專利名稱：：一種燈盞花素前體脂質(zhì)體的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥品
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及燈盞花素前體脂質(zhì)體的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
：隨著脂質(zhì)體和前體脂質(zhì)體在藥劑學(xué)中的應(yīng)用，脂質(zhì)體和前體脂質(zhì)體作為藥物載體的研究己成為熱點，甜體脂質(zhì)體克服了脂質(zhì)體的穩(wěn)定性較差、聚集、沉降、融合滲漏等缺陷，因而甜體脂質(zhì)體作為藥物載體更受醫(yī)藥界的重視。包封率是脂質(zhì)體制劑(包括前提脂質(zhì)體)的重要質(zhì)量控制指標之一。脂質(zhì)體包封率的測定方法較多，有透析法、大孔吸附樹脂分離法、魚精蛋白沉淀法等，但這些包封率的測定方法存在需要的脂質(zhì)體量大、耗時較長、分離不完全等缺點。而本發(fā)明采用凝膠柱色譜法或離心法分離燈盞花素前體脂質(zhì)體與游離藥物，操作簡便易掌握，檢測準確度和精確度高，增強了燈盞花素前體脂質(zhì)體的可控性，建立了燈盞花素前體脂質(zhì)體包封率的分析方法。燈盞花素(6rew'sca貝'/7e)是從菊科飛蓬屬植物短葶巨蓬(Kr&er朋ZreKJ'scsp"s(Y朋t.y>#a/7f/-#朋》中提取的，以燈盞乙素(sci/z^Waw'/7)為主并含少量燈盞甲素(spj>e/7&-7-0-^"c"r朋We)及其它黃酮類成分的混合物。燈盞花素的藥品在治療腦梗塞、腦血栓形成、冠心病、心絞痛等心腦血管疾病的上有顯著療效。為提高燈盞花素的生物利用度，對燈盞花素前體脂質(zhì)體的研究已有一些報道。燈盞花素前體脂質(zhì)體的制備方法較多，但通常是將燈盞花素先制備成脂質(zhì)體，再進行特殊處理而制成，如凍融法、重建法、噴霧法、噴霧干燥法、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法。為了更好地控制燈盞花素前體脂質(zhì)體的質(zhì)量，本申請人(云南植物藥業(yè)有限公司)針對本公司生產(chǎn)的燈盞花素前體脂質(zhì)體藥品進行了質(zhì)量控制方面的系統(tǒng)研究，其中包封率是評價甜體脂質(zhì)體內(nèi)在質(zhì)量(包括脂質(zhì)體質(zhì)量)的重要指標和發(fā)揮療效的關(guān)鍵，在此關(guān)鍵技術(shù)指標的質(zhì)量控制方面，本申請人采用凝膠柱色譜法結(jié)合高效液相色譜法(HPLC法)或者采用離心法結(jié)合高效液相色譜法(HPLC法)對藥物進行分離及檢測，建立了對燈盞花素前體脂質(zhì)體包封率的檢測技術(shù)條件，研究出一套高質(zhì)量和行之有效的燈盞花素前體脂質(zhì)體的質(zhì)量控制方法，保證了本公司生產(chǎn)的燈盞花素前體脂質(zhì)體藥品的質(zhì)量，也為燈盞花素前體脂質(zhì)體的質(zhì)量控制提供了科學(xué)技術(shù)手段。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的針對包封率是評價燈盞花素前體脂質(zhì)體藥品的關(guān)鍵技術(shù)指標問題和克服現(xiàn)有技術(shù)中存在包封率的測定需要的脂質(zhì)體量大、耗時較長、分離不完全的缺陷，在包封率的檢測方法上做了改進，提供一種高質(zhì)量和行之有效的燈盞花素前體脂質(zhì)體的質(zhì)量控制方法，增強燈盞花素前體脂質(zhì)體的質(zhì)量可控性，保證本公司生產(chǎn)的燈盞花素前體脂質(zhì)體藥品的質(zhì)量。