專利名稱：己烯雌酚殘留的時(shí)間分辨免疫分析檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種化學(xué)品污染殘留的檢測(cè)試劑盒及其制備 方法，具體涉及一種檢測(cè)己烯雌酚殘留的時(shí)間分辨免疫分析試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
己烯雌酚(diethylatilbestrol，DES)屬于人工合成激素，己烯雌酚(簡(jiǎn)稱DES) 為第一個(gè)口服有活性的人工合成雌激素，化學(xué)名為1，2-2_雙(4-2-羥苯基)21，22 二乙基 乙烯，俗名乙底酚，為無色結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末，是目前國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)臨床最為廣泛應(yīng)用的合
成激素，其結(jié)構(gòu)式如式(I)所示
權(quán)利要求
一種檢測(cè)己烯雌酚殘留的時(shí)間分辨免疫分析檢測(cè)試劑盒，其特征在于包括包被了己烯雌酚抗原的酶標(biāo)板、己烯雌酚抗體、鑭系元素標(biāo)記羊抗兔或羊抗鼠抗體；所述鑭系元素為Eu3+、Tb3+、Dy3+或Sm3+。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述己烯雌酚抗原是將己烯雌酚和載體 蛋白偶聯(lián)得到；所述己烯雌酚抗體包括單克隆抗體、兔多克隆抗體或基因工程抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于還包括己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)溶液、增強(qiáng)液、濃縮 洗滌液和樣品稀釋濃縮液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)溶液是以濃度為 1000 μ g/L的己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)品配成的濃度梯度為8μ g/L、4μ g/L、2μg/L、lμ g/L、0. 5μ g/ L,0μg/L的己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)品工作液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述增強(qiáng)液包括β-二酮體、三辛基氧化 磷(TOPO)、Triton X-100、冰醋酸和pH值為2. 0 3. 2的鄰苯二甲酸氫鉀。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述濃縮洗液包括0.5 1. 5%吐溫20 的磷酸鹽緩沖液，所述磷酸鹽緩沖液PH值為7. 4，濃度為0. lmol/L ；所述濃縮稀釋液為pH 值 7. 4 8. 0,0. 1 0. 25mol/L 的 Tris-HCl。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的時(shí)間分辨免疫分析試劑盒，其特征在于所述酶標(biāo)板是96孔酶 標(biāo)板，包被有濃度為75 μ g/L抗己烯雌酚抗原，并封閉微孔表面未吸附位點(diǎn)；所述封閉液包 括溶于PBS的脫脂奶粉溶液。
8.一種己烯雌酚的檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟(1)樣品前處理；(2)用權(quán)利要求1 7任一項(xiàng)所述的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)；(3)結(jié)果處理與分析。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述樣品前處理為(1)尿液樣本處理清澈尿液樣品可以直接進(jìn)行檢測(cè)分析；若尿樣呈渾濁狀，2000r/min離心5min或過濾， 用上清液檢測(cè)；或(2)飼料樣本處理將飼料粉碎，稱取Ig置于50mL試管中，加入IOmL乙酸乙酯，充分混勻振蕩lOmin， 5000r/min離心lOmin，取有機(jī)相ImL有機(jī)相于另一試管中，減壓旋蒸干，加入2mL正己烷溶 解樣品；加入ρΗ7· 0的PBS-甲醇(3 2)溶液2mL，漩渦振蕩5min, 4000r/min離心lOmin, 除去上層正己烷，取下層溶液50 μ L待測(cè)；或(3)組織樣本處理所述組織包括肌肉、肝臟或腎臟；將組織破碎和均質(zhì)化，稱取3g均質(zhì)化后的組織，加入 乙酸乙酯9mL，無水氧化鈣0. 3g，漩渦振蕩10min，4000r/min離心l0min，去上清6mL蒸干， 加入正己烷2mL溶解殘?jiān)尤雙H7.0的PBS-甲醇(3 2)溶液lmL，漩渦振蕩5min，4000r/ min離心lOmin，除去上層正己烷，取下層溶液50 μ L待測(cè)。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟(1)將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，置于20 24°C環(huán)境中平衡不少于30min，將酶標(biāo)板條 固定，做平行實(shí)驗(yàn)，按順序編號(hào)；(2)在標(biāo)準(zhǔn)品孔加入50μ L標(biāo)準(zhǔn)溶液，樣品孔加入50 μ L待測(cè)樣品，然后每孔加入 50 μ L己烯雌酚抗體工作液，混勻；振蕩反應(yīng)；(3)步驟(2)所述振蕩反應(yīng)后洗板，拍干，每孔加入100μ L銪標(biāo)二抗工作液，振蕩反應(yīng)；(4)步驟(3)所述振蕩反應(yīng)后洗板，拍干，每孔加入200μL增強(qiáng)液，混勻，振蕩；(5)用時(shí)間分辨免疫分析檢測(cè)儀測(cè)定各孔熒光值；(6)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液熒光值與濃度半對(duì)數(shù)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線與樣品溶液熒光值 計(jì)算樣品濃度。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種己烯雌酚殘留的時(shí)間分辨免疫分析檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。本發(fā)明所述試劑盒包被有己烯雌酚抗原的酶標(biāo)板，鑭系元素標(biāo)記羊抗兔或羊抗鼠抗體、己烯雌酚抗體等。本發(fā)明還公開了應(yīng)用上述試劑盒檢測(cè)己烯雌酚殘留的方法。本發(fā)明提供的檢測(cè)己烯雌酚的試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間分辨免疫分析技術(shù)，靈敏度高、穩(wěn)定性好，大大簡(jiǎn)化了操作步驟和反應(yīng)時(shí)間，減少了因操作復(fù)雜引起的誤差，降低了成本，非常適合大量樣品的篩查，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
文檔編號(hào)G01N21/75GK101988923SQ201010268979
公開日2011年3月23日 申請(qǐng)日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者孫遠(yuǎn)明, 徐振林, 李麗華, 楊金易, 沈玉棟, 王弘, 雷紅濤 申請(qǐng)人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)