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一種快速檢測奶油餅干中三聚氰胺的方法

文檔序號(hào):6153254閱讀:325來源:國知局
專利名稱:一種快速檢測奶油餅干中三聚氰胺的方法
專利說明一種快速檢測奶油餅干中三聚氰胺的方法 發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明屬于食品安全檢測領(lǐng)域,具體涉及食品中有害殘留物的檢測方法,特別是涉及一種快速檢測奶油餅干中三聚氰胺的方法領(lǐng)域。

背景技術(shù)
三聚氰胺(Melamine,MEL),學(xué)名1,3,5-三氨基-2,4,6-三嗪(1,3,5-Triamine-2,4,6-Triazine),分子式C3N3(NH2)3,分子量126.12。簡稱三胺、又稱2,4,6-三氨基脲、蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺等,白色結(jié)晶粉末,無味,是一種三嗪類含氮雜環(huán)化合物,重要的有機(jī)化工原料,廣泛用于塑料、涂料、粘合劑、食品包裝材料、消毒劑、化肥和殺蟲劑的生產(chǎn)。三聚氰胺最主要的用途是作為生產(chǎn)三聚氰胺甲醛樹脂(MF)的原料。由于食品和飼料工業(yè)蛋白質(zhì)含量測試方法的缺陷,三聚氰胺也常被不法商人用作食品添加劑,以提升食品檢測中的蛋白質(zhì)含量指標(biāo),因此三聚氰胺也被人稱為“蛋白精”。資料表明,三聚氰胺可能從環(huán)境、食品包裝材料等途徑進(jìn)入到食品中,其含量很低。三聚氰胺不是食品原料,也不是食品添加劑,禁止人為添加到食品中。
蛋白質(zhì)主要由氨基酸組成,其含氮量一般不超過30%,而三聚氰胺的分子式含氮量為66.7%左右。通用的蛋白質(zhì)測試方法“凱氏定氮法”是通過測出含氮量來估算蛋白質(zhì)含量,因此,添加三聚氰胺會(huì)使得食品的蛋白質(zhì)測試含量偏高,從而使劣質(zhì)食品通過食品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的測試。但是食用添加了三聚氰胺的食品,會(huì)導(dǎo)致中毒和腎結(jié)石。2007年,美國報(bào)道了寵物貓、狗因食入含三聚氰胺飼料而死亡的事件,事后調(diào)查表明摻雜了6.6%三聚氰胺的小麥蛋白粉是寵物食品導(dǎo)致中毒的原因。隨后美國食品藥品管理局(FDA)制訂了相應(yīng)的檢驗(yàn)方法。2008年9月11日,有關(guān)部門披露,某些奶粉中含有三聚氰胺,導(dǎo)致了一些嬰幼兒因食用含三聚氰胺奶粉而出現(xiàn)腎結(jié)石癥狀,少數(shù)嬰幼兒搶救無效而死亡。隨后在一些液體奶、乳制品及含乳食品中也檢出三聚氰胺,給整個(gè)食品行業(yè)帶來巨大的沖擊,社會(huì)影響極壞。在檢出三聚氰胺的產(chǎn)品中,石家莊三鹿牌嬰幼兒配方奶粉三聚氰胺含量很高,其中最高的達(dá)2563mg/kg。2008年10月,國家有關(guān)部門參考美國食品藥品管理局(FDA)和美國食品化學(xué)品法典(FCC)三聚氰胺檢測方法,制定了《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》國家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T223888-2008)。2008年10月7日,衛(wèi)生部等5部門公布了乳制品及含乳食品中三聚氰胺臨時(shí)管理限量值,含乳15%以上的食品中三聚氰胺的限量值為2.5mg/kg,高于2.5mg/kg的產(chǎn)品一律不得銷售。
測定三聚氰胺的方法有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)。HPLC的靈敏度較低且無法提供結(jié)構(gòu)信息,一般常作為篩選方法;GC-MS、HPLC-MS/MS能夠進(jìn)行確證分析。GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》規(guī)定了原料乳與乳制品中三聚氰胺的三種測定方法,即HPLC法、GC-MS法、HPLC-MS/MS法。上述方法均是測定原料乳與乳制品、飼料、寵物食品、植物源性蛋白質(zhì)等中的三聚氰胺,測定奶油餅干中三聚氰胺的方法未見公開報(bào)道。
