專利名稱：金標(biāo)試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型屬于免疫化學(xué)檢測領(lǐng)域，具體來說，涉及一種金標(biāo)試紙條，即一種借助 膠體金標(biāo)記顯色的免疫層析反應(yīng)試紙條。
背景技術(shù)：
膠體金是一種常用的標(biāo)記技術(shù)，是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一 種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)，有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。近年已在各種生物學(xué)研究中廣泛使用。在臨床 使用的免疫印跡技術(shù)幾乎都使用其標(biāo)記。同時(shí)在流式、電鏡、免疫、分子生物學(xué)以至生物芯 片中都可能例用到。1971年Faulk和Taytor將膠體金引入免疫化學(xué)，此后免疫膠體金技術(shù)作為一 種新的免疫學(xué)方法，在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域得到了日益廣泛的應(yīng)用。目前在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng) 用主要是免疫層析法(immunochromatogra-phy)和快速免疫金滲濾法(Dot-immuogold filtration assay DIGFA)，用于檢測HBsAg、HCG和抗雙鏈DNA抗體等，具有簡單、快速、準(zhǔn) 確和無污染等優(yōu)點(diǎn)。膠體金是由氯金酸(HAuC14)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用 下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的 疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù) 電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合，由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影 響蛋白質(zhì)的生物特性。膠體金除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外，還可以與許多其它生物大分子結(jié)合，如SPA、PHA, ConA等。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合 物的免疫和生物學(xué)特性，因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué) 等領(lǐng)域。膠體金標(biāo)記，實(shí)質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸 附機(jī)理可能是膠體金顆粒表面負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)的正電荷基團(tuán)因靜電吸附而形成牢固結(jié) 合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這 種球形的粒子對蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖 蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價(jià)結(jié)合，因而在基礎(chǔ)研究和臨床實(shí) 驗(yàn)中成為非常有用的工具。免疫層析技術(shù)即是將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑 (抗體或單克隆抗體)吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛 細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動(dòng)至固定的抗原或抗 體的區(qū)域時(shí)，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶 上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條，使用十分方便。發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是提供一種金標(biāo)試紙條的制作方法，使結(jié)構(gòu)更為簡單、實(shí)用，并且使用效果更好，且成本更低，易于標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)。本實(shí)用新型所述的一種金標(biāo)試紙條，包括支撐固定粘襯層；以及載體反應(yīng)溶物 吸附層；所述的支撐固定粘襯層上粘貼所述的載體反應(yīng)溶物吸附層；所述的載體反應(yīng)溶物 吸附層從樣品端起到手柄接觸端依次為樣品吸附纖維層、用于吸附待測樣品的金標(biāo)蛋白溶 液涂層、毛細(xì)管層析反應(yīng)固相層、吸水材料層；各吸附層之間相互交疊Imm;所述的毛細(xì)管 層析反應(yīng)固相層包括在距毛細(xì)管反應(yīng)固相層中線2. 