專利名稱：一種煙草中果膠含量的檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種煙草中果膠含量的檢測方法，屬煙草分析檢測技術領域。
背景技術：
果膠是煙草中細胞壁物質的重要組成部分，約占煙葉質量的6% 13%，對煙葉結構的穩(wěn)定性及其熱解產物都有重要影響，其化學組成主要以α (1 — 4)鍵合的D—半乳糖醛酸為基本結構.果膠含量過高時會使煙草在燃吸時不完全并產生甲醇，還會產生強烈的刺激性，青雜氣重的不良影響。因此準確的測定煙草中果膠含量有很重要的意義。目前，果膠的測定方法主要有重量法、咔唑比色法、3，5- 二硝基水楊酸法(DNS)、 高效液相色譜法(HPLC)、流動分析法及氣相色譜法(GC)。其中重量法操作復雜且重復性差，咔唑比色法和高效液相色譜法皆是把果膠酸解成半乳糖醛酸，但半乳糖醛酸遇酸容易形成內酯物質，造成測定值偏低.氣相色譜法需衍生化，操作復雜。3，5 二硝基水楊酸法、流動分析法皆是把果膠酶解成半乳糖醛酸。3，5 二硝基水楊酸法的準確精度不夠，流動分析法儀器穩(wěn)定性不好，浪費試劑。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術之不足，而提供一種方法簡單、成本低、效率高和分析數據精確的煙草果膠含量的測定方法。本發(fā)明根據果膠酶具有很強的專一性的特點，運用果膠酶對樣品進行前處理生成了半乳糖醛酸，簡化了樣品前處理的過程，同時，根據半乳糖醛酸具有還原性的特性，首次在煙草行業(yè)內采用電位滴定方法對煙草中果膠含量進行了測定，減少了人為誤差。本發(fā)明的煙草果膠含量的測定方法，包括標準曲線及線性范圍確定、樣品處理及果膠含量的確定步驟；具體如下(1)標準曲線及線性范圍確定a.稱取精確到0. OOlg的半乳糖醛酸標準品1. 000g，溶解于水中，定容至IOOmL的容量瓶中，得到lmg/mL的半乳糖醛酸原液，保存于溫度為4-5°的冰箱中；b.分別移取lmg/mL的半乳糖醛酸原液:0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5mL，分別注入IOOmL 容量瓶中，稀釋至刻度，得到一組濃度為0. 005g/mL、0. 01g/mL、0. 015g/mL、0. 02g/mL、 0. 025g/mL的半乳糖醛酸標準溶液，將上述梯度濃度的標液采用電位滴定儀測定半乳糖醛酸，制作標準曲線，在濃度為0. 005g/mL 0. 025g/mL范圍內相關系數為0. 9994 ；(2)樣品處理a.稱取精確到0. OOOlg的1. OOOOg煙末置于150mL平底燒瓶中，加入50mL 85% 乙醇，士80°C回流30min，沸騰開始計時；然后過濾，待乙醇過濾完后，用蒸餾水多次洗滌殘渣，直至乙醇洗滌干凈；b.將殘渣轉移至200mL燒杯中，準確加入15mL pH = 4檸檬酸三鈉/檸檬酸緩沖溶液和果膠酶溶液，在58°C水浴中水解池，分別加入菲林試劑A、B液各25mL，使其發(fā)生反應生成Cu2O,用H2SO4和NH4Fe (SO4) 212H20溶液溶解；其中菲林試劑A液取硫酸銅結晶34. 69g，加適量水溶解，加硫酸0. 5mL，再加水稀釋至 500mL，用精制石棉過濾，貯存于具有橡皮塞的玻璃瓶內；菲林試劑B液取酒石酸鉀鈉173g與氫氧化鈉50g，加水溶解，稀釋至500mL，用精制石棉過濾，貯存于具有橡皮塞的玻璃瓶內；(3)果膠含量的確定用電位滴定儀測定半乳糖醛酸含量，按常規(guī)方法用標準曲線求取果膠的百分含量。本發(fā)明的特點在于用酶解-電位滴定分析方法測定煙葉中果膠含量，消除了濃硫酸對顯色反應的影響，操作簡單，重復性好，回收率高，設備投資小，能滿足煙草中果膠含量的批量測定。


附圖為標準曲線圖。
