專利名稱：一種檢測降鈣素原的試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及降鈣素原的檢測技術，特別是涉及一種檢測降鈣素原的試劑盒。
背景技術：
近些年來，對全身性感染的病理、生理過程有了更多了解，支持強化治療也獲得顯著改善，但在非心臟重癥監(jiān)護病房中患者的首位死因仍然是全身性感染及其并發(fā)癥。美國每年大約有500000例全身性感染患者，約40%最終死亡。因此，需要一種標記物能更有效地反映感染導致的炎癥損傷程度。降鈣素原(procalcitonin，PCT)是具有高靈敏度、特異性的新指標，它在細菌或真菌感染合并嚴重全身系統(tǒng)反應或器官低灌注時顯著升高，而在病毒或局灶感染時水平正常或輕度升高。這個特性使得PCT用來鑒別系統(tǒng)感染和非感染性炎癥或局灶感染。降鈣素原(Procalcitonin，PCT)是人降鈣素的前體物。降鈣素原來自定位于第11 號染色體上(11ρ15，4)的單拷貝基因，該基因由觀00個堿基對組成，含6個外顯子和5個內(nèi)含子，基因全長軋約7600。轉(zhuǎn)錄后在甲狀腺濾泡旁細胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)翻譯成降鈣素原前體proprocalcitonin，由116個氨基酸殘基組成，包括N端84個氨基酸、活性降鈣素(CT， 32肽)和降鈣蛋白(katacalcin，21肽)三部分，PCT的相對分子量為13KD。在正常情況下，具有激素活性的降鈣素是在甲狀腺濾泡旁細胞產(chǎn)生與分泌，并由細胞內(nèi)特殊蛋白酶分解PCT成降鈣素。正常健康人體內(nèi)PCT水平很低(<0. 05ng/mL)。血清PCT濃度彡0. 5ng/mL出現(xiàn)重癥敗血癥和/或敗血癥休克的風險較低；血清PCT濃度> 2ng/mL出現(xiàn)重癥敗血癥和/或敗血癥休克的風險較高。在細菌感染(特別是膿毒血癥、革蘭陰性桿菌)引起的全身炎癥反應時血清PCT水平常顯著增高，其增高程度與感染嚴重程度和死亡率呈正相關。在全身細菌感染患者血清PCT濃度升高比C反應蛋白(CRP)及其它炎性因子出現(xiàn)早，在感染池出現(xiàn)升高，6h急劇上升，8 24h維持高水平，且對全身與局部細菌性感染的鑒別具有特殊價值。 PCT在血中半衰期為22 ^h，檢測不受臨床用藥影響；是療效觀察和預后觀察的重要指標。非細菌感染時血清PCT濃度不升高，因而可以鑒別二者。在膿毒血癥的輔助和鑒別診斷方面，與其它炎癥指標相比，PCT被認為是目前最敏感和最特異的膿毒血癥診斷指標。隨著細菌耐藥性、重癥感染患者的增加，在快速診斷顯得愈發(fā)重要。近年來發(fā)現(xiàn)，在全身嚴重細菌感染、敗血癥及多種器官功能失調(diào)綜合征的輔助診斷方面，降鈣素原(PCT)是一個具高靈敏度、高特異性的新指標，不僅能早期鑒別細菌與非細菌感染，更是敗血癥的預警和診斷指標，且PCT與細菌感染的程度成正相關，因此越來越受到臨床重視。目前，PCT在臨床中的應用主要有以下方面。1)自身免疫性疾病與其他標記物如血沉、C反應蛋白不同，炎癥性疾病(如紅斑狼瘡、結(jié)締組織病、反應性關節(jié)炎和炎癥性腸病)活動期間PCT值無顯著性變化。Tamaki 等檢測99例系統(tǒng)性自身免疫病患者，細菌感染組的PCT水平顯著高于免疫病活動組(兩組的PCT值分別為4. 539士9. 677和0. 116士0. 127, P<0. 001)，PCT診斷細菌感染的準確性是0.797，敏感性53. 3%，特異性97. 。PCT不受自身免疫病活動影響，僅在全身感染時顯著升高，因此PCT可用來鑒別自身免疫病活動與是否同時合并感染，且它不受使用激素劑量和其他免疫抑制因素的影響。2)器官移植的監(jiān)測