5mm近端處印制待檢物抗體或抗原的 蛋白溶液檢測印跡“一”或“ I，，的毛細(xì)管層析反應(yīng)層，即T線；以及在距中線2. 5mm遠(yuǎn)端處 印制對照印跡溶液的對照印跡“一”或“ I，，的毛細(xì)管層析反應(yīng)層，即C線。根據(jù)本實(shí)用新型所述的金標(biāo)試紙條的進(jìn)一步特征，所述的樣品吸附纖維層為玻璃 纖維或厚濾紙。根據(jù)本實(shí)用新型所述的金標(biāo)試紙條的進(jìn)一步特征，所述的毛細(xì)管層析反應(yīng)層為硝 酸纖維素反應(yīng)膜或聚偏氟乙烯反應(yīng)膜。根據(jù)本實(shí)用新型所述的金標(biāo)試紙條的進(jìn)一步特征，所述的吸水材料層為強(qiáng)吸水紙。根據(jù)本實(shí)用新型所述的金標(biāo)試紙條的進(jìn)一步特征，所述的金標(biāo)蛋白溶液涂層為在 支撐固定粘襯層樣品吸附纖維層終點(diǎn)起的一層0. 5cm寬的石蠟層，其上劃出1 2條金標(biāo) 蛋白溶液線。本實(shí)用新型的創(chuàng)新之處在于將傳統(tǒng)的金標(biāo)試紙條的金標(biāo)結(jié)合墊去除，將金標(biāo)記 的抗體或抗原直接噴涂于支撐固定粘襯層的固定區(qū)域上，這樣既省去了金標(biāo)結(jié)合墊，更容 易標(biāo)準(zhǔn)控制，又使金標(biāo)物的移行更為干凈、徹底。本實(shí)用新型所述的一種金標(biāo)試紙條與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)檢測快速檢測時(shí)間只需3min，能夠滿足現(xiàn)場檢測的需要；(2)檢測準(zhǔn)確率高，特異性強(qiáng)消線干凈，靈敏度高，尤其適用于競爭法。(3)攜帶方便，操作簡單不限場所，無需專業(yè)人員均可即時(shí)進(jìn)行檢測。(4)生產(chǎn)工藝簡單，容易標(biāo)準(zhǔn)化控制去除了傳統(tǒng)的金標(biāo)結(jié)合墊，省去了繁瑣的粘 貼步驟，噴涂劃線比使用玻璃纖維吸附金標(biāo)蛋白溶液更容易質(zhì)量控制，并且成本更低。(5)檢測試紙條在常溫下即可保存，無需特殊的儀器設(shè)備，保存期可達(dá)1年，且重 復(fù)性好。本實(shí)用新型所述的金標(biāo)試紙條可用于快速檢測各種組織、血液、體液、排泄物、飼 料等中某物質(zhì)的定性或定量分析。

圖1為金標(biāo)試紙條的側(cè)面結(jié)構(gòu)示意圖。圖中，1為支撐固定粘襯層；2為毛細(xì)管層 析反應(yīng)固相層；3為金標(biāo)蛋白溶液涂層；4為樣品吸附纖維層；5為吸水材料層。圖2為金標(biāo)試紙條的正面結(jié)果示意圖。圖中，6為檢測印跡(T線)；7為對照印跡 (C 線)。圖3為支撐固定粘襯劃線示意圖。圖中，8為20mm處；9為25mm處；10為45mm處， 劃3條撕開線。
具體實(shí)施方式
本實(shí)用新型所述的一種金標(biāo)試紙條，如圖1至圖2所示，包括支撐固定粘襯層1 ； 以及載體反應(yīng)溶物吸附層；所述的支撐固定粘襯層上粘貼所述的載體反應(yīng)溶物吸附層；所 述的載體反應(yīng)溶物吸附層從樣品端起到手柄接觸端依次為樣品吸附纖維層4、用于吸附待 測樣品的金標(biāo)蛋白溶液涂層3、毛細(xì)管層析反應(yīng)固相層2、吸水材料層5 ；各吸附層之間相互 交疊Imm ；所述的毛細(xì)管層析反應(yīng)固相層2包括在距毛細(xì)管反應(yīng)固相層中線2. 5mm近端處 印制待檢物抗體或抗原的蛋白溶液檢測印跡“一”或“ I，，的毛細(xì)管層析反應(yīng)層，即T線6 ；以及在距中線2. 5mm遠(yuǎn)端處印制對照印跡溶液的對照印跡“一”或“ |，，的毛細(xì)管層析反應(yīng) 層，即C線7。要制成本實(shí)用新型所述的金標(biāo)試紙條，首先需要有待檢測物的抗體，配制膠體金 溶液，將納米金標(biāo)記到抗體上，其次將被檢測物作為抗原的蛋白溶液用于印制檢測印跡(T 線)，再制備能特異結(jié)合金標(biāo)抗體的對照印跡溶液，用于印制對照印跡(C線)。金標(biāo)蛋白溶 液可以是單克隆抗體、多克隆抗體、SPA、SPG等一些生物大分子的含有緩沖保護(hù)劑的膠體金 顆粒標(biāo)記的復(fù)合物。T線層可以是任何能與金標(biāo)蛋白溶液有結(jié)合反應(yīng)的蛋白物質(zhì)；C線層為 另一能與金標(biāo)蛋白溶液起結(jié)合反應(yīng)的蛋白物質(zhì)，但與T線層是不同的結(jié)合位點(diǎn)。下面將結(jié)合具體實(shí)施例——克倫特羅金標(biāo)試紙條，進(jìn)一步闡述本實(shí)用新型。應(yīng)理 解，這些實(shí)施例僅用于說明本實(shí)用新型而不用于限制本實(shí)用新型的范圍，下列實(shí)施例中未 提及具體實(shí)驗(yàn)方法。通常按照常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行。實(shí)施例材料(1)鹽酸克倫特羅單克隆抗體本室制備；(2)鹽酸克倫特羅-BSA偶聯(lián)物本室制備；(3)山羊抗小鼠IgG抗體市場購買；(4)硝酸纖維素反應(yīng)膜美國Millipore公司生產(chǎn)，型號2. 