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的有益效果是-1、本發(fā)明采用凝膠柱色譜法或離心法分離燈盞花素前體脂質(zhì)體與游離藥物，水化后的脂質(zhì)體樣品不用稀釋即可進行分離，可降低稀釋所帶來的藥物滲漏，分離時，凝膠柱色譜法分離只需脂質(zhì)體0.5ml，分離時間需2h，離心法分離只需脂質(zhì)體5ml，分離時間需2h,而透析法進行分離，需要的脂質(zhì)體量大(50ml)，分離時間較長需8h，(趙遠黨，章一新，錢云良等5-FU變形脂質(zhì)體工藝的改進及其體外透瘢痕的實驗研究[J].中國美容整形外科雜志，2008，4，19(2):96-99.)，因此本發(fā)明大大節(jié)約了成本，節(jié)省了檢測時間。2、本發(fā)明操作簡便易掌握、快速、重現(xiàn)性好、檢測準確度和精確度高，增強了燈盞花素前體脂質(zhì)體的可控性，更好地確保了燈盞花素前體脂質(zhì)體的制劑合格。本發(fā)明方法的技術(shù)方案是由燈盞花素前體脂質(zhì)體的制備、凝膠柱色譜分離燈盞花素前體脂質(zhì)體或者離心分離燈盞花素前體脂質(zhì)體、高效液相色譜法檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體的包封率三個歩驟組成，按以下步驟進行1、燈盞花素前體脂質(zhì)體的制備按重量份數(shù)，精密稱取燈盞花素5-10份，大豆磷脂10-40份，維生素E0.5-2份，甘露醇或乳糖20-80份；將大豆磷脂、維生素E溶于無水乙醇50-2000mL中，將其注入至已配好的燈盞花素水溶液0.5-5L中，并用0.lmol/L的NaOH調(diào)PH6.8使其溶解，攪拌30min，同時減壓至真空壓為0.06kPa除去乙醇，之后加入甘露醇或乳糖攪拌溶解，即得燈盞花素脂質(zhì)體混懸液。將此混懸液按噴干條件為進口溫度120。C，流速2.0ml，min—、霧化壓力180kPa進行噴干，即得干燥、流動性好的燈盞花素前體脂質(zhì)體(粉末狀態(tài))。2、凝膠柱色譜分離燈盞花素前體脂質(zhì)體或者離心分離燈盞花素前體脂質(zhì)體(粉末狀態(tài)是前體脂質(zhì)體，水化后的混懸液即變成脂質(zhì)體)采用凝膠柱色譜分離燈盞花素前體脂質(zhì)體精密量取步驟1所制備的燈盞花素前體脂質(zhì)體粉末加純化水水化配制成10mg/ml的脂質(zhì)體混懸液，精密量取此脂質(zhì)體混懸液0.5ral滴加在交聯(lián)葡聚糖G50凝膠柱上，然后用PH6.8的磷酸鹽緩沖液(PBS液)以lml/min的流速洗脫，連續(xù)收集80ml。將洗脫液在80。C的低溫蒸干，加甲醇lml使其溶解并轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用甲醇稀釋IOO倍即得供試品溶液A,;另^^精密量取上述脂質(zhì)體混懸液0.5ml用甲醇稀釋1000倍即得供試品溶液A2。所得供試品5溶液A,和供試品溶液A2備用待檢測(供試品溶液A,用于檢測洗脫液中燈盞花素含量，即用于檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體中包封的燈盞花素藥物含量；供試品溶液&用于檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體中燈盞花素藥物總含量)。'或者采用離心分離燈盞花素甜體脂質(zhì)體精密量取歩驟1所制備的燈盞花素前體脂質(zhì)體粉末加純化水水化配制成10mg/ml的脂質(zhì)體混懸液，精密量取此脂質(zhì)體混懸液5mL，離心30min，轉(zhuǎn)速18000r/min，共離心3次，每次間隔30min，取上清液，將沉淀脂質(zhì)體用蒸餾水洗3次，每次4ml，其洗液與上清液合并，將合并后的上清液在8(TC的低溫蒸干，分別加甲醇lml使其溶解并轉(zhuǎn)移至容量瓶中用甲醇稀釋100倍即得供試品溶液K:。另外精密量取上述脂質(zhì)體混懸液0.5ml用甲醇稀釋1000倍即得供試品溶液K2。