專利名稱：富硒植物材料中硒形態(tài)的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種富硒植物材料硒形態(tài)的測(cè)定方法，特別是涉及一種富硒植物材料進(jìn)行前處理后進(jìn)行硒形態(tài)的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
硒是人體必需的微量元素之一，是谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的組成成分， 具有抗氧化、抗癌、防衰老、提高人體免疫力、保護(hù)心腦血管等作用(Rotruck J T，Pope A L, Ganther H E, et al Selenium :biochemical role as a component of glutathione peroxidase. Science, 1973，179，588-590.)。我國有 2/3 的地區(qū)缺硒，其中有 1/3 的地區(qū)為嚴(yán)重缺硒地區(qū)。人和動(dòng)物體缺硒會(huì)導(dǎo)致克山病，大骨節(jié)病，動(dòng)物的白肌病等，除此以外一些癌癥，地方性甲狀腺障礙等疾病也與低硒環(huán)境密切相關(guān)(Ip C. Lessons from basic research in selenium and cancer prevention. Journal Nutrition,1998,128, 1845-1854.)。人們?nèi)粘ｏ嬍持械奈o機(jī)硒和有機(jī)硒，其中無機(jī)硒毒性較大，中毒量與需要量的界限非常接近，而且吸收和利用率差，生物有效性低，因而被嚴(yán)格限制其使用量。有機(jī)硒更利于人體吸收利用，生物活性強(qiáng)，毒性低(盧嵐，魯兵，王春娥.保健食品中有機(jī)硒和無機(jī)硒的分析探討.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志.2010,20(4) :767-769.)，是更高效、安全的人體補(bǔ)硒形式。硒的生物學(xué)功能的發(fā)揮主要依賴于其存在形態(tài)，特別是有機(jī)硒(硒代氨基酸)的形態(tài)。因此，準(zhǔn)確的檢測(cè)分析硒代氨基酸形態(tài)具有重大的意義，硒形態(tài)的研究不僅能指導(dǎo)消費(fèi)者科學(xué)補(bǔ)硒，還能進(jìn)一步了解硒的生物化學(xué)特性和硒在自然界遷移變化的規(guī)律。目前，我國測(cè)定有機(jī)硒含量的方法主要為差減法(秦防.植物中有機(jī)硒含量的測(cè)定.無錫輕工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào).1998，17 (4) :74-77.),差減法的原理是先利用不同的試劑將待測(cè)樣品中的有機(jī)硒和無機(jī)硒分離，因無機(jī)硒主要以硒酸根(Se042_)和亞硒酸根(Se032_) 陰離子形式存在，易溶于水。有機(jī)硒主要是與蛋白質(zhì)、纖維素和碳水化合物中的C、N等結(jié)合，以大分子的有機(jī)物形態(tài)存在，所以可利用環(huán)己烷或甲苯等有機(jī)溶劑萃取出有機(jī)硒，再通過測(cè)定總硒和無機(jī)硒的含量，差減得到有機(jī)硒的含量。此方法操作步驟繁瑣，重復(fù)性差， 只能得到有機(jī)硒的總量，對(duì)于具體的有機(jī)硒形態(tài)并不清楚，且所用的環(huán)己烷、甲苯等有機(jī)溶劑存在一定的毒性。國外對(duì)硒形態(tài)測(cè)定的前處理方法也有報(bào)道，Selenium species in leaves of chicory,dandelion,lamb' s lettuce and parsley(Darj a Mazej,Vekoslava Stibil j，et al. Food Chemistry, 2008,107 :75-83.)公開了一種單獨(dú)利用蛋白酶水解樣品然后進(jìn)行硒形態(tài)測(cè)試的方法，該方法蛋白酶用量與樣品的比例為1 2 1 5，成本很高。所以，開發(fā)一種針對(duì)以硒代氨基酸為主要分析目標(biāo)、低成本高效率的樣品前處理及測(cè)試方法十分有必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有硒形態(tài)測(cè)定技術(shù)特別是提取技術(shù)中存在的不足，提供一種操作簡(jiǎn)便，提取效率高，重復(fù)性好，成本低的富硒植物材料中硒形態(tài)的測(cè)定方法。為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的這些問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下一種富硒植物材料中硒形態(tài)的測(cè)定方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(1)富硒植物材料的預(yù)處理使用提取緩沖液Tris-HCl對(duì)粉碎后的富硒植物材料樣品進(jìn)行提取，提取處理后加入纖維素酶對(duì)富硒植物材料樣品中細(xì)胞壁進(jìn)行破壁處理，然后依次加入有效量的蛋白酶K、蛋白酶XIV進(jìn)行水解提取得到待測(cè)樣品溶液；(2)采用氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法與高效液相色譜法聯(lián)用分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)硒形態(tài)溶液和待測(cè)樣品溶液進(jìn)行測(cè)定；用峰高或峰面積進(jìn)行定量，用數(shù)據(jù)處理中的外標(biāo)法，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后保存，然后將樣品峰積分處理，利用外標(biāo)法校正，按照公式(1)可計(jì)算得到待測(cè)樣品溶液中硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸 (SeMet)的含量；X = CXV/m (1)其中X為樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量，單位為微克每千克(yg/kg) ；C為待測(cè)液中該物質(zhì)的濃度，單位為微克每升(yg/L) ；V為測(cè)定液體總體積，單位為毫升(mL) ；F為稀釋倍數(shù)；m為稱樣質(zhì)量(體積)，單位為克(g/mL)。優(yōu)選的，所述方法中采用的提取緩沖液為Tris-HCl，其濃度為lOOmmol/L，pH7. 5， 樣品與提取緩沖液的比例為1 25 1 100(m V)。優(yōu)選的，所述方法中提取方法采用超聲提取，提取時(shí)間為10 30min。優(yōu)選的，所述方法中纖維素酶與稱取的富硒植物材料樣品的質(zhì)量比例為1 1 1 10，破壁處理溫度控制在40 55 °C。優(yōu)選的，所述方法中蛋白酶K與富硒植物材料樣品的質(zhì)量比例為1 20 1 200 ；水解溫度控制在40 55°C。優(yōu)選的，所述方法中蛋白酶XIV與富硒植物材料樣品的質(zhì)量比例為1 20 1 200 ；水解溫度控制在30 45°C。優(yōu)選的，所述方法中水解處理后樣品溶液在0 10°C下，離心處理后上清液過 0. 2 0. 5 μ m的濾膜，制得待測(cè)上清液。優(yōu)選的，所述方法中高效液相色譜法和氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法聯(lián)用時(shí)液相色譜及原子熒光條件為流動(dòng)相(40mmol/L(NH4) 2HP04,pH 6. 0)；流速 lmL/min ；進(jìn)樣體積 100 μ L ；蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速65rpm ；燈電流/輔陰極100mA，45mA ；光電倍增管負(fù)高壓300V ；載氣流速300mL/min ； 屏蔽氣流速700mL/min。優(yōu)選的，所述方法中高效液相色譜法和氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法聯(lián)用時(shí)氫化物發(fā)生條件是還原劑成分0.35 % NaOH+1. 2 % NaBH4,流速:6mL/min ；氧化劑成分0. 35 % Na0H+0. 8% H2O2，流速6mL/min ；載流10% HCl，流速6mL/min。優(yōu)選的，所述方法開機(jī)后對(duì)液相色譜及原子熒光進(jìn)行設(shè)置，待儀器穩(wěn)定后，先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后測(cè)定處理好的樣品溶液，在上述條件下硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se(IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的保留時(shí)間依次為2. 6min,3. 2min,4. Omin, 5. Omin，待測(cè)樣品中的硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋
5氨酸(SeMet)的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相比變化范圍在士5%之內(nèi)即認(rèn)為為該待測(cè)定物質(zhì)。本發(fā)明涉及一種富硒植物中硒形態(tài)的測(cè)定方法，是利用超聲提取后，再結(jié)合溫和的酶水解，使富硒植物中的含硒化合物充分水解并利用儀器進(jìn)行硒形態(tài)的測(cè)定。所述的以硒代氨基酸為主要硒形態(tài)指標(biāo)的測(cè)定方法方法，步驟描述如下(1)稱取粉碎過篩的富硒植物于塑料離心管中，加入提取緩沖液 Tris-HCl(100mmol/L，pH7. 5)，混勻。樣品與提取液的比例為(m V)為1 25 1 100 ；(2)將混合液放入超聲清洗器超聲提取10 30min ；(3)先加入纖維素酶，50°C恒溫振蕩(轉(zhuǎn)速150 200rpm，使塑料離心管中的液體能充分振蕩)提取lh，纖維素酶與稱取的樣品的比例(m m)為1 1 1 10再加入蛋白酶K，50°C，恒溫振蕩(轉(zhuǎn)速150 200rpm，使塑料離心管中的液體能充分振蕩)提取 4 12h，蛋白酶K與秤取的樣品的比例(m m)為1 20 1 200 ；(4)再加入蛋白酶XIV，37°C，恒溫振蕩(轉(zhuǎn)速150 200rpm，使塑料離心管中的液體能充分振蕩)提取4 12h，蛋白酶XIV與秤取的樣品的比例(m m)為1 20 1 200 ；(5)1 4步中獲得的溶液在4°C下，每分鐘轉(zhuǎn)速10000轉(zhuǎn)，離心30min，上清液過 0. 