目前公開報(bào)道檢測食品中的三聚氰胺主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)檢測方法,但是現(xiàn)有三聚氰胺的檢測方法樣品前處理繁瑣,需耗用大量試劑、費(fèi)時(shí)、成本高,而且每次檢測樣品有限,不適應(yīng)大量標(biāo)本的篩查,也不適合現(xiàn)場快速的檢測,不能高通量的檢測樣品中三聚氰胺。因此,探索和研究簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、低成本、耐用的檢測食品中三聚氰胺的方法,對(duì)于維護(hù)食品安全,保護(hù)人民的身體健康和消費(fèi)者的合法權(quán)益,促進(jìn)食品行業(yè)的快速發(fā)展均具有重要意義。


發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)目前未見公開報(bào)道測定奶油餅干中三聚氰胺的方法,現(xiàn)有三聚氰胺的檢測方法樣品前處理繁瑣,需耗用大量試劑、費(fèi)時(shí)、成本高,而且每次檢測樣品有限,不適應(yīng)大量標(biāo)本的篩查,也不適合現(xiàn)場快速的檢測,不能高通量的檢測樣品中三聚氰胺的缺陷。
本發(fā)明的目的在于提供了一種測定奶油餅干中三聚氰胺的簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、低成本、耐用的確證和定量方法。
本發(fā)明具體提供了一種測定奶油餅干中三聚氰胺的確證和定量方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案通過建立了GC-MS法測定奶油餅干中三聚氰胺的方法,用乙酸-乙腈-水溶液超聲提取奶油餅干中的三聚氰胺,離心后過濾,濾液經(jīng)混合型陽離子交換固相萃取柱凈化,氮?dú)獯蹈?,微波加熱衍生化反?yīng),縮短反應(yīng)時(shí)間,通過對(duì)選擇離子監(jiān)測模式選擇離子的優(yōu)化,消除基質(zhì)影響,增強(qiáng)抗干擾能力,降低檢測限和提高定量重現(xiàn)性。從而建立了一種測定奶油餅干中三聚氰胺簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、低成本、耐用的確證和定量方法。
本發(fā)明具體提供了一種測定奶油餅干中三聚氰胺的方法步驟如下 稱取1.00克奶油餅干樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管,加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖,乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1∶70∶29配制,超聲提取10-30min,4500r/min離心5-10min,過濾后經(jīng)固相萃取柱依次用3-5mL的甲醇活化,3-5mL水平衡,準(zhǔn)確移取4-6mL濾液上柱,依次用3-5mL的0.1-0.3mol/L鹽酸溶液,3-5mL的甲醇淋洗,用吸耳球?qū)⑿≈蹈?,?-5mL5%氨水甲醇洗脫,用5mL刻度試管收集洗脫液,在45-75℃氮吹濃縮至干后,加入200μL吡啶和200μL衍生化試劑,用玻璃磨口塞密封,在800W微波高檔條件下反應(yīng)2-8min,冷卻,轉(zhuǎn)移至1.5mL高回收率樣品瓶中,供氣相色譜-質(zhì)譜測定。
本領(lǐng)域所熟知,三聚氰胺微溶于水(3.1g/L,20℃)、乙醇、弱酸和弱堿等,可溶于甲醇、吡啶、二甲基亞砜,水溶液呈弱堿性。三聚氰胺屬于極性化合物、堿性化合物,因此提取溶劑一般都選用稀酸溶液、有機(jī)溶劑和水的混合溶液、極性較強(qiáng)的有機(jī)溶劑或緩沖溶液。本發(fā)明選擇乙酸-乙腈-水溶液為提取溶劑,加入乙酸有利于提高三聚氰胺萃取率,加入乙腈有利于沉淀水溶性蛋白,減少干擾,采用的乙酸-乙腈-水溶液可有效的沉淀奶油餅干樣品中的蛋白質(zhì)和部分脂肪,過濾迅速,濾液澄清。
本發(fā)明通過對(duì)選擇離子監(jiān)測模式(SIM)離子選擇的優(yōu)化,有效消除復(fù)雜基體干擾三聚氰胺的特征離子為99、171、197、285、327、342,GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》中GC-MS法使用的特征離子為99、171、327、342。經(jīng)對(duì)奶油餅干加標(biāo)樣品的分析,樣品基質(zhì)中含有99、171離子碎片,對(duì)定量測定干擾大,本發(fā)明最終選定三聚氰胺的特征離子為197、285、327、342離子組合來定量和確證。