所得供試品溶液K,和供試品溶液K2備用待檢測(供試品溶液Id用于檢測上清液中的燈盞花素含量，即用于檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體中未包封的燈盞花素含量；供試品溶液K2用于檢測母液中的燈盞花素含量，即檢測燈盞花素甜體脂質(zhì)體中燈盞花素藥物總含量)。3、高效液相色譜法檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體的包封率(1)對照品溶液的配制精密稱取純度為99%以上的野黃芩苷(燈盞乙素)25mg，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋制成含1000ug/ml的貯備液。精密吸取該貯備液0.5ml，置25ml容量瓶中，流動相為甲醇-乙腈-40mmol/L10^04(磷酸調(diào)ffl2.5)且其體積比為20:10:70，加該流動相至刻度，搖勻，制成每lml含20txg的溶液，即得。(2)色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗色譜柱AgilentZORBAXSB-C184.6rnmX250mm，5^m;以甲醇-乙腈-40mmol/LKH2P04(磷酸調(diào)ra2.5)(20:10:70)為流動相；檢測波長為335nm;流速1.Oml/min;柱溫35。C。理論板數(shù)按野黃芩苷計算不低于4000。(3)測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，按外標法以峰面積計算，即得燈盞花素含量。(4)包封率的計算z①采用凝膠柱色譜分離燈盞花素前體脂質(zhì)體，其包封率的計算為包封率:WM/WA2X100%，其中Ww為供試品溶液Ai中燈盞花素含量，即燈盞花素前體脂質(zhì)體中包封的燈盞花素藥物含量；WA2為供試品溶液A2中燈盞花素含量，即燈盞花素前體脂質(zhì)體中燈盞花素藥物總含量。②采用離心分離燈盞花素甜體脂質(zhì)體，其包封率的計算為包封率^WK2-WK,)/WK2X100。/。，其中WK,為上清液中的燈盞花素含量，即燈盞花素前體脂質(zhì)體中未包封的燈盞花素含量；WK2為母液中的燈盞花素含量，即燈盞花素前體脂質(zhì)體中燈盞花素藥物總含量。上述試藥中燈盞花素對照品的含量為99%以上，可由國家規(guī)定的藥品檢驗單位提供，乙腈為HPLC級、甲醇為色譜純、維生素E含量99.8M、磷酸二氫鉀及甘露醇為分析純、大豆磷脂(PC含量〉50。/。)，這些均可從市場上購買。水為純凈水。所用儀器為Waters高效液相色譜儀。具體實施例方式以下用實施例對本發(fā)明作進一步的說明，可以更清楚地理解本發(fā)明。實施例1本發(fā)明燈盞花素前體脂質(zhì)體的質(zhì)量控制方法，按以下步驟進行儀器與試藥燈盞花素對照品含量為99.2%由云南省藥品檢驗所提供；乙腈(HPLC級)、甲醇(色譜純)、維生素E(含量99.8M)均由默克公司產(chǎn)品；磷酸二氫鉀及甘露醇為分析純，水為純凈水。大豆磷脂(PC含量〉50。/。)由上海太偉藥業(yè)有限公司提供。所用儀器為Waters高效液相色譜儀。1、燈盞花素前體脂質(zhì)體的制備按重量份數(shù)，精密稱取取燈盞花素5g，大豆磷脂10g，維生素E0.5g，甘露醇20g;將大豆磷脂、維生素E溶于無水乙醇50mL中，將其注入至已配好的燈盞花素水溶液500ml中，并用0.lmol/L的NaOH調(diào)ffl6.8使其溶解，攪拌30分鐘，同時減壓至真空壓為0.06kPa除去乙醇，之后加入甘露醇攪拌溶解，即得燈盞花素脂質(zhì)體混懸液。將此混懸液按噴干條件為進口溫度120。C，流速2.0mlmin—、霧化壓力180kPa進行噴干，即得干燥、流動性好的燈盞花素前體脂質(zhì)體粉末。2、凝膠柱色譜分離燈盞花素前體脂質(zhì)體或者離心分離燈盞花素前體脂質(zhì)體凝膠柱色譜分離燈盞花素前體脂質(zhì)體精密量取步驟1所制備的燈盞花素前體脂質(zhì)體粉末加純化水水化配制成10mg/ml的脂質(zhì)體混懸液，精密量取此脂質(zhì)體混懸液O.5ml滴加在交聯(lián)葡聚糖G50凝膠柱上，然后用PH6.8的磷酸鹽緩沖液(PBS液)以lml/min的流速洗脫，連續(xù)收集80ml。