22 μ m的濾膜，制得待測(cè)上清液。(6)設(shè)定液相色譜及原子熒光條件流動(dòng)相(4(toimol/L(NH4)2HP04，pH6. 0)；流速 lmL/min ；進(jìn)樣體積 100 μ L ；蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速65rpm ；燈電流/輔陰極100mA，45mA ；光電倍增管負(fù)高壓300V ；載氣流速300mL/min ； 屏蔽氣流速700mL/min。氫化物發(fā)生條件還原劑成分0.35 % NaOH+1. 2 % NaBH4,流速:6mL/min ；氧化劑成分0. 35 % Na0H+0. 8% H2O2，流速6mL/min ；載流10% HCl，流速6mL/min。(7)開機(jī)后按上述條件對(duì)液相色譜及原子熒光進(jìn)行設(shè)置，待儀器穩(wěn)定后，先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后測(cè)定處理好的樣品溶液，在上述條件下硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se(IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的保留時(shí)間依次為2. 6min,3. 2min,4. Omin, 5. Omin，待測(cè)樣品中的硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相比變化范圍在士5%之內(nèi)即認(rèn)為為該待測(cè)定物質(zhì)。(8)用峰高或峰面積進(jìn)行定量，用數(shù)據(jù)處理中的外標(biāo)法，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后保存，然后將樣品峰積分處理，利用外標(biāo)校正，即可得到待測(cè)溶液中硒代胱氨酸6e-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys) Je (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的濃度。(9)按照公式⑴可計(jì)算得到待測(cè)樣品中硒代胱氨酸6e-Cys2)、硒甲基半胱氨酸 (SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的濃度。X = CXV/m..................(1)式中X-樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量，單位為微克每千克(μ g/kg)；C-待測(cè)液中該物質(zhì)的濃度，單位為微克每升(μ g/L)；
V-測(cè)定液體總體積，單位為毫升(mL)；F-稀釋倍數(shù)；m-稱樣質(zhì)量(體積)，單位為克(g/mL)。本發(fā)明利用溫和的提取方式，超聲提取含硒化合物后再多種酶結(jié)合使用使含硒化合物徹底水解，這樣不僅使用的酶用量少，成本低廉而且水解效果好。此方法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單易操作，提取效率高，重復(fù)性好，成本低，所用試劑無毒、無污染。相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下有益效果1、本發(fā)明提供了選擇溫和的提取試劑pH近中性的Tris-HCl，使含硒化合物在提取過程中形態(tài)保持穩(wěn)定。2、提取過程中采用超聲提取，使含硒化合物更多的溶入提取液中，提高了提取效率。3、超聲提取在加酶之前，一是不破壞酶的結(jié)構(gòu)，影響酶的活性，二是使含硒化合物更多的溶入提取液后，更利于酶的水解。4、在加入蛋白酶水解前，一定要先加入纖維素酶使植物細(xì)胞壁充分破壁，才能使蛋白酶對(duì)含硒化合物的徹底水解。5、使用2種蛋白酶水解，含硒化合物水解更徹底，與1種蛋白酶水解相比，提取效率提高20%以上，且提取率均可達(dá)80%以上，所需使用的蛋白酶的量更少，節(jié)約了成本。6、本發(fā)明方法簡(jiǎn)單易操作，重復(fù)性好，所用試劑無毒、無污染。


下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述圖1為各種硒形態(tài)的標(biāo)準(zhǔn)分離譜圖；其中包括硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、％ (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的依次出峰順序、保留時(shí)間及濃度梯度。圖2為本發(fā)明實(shí)施例1富硒玉米秸稈硒形態(tài)的測(cè)定結(jié)果圖；由圖2可知，采用本發(fā)明的提取條件及利用高靈敏度的形態(tài)分析儀器可測(cè)定富硒玉米秸稈中存在硒代胱氨酸 (Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)，根據(jù)峰面積計(jì)算可得到各形態(tài)的含量及占總硒的比例。