭漢氏球菌(Branhamellacatarrhalis)、流產(chǎn)布魯氏菌(Brucellaabortus)、馬爾他布魯氏菌(Brucellamelitensis)、豬布魯氏菌(Brucellasuis)、鼻疽伯克霍爾德氏菌(Burkholderiamallei)、類鼻疽伯克霍爾德氏菌(Burkholderiapseudomallei)、肉`芽月中銷桿菌(Calymmatobacteriumgranulomatis)、大腸彎曲桿菌(Campylobactercoli)、空腸彎曲桿菌(Campylobacterjejuni)、幽門彎曲桿菌(Campylobacterpylori)、肺炎衣原體(Chlamydiapneumoniae)、嬰I鶴熱衣原體(Chlamydiapsittaci)、沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis)、肺炎嗜衣原體(Chlamydophilapneumoniae)、嬰I鶴熱嗜衣原體(Chlamydophilapsittaci)、肉毒梭狀芽抱桿菌(Clostridiumbotulinum)、艱難梭狀芽抱桿菌(Clostridiumdifficile)、產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌(Clostridiumperfringens)、破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌(Clostridiumtetani)、韋氏梭狀芽抱桿菌(Clostridiumwelchii)、白喉棒狀桿菌(Corynebacteriumdiphtheriae)、梭形棒狀桿菌(Corynebacteriumfusiforme)、伯氏考克斯氏體(Coxiellaburnetii)、查菲埃立克體(Ehrlichiachaffeensis)、鳥腸球菌(Enterococcusavium)、耐久腸球菌(Enterococcusdurans)、類腸球菌(Enterococcusfaecalis)、屎腸球菌(Enterococcusfaecium)、雞腸球菌(Enterococcusgal11inarum)Λ病臭腸球菌(Enterococcusmaloratus)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、土拉熱巴斯德氏菌(Francisellatularensis)、具核梭桿菌(FusobacteriumnucIeatum)、陰道加德納氏菌(Gardnerellavaginalis)、杜克雷氏嗜血桿菌(Haemophilusducreyi)、流感嗜血桿菌(Haemophilusinfluenzae)、副流感嗜血桿菌(Haemophilusparatnfluenzae)、百日咳嗜血桿菌(Haemophiluspertussis)、陰道嗜血桿菌(Haemophilusvaginalis)、幽門螺旋桿菌(Helicobacterpylori)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)、鼻硬結(jié)克雷伯桿菌-產(chǎn)酸克雷伯桿菌(Klebseillarhinoscleromatis-klebsiellaoxytoca)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)、干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)、乳酸乳球菌(LactococcusIactis)、嗜肺軍團(tuán)菌(Legionellapneumophila)、Methanobacteriumextroquens、多形微桿菌(Microbacteriummultiforme)、藤黃微球菌(MicrococcusIuteus)、鳥分枝桿菌(Mycobacteriumavium)、牛分支桿菌(Mycobacteriumbovis)、白喉分枝桿菌(Mycobacteriumdiphtheriae)、胞內(nèi)分枝桿菌(Mycobacteriumintracellulare)、麻風(fēng)分枝桿菌(Mycobacteriumleprae)、鼠麻瘋分支桿菌(Mycobacteriumlepraemurium)、草分枝桿菌(Mycobacteriumphlei)、包皮垢分支桿菌(Mycobacteriumsmegmatis)、結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)、發(fā)酵支原體(Mycoplasmafermentans)、生殖器支原體(Mycoplasmagenitalium)、人型支原體(Mycoplasmahominis)、肺炎支原體(Mycoplasmapneumoniae)、淋病奈瑟氏菌(Neisseriagonorrhoeae)、腦膜炎奈瑟氏菌(Neisseriameningitidis)、星形諾卡菌(Nocardiaasteroides)、出血敗血性巴斯德菌(Pasteurellamultocida)、土拉巴斯德氏菌(Pasteurellatularensis)、牙銀卩卜啉菌(Porphyromonasgingivalis)、綠胺假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、嗜麥芽假單胞菌(Pseudomonasmaltophilia)、放射型根瘤菌(Rhizobiumradiobacter)、普氏立克次氏體(Rickettsiaprowazekii)、莫塞爾氏立克次氏體(Rickettsiamooseri)、嬰I鶴熱立克次氏體(Rickettsiapsittaci)、五日熱立克次氏體(Rickettsiaquintana)、立克氏立克次氏體(Rickettsiarickettsii)、沙眼立克次氏體(Rickettsiatrachomae)、亨氏羅卡利馬氏體(Rochalimaeahenselae)、五日熱羅卡利馬氏體(Rochalimaeaquintana)、頻齒氏菌(Rothiadentocariosa)、腸炎沙門氏菌(Salmonellaenteritidis)、傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphi)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)、粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratiamarcescens)、痢疾志賀氏菌(Shigelladysenteriae)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)、無乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae)、鳥鏈球菌(Streptococcusavium)、牛鏈球菌(Streptococcusbovis)、大鼠鏈球菌(Streptococcuscricetus)、屎鏈球菌(Streptococcusfaceiun)、類鏈球菌(Streptococcusfaecalis)、野生鏈球菌(Streptococcusferus)、雞鏈球菌(StreptococcusgalIinarum)Λ乳鏈球菌(Streptococcuslactis)、溫和鏈球菌(Streptococcusmitior)、緩癥鏈球菌(Streptococcusmitis)、變形鏈球菌(Streptococcusmutans)、口腔鏈球菌(Streptococcusoralis)、肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae)、釀胺鏈球菌(Streptococcuspyogenes)、鼠鏈球菌(Streptococcusrattus)、唾液鏈球菌(Streptococcussalivarius)、血鏈球菌(Streptococcussanguis)、表兄鏈球菌(Streptococcussobrinus)、梅毒密螺旋體(Treponemapallidum)、霍亂弧菌(Vibriocholerae)、逗號弧菌(Vibriocomma)、副溶血性弧苗(Vibrioparahemolyticus)、創(chuàng)傷弧菌(Vibriovulnificus)、嗜麥芽黃單胞菌(Xanthomonasmaltophilia)、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(Yersiniaenterocolitica)、鼠疫耶爾森氏菌(Yersiniapestis)和假結(jié)核耶爾森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)等等?？梢杂糜诒景l(fā)明的膜可以是真核或原核細(xì)胞膜的任何碎片(fragment),例如上文提到的真核或原核細(xì)胞，任何細(xì)胞膜和/或細(xì)胞隔室(cellcompartment)碎片,例如線粒體、葉綠體、內(nèi)質(zhì)體或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)?？梢杂糜诒景l(fā)明的蛋白質(zhì)可以是血衆(zhòng)蛋白質(zhì)(plasmaprotein)、細(xì)胞蛋白質(zhì)或細(xì)菌蛋白質(zhì)。例如，所述蛋白質(zhì)可以是激素，例如孕酮、加壓素、促甲狀腺激素、黃體生成激素(LH)、甲狀腺刺激激素(TSH)、生長激素(GH)、表皮生長因子(EGF)、胰島素或催產(chǎn)素。它們可以，例如，是通道，例如韓離子通道，例如在CatterallWA.(2000)Structureandregulationofvoltage-gatedCa2+channels.Annu.Rev.Cell.Dev.Biol.16:521-55(#考文獻(xiàn)4)中描述的通道,鉀離子通道,例如在DickGM和TuneJD,Roleofpotassiumchannelsincoronaryvasodilation,ExpBiolMed(Maywood).2010Jan；235(I)10-22.(參考文獻(xiàn)6)中描述的通道。它們還可以是參與主要組織相容性復(fù)合體(MHC)例如MHCI和MHCII的肽。它們還可以是受體,例如核受體、細(xì)胞內(nèi)受體、膜受體、跨膜受體、或g_蛋白偶聯(lián)受體、乙酰膽堿受體、FSH受體、睪酮受體,例如在MostallinoMC等人,PlasticityandfunctionofextrasynapticGABA(A)receptorsduringpregnancyandafterdelivery,Psychoneuroendocrinology.2009Dec；34Suppll:S74_83(參考文獻(xiàn)7)中描述的受體。它們還可以是酶，例如細(xì)菌酶，例如限制酶，例如HindII1、EcoR1、BamH1、MstI1、Taq1、Not1、Hinn、Alu1、BgIII1、HaeI1、Hha1、PstI或Smal，參與細(xì)胞信號傳導(dǎo)的酶，例如蛋白激酶，參與生物合成例如脂肪酸生物合成的酶，磷酸酶，脫氫酶，例如葡萄糖脫氫酶，或參與普通代謝的酶，例如醒脫氫酶、ct-淀粉酶、L-古洛糖酸內(nèi)酯氧化酶(L-gulonolactoneoxidase),視網(wǎng)膜紫質(zhì)，細(xì)胞色素B或細(xì)胞色素C。它們還可以是結(jié)構(gòu)蛋白，例如肌動蛋白、肌球蛋白、peptin、白蛋白、膠原蛋白或組蛋白H4?？梢杂糜诒景l(fā)明的抗體可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何抗體。例如，它們可以是商業(yè)可得的任何抗體，例如IgG、IgA、IgM、IgE和IgD，抗體可以是例如，針對上文提到的蛋白之一的抗體，針對另一個(gè)抗體的抗體，例如針對人類抗體的兔抗體，例如特異地針對針對FSH受體的抗體的抗體。它們還可以是在免疫個(gè)體后獲得的抗體，例如根據(jù)在文件Biologiecellulaireetmoleculaire,Conceptsetexperiences,[Molecularandcellularbiology,conceptsandexperiments]2ndedition2004,GeraldKarp(參考文獻(xiàn)5)中描述的方法。