將洗脫液在8(TC的低溫蒸干，加甲醇lml使其溶解并轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用甲醇稀釋IOO倍即得供試品溶液A"另外精密量取上述脂質(zhì)體混懸液0.5ml用甲醇稀釋1000倍即得供試品溶液A2。所得供試品溶液A和供試品溶液A2備用待檢測，其分離時間用了2h(供試品溶液A,用于檢測洗脫液7中燈盞花素含量，即用于檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體中包封的燈盞花素藥物含量；供試品溶液A2用于檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體中燈盞花素藥物總含量)?；蛘卟捎秒x心分離燈盞花素前體脂質(zhì)體-精密量取步驟1所制備的燈盞花素前體脂質(zhì)體粉水加純化水水化配制成10mg/ml的脂質(zhì)體混懸液，精密量取此脂質(zhì)體混懸液5raL，離心30min，轉(zhuǎn)速18000r/min，共離心3次，每次間隔30min，取上清液，將沉淀脂質(zhì)體用蒸餾水洗3次，每次4ml，其洗液與上清液合并，將合并后的上清液在8(TC的低溫蒸干，分別加甲醇lml使其溶解并轉(zhuǎn)移至容量瓶中用甲醇稀釋100倍即得供試品溶液K,。另外精密量取上述脂質(zhì)體混懸液0.5ml用甲醇稀釋1000倍即得供試品溶液K2。所得供試品溶液K,和供試品溶液K2備用待檢測，其分離時間用了2h(供試品溶液K,用于檢測上清液中的燈盞花素含量，即用于檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體中未包封的燈盞花素含量；供試品溶液K2用于檢測母液中的燈盞花素含量，即檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體中燈盞花素藥物總含量)。3、高效液相色譜法檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體的包封率(1)含量測定①對照品溶液的配制，精密稱取純度為99.2%的野黃芩苷(燈盞乙素)25mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋制成含1000pg/ml的貯備液。精密吸取該貯備液0.5ml，置25ml量瓶中，以甲醇-乙腈-40mmol/L10^04(磷酸調(diào)ffl2.5)(20:10:70)為流動相，加該流動相至刻度，搖勻，制成每lml含20pg的溶液，即得。②色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗，色譜柱AgilentZORBAXSB-C184.6mmX250■，5nm;以甲醇-乙腈-40mmol/LKH2P(X(磷酸調(diào)PH2.5)(20:10:70)為流動相；檢測波長為335nm;流速1.Oml/min;柱溫35'C。理論板數(shù)按野黃芩苷計算不低于4000。③測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，按外標法以峰面積計算，即得燈盞花素含量。④包封率的計算，采用凝膠柱色譜分離燈盞花素前體脂質(zhì)體，其包封率的計算公式為包封率二Ww/WA2X10(m，其中Ww為供試品溶液A,中燈盞花素含量，即燈盞花素前體脂質(zhì)體中包封的燈盞花素藥物含量；WA2為供試品溶液A2中燈盞花素含量，即燈盞花素前體脂質(zhì)體中燈盞花素藥物總含量。采用離心分離燈盞花素前體脂質(zhì)體，其包封率的計算公式為包封率^Wk2-WK1)/WK2X100%，其中Ww為上清液中的燈盞花素含量，即燈盞花素前體脂質(zhì)體中未包封的燈盞花素含量；WK2為母液中的燈盞花素含量，即燈盞花素前體脂質(zhì)體中燈盞花素藥物總含量。