Hammer等對78例心臟或肺臟移植患者研究顯示，急性排異期C反應蛋白和白細胞記數(shù)升高，而PCT無變化。合并全身細菌或真菌感染時PCT > Ing/mL，因此PCT可用來鑒別急性排異反應與感染。病毒或局灶感染時PCT正?；蜉p微升高，PCT < Ing/mL。肝臟移植后的急性排異反應并未影響術后的PCT值。腎臟移植后存在排異反應的患者與對照組間PCT 值差異亦無顯著性。PCT濃度不受免疫抑制劑如硫唑嘌呤、環(huán)孢菌素和他克羅姆的影響，口服激素以及急性排異期大劑量激素沖擊治療對PCT水平無影響。但使用鼠單克隆CD3單抗抗腎移植排異反應時PCT濃度升高，類似細胞因子釋放。CD3單克隆抗體引起大量腫瘤壞死因子_a釋放，腫瘤壞死因子_a促進PCT mRNA表達。CD3單克隆抗體治療后PCT升高不提示合并感染。PCT為器官移植術后鑒別急性排異反應與細菌、真菌及病毒感染提供了方法。3)膿毒癥
膿毒癥時一般PCT升高且> 2 ng/mL。Bernard等研究顯示粒細胞減少癥者PCT > 0. 5 ng/mL提示合并細菌感染，全身真菌感染包括念珠茵和曲霉菌也引起PCT顯著增加。通常 PCT > 5 ng/mL提示重癥感染，包括免疫抑制患者如艾滋病人群，高濃度的PCT、特別是抗生素治療后無下降者常提示預后不良。khroder等觀察術后重癥感染患者顯示，C反應蛋白在所有病例治療后都保持高水平，但PCT濃度在存活者中迅速下降、在死亡病例中處于高水平。PCT可用來判斷膿毒癥和菌血癥者抗生素治療的有效性和臨床情況是否改善。4)急性胰腺炎
由于胰腺炎并發(fā)感染壞死時需要外科手術治療，臨床醫(yī)師需要早期、準確判斷病情。 PCT可以作為急性胰腺炎發(fā)生感染并發(fā)癥的指標，作出早期診斷，并可以作為觀察療效的指標，其升高程度反映全身炎癥感染繼發(fā)器官衰竭的嚴重性。急性水腫型胰腺炎和無菌性壞死胰腺炎PCT無顯著變化，胰腺感染壞死患者中PCT含量明顯增加。PCT ^ 1. 8ng/mL可預測感染壞死，敏感性和特異性分別是80%和93%。Rau等對61例急性胰腺炎研究顯示，感染壞死性胰腺炎患者中12例死亡者術前PCT峰濃度高于7例存活者，存活者PCT濃度在術后 1 3d恢復至正常范圍，而死亡組PCT濃度持續(xù)升高，PCT ^ 5. 7ng/mL預測死亡時敏感性和特異性分別是93%和91 %。PCT是第1個與急性重癥胰腺炎感染壞死在形態(tài)學和嚴重程度方面同時具有相關性的生化指標，手術切除壞死組織PCT迅速下降提示外科治療有效。目前市場常見的PCT檢測方法有雙抗體夾心法，一株針對PCT的抗體包被反應管或板孔，另一株抗體標記發(fā)光物質(zhì)(如吖啶酯等)，與樣本中的PCT形成夾心復合物，發(fā)光物質(zhì)在一定PH值下發(fā)光，被檢測器檢測到發(fā)光信號。專利CN 101(^9897A公開了一種檢測降鈣素原的試劑盒和方法，該方法以兩株針對PCT的單克隆抗體為基礎，一株抗體直接標記發(fā)光物質(zhì)異魯米諾，另一株抗體標記FITC (熒光素)，磁微粒偶聯(lián)羊抗FITC抗體，經(jīng)過免疫反應，形成磁微粒-羊抗FITC抗體-FITC抗體-PCT-發(fā)光標記抗體復合物，在堿性環(huán)境下， 發(fā)光標記物發(fā)出光子，被檢測器檢測到發(fā)光信號。現(xiàn)有檢測方法或試劑盒存在以下缺點
