專利名稱：血液中支鏈氨基酸含量的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種血液中支鏈氨基酸含量的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
支鏈氨基酸包括亮氨酸(Leucine)、異亮氨酸(Isoleucine)和纈氨酸(Valine)三
種氨基酸。亮氨酸在調(diào)節(jié)氨基酸與蛋白質(zhì)代謝方面起重要作用。它是骨骼肌與心肌中唯一可調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)的氨基酸；能促進(jìn)骨骼肌蛋白質(zhì)的合成。異亮氨酸是人類(lèi)的必需氨基酸之一，其功能主要是維持機(jī)體平衡，治療精神障礙；促進(jìn)食欲的増加和抗貧血的作用；人體一旦缺乏異亮氨酸，會(huì)出現(xiàn)體力衰竭，昏迷等癥狀。纈氨酸是ー種必需氨基酸，它的功能包括 給肌肉提供額外的能量，以防止肌肉衰弱；從肝臟清除多余的氮，并將身體需要的氮運(yùn)輸?shù)礁鱾€(gè)部位；有助于治療肝膽疾病；促使神經(jīng)系統(tǒng)功能正常。支鏈氨基酸在體內(nèi)起著重要作用，主要包括氧化供能；參與肌肉合成；預(yù)防和減輕中樞疲勞；刺激相關(guān)激素的分泌亮氨酸可以間接刺激胰島素、生長(zhǎng)激素的分泌釋放，具有促進(jìn)肌肉蛋白質(zhì)合成和抗分解的雙重作用。支鏈氨基酸屬于必需氨基酸，主要作用于骨骼肌代謝，約占骨骼肌蛋白質(zhì)的必需氨基酸的35%，能幫助身體強(qiáng)力阻抗肌肉分解、營(yíng)養(yǎng)的流失并增加肌肉抗壓能力；經(jīng)過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，“支鏈氨基酸”使小白鼠的生命延長(zhǎng)了 12%;且與ー些代謝性疾病關(guān)系密切，如楓糖尿癥。因此定量分析支鏈氨基酸含量對(duì)研究營(yíng)養(yǎng)學(xué)和體內(nèi)代謝過(guò)程具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供ー種特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確度和靈敏度高的血液中支鏈氨基酸含量的檢測(cè)方法。本發(fā)明所提供的血液中支鏈氨基酸含量的檢測(cè)方法，包括如下步驟標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)血清樣本分別和同位素內(nèi)標(biāo)溶液混勻；離心，取上清液，吹干；加入流動(dòng)相復(fù)溶液，超聲溶解；離心，取上清液，與流動(dòng)相一起流經(jīng)色譜柱進(jìn)入液相色譜-質(zhì)譜分析，定量血液中支鏈氨基酸的含量。本發(fā)明的血液中支鏈氨基酸含量的檢測(cè)方法，其中所述流動(dòng)相復(fù)溶液和流動(dòng)相為含2-8%。全氟代庚酸的乙腈水溶液或甲醇水溶液。本發(fā)明的血液中支鏈氨基酸含量的檢測(cè)方法，其中所述流動(dòng)相復(fù)溶液中乙腈或甲醇的體積百分比含量為20-70%。本發(fā)明的血液中支鏈氨基酸含量的檢測(cè)方法，特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確度和靈敏度高、分析時(shí)間短，為臨床上研究營(yíng)養(yǎng)學(xué)、體內(nèi)代謝過(guò)程及楓糖尿癥等代謝性疾病提供準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)及靈敏度高的檢測(cè)方法。本發(fā)明的血液中支鏈氨基酸含量的檢測(cè)方法以同位素為內(nèi)標(biāo)，使得目標(biāo)化合物的識(shí)別更為準(zhǔn)確，同時(shí)更好的消除了系統(tǒng)誤差，定量結(jié)果更為準(zhǔn)確。


圖1為纈氨酸(Val)質(zhì)荷比特征圖。
圖2為亮氨酸(Leu)和異亮氨酸(Ile)質(zhì)荷比特征圖。
圖3為Val標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖。
圖4為Val內(nèi)標(biāo)色譜圖。
圖5為L(zhǎng)eu和Ile標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖。