以上樣品測定的包封率詳見表1。表1.凝膠法和離心法檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體的包封率樣品進樣量(Ul)峰面積(W)包封率Ii367424(WA1)A2404092(WA2)90.9%10Kl79409(WK,)K2509137(WK2)84.4%(2)專屬性試驗照含量測定項下的色譜條件檢測，空白輔料(精密稱取空白輔料25mg，制成每lml含20Pg的溶液)，在335nm波長處基本無吸收，也沒有明顯的溶劑峰，因此，輔料對樣品的測定無干擾。(3)理論板數(shù)的測定精密吸取上述配制的對南、品溶液10wl，注入液相色譜儀，照含量測定項下的色譜條件檢測，記錄色譜圖。結(jié)果測得理論板數(shù)按野黃芩苷計算為〉4000，符合規(guī)定。(4)線性關(guān)系試驗精密稱取野黃芩苷(燈盞乙素)對照品2.5mg，置25ml量瓶中，加甲醇適量，超聲使其溶解，放冷(20°C)，加甲醇至刻度，搖勻，得濃度為20(Vg/ml的貯備液。精密量取貯備液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ml，置25ml量瓶中，加流動相至刻度(流動相與含量測定項下相同，以下流動相均相同)，得到相應(yīng)濃度的標準系列溶液，分別精密吸取各標準系列溶液l(Vl注入液相色譜儀，照含量測定項下的色譜條件檢測，記錄色譜圖。線性相關(guān)性見表2。表2野黃芩苷含量測定線性相關(guān)性試驗結(jié)果濃度C(ug/ml)進樣量"l)峰面積(A)2.00101185474.00102287078.001046046916.001095643232.00101926769線性回歸方程為A=60533C-12480r=0.99999野黃芩苷在濃度范圍2.00-32yg/ml內(nèi)濃度和峰面積呈良好的線性相關(guān)性。(5)系統(tǒng)重現(xiàn)性試驗取濃度為16.00ug/ml對照品溶液，精密吸取10y1注入液相色譜儀，照含量測定項下的色譜條件檢測，連續(xù)進樣6次。結(jié)果見表3。表3野黃零苷含量測定系統(tǒng)重現(xiàn)性試驗測定結(jié)果i^^i§^~~RSD(%)峰面積9696269748859794009885299116039847949791400.69結(jié)果表明野黃芩苷的含量測定色譜系統(tǒng)重現(xiàn)性較好。(6)方法穩(wěn)定性試驗取燈盞花素前體脂質(zhì)體適量(約0.9g)(約相當于燈盞花素100mg)，置10ml容量瓶中，加蒸餾水定容,振搖至無肉眼可見固體微粒，即得燈盞花素脂質(zhì)體混懸液。將此混懸液用甲醇稀釋100倍后，得一澄明溶液，將此澄明溶液用流動相稀釋10倍。取此溶液，于室溫下(20-24°0放置，每隔2小時進樣一次，進樣量為IOPI注入液相色譜儀，照含量測定項下的色譜條件檢測，試驗結(jié)果見表4。表4燈盞花素前體脂質(zhì)體含量測定方法穩(wěn)定性考察試驗結(jié)果時間(h)峰面積變化率(％)RSD(%)0759767—27592350.0747533260.850.6667522030.187547720.66107543780.71試驗結(jié)果表明，含量測定所配制的溶液在10h內(nèi)是穩(wěn)定的。(7)加樣回收率試驗取野黃芩苷90mg，按照含量測定項下的條件和方法，依法操作，精密加入一定量的對照品，加甲醇至刻度(25mL)，得低、中、高三個濃度的回收率樣品溶液。進樣分析，進樣量為10y1注入液相色譜儀，計算測得量。測得量和已知量(已知量是加入的2mg對照品)之差與實際加入量相比較，即得回收率。結(jié)果見表5。10表5野黃芩苷含量測定加樣回收率試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>99.58結(jié)論本法回收率較好。