1.普通的板式或管式包被試劑，受限于包被面積的限制，無法包被更多抗體參與免疫反應，且反應過程是由液態(tài)向固態(tài)的擴散過程，免疫反應過程非常緩慢。該固定方式很難達到更高的分析靈敏度，并且無法實現(xiàn)快速檢測。2.現(xiàn)有方法基本都采用發(fā)光物質(zhì)直接標記抗體(發(fā)光物質(zhì)如吖啶酯，異魯米諾類)，直接標記容易造成發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光效率降低，且發(fā)光標記物穩(wěn)定性差的問題。3.現(xiàn)有的吖啶酯和異魯米諾直接標記物都屬于瞬間發(fā)光型，發(fā)光時間極短，需要復雜的原位檢測機構，且較難保證結(jié)果的重復性，成本上也不具有優(yōu)勢。4.專利CN 101(^9897A所述方法還具有標記物過多，反應過程較復雜的缺點。5用針對PCT的單克隆抗體直接偶聯(lián)磁微粒，另一株抗體標記酶或發(fā)光物質(zhì)，從而形成雙抗體夾心的復合結(jié)構。偶聯(lián)方法是利用化學交聯(lián)試劑將蛋白的NH2 (或C00H)基團與磁微粒表面的COOH (或NH2)基團共價結(jié)合，形成穩(wěn)固結(jié)合物。但是不管是COOH偶聯(lián)還是NH2偶聯(lián)，抗體與磁微粒的結(jié)合都是隨機的，將可能存在抗體的Fc端偶聯(lián)在磁微粒表面或者Fab端偶聯(lián)在磁微粒表面兩種形式，只有抗體的Fc端結(jié)合磁微粒，才能使Fab端的抗原結(jié)合位點參與下一步的免疫反應(Fab端結(jié)合磁微粒，將阻礙其參與下一步的免疫反應， 即這種方式偶聯(lián)的抗體分子類似于無效抗體)，理論上有近50%的抗體分子是屬于無效抗體的，這樣造成了昂貴的PCT單克隆抗體的浪費。并且從增加試劑分析靈敏度的角度考慮，通常采用更高濃度PCT單抗用于偶聯(lián)磁微粒，增加磁微粒上包被抗體的密度，這也進一步增加了 PCT單抗的浪費，明顯增加了試劑成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術問題是，提供一種檢測降鈣素原的試劑盒以提高檢測質(zhì)量、降低檢測成本。本發(fā)明的技術問題通過以下技術方案解決
一種檢測降鈣素原的試劑盒，包括磁微粒分離試劑、PCT檢測抗體、酶結(jié)合物、以及發(fā)光底物；所述磁微粒分離試劑中磁微粒偶聯(lián)的蛋白分子為羊抗鼠免疫球蛋白G (以下稱羊抗鼠IgG)或鏈霉親和素；所述PCT檢測抗體為鼠抗PCT單克隆抗體；所述酶結(jié)合物為辣根過氧化物酶標記羊抗PCT多克隆抗體。優(yōu)選地，所述發(fā)光底物為魯米諾增強發(fā)光底物或異魯米諾增強發(fā)光底物。所述魯米諾增強發(fā)光底物和所述異魯米諾增強發(fā)光底物均包括A液和B液，所述魯米諾增強發(fā)光底物的A液包括魯米諾和增強劑，所述異魯米諾增強發(fā)光底物的A液包括異魯米諾和增強劑，所述魯米諾增強發(fā)光底物和所述異魯米諾增強發(fā)光底物的B液均為氧化劑。優(yōu)選地，所述磁微粒分離試劑中磁微粒的大小為200 μ πΓΙΟ μ m,磁微粒表面的活性基團為COOH或NH2,更優(yōu)選擇⑶0H。 優(yōu)選地，該試劑盒還包括PCT標準品。 優(yōu)選地，該試劑盒還包括用于稀釋所述酶結(jié)合物的酶稀釋液，或者所述酶結(jié)合物溶解在酶稀釋液中形成酶結(jié)合物工作液，其中后者更加便于試劑盒的保存及使用。優(yōu)選的酶稀釋液的成分包括0. lmol/L的TriS-HCl的緩沖液、體積分數(shù)為0.洲 2. 5%的casein、 體積分數(shù)為1% 10%的山羊血清、體積分數(shù)為0. 1%的ft~OClin300。但本發(fā)明不局限于上述成分的酶稀釋液，本領域技術人員也可采用其他類似稀釋液來實現(xiàn)本發(fā)明。