本領(lǐng)域熟知,衍生化反應(yīng)一般為70℃下加熱45min,本發(fā)明經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)確定采用在微波高檔800W條件下,衍生化5min,進(jìn)一步縮短了反應(yīng)時(shí)間。
通過實(shí)施本發(fā)明技術(shù)方案,實(shí)現(xiàn)本發(fā)明內(nèi)容,可以達(dá)到以下有益效果 1.高回收率本發(fā)明中采用乙酸-乙腈-水溶液提取奶油餅干樣品中的三聚氰胺,使得三聚氰胺以正離子態(tài)被吸附在陽離子交換柱上,用0.1mol/L鹽酸代替水來淋洗,既可以使三聚氰胺保持正離子態(tài)被吸附在陽離子交換柱上,又可以有效除去樣品中的水溶性雜質(zhì)、無機(jī)鹽和非離子化的脂溶性雜質(zhì),可減少進(jìn)樣口和離子源的污染,三聚氰胺回收率介于87-102%。
2.精確度高相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于12.4%。
3.樣品前處理時(shí)間短2人在180min內(nèi)可處理30份樣品,可實(shí)現(xiàn)對(duì)奶油餅干樣品中三聚氰胺進(jìn)行高通量檢測。
4.沉淀蛋白質(zhì)效果好本發(fā)明提供的檢測方法中,創(chuàng)造性的選擇了乙酸-乙腈-水溶液為提取溶劑,加入乙酸有利于提高三聚氰胺萃取率,加入乙腈有利于沉淀水溶性蛋白,減少干擾,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),乙酸-乙腈-水溶液可有效的沉淀牛奶樣品中的蛋白質(zhì)和部分脂肪,過濾迅速,濾液澄清。
5.凈化效果好樣品加標(biāo)譜圖“干凈”,在三聚氰胺衍生物出峰時(shí)間無干擾,利于準(zhǔn)確確證和定量。
6.樣品稱樣量少,溶劑使用量少,污染小,環(huán)保樣品稱樣量僅為1克,通過對(duì)提取溶劑的篩選和優(yōu)化,選擇出提取效率最佳的溶劑組合,每份奶油餅干樣品溶劑使用量僅為22mL,且不使用含氯化物溶劑,廢棄物少。
7.流程簡單操作性強(qiáng),易于掌握,無需良好訓(xùn)練和較高技能便能很好完成。
8.使用很少的玻璃器皿只需使用15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管、5mL刻度試管、1.5mL高回收率樣品瓶。
9.樣品制備過程中所使用裝置簡單只需小型超聲波清洗器、小型離心機(jī)、12孔固相萃取裝置、氮吹儀、渦旋混合器等,便于推廣應(yīng)用。
10.所需空間小,在小型實(shí)驗(yàn)室便可完成樣品奶油餅干的前處理可在10平方的房間內(nèi)完成,易于實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場檢驗(yàn)。
11.成本低使用的試劑為實(shí)驗(yàn)室常用試劑,價(jià)格便宜,易于采購,用量少。
12.本發(fā)明通過對(duì)選擇離子監(jiān)測(SIM)模式離子選擇的優(yōu)化,有效消除復(fù)雜基體干擾選定三聚氰胺的特征離子為197、285、327、342,采用上述離子組合來定量和確證,為該發(fā)明為首創(chuàng)。
13.本發(fā)明首次采用微波加熱衍生化反應(yīng),縮短反應(yīng)時(shí)間衍生化反應(yīng)一般為70℃下加熱45min,本發(fā)明經(jīng)過試驗(yàn)確定采用在微波高檔800W條件下,衍生化5min,大大縮短了反應(yīng)時(shí)間,為該發(fā)明為首創(chuàng)。



圖1所示為三聚氰胺衍生物質(zhì)譜圖; 圖2所示為添加2.5mg/kg三聚氰胺奶油餅干樣品SIM質(zhì)譜圖。

具體實(shí)施例方式 下面,舉實(shí)施例說明本發(fā)明,但是,本發(fā)明并不限于下述的實(shí)施例。另外,在下述的說明中,如無特別說明,%皆指重量百分比。
本發(fā)明中設(shè)備和材料有 Agilent7890A/5975C氣相色譜-質(zhì)譜儀(美國Agilent公司),配備7683自動(dòng)進(jìn)樣器、增強(qiáng)型化學(xué)工作站;18790干熱樣品濃縮裝置(美國Pierce公司);微波爐(格蘭仕公司,800W);小型離心機(jī);超聲波清洗器;1.5mL螺紋口高回收率樣品瓶(美國Agilent公司,P/N5183-2030)。
三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品純度為99.5%,Chemservice公司提供;

