專利名稱：川麥冬藥材中黃酮類成分的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥測(cè)定方法，特別涉及一種川麥冬藥材中黃酮類成分的含量測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
川麥冬主產(chǎn)于四川綿陽(yáng)地區(qū)，以涪江沖積平原所產(chǎn)麥冬為佳品，又稱涪江麥冬，含多種留體皂甙麥冬皂甙A、B、C、D，甙元均為假葉樹皂甙元，另含麥冬皂甙B’、C’、D’，甙兀均為薯菌阜式兀；尚含多種黃酮類化合物如麥冬甲基黃燒酮A、B,麥冬黃燒酮A、麥冬黃酮A、B,甲基麥冬黃酮A，B ;另分得5個(gè)高異黃酮類化合物.麥冬具有養(yǎng)陰生津，潤(rùn)肺清心的功能。用于肺燥干咳，虛癆咳嗽，津傷口渴，心煩失 目民，內(nèi)熱消渴，腸燥便秘；咽白喉。目前已有一些文獻(xiàn)報(bào)道麥冬的指紋圖譜分析方法，但尚缺少對(duì)麥冬藥材中黃酮類成分指紋圖譜的研究，因此本實(shí)驗(yàn)對(duì)麥冬藥材中黃酮類成分進(jìn)行了指紋圖譜的研究，以期為全面控制麥冬藥材的質(zhì)量提供參考依據(jù)。川麥冬藥材中黃酮類成分的含量測(cè)定目前主要使用滴定法，該法操作復(fù)雜，精密度差，目前尚無(wú)更精確的測(cè)定方法，本發(fā)明采用HPLC法，獲得了川麥冬藥材中黃酮類成分指紋圖譜，同時(shí)使用該法測(cè)定川麥冬藥材中黃酮類成分的含量，取得了良好的效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種川麥冬藥材中黃酮類成分的含量測(cè)定，該方法包括以下步驟步驟I、對(duì)照品溶液的制備，分別精密稱取對(duì)照品甲基麥冬黃烷酮A、B、6_醛基異麥冬黃烷酮A適量，加甲醇溶解，分別制成甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬黃烷酮B，6-醛基異麥冬黃烷酮A三種對(duì)照品溶液；步驟2、供試品溶液的制備，取川麥冬藥材粉末用甲醇溶解，過C18柱，甲醇洗脫得供試品溶液；步驟3、將步驟I和步驟2注入HPLC儀器中，得到色譜圖；步驟4、對(duì)圖譜的相似性進(jìn)行比較相似為含量合格。本發(fā)明中所述指紋圖譜是HPLC的色譜圖。另一種方法為(A)取合格的川麥冬藥材粉末，按照上述方法建立川麥冬藥材粉末標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(B)取待檢川麥冬藥材粉末，按照上述方法得到指紋圖譜；(C)將步驟⑶得到的指紋圖譜和步驟㈧得到的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比對(duì)，符合即為合格產(chǎn)品，不符合即為不合格產(chǎn)品。優(yōu)選的本發(fā)明的測(cè)定方法，步驟如下步驟I、對(duì)照品溶液的制備，分別精密稱取對(duì)照品甲基麥冬黃烷酮A、B、6_醛基異麥冬黃烷酮A適量，加甲醇溶解，分別制成甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬黃烷酮B，6-醛基異麥冬黃烷酮A三種對(duì)照品溶液。步驟2、供試品溶液的制備，取川麥冬藥材粉末約6. Og,精密稱定，用甲醇超聲提取3次，每次30min，每次加甲醇50mL，合并提取液，過濾，蒸干，加水50mL使溶解，上自制C18小柱富集(80 100目，內(nèi)徑Icm,柱高為2cm,單個(gè)柱體積約為6ml,上樣前用O. 5mol .L-1NaOH溶液處理，再加水平衡)，首先上樣(流速O. 5ml · mirT1)，用4倍柱體積50%甲醇除去雜質(zhì)(流速O. 5ml -mirT1),再用5倍柱體積甲醇洗脫目標(biāo)物質(zhì)(流速O. 3ml · mirT1)，將所得甲醇液蒸干，加甲醇溶解至5mL容量瓶，即得供試品溶液。步驟3、將步驟I和步驟2的溶液分別注入HPLC儀器中，得到色譜圖，對(duì)圖譜的相似性進(jìn)行比較。步驟4、相似為含量合格。
本發(fā)明的色譜條件如下色譜柱WaterssymeteryC18 色譜柱(4. 6_X 150mm, 5 μ m);流動(dòng)相A (O. 05%憐酸)-B (乙腈)，梯度洗脫(見表I)，柱溫30°C，流速I. OmL · mirT1，檢測(cè)波長(zhǎng)296nm，進(jìn)樣量10 μ L0表I液相梯度洗脫條件