實施例2也為本發(fā)明的燈盞花素前體脂質(zhì)體的質(zhì)量控制方法，除步驟1燈盞花素前體脂質(zhì)體的制備不同外，其余步驟均與實施例1相同，不再贅述，測定結(jié)果詳見表6，其分離時間用了2h。其步驟1燈盞花素前體脂質(zhì)體的制備如下按重量份數(shù)，精密稱取取燈盞花素8g，大豆磷脂20g，維生素Elg，甘露醇30g;將大豆磷脂、維生素E溶于無水乙醇100mL中，將其注入至已配好的燈盞花素水溶液2000ml中，并用0.lmol/L的NaOH調(diào)PH6.8使其溶解，攪拌30分鐘，同時減壓至真空壓為0.06kPa除去乙醇，之后加入甘露醇攪拌溶解，即得燈盞花素脂質(zhì)體混懸液。將此混懸液按噴干條件為進口溫度12(TC，流速2.0mlmin—'，霧化壓力180kPa進行噴干，即得干燥、流動性好的燈盞花素前體脂質(zhì)體粉末。實施例'3也為本發(fā)明的燈盞花素前體脂質(zhì)體的質(zhì)量控制方法，除步驟1燈盞花素前體脂質(zhì)體的制備不同外，其余步驟均與實施例1相同，不再贅述，測定結(jié)果詳見表7。其分離時間用了2h。其步驟1燈盞花素前體脂質(zhì)體的制備如下按重量份數(shù)，精密稱取燈盞花素10g，大豆磷脂40g，維生素E2g，乳糖80g;將大豆磷脂、維生素E溶于無水乙醇2000mL中，將其注入至已配好的燈盞花素水溶液5000ral中，并用0.lmol/L的NaOH調(diào)PH6.8使其溶解，攪拌30分鐘，同時減壓至真空壓為0.06kPa除去乙醇，之后加入乳糖攪拌溶解，即得燈盞花素脂質(zhì)休混懸液。將此混懸液按噴干條件為進口溫度120。C，流速2.0ml'min—'，霧化壓力180kPa進行噴干，即得干燥、流動性好的燈盞花素甜體脂質(zhì)體粉末。表6實施例2中凝膠法和離心法檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體的包封率進樣量(u1)峰面積(W)包封率II353245(WA1)A2421032(WA2)83.9%10Kl70905(WK1)K2510108(WK2)86.1%表7實施例3中凝膠法和離心法檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體的包封率進樣量U1)峰面積(W)包封率II358927(WA1)A2412087(WA2)87.1%10Kl69013(WK1)K2511209(WK2)86.5%根據(jù)以上三個實施例和表中數(shù)據(jù)可以看出本發(fā)明的檢測方法大大節(jié)約了成本，節(jié)省了檢測時間，而透析法在檢測中需要的脂質(zhì)體量大(50mL)，且耗時較長(8h)(見趙遠黨，章一新，錢云良等5-FU變形脂質(zhì)體工藝的改進及其體外透瘢痕的實驗研究[J].中國美容整形外科雜志，2008,4,19(2):96-99.)。本發(fā)明方法還操作簡便易掌握，重現(xiàn)性好，檢測準確度和精確度高。權(quán)利要求1、一種燈盞花素前體脂質(zhì)體的質(zhì)量控制方法，由燈盞花素前體脂質(zhì)體的制備、凝膠柱色譜分離燈盞花素前體脂質(zhì)體或者離心分離燈盞花素前體脂質(zhì)體、高效液相色譜法檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體的包封率三個步驟組成，其特征在于，按以下步驟進行(1)燈盞花素前體脂質(zhì)體的制備按重量份數(shù)，精密稱取燈盞花素5-10份，大豆磷脂10-40份，維生素E0.5-2份，甘露醇或乳糖20-80份；將大豆磷脂、維生素E溶于無水乙醇50-2000mL中，將其注入至已配好的燈盞花素水溶液0.5-5L中，并用0.1mol/L的NaOH調(diào)PH6.8使其溶解，攪拌30min，同時減壓至真空壓為0.06kPa除去乙醇，之后加入甘露醇或乳糖攪拌溶解，即得燈盞花素脂質(zhì)體混懸液；將此混懸液按噴干條件為進口溫度120℃，流速2.0ml·min-1，霧化壓力180