混合型陽離子交換固相萃取柱,60mg/3mL,北京振翔公司;衍生化試劑N,O-雙三甲基-硅基三氟乙酰胺(BSTFA)+1%三甲基氯硅烷(TMCS),德國Macherey Nagel公司;吡啶(優(yōu)級(jí)純);甲醇、乙腈(色譜純);冰乙酸(分析純);鹽酸(分析純);氨水(分析純);水為超純水。
實(shí)施例一 稱取1.00克奶油餅干樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管,加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖,乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1∶70∶29配制,超聲提取10min,4500r/min離心5min,過濾后經(jīng)固相萃取柱依次用3mL的甲醇活化,3mL水平衡,準(zhǔn)確移取4mL濾液上柱,依次用3mL的0.1mol/L鹽酸溶液,3mL的甲醇淋洗,用吸耳球?qū)⑿≈蹈?,?mL5%氨水甲醇洗脫,用5mL刻度試管收集洗脫液,在45℃氮吹濃縮至干后,加入200μL吡啶和200μL衍生化試劑,用玻璃磨口塞密封,在800W微波高檔條件下反應(yīng)2min,冷卻,轉(zhuǎn)移至1.5mL高回收率樣品瓶中,供氣相色譜-質(zhì)譜測定。
采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺,使得三聚氰胺以正離子態(tài)被吸附在陽離子交換柱上,用0.1mol/L鹽酸代替水來淋洗,既可以使三聚氰胺保持正離子態(tài)被吸附在陽離子交換柱上,又可以有效除去樣品中的水溶性雜質(zhì)、無機(jī)鹽和非離子化的脂溶性雜質(zhì),可減少進(jìn)樣口和離子源的污染,獲得高的回收率,三聚氰胺回收率達(dá)87%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于12.4%,精確度高;本實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)2人在180min內(nèi)可處理30份樣品,實(shí)現(xiàn)了對(duì)樣品中三聚氰胺進(jìn)行高通量檢測,樣品前處理時(shí)間短;選擇乙酸-乙腈-水溶液為提取溶劑,過濾迅速,濾液澄清,沉淀蛋白質(zhì)效果好;樣品加標(biāo)譜圖“干凈”,在三聚氰胺衍生物出峰時(shí)間無干擾,利于準(zhǔn)確確證和定量,凈化效果好;不使用含氯化物溶劑,每份樣品溶劑使用量僅為22mL,樣品稱樣量少,溶劑使用量少,廢棄物少,污染小,環(huán)保;使用很少的玻璃器皿,只需使用15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管、5mL刻度試管、1.5mL高回收率樣品瓶;樣品制備過程中所使用裝置簡單,只需小型超聲波清洗器、小型離心機(jī)、12孔固相萃取裝置、氮吹儀、渦旋混合器等,便于推廣應(yīng)用;所需空間小,在小型實(shí)驗(yàn)室便可完成樣品的前處理可在10平方的房間內(nèi)完成,易于實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場檢驗(yàn);使用的試劑為實(shí)驗(yàn)室常用試劑,價(jià)格便宜,易于采購,用量少,成本低。
本發(fā)明通過對(duì)選擇離子監(jiān)測(SIM)模式離子選擇的優(yōu)化,有效消除復(fù)雜基體干擾三聚氰胺的特征離子為99、171、197、285、327、342,GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》中GC-MS法使用的特征離子為99、171、327、342。經(jīng)對(duì)奶油餅干加標(biāo)樣品的分析,樣品基質(zhì)中含有99、171離子碎片,對(duì)定量測定干擾大,本最終選定三聚氰胺的特征離子為197、285、327、342,采用上述離子組合來定量和確證;本發(fā)明采用微波加熱衍生化反應(yīng),大大縮短了反應(yīng)時(shí)間,以上兩點(diǎn)為該發(fā)明為首創(chuàng)。
實(shí)施例二 稱取1.00克奶油餅干樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管,加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖,乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1∶70∶29配制,超聲提取30min,4500r/min離心10min,過濾后經(jīng)固相萃取柱依次用5mL的甲醇活化,5mL水平衡,準(zhǔn)確移取6mL濾液上柱,依次用5mL的0.3mol/L鹽酸溶液,5mL的甲醇淋洗,用吸耳球?qū)⑿≈蹈?,?mL5%氨水甲醇洗脫,用5mL刻度試管收集洗脫液,在75℃氮吹濃縮至干后,加入200μL吡啶和200μL衍生化試劑,用玻璃磨口塞密封,在800W微波高檔條件下反應(yīng)8min,冷卻,轉(zhuǎn)移至1.5mL高回收率樣品瓶中,供氣相色譜-質(zhì)譜測定。