5cm, 135s ；(5)玻璃纖維上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，規(guī)格SB06 ；(6)吸水紙上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，規(guī)格FB08 ；(7)支撐固定粘襯上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，規(guī)格60mmX300mm制備(1)支撐固定粘襯廠家劃好不干膠撕開線，見圖3。(2)撕開圖3中的8、9線之間的不干膠層，用5mm寬的排筆刷一層石蠟，37°C干燥；(3)用氯金酸燒制膠體金溶液，使金顆粒大小為40nm左右；(4)將鹽酸克倫特羅單克隆抗體用燒制好的膠體金標(biāo)記；(5)用上海金標(biāo)生物有限公司的金標(biāo)劃膜儀，將標(biāo)記好的克倫特羅金標(biāo)溶液劃于 支撐固定粘襯的石蠟涂層上，劃2條線。優(yōu)選的是，所述的金標(biāo)蛋白溶液涂層為在支撐固定 粘襯層樣品吸附纖維層終點(diǎn)起噴一層0. 5cm寬的石蠟，干燥后，再用劃線儀在石蠟層上劃 出1 2條金標(biāo)蛋白溶液線，干燥。(6)撕開圖3中9、10之間的不干膠層，將硝酸纖維素反應(yīng)膜沿圖3中的8、10沿 線粘貼好。在本實(shí)用新型中貼膜的方法分為有背襯和無背襯兩種，有背襯的膜要反過來貼，即將硝酸纖維素的一面貼于支撐固定粘襯層，背襯朝上；無背襯的膜可按傳統(tǒng)的貼膜方式。 無背襯反應(yīng)膜可按常規(guī)法貼膜。(7)將鹽酸克倫特羅-BSA偶聯(lián)物溶液用上海金標(biāo)生物公司的金標(biāo)劃膜儀劃到圖2 中的6位置上；將山羊抗小鼠IgG抗體劃到圖2中的7位置上，間距為5111111，371干燥30111土11。(8)撕去圖3中10起點(diǎn)的不干膠層，將吸水紙粘貼于上面，并壓緊，注意與硝酸纖 維素膜交疊1mm。(9)撕去圖3中8沿線的不干膠層，將玻璃纖維貼于上面。注 意與硝酸纖維素膜交 疊1mm，壓緊，即告完成。
權(quán)利要求一種金標(biāo)試紙條，其特征在于，包括支撐固定粘襯層；以及載體反應(yīng)溶物吸附層；所述的支撐固定粘襯層上粘貼所述的載體反應(yīng)溶物吸附層；所述的載體反應(yīng)溶物吸附層從樣品端起到手柄接觸端依次為樣品吸附纖維層、用于吸附待測樣品的金標(biāo)蛋白溶液涂層、毛細(xì)管層析反應(yīng)固相層、吸水材料層；各吸附層之間相互交疊1mm；所述的毛細(xì)管層析反應(yīng)固相層包括在距毛細(xì)管反應(yīng)固相層中線2.5mm近端處印制待檢物抗體或抗原的蛋白溶液檢測印跡“-”或“|”的毛細(xì)管層析反應(yīng)層，即T線；以及在距中線2.5mm遠(yuǎn)端處印制對照印跡溶液的對照印跡“-”或“|”的毛細(xì)管層析反應(yīng)層，即C線。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金標(biāo)試紙條，其特征在于所述的樣品吸附纖維層為玻璃纖 維或厚濾紙。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金標(biāo)試紙條，其特征在于所述的毛細(xì)管層析反應(yīng)層為硝酸 纖維素反應(yīng)膜或聚偏氟乙烯反應(yīng)膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金標(biāo)試紙條，其特征在于所述的吸水材料層為強(qiáng)吸水紙。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金標(biāo)試紙條，其特征在于所述的金標(biāo)蛋白溶液涂層為在支 撐固定粘襯層樣品吸附纖維層終點(diǎn)起的一層0. 5cm寬的石蠟層，其上劃出1 2條金標(biāo)蛋 白溶液線。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種金標(biāo)試紙條，包括支撐固定粘襯層以及載體反應(yīng)溶物吸附層；支撐固定粘襯層上粘貼載體反應(yīng)溶物吸附層；載體反應(yīng)溶物吸附層從樣品端起到手柄接觸端依次為樣品吸附纖維層、用于吸附待測樣品的金標(biāo)蛋白溶液涂層、毛細(xì)管層析反應(yīng)固相層、吸水材料層；各吸附層之間相互交疊1mm；毛細(xì)管層析反應(yīng)固相層包括在距毛細(xì)管反應(yīng)固相層中線2.5mm近端處印制待檢物抗體或抗原的蛋白溶液檢測印跡“-”或“|”的毛細(xì)管層析反應(yīng)層，即T線；以及在距中線2.5mm遠(yuǎn)端處印制對照印跡溶液的對照印跡“-”或“|”的毛細(xì)管層析反應(yīng)層，即C線。本實(shí)用新型將傳統(tǒng)的金標(biāo)試紙條的金標(biāo)結(jié)合墊去除，使結(jié)構(gòu)更為簡單、實(shí)用，并且使用效果更好。
文檔編號G01N33/558GK201555851SQ20092026385
公開日2010年8月18日 申請日期2009年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月1日
發(fā)明者曾令虎 申請人:廣州弗賽生物科技有限公司