優(yōu)選地，該試劑盒還包括用于制備磁微粒分離試劑和PCT檢測抗體混合液的稀釋液，或者所述磁微粒分離試劑和PCT檢測抗體溶解在稀釋液中形成磁微粒分離試劑和PCT 檢測抗體混合液。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比的有益效果本發(fā)明采用一種相對便宜的二抗(羊抗鼠免疫球蛋白G)或鏈霉親和素(SA)(成本僅為PCT單抗1/5 1/15)偶聯(lián)磁微粒，PCT單克隆抗體結(jié)合二抗(或鏈霉親和素)這種間接包被模式。這種模式明顯的降低了 PCT單抗的用量 (用量減少為PCT單抗直接包被磁微粒的1/10 1/20)，明顯的降低了成本。通過增加偶聯(lián)磁微粒的羊抗鼠IgG或SA的濃度，能夠明顯的提高檢測靈敏度，而成本僅稍有增加。另外， 與PCT單抗直接偶聯(lián)磁微粒相比，由于采用間接包被的模式，增加了一級抗體反應，相當于延長了抗原抗體的反應臂，在一定程度上避免了抗體分子間空間位阻的影響，有利于被檢測物與抗體分子的結(jié)合，也明顯的改善了試劑的特異性。


圖1為本發(fā)明具體實施例的試劑盒檢測PCT濃度時的標準曲線及曲線方程示例圖2為本發(fā)明具體實施例的試劑盒檢測PCT濃度的結(jié)果與Biom6rieuX PCT試劑檢測結(jié)果的相關性比較圖。
具體實施例方式下面對照附圖并結(jié)合優(yōu)選具體實施方式
對本發(fā)明進行詳細的闡述。一、試劑盒的制備
1.磁微粒分離試劑的制備
本發(fā)明的磁微粒分離試劑為磁微粒偶聯(lián)羊抗鼠IgG (或磁微粒偶聯(lián)SA)，其制備方法如
下
取COOH活性基團的磁微粒5mg，置于磁分離器上％iin，棄去上清液；加入0. Imol/mL PBS緩沖液3mL，吹打均勻，置于磁分離器上分離％iin，棄去上清液，重復洗滌2次。清洗完畢后，加入lOmg/mL碳二亞胺溶液(EDC溶液)(pH 7. 0)1500 μ L活化磁微粒，吹打均勻后， 置于振蕩器上，反應30mirTlh。然后加入羊抗鼠IgG (或SA)進行偶聯(lián)向活化后的磁性微粒中加入lmg/mL羊抗鼠IgG或SA溶液600 μ L，置于振蕩器上反應3 6 h ；偶聯(lián)完成后， 加入1 mol/L甘氨酸3mL封閉磁微粒表面的活性基團，混勻后，置于振蕩器上反應30 min ； 加入0. Imol/mL磷酸鹽吐溫緩沖液(PBST) 3mL,混合均勻，置于磁分離器上分離，棄去上清液，重復洗滌2次；最后加入含0. Imol/mL的PBS、0. 5% (體積分數(shù))牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin，縮略詞為BSA)的保存液復溶磁微粒，使磁微粒的濃度為lmg/mL，置于4°C本發(fā)明也可采用NH2活性基團的磁微?；蚱渌钚曰鶊F，但優(yōu)選采用C00H活性基團的磁微粒，磁微粒的大小優(yōu)選200ηπΓ 0 μ m，在交聯(lián)劑的作用下與羊抗鼠IgG或SA—端的 NH2基團形成酰胺鍵而共價結(jié)合，羊抗鼠IgG或SA的另一端用于與PCT檢測抗體結(jié)合。2.酶結(jié)合物(辣根過氧化酶(HRP)標記羊抗PCT多克隆抗體)的制備
取HRP 5mg溶于蒸餾水0. 5mL中，加入60mmol/L NaIO4 0. 5mL，放置4°C，混合均勻，氧化30min，然后加入0. 16mol/L乙二醇0. 5mL，再置4°C終止30min。加入羊抗PCT多克隆抗5mg，用0. 05mol/L碳酸鹽緩沖液透析，4°C過夜，加KBH4 (5mg/mL) 0. 3mL，置4度終止池。加等容積飽和硫酸銨，4度沉淀30min后用4000r/min離心15min。沉淀物用PH 7. 4、 0. 02mol/L的PBS 0. 5mL溶解，用PBS透析除銨。完成后負20°C保存