時(shí)間(min)_A 0.05%磷酸(％)_B 乙腈(％)
O8020
55238
384248501090
54O100
56O100
588020
_60_80_20_本發(fā)明的方法是經(jīng)過篩選獲得的，研究過程如下I.儀器與試藥Waters Alliance2695高效液相色譜儀,Waters2998檢測(cè)器,Empower色譜工作站(美國(guó)Waters公司)，AL204電子天平，XS105梅特勒精密電子分析天平(梅特勒_托利多儀器(上海)有限公司)，KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。甲基麥冬黃烷酮A、B、6-醛基異麥冬黃烷酮A對(duì)照品(自制，經(jīng)光譜與色譜鑒定，純度均達(dá)到98%以上)。10批川麥冬藥材為市售藥材，均來(lái)自四川雅安，經(jīng)天津天士力之驕藥業(yè)有限公司葉正良研究員鑒定為川麥冬。2.方法與結(jié)果2. I色譜條件色譜柱WaterssymeteryC18 色譜柱(4. 6_X 150mm, 5 μ m);流動(dòng)相A (O. 05%憐酸)-B (乙腈)，梯度洗脫(見表I)，柱溫30°C，流速I. OmL · mirT1，檢測(cè)波長(zhǎng)296nm，進(jìn)樣量IOyL0色譜圖見圖I。表I液相梯度洗脫條件時(shí)間(min)_A 0.05%磷酸(％)_B 乙腈(％)
O8020
55238
38 424850 1090
54O100
56O100
588020
_60_80_20_2.2對(duì)照品溶液的制備分別精密稱取對(duì)照品甲基麥冬黃烷酮A、B、6_醛基異麥冬黃烷酮A適量，加甲醇溶解，分別制成甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬黃烷酮B，6-醛基異麥冬黃烷酮A三種對(duì)照品溶液。2. 3供試品溶液的制備取川麥冬藥材粉末約6. Og,精密稱定，用甲醇超聲提取3次，每次30min，每次加甲醇50mL，合并提取液，過濾，蒸干，加水50mL使溶解，上自制C18小柱富集(80 100目，內(nèi)徑Icm,柱高為2cm，單個(gè)柱體積約為6ml，上樣前用O. 5mol · T1NaOH溶液處理，再加水平衡)，首先上樣(流速O. 5ml · mirT1),用4倍柱體積50%甲醇除去雜質(zhì)(流速O. 5ml · mirT1),再用5倍柱體積甲醇洗脫目標(biāo)物質(zhì)(流速O. 3ml mirT1)，將所得甲醇液蒸干，加甲醇溶解至5mL容量瓶，即得供試品溶液。2. 4精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液，按“2. I”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，結(jié)果各共有峰相對(duì)峰面積比值的RSD小于2. 82%，相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于O. 20%，說(shuō)明儀器的精
密度較好。2. 5重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，按“2. 2”項(xiàng)下制備6份供試品溶液，按“2. I”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果見表2和表3。結(jié)果各共有峰相對(duì)峰面積比值的RSD小于3. 01%，相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于O. 31%，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)方法的重現(xiàn)性較好。表2重復(fù)性試驗(yàn)相對(duì)峰面積(η = 6)
權(quán)利要求
