專(zhuān)利名稱(chēng)：恩諾沙星殘留的時(shí)間分辨免疫分析檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種化學(xué)品污染殘留的檢測(cè)試劑盒及其制備 方法，具體涉及一種檢測(cè)恩諾沙星殘留的時(shí)間分辨免疫分析試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
食品安全是關(guān)系到廣大人民的日常生活的一件大事。食品安全問(wèn)題主要包括食品 中的物理危害、化學(xué)危害和微生物危害等幾個(gè)因素，其中化學(xué)危害主要包括獸藥殘留、農(nóng)藥 殘留、重金屬、環(huán)境有害物等。、聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)殘留聯(lián)合立法委員會(huì)將獸藥殘留定 義為動(dòng)物產(chǎn)品的任何可食部分所含獸藥的母體化合物及其代謝物，以及獸藥有關(guān)的雜質(zhì)。 獸藥殘留已成為困擾全世界食品安全的難題，也是各國(guó)用以設(shè)置貿(mào)易壁壘的最主要的手段之一。恩諾沙星(enrofloxacin，ENR)又名乙基環(huán)丙沙星，化學(xué)名為1_環(huán)丙基_7_(4_乙 基-1-哌嗪基)-6-氟-1，4- 二氫-4-氧代-3-喹啉羧酸。該藥物具有廣譜抗菌效果，對(duì)霉 菌和革蘭氏陰性菌效力強(qiáng)，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和厭氧菌效果較弱；內(nèi)服及肌肉注射吸收迅速，且 在體內(nèi)代謝為同樣具有抗菌活性的環(huán)丙沙星，代謝物生成與消除緩慢，分布廣泛。恩諾沙星 分子結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)恩諾沙星殘留的時(shí)間分辨免疫分析檢測(cè)試劑盒，其特征在于包括包被了恩 諾沙星抗原的酶標(biāo)板、恩諾沙星抗體、鑭系元素標(biāo)記羊抗兔或羊抗鼠抗體；所述鑭系元素為 Eu3+、Tb3+、Dy3+或 Sm3+。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述恩諾沙星抗原是將恩諾沙星和載體 蛋白偶聯(lián)得到；所述恩諾沙星抗體包括單克隆抗體、兔多克隆抗體或基因工程抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于還包括恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液、增強(qiáng)液、濃縮 洗滌液和樣品稀釋濃縮液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液是以濃度為 1000 μ g/L的恩諾沙星配成的濃度梯度為0、0. 1,0. 3,0. 9,2. 7,8. 1 μ g/L的恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn) 品溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述增強(qiáng)液包括β-二酮體、三辛基氧化 磷(TOPO)、Triton X-100、冰醋酸和pH值為2. 0 3. 2的鄰苯二甲酸氫鉀。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述濃縮洗液包括0.5 1. 5%吐溫20 的磷酸鹽緩沖液；所述濃縮稀釋液為pH值7. 4 8. 0、0. 1 0. 25mol/L的磷酸鹽緩沖液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的時(shí)間分辨免疫分析試劑盒，其特征在于所述酶標(biāo)板是96/40 孔酶標(biāo)板，且空白板的熒光值低于1000。
8.一種恩諾沙星的檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟(1)樣品前處理；(2)用權(quán)利要求1 7任一項(xiàng)所述的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)；(3)結(jié)果處理與分析。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述樣品前處理為(1)蜂蜜稱(chēng)取樣品3g，加入3mL蒸餾水，振蕩均勻，加入6mL乙酸乙酯，振蕩15min，5000r/min離 心lOmin，吸取上層2mL旋轉(zhuǎn)蒸干，加入ImL正己烷溶解干燥物，再加入ImL PBS溶液復(fù)溶， 除去上層正己烷相，下層清夜50 μ L待測(cè)；或⑵禽蛋稱(chēng)取樣品3g，加入乙腈-水溶液6mL，振蕩10min，5000r/min離心lOmin，取上層^(guān)iiL, 加入2mL乙酸乙酯，振蕩15min，5000r/min離心lOmin，吸取全部上層溶液，旋轉(zhuǎn)蒸干，加入 ImL正己烷溶解干燥物，再加入ImL PBS溶液復(fù)溶，除去上層正己烷相，下層清夜50 μ L待 測(cè)；或⑶組織所述組織為肌肉、肝臟或腎臟；稱(chēng)取樣品3g，加入PBS 3mL，振蕩IOmin ；5000r/min離 心lOmin，取上層2mL加入等量正己烷，輕輕混勻，5000r/min離心lOmin，取下層清夜50 μ L待測(cè)。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟(1)將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，置于20 環(huán)境中平衡不少于30min，將酶標(biāo)板條 固定，做平行實(shí)驗(yàn)，按順序編號(hào)；(2)在標(biāo)準(zhǔn)品孔加入50μ L標(biāo)準(zhǔn)溶液，樣品孔加入50 μ L待測(cè)樣品，然后每孔加入 50 μ L恩諾沙星抗體工作液，混勻；振蕩反應(yīng)；(3)步驟(2)所述振蕩反應(yīng)后洗板，拍干，每孔加入100μ L銪標(biāo)二抗工作液，振蕩反應(yīng)；(4)步驟C3)所述振蕩反應(yīng)后洗板，拍干，每孔加入200μL增強(qiáng)液，混勻，避光室溫輕拍 振蕩；(5)用時(shí)間分辨免疫分析檢測(cè)儀測(cè)定各孔熒光值；(6)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液熒光值與濃度半對(duì)數(shù)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)與樣品溶液熒光值 計(jì)算樣品濃度。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種恩諾沙星殘留的時(shí)間分辨免疫分析檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。本發(fā)明所述試劑盒包被有恩諾沙星抗原的酶標(biāo)板，鑭系元素標(biāo)記羊抗兔或羊抗鼠抗體、恩諾沙星抗體等。本發(fā)明還公開(kāi)了應(yīng)用上述試劑盒檢測(cè)恩諾沙星殘留的方法。本發(fā)明提供的檢測(cè)恩諾沙星的試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間分辨免疫分析技術(shù)，靈敏度高、穩(wěn)定性好，大大簡(jiǎn)化了操作步驟和反應(yīng)時(shí)間，減少了因操作復(fù)雜引起的誤差，降低了成本，非常適合大量樣品的篩查，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
文檔編號(hào)G01N33/577GK102135534SQ20101026900
公開(kāi)日2011年7月27日 申請(qǐng)日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者孫遠(yuǎn)明, 楊金易, 沈玉棟, 王弘, 肖治理, 雷紅濤 申請(qǐng)人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)