圖3為本發(fā)明實(shí)施例2富硒小麥苗硒形態(tài)的測(cè)定結(jié)果圖；由圖3可知，采用本發(fā)明的提取條件及利用高靈敏度的形態(tài)分析儀器可測(cè)定富硒小麥苗中存在硒代胱氨酸 (Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸GeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸(kMet)，根據(jù)峰面積計(jì)算可得到各形態(tài)的含量及占總硒的比例。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不能用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中采用的實(shí)施條件可以根據(jù)具體廠家的條件作進(jìn)一步調(diào)整，未說明的實(shí)施條件通常為常規(guī)實(shí)驗(yàn)中的條件。以下實(shí)施例選擇了富硒玉米秸稈、富硒小麥苗進(jìn)行前處理和硒形態(tài)的測(cè)定，對(duì)富硒植物中硒及硒的存在形式的測(cè)定有利于了解硒在植物體中的遷移轉(zhuǎn)化規(guī)律。實(shí)施例1富硒玉米秸稈中硒形態(tài)測(cè)定對(duì)富硒玉米秸稈中的硒形態(tài)測(cè)定前處理方法步驟進(jìn)行了優(yōu)化，優(yōu)化過程及結(jié)果如
7下稱取0. 2g富硒玉米秸稈樣品于15mL塑料離心管中，加入5mL提取緩沖液 Tris-HCl，超聲提取20min，先加入纖維素酶40mg，50°C，恒溫振蕩培養(yǎng)lh，再加入0. 5mg蛋白酶K，50°C，恒溫振蕩培養(yǎng)8h后加入0. 5mg蛋白酶XIV，37°C，恒溫振蕩培養(yǎng)8h，接著4°C 下，每分鐘轉(zhuǎn)速10000轉(zhuǎn)，離心30min，上清液過0. 22 μ m的濾膜后，制備得到上機(jī)待測(cè)液。 將液相色譜條件設(shè)置為流動(dòng)相G0mmol/L(NH4)2HP04，pH 6.0)；流速lmL/min ；進(jìn)樣體積 100 μ L ；蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速65rpm ；燈電流/輔陰極100mA，45mA ；光電倍增管負(fù)高壓300V ；載氣流速300mL/min ；屏蔽氣流速700mL/min。氫化物發(fā)生條件設(shè)置為還原劑成分0. 35% NaOH+1. 2% NaBH4,流速:6mL/min ；氧化劑成分0. 35% Na0H+0. 8 % H202,流速:6mL/min ； 載流10% HCl，流速6mL/min。開機(jī)后按上述條件對(duì)液相色譜及原子熒光進(jìn)行設(shè)置，待儀器穩(wěn)定后，先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后測(cè)定處理好的樣品溶液，在上述條件下硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se(IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的保留時(shí)間依次為2. 6min,3. 2min,4. Omin, 5. Omin，待測(cè)樣品中的硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相比變化范圍在士5%之內(nèi)即認(rèn)為為該待測(cè)定物質(zhì)。 用峰高或峰面積進(jìn)行定量，用數(shù)據(jù)處理中的外標(biāo)法，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后保存，然后將樣品峰積分處理，利用外標(biāo)校正，即可得到待測(cè)溶液中硒代胱氨酸6e-Cys2)、硒甲基半胱氨酸GeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的濃度。并根據(jù)公式計(jì)算樣品硒形態(tài)數(shù)據(jù)。 表1優(yōu)化條件篩選及效果
權(quán)利要求
1.一種富硒植物材料中硒形態(tài)的測(cè)定方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(1)富硒植物材料的預(yù)處理使用提取緩沖液Tris-HCl對(duì)粉碎后的富硒植物材料樣品進(jìn)行提取，提取處理后加入纖維素酶對(duì)富硒植物材料樣品中細(xì)胞壁進(jìn)行破壁處理，然后依次加入有效量的蛋白酶K、蛋白酶XIV進(jìn)行水解提取得到待測(cè)樣品溶液；(2)采用氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法與高效液相色譜法聯(lián)用分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)硒形態(tài)溶液和待測(cè)樣品溶液進(jìn)行測(cè)定；用峰高或峰面積進(jìn)行定量，用數(shù)據(jù)處理中的外標(biāo)法，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后保存，然后將樣品峰積分處理，利用外標(biāo)法校正，按照公式(1)可計(jì)算得到待測(cè)樣品溶液中硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸 (SeMet)的含量；X=CXV/m (1)其中X為樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量，單位為微克每千克(μ g/kg);C為待測(cè)液中該物質(zhì)的濃度，單位為微克每升(μ g/L);V為測(cè)定液體總體積，單位為毫升(mL); F為稀釋倍數(shù)； m為稱樣質(zhì)量(體積)，單位為克(g/mL)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中采用的提取緩沖液為 Tris-HCl，其濃度為100 mmol/L，pH7. 