具體實施例方式本方法采用的設備均為市場購買。方法的具體操作步驟如下1.酶解-電位滴定分析方法標準曲線及線性范圍a.準確稱取半乳糖醛酸標準品1. OOOg (精確到0. OOlg)置于IOOmL容量瓶中，定容，保存于溫度為4-5°的冰箱中。b.分別移取lmg/mL的半乳糖醛酸原液0. 5、1.0、1.5、2.0、2. 5mL，分別注入 IOOmL容量瓶中，稀釋至刻度，得到一組濃度為0. 005g/mL、0. 01g/mL、0. 015g/mL、0. 02g/ mL、0. 025g/mL的半乳糖醛酸標準溶液，將上述梯度濃度的標液采用電位滴定儀測定半乳糖醛酸，制作標準曲線(附圖所示)，在濃度為0. 005g/mL 0. 025g/mL范圍內相關系數為 0.9994。2.樣品處理a.準確稱取1. OOOOg煙末(精確到0. OOOlg)置于150mL平底燒瓶中，加入 50mL85%乙醇，士80°C回流30min，沸騰開始計時。然后過濾，待乙醇過濾完后，用蒸餾水多次洗滌殘渣，直至乙醇洗滌干凈。b.將殘渣轉移至200mL燒杯中，準確加入15mL pH = 4檸檬酸三鈉/檸檬酸緩沖溶液和果膠酶溶液，在58°C水浴中水解池，分別加入菲林試劑A、B液各25mL，使其發(fā)生反應生成Cu2O,用H2SO4和NH4Fe (SO4) 212H20溶液溶解。其中菲林試劑A液取硫酸銅結晶34. 69g，加適量水溶解，加硫酸0. 5mL，再加水稀釋至 500mL，用精制石棉過濾，貯存于具有橡皮塞的玻璃瓶內。菲林試劑B液取酒石酸鉀鈉173g與氫氧化鈉50g，加水溶解，稀釋至500mL，用精制石棉過濾，貯存于具有橡皮塞的玻璃瓶內。3、果膠含量的確定用電位滴定儀測定半乳糖醛酸含量，按常規(guī)方法用標準曲線求取果膠的百分含量。
4、對比實驗酶解-電位滴定分析方法和用比色法測定果膠含量(以半乳糖醛酸計)，能夠得到酶解-電位滴定分析方法，重復性較好。煙樣果膠的分析結果
權利要求
1. 一種煙草中果膠含量的檢測方法，其特征在于該檢測方法包括標準曲線及線性范圍確定、樣品處理及果膠含量的確定步驟；具體如下(1)標準曲線及線性范圍確定a.稱取精確到0.OOlg的半乳糖醛酸標準品1. 000g，溶解于水中，定容至IOOmL的容量瓶中，得到lmg/mL的半乳糖醛酸原液，保存于溫度為4-5°的冰箱中保存；b.分別移取lmg/mL的半乳糖醛酸原液0.5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5ML，分別注入IOOmL容量瓶中，稀釋至刻度，得到一組濃度為 0. 005g/mL、0. 01g/mL、0. 015g/mL、0. 02g/mL、0. 025g/ mL的半乳糖醛酸標準溶液，將上述梯度濃度的標液采用電位滴定儀測定半乳糖醛酸，制作標準曲線，在濃度為0. 005g/mL 0. 025g/mL范圍內相關系數為0. 9994 ；(2)樣品處理a.稱取精確到0.OOOlg的l.OOOOg煙末置于150mL平底燒瓶中，加入50mL 85%乙醇， 士80°C回流30min，沸騰開始計時；然后過濾，待乙醇過濾完后，用蒸餾水多次洗滌殘渣，直至乙醇洗滌干凈；b.將殘渣轉移至200mL燒杯中，準確加入15mLpH = 4檸檬酸三鈉/檸檬酸緩沖溶液和果膠酶溶液，在58°C水浴中水解池，分別加入菲林試劑A、B液各25mL，使其發(fā)生反應生成 Cu2O,用 H2SO4 和 NH4Fe (SO4) 212H20 溶液溶解；其中菲林試劑A液取硫酸銅結晶34. 69g，加適量水溶解，加硫酸0. 5mL，再加水稀釋至 500mL，用精制石棉過濾，貯存于具有橡皮塞的玻璃瓶內；菲林試劑B液取酒石酸鉀鈉173g與氫氧化鈉50g，加水溶解，稀釋至500mL，用精制石棉過濾，貯存于具有橡皮塞的玻璃瓶內；(3)果膠含量的確定用電位滴定儀測定半乳糖醛酸含量，用標準曲線求取果膠的百分含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種煙草中果膠含量的檢測方法，屬煙草分析檢測技術領域。本發(fā)明的煙草果膠含量的測定方法，根據果膠酶具有很強的專一性的特點，運用果膠酶對樣品進行前處理生成了半乳糖醛酸，簡化了樣品前處理的過程，同時，根據半乳糖醛酸具有還原性的特性，采用電位滴定方法對煙草中果膠含量進行了測定，減少了人為誤差。本發(fā)明的煙草果膠含量的測定方法，包括標準曲線及線性范圍確定、樣品處理及果膠含量的確定步驟。本發(fā)明的特點在于用酶解-電位滴定分析方法測定煙葉中果膠含量，消除了濃硫酸對顯色反應的影響，操作簡單，重復性好，回收率高，設備投資小，能滿足煙草中果膠含量的批量測定。
文檔編號G01N27/42GK102323319SQ201110129600
公開日2012年1月18日 申請日期2011年5月18日 優(yōu)先權日2011年5月18日
發(fā)明者馮文, 孫桂芬, 廖臻, 徐世濤, 曹紅云, 楊帥, 王嵐, 納丹, 芮曉東, 蔣次清, 馬燕 申請人:云南煙草科學研究院