3.磁微粒偶聯(lián)抗體(指步驟1制備得到的磁微粒偶聯(lián)羊抗鼠IgG或磁微粒偶聯(lián)SA) 和PCT檢測抗體混合液的制備
(1)磁微粒偶聯(lián)抗體和PCT檢測抗體稀釋液的配置
稀釋液成分及含量如下20mmol/L的PB緩沖液(PH7. 4)，體積分數(shù)的1. 5%BSA，體積分數(shù) 0. 5% 的 Triton X-100,體積分數(shù)為 0. 1% 的 Proclin300。(2)磁微粒偶聯(lián)抗體和PCT檢測抗體混合液的制備
取制備好的磁微粒偶聯(lián)抗體和PCT檢測抗體按照棋盤滴定法，選定使用濃度，用所述稀釋液對其進行稀釋，最終確定的混合溶液中，磁微粒偶聯(lián)抗體的使用濃度為0. 5mg/mL, PCT檢測抗體的使用濃度為0. 25 μ g/mL。4.酶結(jié)合物工作液的制備
酶稀釋液的組成為:0. lmol/L的Tris-HCl的緩沖液(PH7. 4),0. 2 2. 5% casein (中文名稱為酪蛋白)，1 10%山羊血清，0. l%Proclin300o通過棋盤滴定法，最終確定酶結(jié)合物的工作液稀釋比例為1:2000-5000，優(yōu)選1 :2500。5. PCT標準品的制備
用馬血清將PCT重組蛋白(蛋白純度>95%)稀釋成標準品，稀釋濃度為0ng/mL，0. 2ng/ mL，0. 4ng/mL，0. 8ng/mL，6. 25ng/mL，25ng/mL，用于制作標準曲線。6.洗滌緩沖液的配置
配置2L體積的洗滌液用102g磷酸氫二鈉.12H20、19. 5g磷酸二氫鈉.2H20、310g氯化鈉，20mL Tween-20用雙蒸水定容至2L體積，加入0. 1%防腐劑。臨用前稀釋20倍使用。7.發(fā)光底物
采用魯米諾增強發(fā)光底物或異魯米諾增強發(fā)光底物。魯米諾增強發(fā)光底物和異魯米諾增強發(fā)光底物均包括A液和B液，魯米諾增強發(fā)光底物的A液包括魯米諾和增強劑，異魯米諾增強發(fā)光底物的A液包括異魯米諾和增強劑，魯米諾增強發(fā)光底物和異魯米諾增強發(fā)光底物的B液均為氧化劑。臨用前，將A液、B液對半混合使用。二.本發(fā)明試劑盒的使用方法 1.標本處理
按照醫(yī)學處理過程收集病人標本，低速離心全血標本，取上層血清進行檢測。2.檢測方法
1)使用前，將酶結(jié)合物工作液，磁微粒偶聯(lián)抗體和PCT檢測抗體混合液，PCT標準品和發(fā)光底物放到室溫平衡至少半個小時。2)可采用一步法檢測或二步法檢測，檢測方法分別如下 二步發(fā)檢測
準備好需要數(shù)量的反應管，在其中一個反應管中加入50 μ L的血清樣品、其他反應管中加入不同濃度的PCT標準品溶液，再分別在各反應管中加入50 μ L的酶結(jié)合物工作液，振蕩混合均勻，放置37度水浴中反應20分鐘，然后加入50 μ L的磁微粒偶聯(lián)抗體和PCT檢測抗體混合液，37度水浴反應10分鐘，磁性分離，棄去上層反應液體；于反應管中加入洗滌液 400μ L，充分混合均勻，置于磁性分離器中，分離3min，棄去洗滌液上清，洗滌液應充分去除干凈，重復洗滌5次。然后加入A液、B液混合后的反應底物100 μ L，充分混合均勻，放入到化學發(fā)光檢測儀，10分鐘后檢測各管的發(fā)光強度值(RLU)。以PCT標準品的不同濃度值為橫坐標，相應的濃度的RLU為縱坐標，按照線性擬合建立標準曲線，得出曲線方程；將待測血清的RLU值帶入曲線方程，可計算出待測血清中PCT的濃度值。一步法檢測