它們可以是，例如，通過人或動物響應(yīng)于感染而產(chǎn)生的抗體，感染例如通過病毒、細(xì)菌、朊病毒、寄生蟲、原生動物的感染，和響應(yīng)于疾病，例如癌癥、自體免疫疾病如，例如，甲狀腺機(jī)能允進(jìn)、多發(fā)性硬化而產(chǎn)生的抗體，和響應(yīng)于迷醉(intoxication),中毒(poisoning),污染,服用禁藥(doping),例如殺害蟲劑(pesticide)、毒藥、殺昆蟲劑(insecticide)、除草劑、致敏劑的攝取、吸入和注射而產(chǎn)生的抗體，和響應(yīng)于移植，例如骨髓移植，器官移植如，例如，腎、肺或肝移植，肢體如手、腿或腳而產(chǎn)生的抗體，和響應(yīng)于人造器官、植入式導(dǎo)管(implantableport)、心臟起搏器、人造心臟或人造髖的植入而產(chǎn)生的抗體?？梢杂糜诒景l(fā)明的化學(xué)分子可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何化學(xué)分子。它們可以，例如，是凝固試劑，在文件中描述的試劑，激素，例如類固醇激素，例如可的松、醛固酮、孕酮、脫氫表雄酮(DHEA)、脫氫表雄酮硫酸鹽(DHEAS)、雌二醇、雄留烯二酮、二氫睪酮(DHT)、雌酮、雌三醇、睪酮，例如甲狀腺素，例如肽激素，例如促紅細(xì)胞生成素(EPO)、胰高血糖素、生長激素抑制素、心房肽(ANP)，或促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)。根據(jù)本發(fā)明，第一物質(zhì)可以存在于溶液中；在這樣的情況下，第一物質(zhì)不需要被引入溶液。根據(jù)本發(fā)明，所述第一物質(zhì)可以附著在預(yù)先浸沒的表面上?？梢杂糜诒景l(fā)明的附著第一物質(zhì)的方法可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法。當(dāng)然，本領(lǐng)域技術(shù)人員，從此常規(guī)知識可以知道如何根據(jù)所述的第一物質(zhì)選擇附著的方法。根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)?shù)谝晃镔|(zhì)被附著時(shí)，與第二物質(zhì)的分子相互作用改變浸沒的表面并且，例如，可以使這個(gè)表面致密，所述制動的顆粒停留在所述表面上，所以當(dāng)施加電場、磁場或電磁場時(shí)，所述顆粒的移動因此揭示相互作用。根據(jù)本發(fā)明，所述第二物質(zhì)可以是上文定義的可以與第一物質(zhì)相互作用的任何物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明，所述第一和/或第二物質(zhì)的密度可以大于或小于溶液的密度，優(yōu)選地大于溶液的密度。有益地，所述第一和/或所述第二物質(zhì)的密度的優(yōu)越性允許定位所述第一和/或第二物質(zhì)于靠近容器底部。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，可以使用預(yù)先包含所述至少一種第一物質(zhì)或所述至少一種第二物質(zhì)的溶液實(shí)施本發(fā)明的方法。在這個(gè)實(shí)施方案中，所述方法可以不包括步驟a)并可以僅包括上文提到的步驟b)和c)。根據(jù)本發(fā)明，所述方法可以代替步驟a)包括，在先步驟a’)將所述第一物質(zhì)附`著在容器的表面上，a”)將溶液引入到所述容器中，和a”’)引入至少一種可與所述第一物質(zhì)相互作用的第二物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明，可以使用多個(gè)顆粒執(zhí)行本發(fā)明的方法，例如，使用至少兩個(gè)顆粒，使用，例如，2至Ij10000000，1000到1000000，10000到1000000，100000到1000000或10000到100000。多個(gè)顆粒有益地使直接檢測所述物質(zhì)間的相互作用成為可能，無需復(fù)雜的成像設(shè)備和無需染料，不像使用單一顆粒并要求復(fù)雜的成像設(shè)備或染料用于檢測相互作用的現(xiàn)有技術(shù)的方法。根據(jù)本發(fā)明，所述至少兩個(gè)顆粒可以選自包括以下的組帶電的顆粒、磁性顆粒、覆蓋至少一層磁性層的顆粒、可磁化的顆粒、覆蓋一層可磁化層的顆粒、帶電荷的電顆粒、電磁顆?；蚩善痣姷念w?；騼蓚€(gè)或更多個(gè)這些顆粒的混合。它們可以是，例如，全部或部分由磁性或可磁化的材料構(gòu)成的顆粒，即，可以通過電場、磁場或電磁場的作用/施加而處于運(yùn)動中的顆粒。的確，它們可以是使本發(fā)明得以實(shí)施的任何顆粒。有益地，所述顆?？梢允浅蔬m合于實(shí)施本發(fā)明的任何形式的顆粒，例如呈球、圓盤(puck)、不對稱的幾何形狀,例如具有平面(flatface)的形式,等等?？梢允褂萌魏魏线m尺寸的磁性顆粒?？梢岳绺鶕?jù)溶液容器的尺寸選擇尺寸。例如，顆粒的尺寸可以小于容器尺寸的十分之一，優(yōu)選地小于容器尺寸的百分之一，更優(yōu)選地還小于容器尺寸的千分之一。例如，顆?？梢跃哂蠭Onm到ΙΟΟμπι或O.1到10μm的尺寸。有益地，本發(fā)明的方法能夠測量浸沒了顆粒的溶液的粘彈性性質(zhì)的細(xì)微變化。此變化越低，測量的靈敏性必須越高。通過使用多個(gè)顆粒，本發(fā)明精確地并有益地能夠檢測由少量的或者執(zhí)行低強(qiáng)度相互作用力的物質(zhì)間的弱相互作用導(dǎo)致的小變化。使用單個(gè)顆粒和/或磁性球或可磁化球不能夠滿意地使相互作用得以檢測。而且存在檢測非特異性現(xiàn)象的不可忽視的風(fēng)險(xiǎn)，所述現(xiàn)象例如由存在的可以干擾所述可磁化的微粒在磁場、電場或電磁場的作用下的移動的聚集體或雜質(zhì)而導(dǎo)致。相反，使用至少兩個(gè)顆粒的本發(fā)明的方法給出可靠的有統(tǒng)計(jì)代表性的結(jié)果。而且，顆粒數(shù)量越高，它們的相對移動提供越多的信息，特別地通過允許與產(chǎn)生所測現(xiàn)象接觸的表面的更好的覆蓋。