采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺,既可以使三聚氰胺保持正離子態(tài)被吸附在陽離子交換柱上,又可以有效除去樣品中的水溶性雜質(zhì)、無機(jī)鹽和非離子化的脂溶性雜質(zhì),可減少進(jìn)樣口和離子源的污染,獲得高的回收率,三聚氰胺回收率達(dá)102%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于12.4%,精確度高,且過濾迅速,濾液澄清,沉淀蛋白質(zhì)效果好。
本實(shí)驗(yàn)2人在180min內(nèi)可處理30份樣品,實(shí)現(xiàn)了對(duì)樣品中三聚氰胺進(jìn)行高通量檢測,樣品前處理時(shí)間短;樣品加標(biāo)譜圖“干凈”,在三聚氰胺衍生物出峰時(shí)間無干擾,利于準(zhǔn)確確證和定量,凈化效果好;不使用含氯化物溶劑,每份樣品溶劑使用量僅為22mL,樣品稱樣量少,溶劑使用量少,廢棄物少,污染小,環(huán)保;使用很少的玻璃器皿,只需使用15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管、5mL刻度試管、1.5mL高回收率樣品瓶;樣品制備過程中所使用裝置簡單,只需小型超聲波清洗器、小型離心機(jī)、12孔固相萃取裝置、氮吹儀、渦旋混合器等,便于推廣應(yīng)用;所需空間小,在小型實(shí)驗(yàn)室便可完成樣品的前處理可在10平方的房間內(nèi)完成,易于實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場檢驗(yàn);使用的試劑為實(shí)驗(yàn)室常用試劑,價(jià)格便宜,易于采購,用量少,成本低。
本發(fā)明通過選擇離子監(jiān)測(SIM)模式離子選擇的優(yōu)化,有效消除復(fù)雜基體干擾,經(jīng)對(duì)奶油餅干加標(biāo)樣品的分析,樣品基質(zhì)中含有99、171離子碎片,對(duì)定量測定干擾大,選定三聚氰胺的特征離子為197、285、327、342組合來定量和確證。
實(shí)施例三 稱取1.00克奶油餅干樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管,加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖,乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1∶70∶29配制,超聲提取20min,4500r/min離心8min,過濾后經(jīng)固相萃取柱依次用4mL的甲醇活化,4mL水平衡,準(zhǔn)確移取5mL濾液上柱,依次用4mL的0.2mol/L鹽酸溶液,4mL的甲醇淋洗,用吸耳球?qū)⑿≈蹈?,?mL5%氨水甲醇洗脫,用5mL刻度試管收集洗脫液,在60℃氮吹濃縮至干后,加入200μL吡啶和200μL衍生化試劑,用玻璃磨口塞密封,在800W微波高檔條件下反應(yīng)4min,冷卻,轉(zhuǎn)移至1.5mL高回收率樣品瓶中,供氣相色譜-質(zhì)譜測定。
本實(shí)驗(yàn)采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺獲得高的回收率達(dá)90%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于12.4%,精確度高,且過濾迅速,濾液澄清,沉淀蛋白質(zhì)效果好;實(shí)現(xiàn)了對(duì)樣品中三聚氰胺進(jìn)行高通量檢測,樣品前處理時(shí)間短;樣品加標(biāo)譜圖“干凈”,在三聚氰胺衍生物出峰時(shí)間無干擾,利于準(zhǔn)確確證和定量,凈化效果好;不使用含氯化物溶劑,溶劑使用量少,污染小;樣品制備過程中所使用裝置簡單,所需空間小,在小型實(shí)驗(yàn)室便可完成,便于推廣應(yīng)用和實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場檢驗(yàn);使用的試劑為實(shí)驗(yàn)室常用試劑,價(jià)格便宜,易于采購,用量少,成本低;本發(fā)明通過選擇離子監(jiān)測(SIM)模式選擇離子的優(yōu)化,消除基質(zhì)影響,增強(qiáng)抗干擾能力,降低檢測限和提高定量重現(xiàn)性。