準備好需要數(shù)量的反應管，一個反應管中加入50 μ L的血清樣品、其他反應管中加入不同濃度的PCT標準品溶液，再分別加入100 μ L的酶工作液，然后加入60 μ L的磁微粒偶聯(lián)抗體和PCT檢測抗體混合液，混合均勻，于37度水浴反應40分鐘，磁性分離，棄去上層反應液體；于反應管中加入洗滌液400 μ L，充分混合均勻，置于磁性分離器中，分離3min， 棄去洗滌液上清，洗滌液應充分去除干凈，重復洗滌5次。然后加入A液、B液混合后的反應底物100 μ L，充分混合均勻，放入到化學發(fā)光檢測儀，10分鐘后檢測各管的發(fā)光強度值 (RLU)0以PCT標準品的不同濃度值為橫坐標，相應的濃度的RLU為縱坐標，按照線性擬合建立標準曲線，得出曲線方程；將待測血清的RLU值帶入曲線方程，可計算出待測血清中PCT 的濃度值。三.本發(fā)明的方法學評價 1.準確性
準確性測量是指用已知量PCT蛋白的標準品加入到正常人血清標本中，測量加入后濃度值與加入的理論值進行比較，計算PCT的回收率。檢測結(jié)果如下
權利要求
1.一種檢測降鈣素原的試劑盒，其特征在于包括磁微粒分離試劑、PCT檢測抗體、酶結(jié)合物、以及發(fā)光底物；所述磁微粒分離試劑中磁微粒偶聯(lián)的蛋白分子為羊抗鼠免疫球蛋白G或鏈霉親和素； 所述PCT檢測抗體為鼠抗PCT單克隆抗體；所述酶結(jié)合物為辣根過氧化物酶標記羊抗PCT 多克隆抗體。
2.根據(jù)權利要求1所述的檢測降鈣素原的試劑盒，其特征在于所述發(fā)光底物為魯米諾增強發(fā)光底物或異魯米諾增強發(fā)光底物。
3.根據(jù)權利要求2所述的檢測降鈣素原的試劑盒，其特征在于所述魯米諾增強發(fā)光底物和所述異魯米諾增強發(fā)光底物均包括A液和B液，所述魯米諾增強發(fā)光底物的A液包括魯米諾和增強劑，所述異魯米諾增強發(fā)光底物的A液包括異魯米諾和增強劑，所述魯米諾增強發(fā)光底物和所述異魯米諾增強發(fā)光底物的B液均包括氧化劑。
4.根據(jù)權利要求1所述的檢測降鈣素原的試劑盒，其特征在于所述磁微粒分離試劑中磁微粒的大小為200 μ πΓΙΟ μ m,磁微粒表面的活性基團為COOH或NH2。
5.根據(jù)權利要求1所述的檢測降鈣素原的試劑盒，其特征在于還包括PCT標準品。
6.根據(jù)權利要求1所述的檢測降鈣素原的試劑盒，其特征在于還包括用于稀釋所述酶結(jié)合物的酶稀釋液，或者所述酶結(jié)合物溶解在酶稀釋液中形成酶結(jié)合物工作液。
7.根據(jù)權利要求6所述的檢測降鈣素原的試劑盒，其特征在于所述酶稀釋液包括 0. lmol/L的Tris-HCl的緩沖液、體積分數(shù)為0. 2% 2. 5%的casein、體積分數(shù)為1% 10% 的山羊血清、體積分數(shù)為0. 1%的ftx)clin300。
8.根據(jù)權利要求1所述的檢測降鈣素原的試劑盒，其特征在于還包括用于制備磁微粒分離試劑和PCT檢測抗體混合液的稀釋液，或者所述磁微粒分離試劑和PCT檢測抗體溶解在稀釋液中形成磁微粒分離試劑和PCT檢測抗體混合液。
9.根據(jù)權利要求1所述的檢測降鈣素原的試劑盒，其特征在于還包括洗滌緩沖液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測降鈣素原的試劑盒，包括磁微粒分離試劑、PCT檢測抗體、酶結(jié)合物、以及發(fā)光底物；所述磁微粒分離試劑中磁微粒偶聯(lián)的蛋白分子為羊抗鼠免疫球蛋白G或鏈霉親和素；所述PCT檢測抗體為鼠抗PCT單克隆抗體；所述酶結(jié)合物為辣根過氧化物酶標記羊抗PCT多克隆抗體。本發(fā)明具有檢測靈敏度高、成本低的有益效果。
文檔編號G01N33/577GK102305858SQ201110210250
公開日2012年1月4日 申請日期2011年7月26日 優(yōu)先權日2011年7月26日
發(fā)明者鄭筱雯, 陸春, 陳明鋒 申請人:深圳市國賽生物技術有限公司