本發(fā)明的方法因此有益地允許闡述不僅所述微粒自身的移動(軌跡、移動速度)，而且它們將描繪在施加磁場、電場或電磁場后的全景。的確，根據(jù)介質(zhì)的粘彈性性質(zhì)，多個(gè)微粒的初始均勻分布被施加的這樣的場而擾亂。例如，如果介質(zhì)是非常粘的，例如如果其內(nèi)發(fā)生接觸的物質(zhì)間的強(qiáng)相互作用，分布保持均勻，原因是顆粒在所述場的作用下不能夠移動太多或根本不能夠移動。如果介質(zhì)不是非常粘或一點(diǎn)都不粘，或如果其內(nèi)發(fā)生非常弱的或不發(fā)生接觸的所述物質(zhì)間的相互作用，分布將跟隨最強(qiáng)的場線，如通過在圓柱形磁鐵上形成環(huán)或斑點(diǎn)，因?yàn)樗鲱w粒在所述場的作用下是自由移動的。而且，本發(fā)明的方法還通過使用多個(gè)顆粒，例如通過在包含所述物質(zhì)的溶液中均勻地分布和/或分散所述顆粒，有益地能夠目視觀察不僅在分子尺度(即大約一納米)而且在微觀尺度(即大約一微米)并甚至在宏觀尺度下(即大于一微米)可見的相互作用。例如，導(dǎo)致I)聚集體、核心或晶體形成的物質(zhì)間的相互作用，與其相互作用導(dǎo)致2)或多或少交聯(lián)的聚合物形成的物質(zhì)相比，以不同形式干擾所述顆粒。在第一種情況下，所述顆粒傾向于對抗聚集體、核心或晶體在由電場、磁場或電磁場施加于所述顆粒而產(chǎn)生的移動的方向的相反一側(cè)聚積。顆粒在聚積的區(qū)域產(chǎn)生對比的圖像。在第二種情況下，如果聚合均勻地并有規(guī)律地在溶液中發(fā)生，圖像反映隨電場、磁場或電磁場強(qiáng)度的降低(例如，與距磁鐵的距離成比例)，所述顆粒的漸進(jìn)的固定。本發(fā)明的方法因此有益地使待獲得的圖像揭示由物質(zhì)和溶液中的顆粒間的相互作用導(dǎo)致的結(jié)構(gòu)。優(yōu)選地，用于在微觀尺度和宏觀尺度下對圖像成像的顆粒數(shù)目是1000到1000000，10000到1000000，100000到1000000，或10000到100000。根據(jù)本發(fā)明，顆?？梢杂幸娴鼐哂信c可以與它們相互作用的物質(zhì)的密度接近的密度。例如，顆粒可以具有O.3到3之間的相對于所包含的物質(zhì)的密度。根據(jù)本發(fā)明，可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法來測定顆粒的密度，例如，它可以是顆粒質(zhì)量和添加了這些顆粒的溶液的體積的增加之間的比。根據(jù)本發(fā)明，顆粒的密度有益地改進(jìn)了本發(fā)明方法的特異性和/或靈敏性，例如通過增強(qiáng)、減弱或消除重力的影響。優(yōu)選地，顆粒和物質(zhì)將具有高于包含它們的溶液的密度的密度。優(yōu)選地，所述顆粒和所述物質(zhì)將具有稍微更高的密度，例如具有是包含它們的溶液的密度的1.0001到3倍的山/又ο有益地，可以將粘附分子偶聯(lián)至顆粒的表面。有益地，所述分子至顆粒表面的偶聯(lián)幫助顆粒粘附在一起。例如，顆?？梢员痪酆衔锔采w，例如包括親水部分和疏水部分的嵌段聚合物，有益地允許在施加電場、磁場或電磁場之后顆粒的固定群集。換言之，粘附分子間的相互作用在施加場之后使顆粒連接在一起，并因此給出穩(wěn)定和不可修改的結(jié)果。根據(jù)本發(fā)明，顆?？梢跃哂邢嗤幕虿煌某叽?。當(dāng)顆粒具有相同的尺寸時(shí)，顆粒在分子相互作用期間的同時(shí)基本是制動的或加速的。當(dāng)使用的顆粒具有不同的尺寸時(shí)，可以選擇小顆粒的尺寸，例如，使得它們在分子相互作用一開始就被制動，并且大顆粒之后被制動。在這樣的情況下，最小的顆粒在最大顆粒之前被制動。當(dāng)顆粒具有不同的尺寸時(shí)，小顆?？梢跃哂腥鏘Onm到Ιμπκ如100到500nm的尺寸，而最大的顆粒可以具有如Iμm到100μm、如Iμm到10μm、如Iμm到5μm的尺寸。有益地，變化尺寸的顆?？梢栽试S分子相互作用的早期的且更靈敏的檢測和/或分析。根據(jù)本發(fā)明，可以使用多個(gè)具有不同磁化的相同尺寸的顆粒。多個(gè)顆粒的行為差異可以有益地使分子相互作用的力度得以評估。與相互作用強(qiáng)時(shí)所有顆粒的全部固定相比，通過施加磁場可以引起最強(qiáng)磁化的顆粒的移動，磁力更強(qiáng)，但較弱磁化的顆粒不可以被設(shè)置成處于運(yùn)動中。根據(jù)本發(fā)明，所述至少一個(gè)顆粒優(yōu)選是產(chǎn)生可檢測的信號的顆粒。該信號的檢測將依賴于顆粒的性質(zhì)。例如，所述至少一個(gè)顆粒可以是熒光的、磷光的、放射活性的、化學(xué)發(fā)光的、反光的或有色的。例如，在所述至少一個(gè)顆粒是熒光的情況下，所述顆粒發(fā)射的熒光可以例如目視和/或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何光學(xué)方法被檢測。所述至少一個(gè)顆粒可以，例如，通過光源，例如激光束的方法被照明以跟蹤它的移動。根據(jù)本發(fā)明，照明可以是連續(xù)的或間歇的。例如，可以貫穿所述方法或例如在步驟a)或b)或c)、a)和c)、a)和b)或b)和c)的過程中使用照明。例如，在所述至少一個(gè)顆粒是磷光的情況下，所述顆?？梢岳缒恳暫?或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何光學(xué)方法被顯示。例如，在所述顆粒是放射活性的情況下，所述顆粒可以甚至通過光學(xué)不透明液體或培養(yǎng)基，以及通過光學(xué)不透明微稀釋板，經(jīng)由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何放射活性發(fā)射檢測設(shè)備，特別是在自動射線照相膠片上顯影的傳統(tǒng)方法而被檢測。然后，使敏感的膠片在微稀釋盤下充分變平，然后在所述微稀釋板的底部顯影圖像。例如，在所述至少一個(gè)顆粒是化學(xué)發(fā)光的情況下，可以通過將化學(xué)試劑添加到介質(zhì)中以允許所述顆粒發(fā)射光能來檢測所述顆粒。