實(shí)施例四 稱取1.00克奶油餅干樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管,加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖,乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1∶70∶29配制,超聲提取25min,4500r/min離心9min,過濾后經(jīng)固相萃取柱依次用4mL的甲醇活化,3.5mL水平衡,準(zhǔn)確移取4.5mL濾液上柱,依次用3.5mL的0.2mol/L鹽酸溶液,3.5mL的甲醇淋洗,用吸耳球?qū)⑿≈蹈桑?mL5%氨水甲醇洗脫,用5mL刻度試管收集洗脫液,在46℃氮吹濃縮至干后,加入200μL吡啶和200μL衍生化試劑,用玻璃磨口塞密封,在800W微波高檔條件下反應(yīng)3min,冷卻,轉(zhuǎn)移至1.5mL高回收率樣品瓶中,供氣相色譜-質(zhì)譜測定。
本實(shí)驗(yàn)采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺獲得高的回收率達(dá)88%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于12.4%,精確度高,且過濾迅速,濾液澄清,沉淀蛋白質(zhì)效果好;實(shí)現(xiàn)了對(duì)樣品中三聚氰胺進(jìn)行高通量檢測,樣品前處理時(shí)間短;樣品加標(biāo)譜圖“干凈”,在三聚氰胺衍生物出峰時(shí)間無干擾,利于準(zhǔn)確確證和定量,凈化效果好;不使用含氯化物溶劑,溶劑使用量少,污染小;樣品制備過程中所使用裝置簡單,所需空間小,在小型實(shí)驗(yàn)室便可完成,便于推廣應(yīng)用和實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場檢驗(yàn);使用的試劑為實(shí)驗(yàn)室常用試劑,價(jià)格便宜,易于采購,用量少,成本低;本發(fā)明通過選擇離子監(jiān)測(SIM)模式選擇離子的優(yōu)化,消除基質(zhì)影響,增強(qiáng)抗干擾能力,降低檢測限和提高定量重現(xiàn)性。
實(shí)施例五 稱取1.00克奶油餅干樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管,加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖,乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1∶70∶29配制,超聲提取29min,4500r/min離心9min,過濾后經(jīng)固相萃取柱依次用5mL的甲醇活化,5mL水平衡,準(zhǔn)確移取5.5mL濾液上柱,依次用4.5mL的0.3mol/L鹽酸溶液,5mL的甲醇淋洗,用吸耳球?qū)⑿≈蹈?,?mL5%氨水甲醇洗脫,用5mL刻度試管收集洗脫液,在74℃氮吹濃縮至干后,加入200μL吡啶和200μL衍生化試劑,用玻璃磨口塞密封,在800W微波高檔條件下反應(yīng)7min,冷卻,轉(zhuǎn)移至1.5mL高回收率樣品瓶中,供氣相色譜-質(zhì)譜測定。
本實(shí)驗(yàn)采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺獲得高的回收率達(dá)101%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于12.4%,精確度高,且過濾迅速,濾液澄清,沉淀蛋白質(zhì)效果好;實(shí)現(xiàn)了對(duì)樣品中三聚氰胺進(jìn)行高通量檢測,樣品前處理時(shí)間短;樣品加標(biāo)譜圖“干凈”,在三聚氰胺衍生物出峰時(shí)間無干擾,利于準(zhǔn)確確證和定量,凈化效果好;不使用含氯化物溶劑,溶劑使用量少,污染小;樣品制備過程中所使用裝置簡單,所需空間小,在小型實(shí)驗(yàn)室便可完成,便于推廣應(yīng)用和實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場檢驗(yàn);使用的試劑為實(shí)驗(yàn)室常用試劑,價(jià)格便宜,易于采購,用量少,成本低;本發(fā)明通過選擇離子監(jiān)測(SIM)模式選擇離子的優(yōu)化,消除基質(zhì)影響,增強(qiáng)抗干擾能力,降低檢測限和提高定量重現(xiàn)性。