1.一種川麥冬藥材中黃酮類成分的測(cè)定方法，其特征在于，該方法包括以下步驟 步驟I、對(duì)照品溶液的制備，分別精密稱取對(duì)照品甲基麥冬黃烷酮A、B、6-醛基異麥冬黃烷酮A適量，加甲醇溶解，分別制成甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬黃烷酮B，6-醛基異麥冬黃烷酮A三種對(duì)照品溶液； 步驟2、供試品溶液的制備，取川麥冬藥材粉末用甲醇溶解，過C18柱，甲醇洗脫得供試品溶液； 步驟3、將步驟I和步驟2注入HPLC儀器中，得到色譜圖； 步驟4、對(duì)圖譜的相似性進(jìn)行比較相似為含量合格。
本發(fā)明中所述指紋圖譜是HPLC的色譜圖。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的測(cè)定方法，其特征在于，該方法包括以下步驟 步驟I、對(duì)照品溶液的制備，分別精密稱取對(duì)照品甲基麥冬黃烷酮A、B、6-醛基異麥冬黃烷酮A適量，加甲醇溶解，分別制成甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬黃烷酮B，6-醛基異麥冬黃烷酮A三種對(duì)照品溶液。
步驟2、供試品溶液的制備，取川麥冬藥材粉末約6. Og，精密稱定，用甲醇超聲提取3次，每次30min,每次加甲醇50mL,合并提取液,過濾,蒸干，加水50mL使溶解,上自制C18小柱富集(80 100目，內(nèi)徑1cm，柱高為2cm，單個(gè)柱體積約為6ml，上樣前用O. 5mol -L^1NaOH溶液處理，再加水平衡)，首先上樣(流速O. 5ml · mirT1)，用4倍柱體積50%甲醇除去雜質(zhì)(流速O. 5ml · mirT1)，再用5倍柱體積甲醇洗脫目標(biāo)物質(zhì)(流速O. 3ml · mirT1)，將所得甲醇液蒸干，加甲醇溶解至5mL容量瓶，即得供試品溶液。
步驟3、將步驟I和步驟2的溶液分別注入HPLC儀器中，得到色譜圖，對(duì)圖譜的相似性進(jìn)行比較。
步驟4、相似為含量合格。
3.一種川麥冬藥材中黃酮類成分的測(cè)定方法，其特征在于，該方法包括以下步驟 (A)取合格的川麥冬藥材粉末，按照上述方法建立川麥冬藥材粉末標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜； (B)取待檢川麥冬藥材粉末，按照上述方法得到指紋圖譜； (C)將步驟(B)得到的指紋圖譜和步驟(A)得到的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比對(duì)，符合即為合格產(chǎn)品，不符合即為不合格產(chǎn)品。
4.根據(jù)權(quán)利要求I的測(cè)定方法，其特征在于，色譜條件如下 色譜柱Waters symeteryC18 色譜柱(4. 6mm X 150mm, 5 μ m);流動(dòng)相A (O. 05 % 憐酸)-B (乙腈)，梯度洗脫(見表I)，柱溫30°C，流速I. OmL · mirT1，檢測(cè)波長(zhǎng)296nm，進(jìn)樣量10 μ L0 液相梯度洗脫條件
5.根據(jù)權(quán)利要求I的測(cè)定方法，其特征在于，該方法精密度較好。
6.根據(jù)權(quán)利要求I的測(cè)定方法，其特征在于，該方法重現(xiàn)性較好。
7.根據(jù)權(quán)利要求I的測(cè)定方法，其特征在于，該方法在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種川麥冬藥材中黃酮類成分的測(cè)定方法，該方法包括以下步驟步驟1、對(duì)照品溶液的制備，分別精密稱取對(duì)照品甲基麥冬黃烷酮A、B、6-醛基異麥冬黃烷酮A適量，加甲醇溶解，分別制成甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬黃烷酮B，6-醛基異麥冬黃烷酮A三種對(duì)照品溶液；步驟2、供試品溶液的制備，取川麥冬藥材粉末用甲醇溶解，過C18柱，甲醇洗脫得供試品溶液；步驟3、將步驟1和步驟2注入HPLC儀器中，得到色譜圖；步驟4、對(duì)圖譜的相似性進(jìn)行比較相似為含量合格。
文檔編號(hào)G01N30/06GK102759582SQ20111010904
公開日2012年10月31日 申請(qǐng)日期2011年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月28日
發(fā)明者葉正良, 周大錚, 李德坤, 賈誠(chéng) 申請(qǐng)人:天津天士力之驕藥業(yè)有限公司