此信號的檢測可以是例如目視和/或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法，特別是通過使用對所發(fā)射的波長敏感的CCD(電荷偶聯(lián)設(shè)備)相機(jī)，所述相機(jī)掃描微稀釋板的孔。例如，在所述至少一個(gè)顆粒是反光的情況下，所述顆?？梢岳缒恳暬蛲ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何光學(xué)方法被檢測。有益地，所述至少一個(gè)顆?？梢允牵?，通過光源，例如激光束被照明以跟蹤它的移動。例如，在所述至少兩個(gè)顆粒是有色的情況下，所述顆?？梢岳缒恳暫?或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的用于檢測有色顆粒的任何光學(xué)方法被檢測。根據(jù)本發(fā)明，依賴于顆粒的大小和/或磁力，所述顆?？梢员挥幸娴剡x擇為不同的顏色。在此情況下，磁場的施加通過群集所述顆粒而導(dǎo)致有色點(diǎn)或環(huán)或有色斑點(diǎn)出現(xiàn)在表面上。這個(gè)特征有益地能夠使群集被更易于目測。的確，例如在所述顆粒具有不同大小的情況下，大顆粒具有一種顏色而小顆粒具有另一種顏色，當(dāng)施加磁場時(shí)，如果所述物質(zhì)間的相互作用是弱的，小顆粒在溶液中保持固定，而大顆粒被群集。此群集通過出現(xiàn)有色點(diǎn)而是可看到的，在此情況下，所述有色點(diǎn)與大顆粒的顏色是相同的。如果沒有物質(zhì)間的分子相互作用存在于溶液中，小顆粒和大顆粒可以被群集并且顆粒的群集通過出現(xiàn)對應(yīng)于重疊的兩種顏色的有色點(diǎn)而是可看到的。最后，如果分子相互作用是相當(dāng)強(qiáng)的，顆粒可以被完全制動并且因此可以是群集的并且看不到有色點(diǎn)。換言之，可以評估群集，例如，通過測量由所述群集的顆粒形成的斑點(diǎn)。例如，當(dāng)所述顆粒是有色的時(shí)，通過測量所述顆粒的顏色。此外，群集可以例如隨著所獲得的斑點(diǎn)的形式的變化，例如隨著形狀、直徑或其拓?fù)鋵W(xué)，例如盤或環(huán)的變化而被評估。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易理解，對于本發(fā)明的實(shí)施方案，還可以根據(jù)溶液選擇所述至少兩個(gè)顆粒的可視性質(zhì)。的確，所述至少兩個(gè)顆粒的移動的測定均是所述至少兩個(gè)顆粒的顏色和所述溶液的顏色之間的對比越大越容易。在本發(fā)明中，磁場、電場或電磁場可以是導(dǎo)致所述至少兩個(gè)顆粒在浸沒在所述溶液中的所述表面上移動的任何場，例如電磁場或磁場。可以如通過磁鐵或螺線管產(chǎn)生磁場、電場或電磁場。磁鐵可以是如呈棒、尖狀物、部分(part)等的形式或用于實(shí)施本發(fā)明的任何其他合適的形狀?？梢匀缤ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法施加所述場,例如通過脈沖、通過電磁場的逐漸增加、通過電磁場的變化或通過這些應(yīng)用的組合。電磁場的逐漸增加可以如通過沿直的或螺線管的軌跡移動使磁鐵更靠近，或通過具有或不具有可變振幅的振蕩和/或頻率的振蕩運(yùn)動而獲得?？梢匀缤ㄟ^靠近所述至少一個(gè)顆粒的磁性材料的旋轉(zhuǎn)或移動的組合來獲得更復(fù)雜的場變化。因此，根據(jù)本發(fā)明，可以通過可以移動或可以不移動的場產(chǎn)生裝置(fiield-generatingmeans)來產(chǎn)生所述磁場。當(dāng)若干顆粒必須被設(shè)置成處于運(yùn)動中時(shí)，場必須能夠使所述顆粒群集在浸沒于所述溶液中的所述表面上。不管本發(fā)明的實(shí)施，可以有益地同時(shí)在多個(gè)隔室內(nèi)實(shí)施本發(fā)明的方法。在此情況下，對于使所述顆粒設(shè)置成在所述隔室中處于運(yùn)動，可以有益地使用多個(gè)磁場，例如磁鐵?？梢詫⒋盆F附著在如基材上，使得實(shí)施本發(fā)明方法的每一個(gè)隔室可以與基材的磁鐵并列。施加到所述隔室的磁場從一個(gè)隔室到另一個(gè)是獨(dú)立的。施加到所述隔室的磁場從一個(gè)隔室到其他的隔室可以是相同的或不同的，優(yōu)選地是相同的。根據(jù)本發(fā)明，可以施加磁場、電磁場或電場如持續(xù)I秒到15分鐘或10秒到10分鐘的時(shí)間。當(dāng)然，本領(lǐng)域技術(shù)人員從此常規(guī)知識，將知曉如何根據(jù)所測試的物質(zhì)和/或所施加的場強(qiáng)來調(diào)節(jié)時(shí)間。在本發(fā)明中，隔室(compartment)指,例如，培養(yǎng)反應(yīng)器、孔或管,例如微稀釋板。微稀釋板指如由美國國家標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(AmericanNationalStandardsInstitute)和生物分子科學(xué)協(xié)會(SocietyforBiomolecularSciences)定義的具有96、384和甚至1536個(gè)孔的板(微板)的類型。構(gòu)成所述隔室的材料可以是適合于本發(fā)明實(shí)施方案的任何材料，例如塑料，例如聚碳酸酯、聚苯乙烯等，玻璃、金屬等。有益地，可以使用具有無底孔的聚苯乙烯微稀釋板。通過在微稀釋板的下面固定平表面來產(chǎn)生這些孔的底部。這個(gè)平表面可以由透明的材料制成，例如，塑料、玻璃等，或不透明材料如金屬、陶瓷等?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的用于這樣的附著的任何合適的方法來在微稀釋板下面附著平表面，例如通過使用粘合劑膠粘、通過摩擦方法、通過塑料的熔融粘合如使用激光等。根據(jù)本發(fā)明，多個(gè)隔室可以被群聚(group)在同一基材上，例如，在具有I到1536個(gè)孔，例如6、16、64、96個(gè)孔等的板上。隔室可以是，例如，具有一個(gè)閉合端的室，如管、孔等，或具有兩個(gè)開口的室。