實(shí)施例六 稱取1.00克奶油餅干樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管,加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖,乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1∶70∶29配制,超聲提取11min,4500r/min離心7min,過濾后經(jīng)固相萃取柱依次用3mL的甲醇活化,3mL水平衡,準(zhǔn)確移取4.5mL濾液上柱,依次用3mL的0.1mol/L鹽酸溶液,3mL的甲醇淋洗,用吸耳球?qū)⑿≈蹈?,?mL5%氨水甲醇洗脫,用5mL刻度試管收集洗脫液,在50℃氮吹濃縮至干后,加入200μL吡啶和200μL衍生化試劑,用玻璃磨口塞密封,在800W微波高檔條件下反應(yīng)6min,冷卻,轉(zhuǎn)移至1.5mL高回收率樣品瓶中,供氣相色譜-質(zhì)譜測定。
本實(shí)驗(yàn)采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺獲得高的回收率達(dá)95%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于12.4%,精確度高,且過濾迅速,濾液澄清,沉淀蛋白質(zhì)效果好;實(shí)現(xiàn)了對(duì)樣品中三聚氰胺進(jìn)行高通量檢測,樣品前處理時(shí)間短;樣品加標(biāo)譜圖“干凈”,在三聚氰胺衍生物出峰時(shí)間無干擾,利于準(zhǔn)確確證和定量,凈化效果好;不使用含氯化物溶劑,溶劑使用量少,污染?。粯悠分苽溥^程中所使用裝置簡單,所需空間小,在小型實(shí)驗(yàn)室便可完成,便于推廣應(yīng)用和實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場檢驗(yàn);使用的試劑為實(shí)驗(yàn)室常用試劑,價(jià)格便宜,易于采購,用量少,成本低;本發(fā)明通過選擇離子監(jiān)測(SIM)模式選擇離子的優(yōu)化,消除基質(zhì)影響,增強(qiáng)抗干擾能力,降低檢測限和提高定量重現(xiàn)性。
實(shí)施例七 衍生化反應(yīng)一般為70℃下加熱45min,通過實(shí)驗(yàn)微波加熱衍生化反應(yīng),固定其它條件不變,改變微波加熱時(shí)間,分別衍生2、3、4、5、6、7、8min,結(jié)果在微波高檔800W條件下,衍生化5min,三聚氰胺衍生化產(chǎn)物的相對(duì)含量最大,峰面積與在70℃下,加熱45min基本相當(dāng)。最優(yōu)選定衍生時(shí)間5min,大大縮短了反應(yīng)時(shí)間。
實(shí)施例八 參見附圖1為三聚氰胺的全掃描(SCAN)質(zhì)譜圖。選擇離子監(jiān)測(SIM)經(jīng)常被用于降低檢測限和提高定量重現(xiàn)性。SIM的離子選擇應(yīng)能有效消除復(fù)雜基體干擾,三聚氰胺的特征離子為99、171、197、285、327、342,經(jīng)對(duì)奶油餅干加標(biāo)樣品的分析,樣品基質(zhì)中含有99、171離子碎片,對(duì)定量測定干擾大,最終選定三聚氰胺的特征離子為197、285、327、342,采用上述離子組合來定量和確證,附圖2為添加2.5mg/kg三聚氰胺奶油餅干樣品SIM色譜圖,三聚氰胺的保留時(shí)間為6.958min。
實(shí)施例九 三聚氰胺的保留時(shí)間、定量離子、定性離子及定量離子與定性離子的相對(duì)豐度見表1。
定性依據(jù)進(jìn)行樣品測定時(shí),如果試樣中的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致(變化范圍在±0.5%之內(nèi));并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中,所選擇的離子均出現(xiàn),而且所選擇的離子相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)豐度相差不大于20%,則可判斷樣品中存在三聚氰胺。
定量方法外標(biāo)法定量,采用本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)可知。