圖6為L(zhǎng)eu內(nèi)標(biāo)色譜圖。
圖7為血清樣本中Leu和Ile色譜圖。
圖8為血清樣本中Val色譜圖。
圖9為血清樣本中Leu內(nèi)標(biāo)色譜圖。
圖10為血清樣本中Val內(nèi)標(biāo)色譜圖。
具體實(shí)施例方式(一)檢測(cè)方法(1)用移液器移取標(biāo)準(zhǔn)品和同位素內(nèi)標(biāo)于離心管中，渦旋儀混勻；同時(shí)平行移取待測(cè)樣本和同位素內(nèi)標(biāo)渦旋混勻，密封。(2)高速離心，取部分體積的上清液，吹干，(3)加入流動(dòng)相復(fù)溶液(含2_8%。全氟代庚酸的乙腈水溶液或甲醇水溶液，有機(jī)相的體積百分比含量為20-70% )復(fù)溶，超聲溶解；離心，取上清液，由液相自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣， 與流動(dòng)相一起流經(jīng)色譜柱進(jìn)入液相色譜-質(zhì)譜分析，最終定量分析血清中支鏈氨基酸的含里。液相色譜條件在Discovery C18色譜柱上進(jìn)行分離，流動(dòng)相為含2_8%。全氟代庚酸的乙腈水溶液或甲醇水溶液，采用梯度洗脫方式，流速為175μ 1/min。串聯(lián)質(zhì)譜條件質(zhì)譜采用電噴霧離子源(ESI)、正離子模式、選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)進(jìn)行定量分析。 離子源為ESI源，設(shè)置噴霧電壓為4500V;氬氣作為碰撞氣體，壓カ為1.5mTorr (ImTorr =0. 133Pa)，碰撞能量(CE) 15V ；氮?dú)庾鳛榍蕷夂洼o助氣體，設(shè)置參數(shù)分別為30psi和 IOpsidpsi =6. 89KPa)；加熱毛細(xì)管溫度350°C ；檢測(cè)方式為正離子模式，掃描模式為SRM， 掃描時(shí)間為0. k。支鏈氨基酸，包含纈氨酸(Val)，亮氨酸(Leu)，異亮氨酸(Ile)三種氨基酸，其分
子結(jié)構(gòu)式如下所示
權(quán)利要求
1.ー種血液中支鏈氨基酸含量的檢測(cè)方法，包括如下步驟標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)血清樣本分別和同位素內(nèi)標(biāo)溶液混勻；離心，取上清液，吹干；加入流動(dòng)相復(fù)溶液，超聲溶解；離心，取上清液，與流動(dòng)相一起流經(jīng)色譜柱進(jìn)入液相色譜-質(zhì)譜分析， 定量血液中支鏈氨基酸的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述流動(dòng)相復(fù)溶液和流動(dòng)相均為含 2-8%。十三氟代庚酸的乙腈水溶液或甲醇水溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述流動(dòng)相復(fù)溶液中乙腈或甲醇的體積百分比含量為20-70%。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種血液中支鏈氨基酸含量的檢測(cè)方法，包括如下步驟標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)血清樣本分別和同位素內(nèi)標(biāo)溶液混勻；離心，取上清液，吹干；加入流動(dòng)相復(fù)溶液，超聲溶解；離心，取上清液，與流動(dòng)相一起流經(jīng)色譜柱進(jìn)入液相色譜-質(zhì)譜分析，定量血液中支鏈氨基酸的含量。本發(fā)明的血液中支鏈氨基酸含量的檢測(cè)方法，特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確度和靈敏度高、分析時(shí)間短。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102539545SQ20101058081
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月9日
發(fā)明者倪君君, 韓鎏 申請(qǐng)人:北京國(guó)立柏林醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司