根據(jù)第一個(gè)結(jié)構(gòu)，隔室可以具有一個(gè)閉合端以形成平的底部。根據(jù)第二個(gè)結(jié)構(gòu)，隔室可以具有一個(gè)閉合端以形成半球形的底部。根據(jù)本發(fā)明，可以在施加磁場、電磁場或電場后直接測定所述物質(zhì)間的相互作用。例如，可以在施加場O.01秒到30分鐘或I秒到3分鐘后測定相互作用。根據(jù)本發(fā)明，還可以通過比較施加磁場、電磁場或電場時(shí)的顆粒的群集來測定所述物質(zhì)間的相互作用。例如，可以比較顆粒在不包含或僅包含上文提到的所述物質(zhì)中的一種物質(zhì)的溶液中的群集和顆粒在包含所述第一物質(zhì)和所述第二物質(zhì)的溶液中的群集。如果在不包含或僅包含所述物質(zhì)中的一種物質(zhì)的溶液中群集更多或更少，那么所述物質(zhì)相互作用并且因此測定該相互作用。換言之，當(dāng)施加所述場時(shí)，物質(zhì)間的相互作用可以減弱或增強(qiáng)顆粒的群集并可以因此被測定。例如，如果相互作用導(dǎo)致物質(zhì)聚集，介質(zhì)可能變得粘性較弱并且顆粒的群集將被增強(qiáng)。例如，如果相互作用導(dǎo)致物質(zhì)沉淀，表面可能，例如，被沉淀堆滿并且顆粒的群集將被減弱。例如，如果相互作用導(dǎo)致物質(zhì)交聯(lián)，物質(zhì)的網(wǎng)絡(luò)將減慢顆粒并且顆粒的群集將被減弱。例如，如果相互作用導(dǎo)致形成物質(zhì)的線性鏈，那么介質(zhì)的粘度將被增加并且顆粒的群集將被減弱。根據(jù)本發(fā)明，可以在如多個(gè)隔室內(nèi)實(shí)施所述方法，每一個(gè)隔室包含-所述溶液，-所述至少一個(gè)顆粒，和-可以相互作用的所述物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明，所述方法還可以包括混合步驟b’。可以如通過攪拌其內(nèi)存在所述物質(zhì)的溶液來進(jìn)行混合。其可以是如使用磁力攪拌器的混合或使用定軌搖床的混合。根據(jù)本發(fā)明，可以進(jìn)行混合如I秒到15分鐘或10秒到10分鐘。本發(fā)明還涉及本發(fā)明方法的以下用途例如，識別存在于溶液中的物質(zhì)，分析生物樣品，進(jìn)行生物測試，確定血型，進(jìn)行免疫血液學(xué)測試或檢測例如病毒、細(xì)菌、變形蟲、酵母、癌癥細(xì)胞、朊病毒、殺害蟲劑、殺真菌劑、抗生素、激素或毒素的自然的或人類來源的污染物。本發(fā)明還涉及本發(fā)明方法的以下用途例如，實(shí)施藥物測試，進(jìn)行對物質(zhì)的科學(xué)研究，例如以如分子、膠體、納米顆?；蛭⒘Ｑ芯咳芤簩ξ镔|(zhì)間相互作用的影響，例如在水溶液中、在有機(jī)溶液中、在氣體中。本發(fā)明還涉及本發(fā)明方法的以下用途例如，進(jìn)行對對象或物質(zhì)的科學(xué)研究，所述對象或物質(zhì)參與如生物學(xué)、腫瘤學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)或感染性疾病，例如研究在水溶液中形成的水凝膠、氣體中形成的氣凝膠或在溶劑中或在烴中形成的凝膠。例如，可以使用本發(fā)明的方法來分析生物樣品，例如用于血清分型，確定個(gè)體的MHC或確定如樣品中特定蛋白、抗體或受體的存在。還可以使用本發(fā)明的方法來識別溶液中的化學(xué)物質(zhì)。例如，當(dāng)本發(fā)明的方法用于血清分型時(shí)，溶液是來源于個(gè)體，例如人類或動物的包含第一物質(zhì)的血樣品。此外，本發(fā)明的方法可以用于測定受體和可能的配體間，抗體和蛋白、化學(xué)分子、另一種抗體和/或可以被抗體識別的任何分子間的相互作用。本發(fā)明的方法還可以用于檢測細(xì)胞間的相互作用，例如真核細(xì)胞間或原核細(xì)胞間，或真核細(xì)胞和原核細(xì)胞間。本發(fā)明的方法還可以用于獨(dú)立檢測細(xì)菌、病毒、酵母和/或真核細(xì)胞間的相互作用。本發(fā)明的方法還可以用于如檢測趨化和細(xì)胞粘附的現(xiàn)象。本發(fā)明的方法還可以用于如檢測納米顆粒、微?；蚓哂袕?fù)雜形狀的微量級或納米級目標(biāo)間的相互作用。本發(fā)明的方法還可以用于如檢測(i)第一物質(zhì)與(ii)第二物質(zhì)的相互作用，第一物質(zhì)如人類或動物響應(yīng)于由例如病毒、細(xì)菌、朊病毒、寄生蟲或原生生物導(dǎo)致的感染以及響應(yīng)于疾病所產(chǎn)生的抗體，疾病如癌癥，自體免疫疾病如，例如，甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、多發(fā)性硬化，響應(yīng)于迷醉，中毒，污染，服用禁藥，例如殺害蟲齊、毒藥、殺昆蟲齊、除草齊、致敏劑的攝取、吸入和注射所產(chǎn)生的抗體，以及還響應(yīng)于移植，例如骨髓移植，器官移植如，腎、肺或肝，肢體如手、腿或腳所產(chǎn)生的抗體，并且還響應(yīng)于人造器官、植入式導(dǎo)管、心臟起搏器、人造心臟或人造髖的植入所產(chǎn)生的抗體，第二物質(zhì)如可以誘導(dǎo)產(chǎn)生所述第一物質(zhì)的物質(zhì)，例如負(fù)責(zé)產(chǎn)生上文提到的抗體的抗原。根據(jù)本發(fā)明，溶液可以包括能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生待檢測的所述第一物質(zhì)的第二物質(zhì)。有益地，第二物質(zhì)可以被附著于容器的表面上；所述第二物質(zhì)的附著有益地允許檢測所述第一和第二物質(zhì)間的相互作用，不管它們的濃度如何，例如抗體和抗原間的相互作用，即使當(dāng)它們以低數(shù)量存在時(shí)。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的方法還可以包括(iii)第三物質(zhì)的使用。其可以是，例如，如之前定義的物質(zhì)，例如可以識別所述第一和/或第二物質(zhì)的至少一種的抗體。