5，樣品與提取緩沖液的比例為1:25^1:100 (m:V)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中提取方法采用超聲提取，提取時(shí)間為1(T30 min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中纖維素酶與稱取的富硒植物材料樣品的質(zhì)量比例為1 廣1 10，破壁處理溫度控制在40 55°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中蛋白酶K與富硒植物材料樣品的質(zhì)量比例為1 :20 1 200 ；水解溫度控制在40 550C 0
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中蛋白酶XIV與富硒植物材料樣品的質(zhì)量比例為1 :20 1 200 ；水解溫度控制在30 450C O
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中水解處理后樣品溶液在0 10°C下，離心處理后上清液過0. 2 0. 5 μ m的濾膜，制得待測(cè)上清液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中高效液相色譜法和氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法聯(lián)用時(shí)液相色譜及原子熒光條件為流動(dòng)相(40 mmol/L (NH4)2HPO4, pH 6. 0)；流速 1 mL/min ；進(jìn)樣體積 100 μ L ；蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速65 rpm ；燈電流/輔陰極100mA，45mA ；光電倍增管負(fù)高壓300V ；載氣流速300mL/ min ； 屏蔽氣流速700mL/min。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述方法中高效液相色譜法和氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法聯(lián)用時(shí)氫化物發(fā)生條件是還原劑成分0. 35%Na0H+l. 2%NaBH4,流速6 mL/min ；氧化劑成分 0. 35%Na0H+0. 8%H202，流速6 mL/min ；載流10% HCl，流速6 mL/min。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于所述方法開機(jī)后對(duì)液相色譜及原子熒光進(jìn)行設(shè)置，待儀器穩(wěn)定后，先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后測(cè)定處理好的樣品溶液，在上述條件下硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、k(IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的保留時(shí)間依次為2.6 min, 3. 2 min, 4.0 min, 5.0 min，待測(cè)樣品中的硒代胱氨酸(Se_Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se(IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相比變化范圍在士5%之內(nèi)即認(rèn)為為該待測(cè)定物質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種富硒植物材料中硒形態(tài)的測(cè)定方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(1)富硒植物材料的預(yù)處理使用提取緩沖液Tris-HCl對(duì)粉碎后的富硒植物材料樣品進(jìn)行提取，提取處理后加入纖維素酶對(duì)富硒植物材料樣品中細(xì)胞壁進(jìn)行破壁處理，然后依次加入有效量的蛋白酶K、蛋白酶XIV進(jìn)行水解提取得到待測(cè)樣品溶液；(2)采用氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法與高效液相色譜法聯(lián)用分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)硒形態(tài)溶液和待測(cè)樣品溶液進(jìn)行測(cè)定。該方法簡(jiǎn)單易操作，重復(fù)性好，所用試劑無毒、無污染。
文檔編號(hào)G01N21/62GK102520104SQ201110428248
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月20日
發(fā)明者劉志奎, 朱元元, 焦文寧 申請(qǐng)人:蘇州硒谷科技有限公司