表1三聚氰胺的保留時(shí)間、定量離子、定性離子及定量離子與定性離子的相對(duì)豐度 實(shí)施例十 配制三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液,三聚氰胺濃度為0.05-2.50μg/mL之間,衍生后上機(jī)測試。通過軟件計(jì)算線性范圍、相關(guān)系數(shù)。檢出限(LOD)是指信噪比(S/N)大于3時(shí)的最低檢測濃度。線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限見表2。
表2三聚氰胺線性范圍、相關(guān)系數(shù)、線性方程及檢出限測定結(jié)果 實(shí)施例十一 以不同類別的奶油餅干為樣品,做三個(gè)水平的添加試驗(yàn),分別為0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.5mg/kg,每個(gè)添加水平重復(fù)6次,方法回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差符合國內(nèi)外有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和法規(guī)的要求,見表3。
表3奶油餅干樣品三聚氰胺添加回收率測定結(jié)果(n=6)
權(quán)利要求
1、一種快速測定奶油餅干中三聚氰胺的方法,奶油餅干經(jīng)前處理后,氣相色譜-質(zhì)譜測定,選擇離子監(jiān)測模式,外標(biāo)法定量,其特征在于,所述的前處理步驟如下
稱取1.00克奶油餅干樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管,加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖,乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1∶70∶29配制,超聲提取10-30min,4500r/min離心5-10min,過濾后經(jīng)固相萃取柱依次用3-5mL的甲醇活化,3-5mL水平衡,準(zhǔn)確移取4-6mL濾液上柱,依次用3-5mL的0.1-0.3mol/L鹽酸溶液,3-5mL的甲醇淋洗,用吸耳球?qū)⑿≈蹈?,?-5mL5%氨水甲醇洗脫,用5mL刻度試管收集洗脫液,在45-75℃氮吹濃縮至干后,加入200μL吡啶和200μL衍生化試劑,用玻璃磨口塞密封,經(jīng)微波加熱衍生化反應(yīng)后轉(zhuǎn)移至樣品瓶中,供氣相色譜-質(zhì)譜測定。
2、按照權(quán)利要求1的測定奶油餅干中三聚氰胺的方法,其特征在于,所述的選擇離子監(jiān)測模式,選定三聚氰胺的特征離子為197、285、327、342離子組合來定量和確證。
3、按照權(quán)利要求1的測定奶油餅干中三聚氰胺的方法,其特征在于,所述的微波加熱衍生化反應(yīng)在微波高檔800W條件下,衍生化2-8min。
4、按照權(quán)利要求3的測定奶油餅干中三聚氰胺的方法,其特征在于,所述的衍生化5min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種快速檢測奶油餅干中三聚氰胺的方法,通過用乙酸-乙腈-水溶液超聲提取奶油餅干中的三聚氰胺,離心后過濾,濾液經(jīng)混合型陽離子交換固相萃取柱凈化,氮?dú)獯蹈?,微波加熱衍生化反?yīng),縮短反應(yīng)時(shí)間,通過對(duì)選擇離子監(jiān)測模式選擇離子的優(yōu)化,消除基質(zhì)影響,增強(qiáng)抗干擾能力,降低檢測限和提高定量重現(xiàn)性。從而建立了一種測定奶油餅干中三聚氰胺簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、低成本、耐用的確證和定量方法,廣泛應(yīng)用于奶油餅干為代表的食品中三聚氰胺的檢測技術(shù)領(lǐng)域。
文檔編號(hào)G01N30/02GK101576544SQ20091011329
公開日2009年11月11日 申請(qǐng)日期2009年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月21日
發(fā)明者李鋒格, 田延河, 忠 楊, 姚偉琴, 李世雨, 敏 蘇, 輝 竇, 朱慧萍, 胡建民 申請(qǐng)人:新疆出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
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