其可以是，例如，抗獨(dú)特型抗體，例如特異性識別由人類或動物產(chǎn)生的抗體的抗體，例如抗兔抗體、抗羊抗體、抗Ig`G抗體、抗IgM抗體、或抗IgE抗體。根據(jù)本發(fā)明，第三物質(zhì)可以被預(yù)先附著于容器的表面以檢測如所述第三物質(zhì)與所述第一和/或第二物質(zhì)的相互作用。有益地，根據(jù)本發(fā)明，所述第三物質(zhì)是抗獨(dú)特型抗體，S卩，可以與，例如，如前所述的由人或動物響應(yīng)于抗原和/或存在或已存在于人或動物內(nèi)的抗原而產(chǎn)生的抗體的相互作用的抗-抗體抗體。本發(fā)明因此有益地允許間接檢測物質(zhì)，例如存在或已存在于人或動物內(nèi)的物質(zhì)而無需開發(fā)與這個(gè)物質(zhì)特異性地相互作用的抗體。本發(fā)明因此有益地允許直接或間接地檢測響應(yīng)于感染、疾病、迷醉、中毒、污染、月艮用禁藥、攝取、殺害蟲劑或移植而產(chǎn)生的抗體的存在。而且，本發(fā)明因此使沉默的感染得以檢測，沉默的感染即通過普通微生物學(xué)方法不可檢測的感染，所述方法例如血液培養(yǎng)、活檢培養(yǎng)、生理液的樣品溫育或灌注假定的感染部位，例如腦脊髓液、尿、唾液，通過如通過使用與特異性針對這些感染的抗體相互作用的抗獨(dú)特型抗體檢測。在閱讀下面的基于闡述目的提供的通過附圖闡述的實(shí)施例時(shí)，更多優(yōu)點(diǎn)將對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯現(xiàn)。-圖1顯示由作為親和物質(zhì)的呈現(xiàn)(SwH)或不呈現(xiàn)(SwE)對彼此的親和力的抗體而獲得的斑點(diǎn)的照片。磁化20秒后拍攝照片1A，磁化5分鐘后拍攝照片1B。-圖2顯示由抗血型決定簇抗體和紅細(xì)胞作為親和物質(zhì)而獲得的斑點(diǎn)的照片。-圖3顯示由抗血型決定簇抗體和紅細(xì)胞作為親和物質(zhì)而獲得的斑點(diǎn)的圖像。實(shí)施例實(shí)施例1:檢測具有或不具有對彼此的未和力的抗體的相互作用。在這個(gè)實(shí)施例中，使用兩條具有8個(gè)平底孔的帶(參考MSW002B，BioFilmControl,法國)，分別命名為SwH和SwE。在每一條帶中，將通過如下而獲得的70μI抗體溶液置于每一個(gè)孔內(nèi)分別將15μI抗人IgG抗體(參考ΒΙ2018，ParisAnticorps,法國)或抗大腸桿菌抗體(參考BP2298,AcrisAntibodies,德國)混合在1.5mlPBS(8g/lNaCl(SigmaAldrich,美國)、200mg/lKCl(SigmaAldrich,美國)、1.44g/lNa2HPO4(SigmaAldrich，美國)、240mg/lKH2PO4(SigmaAldrich，美國)中，然后將它們放置在穩(wěn)定于37°C的恒溫爐(參考BC240,Firelabo，法國)內(nèi)16小時(shí)。制備分別命名為SIgO、SIgH和SigE的溶液，其包含200μI的用于探測人抗FYl抗紅細(xì)胞抗體的試劑(IJB-1HControl3,參考108030357,InstitutJacquesBoy,法國)、2μI順磁微珠(Ton004N,BiofilmControl，法國)以及分別是15μI注射用水、200μI抗人IgG抗體(參考ΒΙ2018，ParisAnticorps，法國)或者200μI抗大腸桿菌抗體(參考ΒΡ2298,AcrisAntibodiesGmbH,德國)。然后從SwH和SwE帶中移除抗體溶液，然后在每一個(gè)孔中放置并移除150μIPBS三次。100μI的SIgO、SIgH和SIgE被分別放置于SwH和SwE帶的D、E和F孔。然后將帶放置在穩(wěn)定于37°C的恒溫爐(參考BC240，F(xiàn)irelabo，法國)內(nèi)20分鐘，然后放置在磁化測試塊(BKT-MSW002BioFilmControl，法國)中20秒。然后將帶放置于文件掃描儀(PerfectionV-750PR0,Epson,美國)中，使用所述掃描儀借助EpsonScan(Epson,美國)軟件拍攝第一圖像。第二次重復(fù)磁化/圖像捕捉循環(huán)以便在磁化總共5分鐘后獲得第二圖像。通過使用ImageJ軟件(http://rsb.1nfo.nih.gov.1j)和剪除由不同對比調(diào)整獲得的圖像從用掃描儀獲得的彩色圖像的紅色組分中減去圖像的綠色組分而得到最終的圖像。相應(yīng)的照片是圖1中的圖像。獲得各種直徑的環(huán)，相應(yīng)于在磁場中在它們遷移期間在孔底部的珠的聚積。環(huán)直徑被認(rèn)為是根據(jù)珠的磁移動性的減少法則的測量結(jié)果。如預(yù)期，在抗紅細(xì)胞抗體和抗人Ig抗體研究試劑(SwH帶孔E)中存在的免疫球蛋白之間存在預(yù)期的親和反應(yīng)下，所觀察到的環(huán)直徑大于在磁化20秒后在用于抗紅細(xì)胞抗體和抗大腸桿菌抗體(SwH帶孔D和F)的研究試劑中存在的免疫球蛋白間不存在親和反應(yīng)時(shí)和在孔E(帶SwH和SwE孔E)中磁化5分鐘后時(shí)。如圖1孔E可見的，當(dāng)兩種親和物質(zhì)同時(shí)存在于溶液中并被吸附于孔內(nèi)，此作用被放大，這(帶SwH,孔E),相對于圖1,帶SwH,孔D中顯示的情況極大地減少珠的遷移,孔D中物質(zhì)之一僅吸附存在于表面上。而且，當(dāng)兩種親和物質(zhì)，即抗體，存在于溶液中時(shí)，如果其中一種物質(zhì)已經(jīng)被吸附在表面上，那么減少珠移動性的現(xiàn)象被進(jìn)一步放大(孔E,帶SwH相比于SwE)。最后，當(dāng)親和物質(zhì)沒有被吸附在表面上時(shí)，親和反應(yīng)在溶液中的發(fā)生是通過觀察形成的環(huán)的直徑可檢測的(帶SwE，孔E，相比于孔D和F)。實(shí)施例2:檢測抗血型決定簇抗體和紅細(xì)胞間的相互作用在這個(gè)實(shí)施例中，使用三條具有8個(gè)SBS平底孔的帶(參考MSW002B，BioFilmControl，法國)，分別命名為SwA、SwB和SwAB。