kPa進行噴干，即得干燥、流動性好的燈盞花素前體脂質(zhì)體；(2)凝膠柱色譜分離燈盞花素前體脂質(zhì)體或者離心分離燈盞花素前體脂質(zhì)體采用凝膠柱色譜分離燈盞花素前體脂質(zhì)體，即精密量取步驟1所制備的燈盞花素前體脂質(zhì)體粉末加純化水水化配制成10mg/ml的脂質(zhì)體混懸液，精密量取此脂質(zhì)體混懸液0.5ml滴加在交聯(lián)葡聚糖G50凝膠柱上，然后用PH6.8的磷酸鹽緩沖液以1ml/min的流速洗脫，連續(xù)收集80ml；將洗脫液在80℃的低溫蒸干，加甲醇1ml使其溶解并轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用甲醇稀釋100倍即得供試品溶液A1；另外精密量取上述脂質(zhì)體混懸液0.5ml用甲醇稀釋1000倍即得供試品溶液A2；所得供試品溶液A1和供試品溶液A2備用待檢測；或者采用離心分離燈盞花素前體脂質(zhì)體，即精密量取步驟1所制備的燈盞花素前體脂質(zhì)體粉末加純化水水化配制成10mg/ml的脂質(zhì)體混懸液，精密量取此脂質(zhì)體混懸液5mL，離心30min，轉(zhuǎn)速18000r/min，共離心3次，每次間隔30min，取上清液，將沉淀脂質(zhì)體用蒸餾水洗3次，每次4ml，其洗液與上清液合并，將合并后的上清液在80℃的低溫蒸干，分別加甲醇1ml使其溶解并轉(zhuǎn)移至容量瓶中用甲醇稀釋100倍即得供試品溶液K1；另外精密量取上述脂質(zhì)體混懸液0.5ml用甲醇稀釋1000倍即得供試品溶液K2；所得供試品溶液K1和供試品溶液K2備用待檢測；(3)高效液相色譜法檢測燈盞花素前體脂質(zhì)體的包封率①對照品溶液的配制，精密稱取純度為99％以上的野黃芩苷25mg，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋制成含1000ug/ml的貯備液；精密吸取該貯備液0.5ml，置25ml容量瓶中，流動相為甲醇-乙腈-40mmol/LKH2PO4且其體積比為20∶10∶70，該流動相用磷酸調(diào)至PH2.5，加該流動相至刻度，搖勻，制成每1ml含20μg的溶液，即得；②色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗，色譜柱AgilentZORBAXSB-C184.6mm×250mm，5μm；以甲醇-乙腈-40mmol/LKH2PO4且其體積比是20∶10∶70為流動相；該流動相用磷酸調(diào)至PH2.5；；檢測波長為335nm；流速1.0ml/min；柱溫35℃；理論板數(shù)按野黃芩苷計算不低于4000；③測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，按外標法以峰面積計算，即得燈盞花素含量。全文摘要本發(fā)明提供一種燈盞花素前體脂質(zhì)體的質(zhì)量控制方法，由燈盞花素前體脂質(zhì)體的制備、凝膠柱色譜或者離心分離其前體脂質(zhì)體、高效液相色譜法檢測其包封率各步驟組成，屬藥品
技術(shù)領(lǐng)域：
。其前體脂質(zhì)體含燈盞花素5-10份，大豆磷脂10-40份，維生素E0.5-2份，甘露醇或乳糖20-80份；凝膠柱色譜分離需脂質(zhì)體混懸液0.5ml，離心分離需脂質(zhì)體混懸液5mL，離心30min，轉(zhuǎn)速18000r/min；檢測包封率以甲醇-乙腈-40mmol/LKH₂PO₄(20∶10∶70)為流動相；檢測波長為335nm；理論板數(shù)按野黃芩苷計算不低于4000。該方法大大節(jié)約了成本和節(jié)省了檢測時間，操作簡便，檢測準確度和精確度高。文檔編號G01N30/00GK101493444SQ200910094119公開日2009年7月29日申請日期2009年2月23日優(yōu)先權(quán)日2009年2月23日發(fā)明者呂小波,敏周,文李,黃春球申請人:云南植物藥業(yè)有限公司