將70μI抗體溶液置于帶的每一個(gè)孔內(nèi)，抗體溶液分別為抗A(參考102010153，InstitutJacquesBoy，法國)、抗B(102010253，InstitutJacquesBoy,法國)以及抗AB(參考102010353,InstitutJacquesBoy，法國)。將帶放置在穩(wěn)定于37°C的恒溫爐(參考BC240，F(xiàn)irelabo，法國)內(nèi)10分鐘。分別命名為hA、hB、hAB和h0的血液懸浮液通過以下制備將ImlTS緩沖液，其包含8g/lNaCl(Sigma-Aldrich,美國)和lg/1胰化蛋白胨(Difco,美國)，分別用100μI的分別為A型、B型、AB型和O型的紅細(xì)胞，(IJB-1HControl2,參考108020257，InstitutJacquesBoy,法國)和6μI順磁微珠(Ton005N,BiofilmControl,法國)和IμI藍(lán)色食品著色劑(Vahin6，法國)稀釋。從孔中移除抗體溶液，之后分別在帶SwA、SwB和SwAB的孔A和B，然后C和D，然后E和F，然后G和H中分別放置70μI的hA、hB、hC和h0的制備液。將帶放置于穩(wěn)定于37°C的恒溫爐(參考BC240，F(xiàn)irelabo,法國)內(nèi)10分鐘，然后放置在磁化測試塊(BKT-MSW002BioFilmControl，法國)上I分鐘。然后將它們放置在文件掃描儀(PerfectionV-750PR0，Epson，美國)中，使用所述掃描儀借助EpsonScan(Epson,美國)軟件拍攝圖像。如在實(shí)施例1中一樣獲得圖2中的最終圖像。如圖2所示，在帶SwA的孔C、D、G和H中，在帶SwB的孔A，B，G和H中和在帶SwAB的孔G和H中，觀察到大約2mm±lmm的直徑的暗盤的形成，其歸因于結(jié)合于孔的抗體和紅細(xì)胞間不存在親和反應(yīng)。在下列表I中概述了觀察結(jié)果，其中不存在盤被命名為-并且存在盤被命名為+表1:圖2的孔的觀察結(jié)果權(quán)利要求1.一種用于檢測溶液中的相互作用的方法，其包括下列步驟a.將至少一種第一物質(zhì)和優(yōu)選地至少一種能夠與所述第一物質(zhì)相互作用的第二物質(zhì)弓I入溶液中，b.將至少兩個(gè)磁性顆?；蚩纱呕念w粒引入步驟a)中獲得的溶液中，所述顆粒停留在浸沒于所述溶液內(nèi)的表面上，c.通過施加設(shè)計(jì)成使所述顆粒處于運(yùn)動中的電場、磁場或電磁場來確定所述物質(zhì)的相互作用，當(dāng)所述顆粒在所述表面上的移動性發(fā)生改變時(shí)，檢測所述物質(zhì)間的所述相互作用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述至少兩個(gè)磁性顆?；蚩纱呕念w粒獨(dú)立地是帶電的顆粒、磁性顆粒或可磁化的顆?；蚋采w至少一層磁性層或可磁化層的顆粒。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的任一項(xiàng)所述的方法，其中使所述至少兩個(gè)顆粒經(jīng)歷脈沖電磁場。4.根據(jù)權(quán)利要求1到3中任一項(xiàng)所述的方法，其中移動性改變是在所述電場、磁場或電磁場的作用下所述顆粒的移動的加速。5.根據(jù)權(quán)利要求1到3中任一項(xiàng)所述的方法，其中移動性改變是在所述電場、磁場或電磁場的作用下所述顆粒的移動的減慢。6.根據(jù)權(quán)利要求1到3中任一項(xiàng)所述的方法，其中移動性改變是在所述電場、磁場或電磁場的作用下所述顆粒的軌跡的變化。7.根據(jù)權(quán)利要求1到3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述相互作用通過在所述電場、磁場或電磁場的作用下所述顆粒的群集來進(jìn)行檢測。8.根據(jù)權(quán)利要求1到3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述相互作用通過在所述電場、磁場或電磁場的作用下所述顆粒的不群集來進(jìn)行檢測。9.根據(jù)權(quán)利要求1到3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述相互作用通過在所述電場、磁場或電磁場的作用下所述顆粒的分散來進(jìn)行檢測。10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過發(fā)光源照明所述至少兩個(gè)顆粒來檢測它們的移動。11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述至少兩個(gè)顆粒是信號發(fā)生器。12.根據(jù)權(quán)利要求1到11中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一物質(zhì)選自包括真核細(xì)胞、原核細(xì)胞、膜、病毒、蛋白質(zhì)、抗體、抗原、化學(xué)分子的組。13.根據(jù)權(quán)利要求1到11中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第二物質(zhì)選自包括真核細(xì)胞、原核細(xì)胞、膜、病毒、蛋白質(zhì)、抗體、抗原、化學(xué)分子的組。14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法代替步驟a)包括，在先步驟a’)將所述第一物質(zhì)附著在容器的表面上，a”)將溶液引入到所述容器內(nèi)，和a”’)引入至少一種能夠與所述第一物質(zhì)相互作用的第二物質(zhì)。全文摘要本發(fā)明涉及一種用于檢測溶液中的分子相互作用的方法。具體地，本發(fā)明涉及一種用于檢測可能彼此相互作用的兩種物質(zhì)間的相互作用的方法。本發(fā)明可以特別用于科學(xué)研究領(lǐng)域和醫(yī)學(xué)分析領(lǐng)域中。文檔編號G01N11/10GK103069264SQ201180039692公開日2013年4月24日申請日期2011年6月30日優(yōu)先權(quán)日2010年7月2日發(fā)明者蒂埃里·貝爾納迪,帕斯卡·邁爾,杰羅姆·格羅利申請人:生物膜控制公司